G蛋白耦联受体C家族6组A亚型在前列腺癌细胞增殖和凋亡中的作用

目的前列腺癌(PCa)在我国的发病率逐年上升。G蛋白耦联受体C家族6组A亚型(GPRC6A)是近年来发现的PCa易感基因。文章探讨GPRC6A及其介导的细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)在前列腺癌LncapC4?2细胞增殖与凋亡中的作用。方法实验分为LncapC4?2 PCDH组(仅转染空载体pCDH)、LncapC4?2 GPRC6A组(仅转染pCDH?GPRC6A)和LncapC4?2 GPRC6A+U0126组(转染pCDH?GPRC6A并加入U0126处理),通过CCK8检测细胞增殖变化,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡改变以及Western blot方法检测细胞周期与凋亡相关蛋白的变化。结果 Western blot法结果表明,与LncapC4?2 PCDH组比较,LncapC4?2 GPRC6A组的GPRC6A和P?ERK表达增加(P<0.05);与LncapC4?2 GPRC6A组比较,LncapC4?2 GPRC6A+U0126组的P?ERK的表达明显降低(P<0.05)。CCK8检测表明LncapC4?2 GPRC6A组相较LncapC4?2 PCDH组增殖加快(P<0.05),而LncapC4?2 GPRC6A+U0126组相较LncapC4?2 GPRC6A组增殖明显减慢(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示LncapC4?2 GPRC6A组的G1/(S+G2)值较LncapC4?2 PCDH组明显降低(P<0.05);LncapC4?2 GPRC6A+U0126组的G1/(S+G2)值较LncapC4?2 GPRC6A组明显升高(P<0.05)。Western blot结果中LncapC4?2 GPRC6A组的CyclinD1蛋白表达(0.88±0.04)较LncapC4?2 PCDH组(0.66±0.02)明显升高(P<0.05),而LncapC4?2 GPRC6A+U0126组的CyclinD1蛋白表达(0.71±0.02)较LncapC4?2 GPRC6A组明显降低(P<0.05)。流式细胞仪检测凋亡结果表明,LncapC4?2 GPRC6A组的凋亡比例(3.64%)较LncapC4?2 PCDH组(9.00%)和LncapC4?2 GPRC6A+U0126组(19.57%)明显降低(P<0.05)。同时Western blot检测结果表明,LncapC4?2 GPRC6A组的Bcl2的表达比LncapC4?2 PCDH组高,活化Caspase3的表达则降低(P<0.05);LncapC4?2 GPRC6A+U0126组相对于LncapC4?2 GPRC6A组Bcl2的表达降低,活化Caspase3的表达则增高(P<0.05)。结论 GPRC6A可能通过ERK信号通路促进PCa细胞增殖,抑制细胞凋亡,而参与PCa的发展过程。

炎症信号通路对肺肿瘤抑制基因G蛋白偶联受体C型家族5A表达的抑制作用

目的·探究炎症信号通路对G蛋白偶联受体C型家族5A(G protein-coupled receptor class C group 5 member A,GPRC5A)表达的调控作用。方法·给予核因子κB(NF-κB)启动子驱动荧光酶转基因小鼠腹腔注射细菌内毒素脂多糖(LPS),诱导肺组织炎症,活体动物可见光成像系统下观察小鼠肺部NF-κB信号通路激活情况。在C57BL/6J小鼠,腹腔注射LPS,Western blotting检测肺组织GPRC5A表达情况。体外实验中,对人肺癌细胞Calu-1、H322,人胚胎肾细胞HEK293T给予肿瘤坏死因子α(TNF-α)或转染p65表达质粒,而后用Western blotting、RT-PCR、荧光素酶报告基因实验、免疫荧光等方法检测分析炎症对GPRC5A表达的影响。结果·小鼠腹腔注射LPS可以诱导NF-κB炎症信号通路激活,并抑制肺组织中GPRC5A的表达。炎症因子TNF-α可明显抑制Calu-1细胞GPRC5A的蛋白和mRNA表达。在HEK293T细胞,转染p65表达质粒后,可以抑制GPRC5A启动子驱动的荧光素酶报告质粒的表达。被转染并表达绿色荧光蛋白-p65的H322细胞中几乎没有GPRC5A的表达。结论·NF-κB信号通路可以抑制GPRC5A启动子的转录活性,抑制其mRNA和蛋白的表达。

