炎症信号通路对肺肿瘤抑制基因G蛋白偶联受体C型家族5A表达的抑制作用

目的·探究炎症信号通路对G蛋白偶联受体C型家族5A(G protein-coupled receptor class C group 5 member A,GPRC5A)表达的调控作用。方法·给予核因子κB(NF-κB)启动子驱动荧光酶转基因小鼠腹腔注射细菌内毒素脂多糖(LPS),诱导肺组织炎症,活体动物可见光成像系统下观察小鼠肺部NF-κB信号通路激活情况。在C57BL/6J小鼠,腹腔注射LPS,Western blotting检测肺组织GPRC5A表达情况。体外实验中,对人肺癌细胞Calu-1、H322,人胚胎肾细胞HEK293T给予肿瘤坏死因子α(TNF-α)或转染p65表达质粒,而后用Western blotting、RT-PCR、荧光素酶报告基因实验、免疫荧光等方法检测分析炎症对GPRC5A表达的影响。结果·小鼠腹腔注射LPS可以诱导NF-κB炎症信号通路激活,并抑制肺组织中GPRC5A的表达。炎症因子TNF-α可明显抑制Calu-1细胞GPRC5A的蛋白和mRNA表达。在HEK293T细胞,转染p65表达质粒后,可以抑制GPRC5A启动子驱动的荧光素酶报告质粒的表达。被转染并表达绿色荧光蛋白-p65的H322细胞中几乎没有GPRC5A的表达。结论·NF-κB信号通路可以抑制GPRC5A启动子的转录活性,抑制其mRNA和蛋白的表达。

下调G蛋白偶联受体C家族5A表达抑制脂多糖诱导的人牙龈成纤维细胞炎症反应

目的探究下调G蛋白偶联受体C家族5A(GPRC5A)表达对脂多糖诱导的人牙龈成纤维细胞(GFs)炎症反应的影响并探索其机制,为深入探讨G蛋白偶联受体(GPCR)在牙周炎中的调控作用及其机制奠定基础。方法于2022年12月至2023年2月在山东大学口腔医学院·口腔医院口腔颌面外科、牙周科收集3名牙周健康者(牙周健康组)和3例牙周炎患者(牙周炎组)的牙龈组织,采用免疫组化染色检测两组牙龈组织中GPRC5A的表达。收集健康牙龈组织提取GFs,健康牙龈组织来自2022年12月至2023年2月在山东大学齐鲁医学院口腔医学院·口腔医院口腔颌面外科招募的6例16~20岁需拔除埋伏阻生齿的患者。应用胶原酶消化法提取并培养GFs,设置30、50和80μmol/L浓度转染GPRC5A小干扰RNA(siGPRC5A)的实验组和阴性对照小干扰RNA(siNC),利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测siGPRC5A的沉默效率;设置阴性对照、脂多糖、siGPRC5A+脂多糖和siGPRC5A 4个组,通过RT-qPCR和蛋白质印迹法分别验证应用siGPRC5A对1 mg/L脂多糖诱导的GFs炎症状态下GPRC5A在基因和蛋白水平的表达;下调GPRC5A表达后,RT-qPCR检测脂多糖诱导的GFs白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)基因的表达;通过蛋白质印迹法、免疫荧光染色检测核因子-κB(NF-κB)信号通路的激活情况。结果免疫组化结果显示,牙周炎组牙龈组织中GPRC5A表达(0.132±0.006)显著高于牙周健康组(0.036±0.019)(t=8.24,P=0.001)。RT-qPCR结果显示,在脂多糖作用2、6、12和24 h时,脂多糖组GPRC5A基因水平表达量(分别为0.026±0.002、0.042±0.005、0.004±0.000、0.016±0.000)均分别显著高于阴性对照组(分别为0.004±0.000、0.004±0.000、0.002±0.000、0.007±0.000)(均P<0.001),且6 h时达峰值。50μmol/L siGPRC5A(31.16±3.29)与siNC组(100.00±4.88)相比能有效沉默GFs中GPRC5A的表达(F=297.98,P<0.001)。RT-qPCR和蛋白质印迹法结果显示,脂多糖组GPRC5A在基因和蛋白水平的表达(分别为1.30±0.10、1.43±0.03)均显著高于阴性对照组(分别为1.00±0.01、1.00±0.00)(均P<0.001),siGPRC5A组(分别为0.27±0.03、0.71±0.00)均显著低于阴性对照组(分别为1.00±0.01、1.00±0.00)(均P<0.001),siGPRC5A+脂多糖组(分别为0.39±0.03、1.06±0.16)均显著低于脂多糖组(分别为1.30±0.10、1.43±0.03)(均P<0.001)。RT-qPCR结果显示,脂多糖组IL-8、IL-1β、IL-6、TNF-α、PTGS2基因表达水平均显著高于阴性对照组,siGPRC5A+脂多糖组均显著低于脂多糖组(均P<0.001)。蛋白质印迹法结果表明,脂多糖组p65和IκBα蛋白磷酸化水平均显著高于阴性对照组,而siGPRC5A+脂多糖组均显著低于脂多糖组(均P<0.01)。免疫荧光染色结果显示,对照组NF-κB p65集中表达于胞质,在脂多糖刺激下p65部分向核内转位,应用siGPRC5A后能一定程度上抑制脂多糖诱导的p65核内转位。结论GPRC5A在GFs炎症状态下表达增加,下调GPRC5A的表达能抑制脂多糖诱导的炎症反应,且GPRC5A可通过NF-κB信号通路发挥炎症调控的作用。

