G蛋白偶联受体56基因敲除抑制少突胶质前体细胞成熟

目的:探讨G蛋白偶联受体56(GPR56)基因敲除对小鼠脑胼胝体内轴突髓鞘化和少突胶质前体细胞(OPCs)成熟的影响。方法:筛选出GPR56基因杂合型(GPR56+/-)和敲除型(GPR56-/-)小鼠36只,分为GPR56+/-和GPR56-/-组,每组18只。每组根据小鼠出生后时间分为出生后7 d(P7)、14 d(P14)、21 d(P21)和28d(P28)4个亚组。应用FluoroMyelin染色观察P14、P21和P28 GPR56+/-和GPR56-/-小鼠脑胼胝体内髓鞘形成。用电镜观察P28 GPR56+/-和GPR56-/-小鼠胼胝体内轴突髓鞘化,比较髓鞘的厚度。用荧光免疫组化染色观察P7GPR56+/-和GPR56-/-小鼠胼胝体内血小板源性生长因子α受体阳性(PDGF-αR+)细胞(即OPCs)的数量。用原位杂交监测P28 GPR56+/-和GPR56-/-小鼠胼胝体内髓鞘蛋白脂质蛋白阳性(PLP+)细胞数。用出生后1 d的GPR56+/-和GPR56-/-小鼠脑皮质做体外OPCs培养并诱导其分化成熟,观察pro-oligodendroblast、immature oligodendrocyte和mature oligodendrocyte阶段O4+细胞百分比。结果:与GPR56+/-小鼠比较,在P14、P21和P28GPR56-/-小鼠脑胼胝体中髓鞘的形成明显减少。电镜见P28 GPR56-/-小鼠脑胼胝体内髓鞘化轴突的数量明显减少,髓鞘g-ratio值变大,髓鞘厚度变薄。荧光免疫组化和原位杂交结果显示P7 GPR56+/-和GPR56-/-小鼠胼胝体内PDGF-aR+细胞数量无差异,但P28 GPR56+/-小鼠胼胝体内PLP+细胞数明显多于P28 GPR56-/-小鼠。体外细胞培养结果显示在pro-oligodendroblast阶段GPR56-/-O4+细胞百分比明显多于GPR56+/-O4+细胞,在immature oligodendrocyte和mature oligodendrocyte阶段GPR56-/-O4+细胞百分比明显少于GPR56+/-O4+细胞。结论:GPR56蛋白可能参与了脑白质轴突髓鞘化和OPCs的成熟。

G蛋白偶联受体56对小鼠脑胼胝体轴突髓鞘化的影响

目的探讨G蛋白偶联受体56(GPR56)对小鼠脑胼胝体轴突髓鞘化的影响。方法筛选出GPR56基因杂合型(GPR56+/-)小鼠(GPR56+/-组)和敲除型(GPR56-/-)小鼠(GPR56-/-组)各38只。每组选在小鼠出生后7 d、14 d、21 d、28 d(P7d、P14d、P21d、P28d)进行研究。应用免疫组化染色和Western Blot方法监测髓鞘碱性蛋白(MBP)和2、3-环核苷酸3-磷酸二酯酶(CNPase)在P7d、P14d、P21d、P28d两组小鼠脑胼胝体白质中的表达;用电镜观察P28d小鼠胼胝体白质内轴突髓鞘化,比较轴突髓鞘的厚度。用荧光免疫组化染色观察P7d两组小鼠胼胝体内PDGF-aR阳性(PDGF-aR+)细胞的数量。用原位杂交检测P28d两组小鼠胼胝体内髓鞘蛋白脂质蛋白(PLP)阳性(PLP+)细胞数。结果与GPR56+/-小鼠比较,MBP在P14d、P21d、P28d GPR56-/-小鼠脑胼胝体白质中的表达明显下降,CNPase在P7d、P14d、P21d、P28d GPR56-/-小鼠脑胼胝体白质中的表达明显下降(均P<0.01)。电镜见P28d GPR56-/-小鼠脑胼胝体白质内髓鞘化轴突的数量明显减少,轴突髓鞘的g-ratio值升高(P<0.05),髓鞘的厚度变薄。荧光免疫组化和原位杂交结果显示P7d GPR56+/-和GPR56-/-小鼠胼胝体内PDGF-aR+细胞数量无差异,但P28d GPR56+/-小鼠胼胝体内PLP+细胞数明显多于P28d GPR56-/-小鼠(P<0.01)。结论 GPR56蛋白分子可能通过影响少突胶质前体细胞分化成熟参与了脑白质轴突髓鞘化。