GPRC5A调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响

目的ATP结合盒B亚家族成员1(ATP binding cassette subfamily B member 1,ABCB1)的异常表达在多种癌症的发生发展中发挥关键作用。然而,G蛋白偶联受体C家族5组A型(G protein coupled receptor family C group5 type A,GPRC5A)调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响仍不清楚。本研究探讨了GPRC5A调控的ABCB1表达对肺腺癌增殖的影响。方法我们采用RT-PCR、Western-blot或免疫组化实验,分析ABCB1在肺腺癌细胞系、人肺腺癌组织以及GPRC5A基因敲除小鼠和野生型小鼠的气管上皮细胞和肺组织中的表达。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析GPRC5A基因敲除小鼠气管上皮细胞对化疗药物的敏感性。采用皮下肿瘤形成实验探讨下调ABCB1表达是否可抑制体内肺腺癌增殖。采用免疫荧光和免疫沉淀实验研究GPRC5A和ABCB1之间潜在的调控关系。结果ABCB1在肺腺癌细胞系和人类肺腺癌组织中表达上调。GPRC5A基因敲除小鼠的气管上皮细胞及肺组织的ABCB1表达高于野生型小鼠。与GPRC5A野生型小鼠的气管上皮细胞相比,GPRC5A基因敲除小鼠的气管上皮细胞对塔立奇达和多柔比星更敏感。注射移植细胞28天后,接受ABCB1基因敲除细胞移植的GPRC5A-/-C57BL/6小鼠的肺肿瘤的体积和重量均明显低于野生型细胞移植小鼠(P=0.0043,P=0.0060)。此外,免疫荧光和免疫沉淀实验表明,GPRC5A通过直接结合方式调控ABCB1的表达。结论GPRC5A通过抑制ABCB1表达降低肺腺癌增殖。GPRC5A调节ABCB1表达的途径有待研究。

下调G蛋白偶联受体C家族5A表达抑制脂多糖诱导的人牙龈成纤维细胞炎症反应

目的探究下调G蛋白偶联受体C家族5A(GPRC5A)表达对脂多糖诱导的人牙龈成纤维细胞(GFs)炎症反应的影响并探索其机制,为深入探讨G蛋白偶联受体(GPCR)在牙周炎中的调控作用及其机制奠定基础。方法于2022年12月至2023年2月在山东大学口腔医学院·口腔医院口腔颌面外科、牙周科收集3名牙周健康者(牙周健康组)和3例牙周炎患者(牙周炎组)的牙龈组织,采用免疫组化染色检测两组牙龈组织中GPRC5A的表达。收集健康牙龈组织提取GFs,健康牙龈组织来自2022年12月至2023年2月在山东大学齐鲁医学院口腔医学院·口腔医院口腔颌面外科招募的6例16~20岁需拔除埋伏阻生齿的患者。应用胶原酶消化法提取并培养GFs,设置30、50和80μmol/L浓度转染GPRC5A小干扰RNA(siGPRC5A)的实验组和阴性对照小干扰RNA(siNC),利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测siGPRC5A的沉默效率;设置阴性对照、脂多糖、siGPRC5A+脂多糖和siGPRC5A 4个组,通过RT-qPCR和蛋白质印迹法分别验证应用siGPRC5A对1 mg/L脂多糖诱导的GFs炎症状态下GPRC5A在基因和蛋白水平的表达;下调GPRC5A表达后,RT-qPCR检测脂多糖诱导的GFs白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)基因的表达;通过蛋白质印迹法、免疫荧光染色检测核因子-κB(NF-κB)信号通路的激活情况。结果免疫组化结果显示,牙周炎组牙龈组织中GPRC5A表达(0.132±0.006)显著高于牙周健康组(0.036±0.019)(t=8.24,P=0.001)。RT-qPCR结果显示,在脂多糖作用2、6、12和24 h时,脂多糖组GPRC5A基因水平表达量(分别为0.026±0.002、0.042±0.005、0.004±0.000、0.016±0.000)均分别显著高于阴性对照组(分别为0.004±0.000、0.004±0.000、0.002±0.000、0.007±0.000)(均P<0.001),且6 h时达峰值。50μmol/L siGPRC5A(31.16±3.29)与siNC组(100.00±4.88)相比能有效沉默GFs中GPRC5A的表达(F=297.98,P<0.001)。RT-qPCR和蛋白质印迹法结果显示,脂多糖组GPRC5A在基因和蛋白水平的表达(分别为1.30±0.10、1.43±0.03)均显著高于阴性对照组(分别为1.00±0.01、1.00±0.00)(均P<0.001),siGPRC5A组(分别为0.27±0.03、0.71±0.00)均显著低于阴性对照组(分别为1.00±0.01、1.00±0.00)(均P<0.001),siGPRC5A+脂多糖组(分别为0.39±0.03、1.06±0.16)均显著低于脂多糖组(分别为1.30±0.10、1.43±0.03)(均P<0.001)。RT-qPCR结果显示,脂多糖组IL-8、IL-1β、IL-6、TNF-α、PTGS2基因表达水平均显著高于阴性对照组,siGPRC5A+脂多糖组均显著低于脂多糖组(均P<0.001)。蛋白质印迹法结果表明,脂多糖组p65和IκBα蛋白磷酸化水平均显著高于阴性对照组,而siGPRC5A+脂多糖组均显著低于脂多糖组(均P<0.01)。免疫荧光染色结果显示,对照组NF-κB p65集中表达于胞质,在脂多糖刺激下p65部分向核内转位,应用siGPRC5A后能一定程度上抑制脂多糖诱导的p65核内转位。结论GPRC5A在GFs炎症状态下表达增加,下调GPRC5A的表达能抑制脂多糖诱导的炎症反应,且GPRC5A可通过NF-κB信号通路发挥炎症调控的作用。