GPRC5A调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响

目的ATP结合盒B亚家族成员1(ATP binding cassette subfamily B member 1,ABCB1)的异常表达在多种癌症的发生发展中发挥关键作用。然而,G蛋白偶联受体C家族5组A型(G protein coupled receptor family C group5 type A,GPRC5A)调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响仍不清楚。本研究探讨了GPRC5A调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响。方法我们采用RT-PCR、Western-blot或免疫组化实验,分析ABCB1在肺腺癌细胞系、人肺腺癌组织以及GPRC5A基因敲除小鼠和野生型小鼠的气管上皮细胞和肺组织中的表达。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析GPRC5A基因敲除小鼠气管上皮细胞对化疗药物的敏感性。采用皮下肿瘤形成实验探讨下调ABCB1表达是否可抑制体内肺腺癌增殖。采用免疫荧光和免疫沉淀实验研究GPRC5A和ABCB1之间潜在的调控关系。结果ABCB1在肺腺癌细胞系和人类肺腺癌组织中表达上调。GPRC5A基因敲除小鼠的气管上皮细胞及肺组织的ABCB1表达高于野生型小鼠。与GPRC5A野生型小鼠的气管上皮细胞相比,GPRC5A基因敲除小鼠的气管上皮细胞对塔立奇达和多柔比星更敏感。注射移植细胞28天后,接受ABCB1基因敲除细胞移植的GPRC5A-/-C57BL/6小鼠的肺肿瘤的体积和重量均明显低于野生型细胞移植小鼠(P=0.0043,P=0.0060)。此外,免疫荧光和免疫沉淀实验表明,GPRC5A通过直接结合方式调控ABCB1的表达。结论GPRC5A通过抑制ABCB1表达降低肺腺癌增殖。GPRC5A调节ABCB1表达的途径有待研究。

Wnt信号通路相关分子LGR5、CDK5和βcatenin在结直肠侧向发育型肿瘤中的表达及其临床意义

为探讨Wnt信号通路相关分子富含亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体5(Leucine-rich repeat-containing G protein-coupled Receptor 5,LGR5)、细胞周期蛋白依赖性激酶5(Cyclin-Dependent Kinase 5,CDK5)和β-连环蛋白(β-catenin)在结直肠侧向发育型肿瘤(Laterally Spreading Tumor,LST)中的表达及其临床意义,收集2017年1月-2021年11月于广西医科大学第二附属医院行内镜治疗的56例LST患者的临床资料和组织标本,另收集58例结直肠隆起型腺瘤(Protruded-type colorectal Adenoma,PA)、44例结直肠癌(Colorectal Cancer,CRC)和相应的正常组织及相应临床资料,采用免疫组织化学染色法测定组织中Wnt通路相关分子LGR5、CDK5和β-catenin在LST、PA、CRC和正常组织中的表达。结果表明:LST不同亚型在性别、年龄、病变部位及病理类型上的差异不具有统计学意义(P>0.05),在病变大小上的差异具有统计学意义(P<0.05)。LST与PA在年龄、病变部位及病理学类型和病变大小上的差异有统计学意义(P<0.05),但性别差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组织化学染色法测定显示,LGR5、CDK5及β-catenin在正常组织、PA、LST和CRC中的表达逐渐增高,并且3种蛋白在LST组织的表达水平均高于正常组织和PA。Wnt信号通路相关分子LGR5、CDK5和β-catenin在正常组织、PA、LST和CRC中的阳性表达率逐渐增高,提示Wnt信号通路及其相关因子LGR5、CDK5和β-catenin可能在LST的发生、发展中发挥重要作用。