G蛋白偶联受体56参与轴突发育和髓鞘化

目的：探讨G蛋白偶联受体56（G-protein coupled receptor 56，GPR56）对小鼠脑胼胝体白质内轴突发育和髓鞘化的影响。方法筛选出 Gpr56基因杂合型（Gpr56^＋/-）和敲除型（Gpr56^-/-）小鼠64只，随机数字法分为2组：Gpr56^＋/-和Gpr56^-/-组，每组32只。每组根据小鼠出生后时间分为出生后7 d、14 d、21 d、28 d （P7 d、P14 d、P21 d、P28 d）四个亚组。应用免疫组化染色和Western Blot方法监测神经纤维丝蛋白（NF-200）、髓鞘蛋白脂质蛋白（PLP）在出生后P7 d、P14 d、P21 d、P28 d 的 Gpr56^＋/-和 Gpr56^-/-小鼠脑胼胝体白质中的表达；用 P1d Gpr56^＋/-和Gpr56^-/-小鼠皮质做体外神经元培养，观察两组神经元轴突的长短；用电镜观察P28d Gpr56^＋/-和Gpr56^-/-小鼠胼胝体白质内轴突髓鞘化，比较轴突直径的大小。结果与Gpr56^＋/-小鼠比较，NF-200和 PLP蛋白在P14 d、P21 d、P28 d 的Gpr56^-/-小鼠脑胼胝体白质中的表达明显下降。Gpr56^-/-神经元轴突明显短于Gpr56^＋/-神经元。电镜见P28d Gpr56^-/-小鼠脑胼胝体白质内髓鞘化轴突的数量明显减少，轴突直径明显变小。结论 GPR56蛋白分子可能参与了脑白质轴突轴突发育和髓鞘化。

GPR56基因在骨肉瘤组织中的表达变化及其对骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响

目的探讨G蛋白偶联受体56(GPR56)基因在骨肉瘤发生、发展中的作用。方法选取拟行手术治疗的骨肉瘤患者53例,术中留取骨肉瘤组织及其癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR法检测组织GPR56 mRNA相对表达量,并分析其与患者临床病理参数的关系。将对数生长期人骨肉瘤细胞株MG-63随机分为三组,其中siRNA-GPR56组转染GPR56干扰序列,siRNA-对照组转染siRNA对照序列,空白对照组不作任何处理。采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞GPR56 mRNA相对表达量,CCK-8法和克隆形成试验检测细胞增殖能力(分别以培养24、48、72、96 h的吸光度值及克隆形成率表示),Transwell法检测细胞迁移、侵袭能力(以迁移、侵袭细胞数表示)。结果骨肉瘤组织GPR56 mRNA相对表达量为1.86±0.14,癌旁正常组织为1.39±0.12,二者比较P<0.01。骨肉瘤组织GPR56 mRNA相对表达量与患者年龄、性别、发病部位、肿瘤直径、组织类型、血清碱性磷酸酶水平均无关(P均>0.05),与Enneking分期、肺部转移、软组织浸润均有关(P均<0.05)。siRNA-GPR56组GPR56mRNA相对表达量明显低于siRNA-对照组及空白对照组(P均<0.01)。siRNA-GPR56组培养48、72、96 h吸光度值及克隆形成率、迁移细胞数、侵袭细胞数均低于siRNA-对照组及空白对照组(P<0.05或<0.01)。结论骨肉瘤组织中GPR56基因表达升高,GPR56基因可能通过影响细胞增殖、迁移和侵袭能力而参与骨肉瘤的发生与发展。