miR-204靶向GPRC5A对结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-204(miR-204)对结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法 体外培养人正常结肠上皮细胞(FHC)和人结肠癌肿瘤细胞(HCT116);将HCT116细胞随机分为对照组、miR-204 mimic组和miR-204 NC组;利用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组HCT116细胞miR-204及G蛋白耦联受体C型家族(GPRC)5A表达情况;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组HCT116细胞的增殖情况;划痕实验检测各组HCT116细胞的迁移能力;Transwell法检测各组HCT116细胞的侵袭能力;Western检测各组HCT116细胞GPRC5A蛋白的表达情况;采用双荧光素酶报告实验验证miR-204与GPRC5A的靶向关系。结果 与正常组相比,各组HCT116细胞miR-204表达水平显著降低(P<0.05)。与对照组和miR-204 NC组相比,miR-204 mimic组HCT116细胞miR-204表达水平显著升高(P<0.05),细胞存活率、划痕愈合率、侵袭数量、GPRC5A mRNA及GPRC5A蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与GPRC5A-3′UTR-WT+miR-204 NC组比较,GPRC5A-3′UTR-WT+miR-204 mimic组荧光素酶活性降低(P<0.05)。结论 过表达miR-204可能靶向下调GPRC5A基因表达,抑制人结肠癌细胞的增殖、迁移及侵袭行为。

GPRC5A和SOCS3在大肠癌中的表达及临床意义

目的:研究G蛋白偶联受体C家族5A(GPRC5A)和细胞因子信号转导抑制因子-3(SOCS3)在大肠癌中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学(SP法)检测GPRC5A和SOCS3在45例大肠癌、25例大肠腺瘤及22例正常大肠黏膜组织中的表达。结果:1)GPRC5A在大肠癌组织中的表达(22.2%)明显低于腺瘤组织(52.0%,P<0.05),腺瘤组织中的表达明显低于正常大肠黏膜组织(81.8%,P<0.05)。GPRC5A的表达与有无淋巴结转移、Dukes分期、浸润深度密切相关(P<0.05)。2)SOCS3在大肠癌组织中的表达(24.4%)明显低于腺瘤组织(56.0%,P>0.01),腺瘤组织中的表达明显低于正常大肠黏膜组织(86.4%,P<0.05)。SOCS3的表达与肿瘤分化程度、浸润深度、Dukes分期、有无淋巴结转移有关(P<0.05)。3)GPRC5A与SOCS3在大肠癌组织中的表达呈正相关(r=0.503,P<0.05)。结论:GPRC5A和SOCS3的低表达参与了大肠癌的发生、发展,联合检测两蛋白可能作为临床判断大肠癌的恶性程度及预后的参考指标,并有望成为基因治疗的新靶点。