GPRC5A和SOCS3在大肠癌中的表达及临床意义

目的:研究G蛋白偶联受体C家族5A(GPRC5A)和细胞因子信号转导抑制因子-3(SOCS3)在大肠癌中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学(SP法)检测GPRC5A和SOCS3在45例大肠癌、25例大肠腺瘤及22例正常大肠黏膜组织中的表达。结果:1)GPRC5A在大肠癌组织中的表达(22.2%)明显低于腺瘤组织(52.0%,P<0.05),腺瘤组织中的表达明显低于正常大肠黏膜组织(81.8%,P<0.05)。GPRC5A的表达与有无淋巴结转移、Dukes分期、浸润深度密切相关(P<0.05)。2)SOCS3在大肠癌组织中的表达(24.4%)明显低于腺瘤组织(56.0%,P>0.01),腺瘤组织中的表达明显低于正常大肠黏膜组织(86.4%,P<0.05)。SOCS3的表达与肿瘤分化程度、浸润深度、Dukes分期、有无淋巴结转移有关(P<0.05)。3)GPRC5A与SOCS3在大肠癌组织中的表达呈正相关(r=0.503,P<0.05)。结论:GPRC5A和SOCS3的低表达参与了大肠癌的发生、发展,联合检测两蛋白可能作为临床判断大肠癌的恶性程度及预后的参考指标,并有望成为基因治疗的新靶点。

GPRC5A对LPS诱导的支气管上皮16HBE细胞损伤的影响及机制

目的探究G蛋白偶联受体家族C组5型(GPRC5A)对脂多糖(LPS)诱导的人支气管上皮16HBE细胞多种生物学特性的影响,并探讨其分子机制。方法利用LPS建立16HBE细胞损伤模型,将细胞分为4组:Control组、LPS组、LPS+pcDNA组和LPS+pcDNA-GPRC5A组。利用患者样本和基因表达组学数据库数据分析支气管哮喘(BA)患者和健康受试者气道组织中的GPRC5A的表达情况;采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测GPRC5A、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的mRNA表达水平;采用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖与凋亡;Western-Blot检测GPRC5A、气道黏蛋白5AC(MUC5AC)、NF-κB p65和NF-κB抑制因子α(IκBα)蛋白的表达水平。结果成功构建LPS诱导的16HBE细胞损伤模型;与健康受试者组织和Control组细胞比较,GPRC5A在EBCs组织和LPS组的16HBE细胞中下调(P<0.05);而与LPS组和LPS+pcDNA组比较,LPS+pcDNA-GPRC5A组的细胞凋亡率、炎症因子TNF-α和IL-6、气道黏蛋白MUC5AC、NF-κB p65和IκBα的表达均显著下降,而细胞活力升高(P<0.05)。结论GPRC5A可能通过NF-κB通路抑制LPS诱导的16HBE细胞凋亡、炎症反应和气道黏蛋白的分泌,促进细胞的活力,发挥阻碍损伤的作用。

GPRC5A基因在肺腺癌中的表达及临床意义

目的了解G蛋白偶联受体C型家族5A(GPRC5A)基因在肺腺癌组织及癌旁正常组织中的表达,并探讨其临床意义。方法分别采用Real-time PCR和Western blot法检测25例肺腺癌组织及癌旁正常组织GPRC5A mRNA和蛋白表达水平。应用免疫组化法检测93例肺腺癌组织及癌旁正常组织GPRC5A蛋白的表达情况,并分析GPRC5A蛋白的表达与临床病理特征及预后的关系。结果 25例肺腺癌组织中GPRC5A mRNA和蛋白表达水平均明显低于癌旁正常组织(均P<0.05)。93例肺腺癌中GPRC5A蛋白低表达率为55.9%,均表达在胞质和胞膜中。GPRC5A蛋白的表达与肿瘤分化程度、TNM分期及淋巴结转移均有关(均P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤大小均无关(均P>0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示,GPRC5A高表达的患者3年生存率为73.7%,高于低表达患者的39.4%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 GPRC5A在肺腺癌组织中低表达,其低表达与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移及预后密切相关,可作为估计生存率的独立指标。

GPRC5A和STAT3在食管鳞癌组织中的表达及临床病理意义

目的:探讨G蛋白偶联受体C家族5A(G protein-coupled receptor family C,member 5,group A,GPR C5A)和信号转导子与转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达、两者的相关性及其临床病理意义.方法:采用免疫组织化学法分别检测ESCC、癌旁组织及正常食管黏膜组织中GPRC5A及STAT3蛋白的表达,并分析两者表达水平相关性及与临床病理因素的关系.采用χ2检验进行统计学分析.结果:GPRC5A在ESCC、癌旁组织、正常食管黏膜组织中的阳性表达率分别为41.79%、58.21%、68.66%,STAT3在ESCC、癌旁组织、正常食管黏膜组织中的阳性表达率分别为80.60%、71.64%、53.73%.两者在组间的表达差异有统计学意义(P<0.05).食管鳞癌组织中GPRC5A和STAT3蛋白表达与肿瘤分级及浸润深度均密切有关(P<0.05),与年龄、性别、淋巴结转移无关,两者在ESCC组织中的表达呈负相关(r=-0.254,P<0.05).结论:GPRC5A和STAT3蛋白表达与ESCC发生、发展、浸润有关,联合检测GPRC5A和STAT3两蛋白可更准确判断ESCC的生物学行为,对食管鳞癌的预后判断具有重要的意义,并有望成为食管癌基因治疗的新靶点.