GPRC5A对LPS诱导的支气管上皮16HBE细胞损伤的影响及机制

目的探究G蛋白偶联受体家族C组5型(GPRC5A)对脂多糖(LPS)诱导的人支气管上皮16HBE细胞多种生物学特性的影响,并探讨其分子机制。方法利用LPS建立16HBE细胞损伤模型,将细胞分为4组:Control组、LPS组、LPS+pcDNA组和LPS+pcDNA-GPRC5A组。利用患者样本和基因表达组学数据库数据分析支气管哮喘(BA)患者和健康受试者气道组织中的GPRC5A的表达情况;采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测GPRC5A、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的mRNA表达水平;采用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖与凋亡;Western-Blot检测GPRC5A、气道黏蛋白5AC(MUC5AC)、NF-κB p65和NF-κB抑制因子α(IκBα)蛋白的表达水平。结果成功构建LPS诱导的16HBE细胞损伤模型;与健康受试者组织和Control组细胞比较,GPRC5A在EBCs组织和LPS组的16HBE细胞中下调(P<0.05);而与LPS组和LPS+pcDNA组比较,LPS+pcDNA-GPRC5A组的细胞凋亡率、炎症因子TNF-α和IL-6、气道黏蛋白MUC5AC、NF-κB p65和IκBα的表达均显著下降,而细胞活力升高(P<0.05)。结论GPRC5A可能通过NF-κB通路抑制LPS诱导的16HBE细胞凋亡、炎症反应和气道黏蛋白的分泌,促进细胞的活力,发挥阻碍损伤的作用。

GPRC5A和STAT3在食管鳞癌组织中的表达及临床病理意义

目的:探讨G蛋白偶联受体C家族5A(G protein-coupled receptor family C,member 5,group A,GPR C5A)和信号转导子与转录激活子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达、两者的相关性及其临床病理意义.方法:采用免疫组织化学法分别检测ESCC、癌旁组织及正常食管黏膜组织中GPRC5A及STAT3蛋白的表达,并分析两者表达水平相关性及与临床病理因素的关系.采用χ2检验进行统计学分析.结果:GPRC5A在ESCC、癌旁组织、正常食管黏膜组织中的阳性表达率分别为41.79%、58.21%、68.66%,STAT3在ESCC、癌旁组织、正常食管黏膜组织中的阳性表达率分别为80.60%、71.64%、53.73%.两者在组间的表达差异有统计学意义(P<0.05).食管鳞癌组织中GPRC5A和STAT3蛋白表达与肿瘤分级及浸润深度均密切有关(P<0.05),与年龄、性别、淋巴结转移无关,两者在ESCC组织中的表达呈负相关(r=-0.254,P<0.05).结论:GPRC5A和STAT3蛋白表达与ESCC发生、发展、浸润有关,联合检测GPRC5A和STAT3两蛋白可更准确判断ESCC的生物学行为,对食管鳞癌的预后判断具有重要的意义,并有望成为食管癌基因治疗的新靶点.

GPRC5A对肝癌细胞增殖、凋亡和氧化应激的影响及作用机制探讨

目的通过检测G蛋白偶联受体家族C群5成员A(G protein coupled receptor C type group 5 member A,GPRC5A)在肝癌组织及细胞中的表达,探讨GPRC5A对肝癌细胞增殖、凋亡、氧化应激的影响及其相关作用机制。方法收集2018年12月~2019年11月在解放军联勤保障部队第九六九医院行手术治疗的38例肝癌患者癌组织及配对癌旁正常组织样本;另选取人正常肝上皮细胞株HL-7702和人肝癌细胞株(HepG2,HCCLM3,HuH-7和MHCC-97H)进行研究。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肝癌组织、癌旁正常组织及肝癌细胞、正常肝上皮细胞中GPRC5A表达量。通过转染pcDNA3.1-GPRC5A质粒构建过表达GPRC5A肝癌细胞株,采用MTT实验和V-FITC/PI凋亡试剂盒分别检测过表达GPRC5A对肝癌细胞增殖、凋亡的影响。采用活性氧指示剂DCFH-DA检测细胞中氧化应激相关因子活性氧(ROS),NAD+/NADH和三磷酸腺苷(ATP)水平。采用Western blot实验检测凋亡相关蛋白caspase-3及上皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平。结果肝癌组织中GPRC5A表达较癌旁正常组织显著降低(0.34±0.09 vs 0.73±0.10),差异有统计学意义(t=17.869,P<0.01)。肝癌细胞HepG2(0.35±0.06),HCCLM3(0.38±0.10),HuH-7(0.53±0.07),MHCC-97H(0.67±0.06)中GPRC5A表达量显著低于人正常肝上皮细胞HL-7702中的GPRC5A表达量(1.00±0.08),差异有统计学意义(t=5.716~11.258,均P<0.05)。pcDNA3.1-GPRC5A组转染36 h细胞增殖吸光度(A)值(0.94±0.16)显著低于对照组(1.49±0.05)和pcDNA3.1组(1.45±0.07)(F=25.640,P<0.01)。GPRC5A过表达组VEGF(0.98±0.04)表达量较对照组(2.94±0.15)和pcDNA3.1组(2.89±0.11)显著降低(F=310.450,P<0.001)。pcDNA3.1-GPRC5A组细胞中ROS(182.12±13.42)水平显著高于对照组(101.23±11.20)和pcDNA3.1组(98.30±10.26)(F=49.577,P<0.001);NAD+/NADH(35.24±6.43)及ATP(55.34±6.51)水平显著低于对照组(100.25±12.41,100.17±14.36)和pcDNA3.1组(97.86±9.67,102.23±11.02)(F=42.338,17.077,P<0.05)。GPRC5A过表达组细胞凋亡率高于对照组和pcDNA3.1组;细胞凋亡蛋白caspase-3(2.61±0.16)表达量也高于对照组(1.00±0.11)和pcDNA3.1组(1.01±0.02)(F=202.843,P<0.001)。pcDNA3.1-GPRC5A组细胞中p-STAT3表达量(0.43±0.06)显著低于对照组(1.00±0.13)和pcDNA3.1组(1.03±0.12)(F=29.476,P<0.001);pcDNA3.1-GPRC5A组下游基因Socs3(0.47±0.05),c-MYC(0.54±0.06)表达量也显著低于对照组(1.01±0.05,1.00±0.04)和pcDNA3.1组(0.98±0.09,1.02±0.06)(F=63.275,75.409,P<0.001)。肝癌组织中STAT3与GPRC5A表达量呈显著负相关(r=-0.746,P<0.01)。过转染pcDNA3.1-STAT3或pcDNA3.1-NLRP3后显著逆转了pcDNA3.1-GPRC5A对肝癌细胞的抑制作用(P<0.05)。结论GPRC5A低表达可能通过调节STAT3/Socs3/c-MYC信号和炎症反应抑制了肝癌细胞的增殖,诱导肝癌细胞的氧化应激和凋亡。

GPRC5A抑制肺癌细胞A549增殖和迁移及与EGFR的相关性研究

目的探讨G蛋白偶联受体C家族5A(GPRC5A)基因对肺癌细胞A549增殖和迁移能力的影响及其与表皮生长因子受体(EGFR)的相关性。方法构建GPRC5A基因真核表达质粒pLenti6.3-MCS-GPRC5A,通过脂质体法转染A549细胞,经过新霉素筛选获得阳性单克隆细胞。用qRT-PCR和Western blot检测转染前后GPRC5A、EGFR基因的m RNA和蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖能力的变化,Transwell法检测细胞迁移能力的变化。结果真核表达质粒转染A549细胞后,GPRC5A m RNA表达上调,蛋白表达水平升高,EGFR m RNA表达下降,蛋白表达水平降低。高表达GPRC5A后,细胞增殖和迁移能力显著减弱。结论GPRC5A可能与EGFR结合,抑制EGFR通路的过度激活,从而影响了A549细胞的增殖和迁移能力。