miR-204靶向GPRC5A对结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-204(miR-204)对结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法 体外培养人正常结肠上皮细胞(FHC)和人结肠癌肿瘤细胞(HCT116);将HCT116细胞随机分为对照组、miR-204 mimic组和miR-204 NC组;利用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组HCT116细胞miR-204及G蛋白耦联受体C型家族(GPRC)5A表达情况;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组HCT116细胞的增殖情况;划痕实验检测各组HCT116细胞的迁移能力;Transwell法检测各组HCT116细胞的侵袭能力;Western检测各组HCT116细胞GPRC5A蛋白的表达情况;采用双荧光素酶报告实验验证miR-204与GPRC5A的靶向关系。结果 与正常组相比,各组HCT116细胞miR-204表达水平显著降低(P<0.05)。与对照组和miR-204 NC组相比,miR-204 mimic组HCT116细胞miR-204表达水平显著升高(P<0.05),细胞存活率、划痕愈合率、侵袭数量、GPRC5A mRNA及GPRC5A蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与GPRC5A-3′UTR-WT+miR-204 NC组比较,GPRC5A-3′UTR-WT+miR-204 mimic组荧光素酶活性降低(P<0.05)。结论 过表达miR-204可能靶向下调GPRC5A基因表达,抑制人结肠癌细胞的增殖、迁移及侵袭行为。

GPRC5A对肝癌细胞增殖、凋亡和氧化应激的影响及作用机制探讨

目的通过检测G蛋白偶联受体家族C群5成员A(G protein coupled receptor C type group 5 member A,GPRC5A)在肝癌组织及细胞中的表达,探讨GPRC5A对肝癌细胞增殖、凋亡、氧化应激的影响及其相关作用机制。方法收集2018年12月~2019年11月在解放军联勤保障部队第九六九医院行手术治疗的38例肝癌患者癌组织及配对癌旁正常组织样本;另选取人正常肝上皮细胞株HL-7702和人肝癌细胞株(HepG2,HCCLM3,HuH-7和MHCC-97H)进行研究。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肝癌组织、癌旁正常组织及肝癌细胞、正常肝上皮细胞中GPRC5A表达量。通过转染pcDNA3.1-GPRC5A质粒构建过表达GPRC5A肝癌细胞株,采用MTT实验和V-FITC/PI凋亡试剂盒分别检测过表达GPRC5A对肝癌细胞增殖、凋亡的影响。采用活性氧指示剂DCFH-DA检测细胞中氧化应激相关因子活性氧(ROS),NAD+/NADH和三磷酸腺苷(ATP)水平。采用Western blot实验检测凋亡相关蛋白caspase-3及上皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平。结果肝癌组织中GPRC5A表达较癌旁正常组织显著降低(0.34±0.09 vs 0.73±0.10),差异有统计学意义(t=17.869,P<0.01)。肝癌细胞HepG2(0.35±0.06),HCCLM3(0.38±0.10),HuH-7(0.53±0.07),MHCC-97H(0.67±0.06)中GPRC5A表达量显著低于人正常肝上皮细胞HL-7702中的GPRC5A表达量(1.00±0.08),差异有统计学意义(t=5.716~11.258,均P<0.05)。pcDNA3.1-GPRC5A组转染36 h细胞增殖吸光度(A)值(0.94±0.16)显著低于对照组(1.49±0.05)和pcDNA3.1组(1.45±0.07)(F=25.640,P<0.01)。GPRC5A过表达组VEGF(0.98±0.04)表达量较对照组(2.94±0.15)和pcDNA3.1组(2.89±0.11)显著降低(F=310.450,P<0.001)。pcDNA3.1-GPRC5A组细胞中ROS(182.12±13.42)水平显著高于对照组(101.23±11.20)和pcDNA3.1组(98.30±10.26)(F=49.577,P<0.001);NAD+/NADH(35.24±6.43)及ATP(55.34±6.51)水平显著低于对照组(100.25±12.41,100.17±14.36)和pcDNA3.1组(97.86±9.67,102.23±11.02)(F=42.338,17.077,P<0.05)。GPRC5A过表达组细胞凋亡率高于对照组和pcDNA3.1组;细胞凋亡蛋白caspase-3(2.61±0.16)表达量也高于对照组(1.00±0.11)和pcDNA3.1组(1.01±0.02)(F=202.843,P<0.001)。pcDNA3.1-GPRC5A组细胞中p-STAT3表达量(0.43±0.06)显著低于对照组(1.00±0.13)和pcDNA3.1组(1.03±0.12)(F=29.476,P<0.001);pcDNA3.1-GPRC5A组下游基因Socs3(0.47±0.05),c-MYC(0.54±0.06)表达量也显著低于对照组(1.01±0.05,1.00±0.04)和pcDNA3.1组(0.98±0.09,1.02±0.06)(F=63.275,75.409,P<0.001)。肝癌组织中STAT3与GPRC5A表达量呈显著负相关(r=-0.746,P<0.01)。过转染pcDNA3.1-STAT3或pcDNA3.1-NLRP3后显著逆转了pcDNA3.1-GPRC5A对肝癌细胞的抑制作用(P<0.05)。结论GPRC5A低表达可能通过调节STAT3/Socs3/c-MYC信号和炎症反应抑制了肝癌细胞的增殖,诱导肝癌细胞的氧化应激和凋亡。