GPRC5A基因在肺腺癌中的表达及临床意义

目的了解G蛋白偶联受体C型家族5A(GPRC5A)基因在肺腺癌组织及癌旁正常组织中的表达,并探讨其临床意义。方法分别采用Real-time PCR和Western blot法检测25例肺腺癌组织及癌旁正常组织GPRC5A mRNA和蛋白表达水平。应用免疫组化法检测93例肺腺癌组织及癌旁正常组织GPRC5A蛋白的表达情况,并分析GPRC5A蛋白的表达与临床病理特征及预后的关系。结果 25例肺腺癌组织中GPRC5A mRNA和蛋白表达水平均明显低于癌旁正常组织(均P<0.05)。93例肺腺癌中GPRC5A蛋白低表达率为55.9%,均表达在胞质和胞膜中。GPRC5A蛋白的表达与肿瘤分化程度、TNM分期及淋巴结转移均有关(均P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤大小均无关(均P>0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示,GPRC5A高表达的患者3年生存率为73.7%,高于低表达患者的39.4%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 GPRC5A在肺腺癌组织中低表达,其低表达与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移及预后密切相关,可作为估计生存率的独立指标。

GPRC5A在喉癌发生中的生物学作用及机制研究

目的探讨G蛋白偶联受体C家族5A(Gprotein-coupled receptor family C,member 5,group A,GPRC5A)在喉癌组织中的表达特征,分析其在喉癌发展进程中的作用及机制。方法选取河北医科大学第二医院收治的32例经病理检查确定为喉鳞状细胞癌患者的喉癌组织及癌旁组织,采用免疫组织化学方法检测GPRC5A在喉癌组织及癌旁组织中的表达,并分析其表达特征与患者临床资料的相关性。采用定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)方法对GPRC5A在喉癌组织与癌旁组织的表达进行组织水平的验证,在人支气管上皮细胞系BEAS-2B、喉癌细胞系TU686及下咽癌细胞系Fadu中进行细胞水平的验证。构建GPRC5A过表达质粒p-GPRC5A,转染至喉癌TU686细胞中采用cell counting kit 8、Transwell方法检测GPRC5A基因过表达对喉癌TU686细胞增殖、侵袭及迁移的影响。Western blot检测GPRC5A基因过表达对细胞凋亡相关蛋白表达的影响。Western blot验证GPRC5A基因过表达对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)/STAT3(epidermal growth factor receptor/signal transducer and activator of transcription 3)通路的影响。结果免疫组织化学结果表明,GPRC5A在喉癌组织中的阳性表达率显著低于癌旁组织(χ^(2)=14.190,P<0.001)。GPRC5A在不同肿瘤分期、淋巴结转移、分化程度喉癌组织中表达差异无统计学意义(P>0.05)。GPRC5A在喉癌组中的表达显著低于癌旁组(t=3.175,P=0.003)。GPRC5A在喉癌TU686和Fadu细胞中表达为BEAS-2B的(0.73±0.08)和(0.78±0.04)倍,差异有统计学意义(F=9.060,P=0.015);CCK8结果表明,48 h后p-GPRC5A组的OD值为0.76±0.03,显著低于NC组1.20±0.01和对照组1.30±0.08(F=69.970,P<0.001);Transwell实验表明,p-GPRC5A组细胞迁移的细胞数为138.70±10.97,显著低于对照组251.3±16.9和NC组247.7±17.5(F=5731.100,P<0.001)。p-GPRC5A组细胞侵袭的细胞数为113.00±10.21,显著低于对照组193.3±010.02和NC组190.00±7.90(F=8894.100,P<0.001)。Western blot结果表明,与对照组相比,Caspase3蛋白在p-GPRC5A组表达显著升高(F=78.880,P<0.001),Bcl-2蛋白在p-GPRC5A组的表达显著降低(F=125.820,P<0.001)。EGFR和p-STAT3蛋白在p-GPRC5A组的表达显著降低(F=27.573,P=0.001;F=60.614,P<0.001)。结论GPRC5A在喉癌组织及细胞系中低表达。GPRC5A基因过表达可抑制喉癌细胞增殖,迁移和侵袭,促进细胞凋亡发生,并抑制EGFR/STAT3通路的激活。