G蛋白偶联受体相关分选蛋白1在非小细胞肺癌中表达的临床意义及其与顺铂化疗抵抗的关系

目的探究G蛋白偶联受体相关分选蛋白1(GPRASP1)的表达与非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的顺铂(DDP)敏感性的关系。方法收集癌旁组织、原发NSCLC组织及复发NSCLC组织,用荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测GPRASP1和腺苷三磷酸结合盒式亚家族A成员5(ABCA5)mRNA的表达情况。空白组和过表达组分别用慢病毒转染空白载体和GPRASP1过表达载体于A549细胞中;对照组和抵抗组分别用慢病毒转染对照小干扰RNA(si-control)于A549细胞及DDP耐药细胞中;干扰组用慢病毒转染GPRASP1小干扰RNA(si-GPRASP1)于DDP耐药细胞中。用CCK-8实验法检测细胞对DDP的半抑制浓度(IC50),用RT-PCR法检测各组细胞中GPRASP1与ABCA5的表达情况。结果癌旁组织、NSCLC组织与复发NSCLC组织中GPRASP1 mRNA表达量分别为(1.27±0.16)×10^(-2)、(2.68±0.30)×10^(-2)和(3.89±0.72)×10^(-2),ABCA5 mRNA表达量分别为(1.03±0.13)×10^(-1)、(1.85±0.21)×10^(-1)和(2.67±0.61)×10^(-1);复发NSCLC组织中GPRASP1和ABCA5 mRNA表达量均显著高于癌旁组织及NSCLC组织,差异均有统计学意义(均P<0.01)。空白组和过表达组的GPRASP1 mRNA表达量分别为1.00±0.16和5.98±0.66,ABCA5 mRNA表达量分别为1.00±0.09和2.81±0.33,DDP IC50分别为(2.10±0.13)和(3.50±0.11)μmol·L^(-1),差异均有统计学意义(均P<0.01)。对照组、抵抗组和干扰组的GPRASP1 mRNA表达量分别为1.00±0.11、3.37±0.31和0.81±0.13,ABCA5 mRNA表达量分别为1.00±0.10、4.06±0.43和2.30±0.25,DDP IC50分别为(2.08±0.13)、(7.87±0.61)和(5.77±0.55)μmol·L^(-1);抵抗组的上述指标与对照组和干扰组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论GPRASP1可显著促进ABCA5的表达,并介导NSCLC DDP抵抗。

GPRC5A抑制肺癌细胞A549增殖和迁移及与EGFR的相关性研究

目的探讨G蛋白偶联受体C家族5A(GPRC5A)基因对肺癌细胞A549增殖和迁移能力的影响及其与表皮生长因子受体(EGFR)的相关性。方法构建GPRC5A基因真核表达质粒pLenti6.3-MCS-GPRC5A,通过脂质体法转染A549细胞,经过新霉素筛选获得阳性单克隆细胞。用qRT-PCR和Western blot检测转染前后GPRC5A、EGFR基因的m RNA和蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖能力的变化,Transwell法检测细胞迁移能力的变化。结果真核表达质粒转染A549细胞后,GPRC5A m RNA表达上调,蛋白表达水平升高,EGFR m RNA表达下降,蛋白表达水平降低。高表达GPRC5A后,细胞增殖和迁移能力显著减弱。结论GPRC5A可能与EGFR结合,抑制EGFR通路的过度激活,从而影响了A549细胞的增殖和迁移能力。

miR-520a-5p靶向TGR5调控H9c2细胞中高糖引起的心肌肥大

目的探讨高糖引起H9c2细胞心肌肥大的潜在机制。方法通过高糖处理H9c2细胞后,检测其表面积大小以及心脏肥大标志物ANP,BNP,β-MHC的表达水平。通过高通量测序检测高糖处理H9c2细胞表达的差异mi RNA。过表达差异mi RNA后检测心脏肥大标志物ANP的表达水平。通过mi RDB在线分析mi RNA的潜在底物。结果高糖可使心肌细胞H9c2的大小增加(P<0.05)、表面积增加(P<0.05)。高糖处理后,心脏肥大标志物ANP,BNP,β-MHC的表达水平均上升(P<0.05)。敲低mi R-520a-5p后,心脏肥大标志物ANP,BNP,β-MHC的表达水平均下降(P<0.05)、心肌细胞H9c2表面积减少(P<0.05)。过表达mi R-520a-5p后,心脏肥大标志物ANP,BNP,β-MHC的表达水平均上升(P<0.05)、心肌细胞H9c2表面积增加(P<0.05)。mi R-520a-5p靶向TGR5的3端非编码区(P<0.05)。过表达mi R-520a-5p后,TGR5表达水平下降。敲低TGR5后,TGR5表达水平上升。敲低TGR5后,心脏肥大标志物ANP,BNP,β-MHC的表达水平均上升(P<0.05)、心肌细胞H9c2表面积增加(P<0.05)。过表达TGR5后,心脏肥大标志物ANP,BNP,β-MHC的表达水平均下降(P<0.05)、心肌细胞H9c2表面积减少(P<0.05)。结论高糖处理后,mi R-520a-5p的表达水平上升,mi R-520a-5p通过靶向TGR5 m RNA的3端非编码区后降解了TGR5 mRNA,降低了TGR5的蛋白水平,随后引起了H9c2细胞的心肌肥大。

M5毒蕈碱乙酰胆碱受体参与药物成瘾的研究进展

M5受体是毒蕈碱乙酰胆碱受体家族的一个新成员，是毒蕈碱乙酰胆碱受体家族（M1-M5亚型）最后一个被克隆出来的，属于G蛋白偶联受体。免疫沉淀和m RNA原位杂交实验表明M5受体在中枢神经系统中特定区域表达，包括海马、丘脑、黑质和中脑腹侧背盖区（VTA）部位）^[1，2，3]。可是和其他M受体比较，M5受体表达水平较低，

肠道菌群-胆汁酸途径对2型糖尿病的影响

目的综述肠道菌群-胆汁酸通路对2型糖尿病(T2DM)发生发展及防治的研究进展,为基于该通路的糖尿病防治提供文献参考,为开发治疗糖尿病的创新治疗方法提供思路。方法通过查阅国内外相关文献,我们综述了肠道菌群与T2DM的相关性、胆汁酸和T2DM相关性、肠道菌群与胆汁酸代谢的相关性,并重点论述了肠道菌群-胆汁酸通路在T2DM发生发展及防治中的研究进展,强调该路径对血糖调节方面的局限性和挑战,并探讨如何基于该路径开发防治T2DM的创新方法。结果与结论肠道菌群-胆汁酸通路可介导T2DM的发生发展。肠道菌群可通过一系列酶促反应,影响初级胆汁酸转变为次级胆汁酸,随后通过法尼醇X受体(FXR)、G蛋白偶联胆汁酸受体5(TGR5)调节信号传导,影响宿主的代谢途径。FXR和TGR5受体已成为糖尿病等代谢疾病研究的新靶点,开发肠道特异性FXR拮抗剂和TGR5激动剂可能是未来治疗T2DM的一个很有前途的方法,然而其长期效果值得进一步评估。

加味葛根芩连汤对2型糖尿病db/db小鼠胰腺组织TGR5/cAMP/GLP-1信号通路的影响

目的:探讨加味葛根芩连汤对肥胖型2型糖尿病(T2DM)模型小鼠血糖血脂及胰腺组织中G蛋白偶联胆汁酸受体5(TGR5)相关途径的影响。方法:将10只7周龄无特定病原体(SPF)级雄性m/m小鼠及50只7周龄SPF级雄性db/db小鼠在SPF级实验室适应性喂养1周。m/m小鼠作为空白组。成模后随机分为5组,每组10只,分别作为模型组、二甲双胍组(0.2 g·kg^(-1))、加味葛根芩连汤高、中、低剂量组(31.9、19.1、6.4 g·kg^(-1)),灌胃体积均为10 mL·kg^(-1),模型组和空白组灌服等体积蒸馏水,1次/d,连续12周。定期检测小鼠空腹血糖(FBG)。药物干预12周后,检测血清中糖化血清蛋白(GSP)、血清葡萄糖(GLU)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;采用苏木素-伊红(HE)染色观察各组小鼠胰腺组织病理改变,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胰腺组织TGR5、蛋白激酶A(PKA)、磷酸化(p)-PKA、环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、p-CREB、前蛋白转化酶1/3(PC1/3)、胰高糖素样肽-1(GLP-1)蛋白的表达水平,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测胰腺组织环磷腺苷(cAMP)的含量。结果:与空白组比较,模型组小鼠胰腺组织出现病理学改变;小鼠FBG、GSP、GLU、TC、TG、LDL-C水平显著增高(P<0.01),HDL-C水平明显降低(P<0.05);胰腺组织中TGR5、p-PKA(Thr197)/PKA、p-CREB(Ser133)/CREB、PC1/3、GLP-1蛋白表达水平显著降低(P<0.01);胰腺组织中cAMP的含量显著降低(P<0.01)。与模型组比较,治疗组胰腺组织病变程度减轻;加味葛根芩连汤高剂量组及二甲双胍组均能够明显降低db/db小鼠FBG、GSP、GLU、TC、TG、LDL-C水平(P<0.05,P<0.01),显著增高db/db小鼠HDL-C水平(P<0.01);除加味葛根芩连汤中剂量组GLP-1蛋白外,加味葛根芩连汤高、中剂量组及二甲双胍组TGR5、p-PKA(Thr197)/PKA、p-CREB(Ser133)/CREB、PC1/3、GLP-1蛋白表达水平均有不同程度的增加(P<0.05,P<0.01);加味葛根芩连汤高、中剂量组及二甲双胍组胰腺组织中cAMP的含量明显增高(P<0.05,P<0.01)。结论:加味葛根芩连汤能够改善T2DM模型db/db小鼠的葡萄糖稳态,其机制可能与调控TGR5/cAMP/GLP-1信号通路相关蛋白表达有关。

信号识别颗粒14调控肝细胞癌进程并影响患者预后

目的:探究信号识别颗粒14(SRP14)在肝细胞癌(HCC)中的表达及功能。方法:利用生物信息学、定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫组织化学染色和蛋白质印迹法等明确SRP14在HCC中的表达;应用Kaplan-Meier法分析SRP14 mRNA表达变化与HCC患者的总生存期、无进展生存期及疾病特异性生存期的相关性;通过5-乙基-2′-94脱氧尿苷(EdU)染色、MTS实验、Transwell小室实验及细胞划痕实验等探索SRP14对HCC细胞增殖和迁移的作用;利用京都基因与基因组百科全书(KEGG)和基因本体(GO)富集分析以及qRT-PCR初探SRP14在HCC中的作用机制。结果:在GSE14520数据集、TNMplot数据库和临床标本中,与配对癌旁组织、非配对癌旁组织或正常组织比较,HCC组织的SPR14 mRNA表达均有不同程度的升高(均P<0.05)。在临床标本中,与配对癌旁组织比较,HCC组织的SPR14蛋白表达上调(P<0.05)。SRP14表达上调的HCC患者具有更长的总生存期、无进展生存期及疾病特异性生存期(均P<0.05)。细胞实验结果显示,SRP14能抑制HCC细胞的体外增殖和迁移。KEGG和GO富集分析结果显示,在HCC中,与SRP14共表达的基因主要调控蛋白质合成、加工和运输等相关细胞活动或功能;在非酒精性脂肪性肝病相关HCC中,与SRP14共表达的基因主要调控MAPK、cAMP、PI3K-Akt、Wnt等多条信号传导通路。SRP14抑制HCC细胞中已知抑癌基因GPRC5A的mRNA表达(P<0.05)。结论:SRP14可能调控HCC进程并影响患者预后。

13例先天性双侧输精管缺如不育患者的致病基因突变检测

目的:检测先天性双侧输精管缺如(congenital bilateral absence of the vas deferens,CBAVD)患者中囊性纤维化跨膜转导调节因子(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)基因和CBAVD易感基因的突变情况,探讨它们与CBAVD发病风险的相关性。方法:对13例诊断为孤立发生的CBAVD患者的致病基因CFTR及易感基因黏附型G蛋白偶联受体G2(adhesion G protein-coupled receptor G2,ADGRG2)、上皮细胞钠离子通道β亚单位(sodium channel epithelial 1 subunit beta,SCNN1B)和碳酸酐酶12(carbonic anhydrase,CA12)和溶质载体家族9成员3(solute carrier family 9 member A3,SLC9A3)行全外显子测序及Sanger测序验证,针对CFTR基因多态性位点、内含子及侧翼序列行聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增后用Sanger测序,并运用生物信息学方法对CBAVD易感基因新发突变进行保守性分析和有害性预测。对13例CBAVD患者中1例患者的家系进行遗传学分析,评估子代遗传风险。结果:外显子测序发现13例CBAVD患者中,只有6例患者检测到CFTR基因外显子突变,有6种错义突变:c.2684G>A(p.Ser895Asn)、c.4056G>C(p.Gln1352His)、c.2812G>T(p.Val938Leu)、c.3068T>G(p.Ile1023Arg)、c.374T>C(p.Ile125Thr)、c.1666A>G(p.Ile556Val),1种无义突变:c.1657C>T(p.Arg553Ter),这6例患者中有2例患者同时还存在CFTR的纯合p.V470位点,另外7例患者未检测出CFTR基因外显子区域的突变。13例CBAVD患者中,3例患者携带纯合p.V470的多态性位点,4例患者携带5T等位基因,2例患者携带TG13等位基因,10例患者携带c.-966T>G位点。4例CBAVD患者同时携带以上CFTR基因突变位点中的2~3个位点。13例患者中CBAVD易感基因突变情况:1种ADGRG2错义突变c.2312A>G(p.Asn771Ser),2种SLC9A3错义突变c.2395T>C(p.Cys799Arg)、c.493G>A(p.Val165Ile),1种SCNN1B错义突变c.1514G>A(p.Arg505His)和1种CA12错义突变c.1061C>T(p.Ala354Val),其中,SLC9A3基因的c.493G>A(p.Val165Ile)突变位点是首次在CBAVD患者中被发现,以上5种突变位点在gnomAD数据库中的人群变异频率极低,属于罕见突变,用Mutation Taster和Polyphen-2软件预测显示SLC9A3基因的c.493G>A(p.Val165Ile)位点和SCNN1B基因的c.1514G>A(p.Arg505His)位点的有害性等级为致病突变。1例家系遗传分析发现,先证者的c.1657C>T(p.Arg553Ter)突变为新生突变,先证者父亲、母亲均未携带该突变,先证者及其配偶通过辅助生殖技术孕育1女婴,该女婴遗传了先证者的致病性突变c.1657C>T(p.Arg553Ter)。结论:CFTR基因突变仍然是中国CBAVD患者的主要致病原因,但突变的分布与频率与国内外其他研究的数据存在一定差异,需要进一步扩充中国CBAVD患者的CFTR突变谱;ADGRG2、SLC9A3、SCNN1B和CA12易感基因可能解释部分无CFTR突变的CBAVD病例;CBAVD患者多无特殊临床表现,建议临床医生确诊前对患者行进一步的体格检查,并结合其阴囊超声或经直肠超声检查;建议将CFTR基因突变检测应用于辅助生殖前的遗传学筛查,降低子代罹患CBAVD及囊性纤维化的风险。

GPRC5D CAR-T细胞治疗复发/难治性多发性骨髓瘤:单臂Ⅱ期临床试验

G蛋白偶联受体,C类5组成员D(G-protein-coupled receptor family C group 5 member D,GPRC5D)被认为是多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)免疫治疗的潜在靶标。2021年9月1日—2022年3月23日,本Ⅱ期单臂临床试验共纳入33例复发/难治(relapsed or refractory,R/R)MM患者(18~70岁),在接受淋巴细胞清除化疗后输注2×106/kg抗GPRC5D嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)-T细胞,随后进行有效性和安全性的评估。在中位随访5.2(3.2~8.9)个月时,患者总体反应率为91%(95%CI 76%~98%,30/33例),包括11例(33%)严格意义上的完全缓解,10例(30%)完全缓解,4例(12%)非常好的部分缓解和5例(15%)部分缓解。9例既往接受过抗B细胞成熟抗原(B-cell maturation antigen,BCMA)CAR-T细胞治疗的患者疗效均达部分缓解或以上,其中包括2例接受过2次或以上抗BCMA CAR-T细胞输注的患者。3级或更高的血液学毒性为中性粒细胞减少[33例(100%)]、贫血[17例(52%)]和血小板减少症[15例(45%)]。33例患者中25例(76%)发生细胞因子释放综合征(均为1级或2级),3例患者发生神经毒性(1例2级和1例3级免疫效应细胞相关神经毒性综合征,1例3级头痛)。综上所述,抗GPRC5D CAR-T细胞疗法在R/R MM患者中表现出令人鼓舞的临床疗效和可控的安全性。对于抗BCMA CAR-T细胞治疗后进展或无效的MM患者,抗GPRC5D CAR-T细胞治疗可能是一种潜在的替代选择。