沙库巴曲缬沙坦钠对急性心肌梗死后心力衰竭患者血清sFRP5、VS-2、GRK2水平的影响

目的 探讨沙库巴曲缬沙坦钠对急性心肌梗死(AMI)后心力衰竭患者血清分泌型卷曲相关蛋白5(sFRP5)、血管抑制因子-2(VS-2)、G蛋白耦联受体激酶2(GRK2)水平的影响。方法 以随机数表法将江西省丰城市人民医院收治的108例AMI后心力衰竭患者分为A组及B组,各54例。B组采用常规治疗方法,A组在此基础上增加沙库巴曲缬沙坦钠治疗,比较两组血清sFRP5、VS-2、GRK2水平、心室重构及心功能指标、临床症状及生活质量、不良反应。结果 治疗后A组左心室舒张末期室间隔厚度(IVST)、左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室收缩末期后壁厚度(LVPWT)、左心室收缩末期内径(LVESd)、左心室质量指数(LVMI)低于B组,心排血指数(CI)高于B组(P<0.05);治疗后A组sFRP5、VS-2水平高于B组,GRK2水平低于B组(P<0.05);治疗后A组Lee氏心力衰竭积分、心功能不全生活质量量表(MLHFQ)评分低于B组(P<0.05);A、B组总不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 沙库巴曲缬沙坦钠可以提高AMI后心力衰竭患者心功能,改善心肌重构,提高血清sFRP5、VS-2水平,降低GRK2表达,改善患者临床症状。

胆汁酸代谢与2型糖尿病

研究发现,胆汁酸代谢异常影响胰岛素敏感性和糖代谢.胆汁酸是一种代谢调节器,它通过受体依赖性和非受体依赖性途径发挥信号分子的作用.在受体依赖性途径中,介导胆汁酸信号转导的最重要信号分子是核受体法尼醇X受体（FXR）及膜受体G蛋白耦联胆汁酸受体5（TGR5）.胆汁酸的信号通路紊乱会导致胰岛素敏感性降低.因此,对胆汁酸代谢的调节,尤其是对其信号通路的调节有望成为治疗2型糖尿病的潜在方法.

骨边刺电针干预对骨癌痛吗啡耐受大鼠蓝斑核的影响

目的:观察骨边刺电针对骨癌痛吗啡耐受大鼠蓝斑核G蛋白耦联受体激酶5(GRK5)、β-抑制蛋白2(β-arrestin2)、蛋白激酶Cα(PKCα)及其磷酸化(p-PKCα)表达的影响,部分揭示骨边刺电针干预骨癌痛吗啡耐受的中枢机制。方法:SD大鼠随机分为假骨癌痛组、骨癌痛组、吗啡耐受组、骨边刺电针组和假电针组,每组8只。采用胫骨骨髓腔内注射3μL MRMT-1大鼠乳腺癌细胞建立骨癌痛模型,在此基础上通过腹腔多次注射盐酸吗啡注射液(10 mg/kg)建立骨癌痛吗啡耐受模型。骨边刺电针组于成功建立骨癌痛吗啡耐受模型后,开始介入骨边刺电针干预,每日1次,持续7 d。动态观察各组大鼠患侧足跖机械痛阈。采用免疫印迹法观察各组大鼠患侧蓝斑核GRK5、β-arrestin2、PKCα、p-PKCα蛋白表达。结果:与假骨癌痛组比较,癌细胞接种后10 d骨癌痛组大鼠患侧足跖机械痛阈显著降低(P<0.01);吗啡注射后,与骨癌痛组比较,吗啡耐受组、骨边刺电针组和假电针组大鼠患侧足跖机械痛阈显著升高(P<0.01),而吗啡注射11 d后,吗啡耐受组机械痛阈显著降低,与骨癌痛组比较差异无统计学意义(P>0.05),出现耐受现象;与吗啡耐受组、假电针组比较,骨边刺电针组干预后机械痛阈明显升高(P<0.01)。与假骨癌痛组比较,吗啡耐受组大鼠蓝斑核GRK5蛋白表达显著降低(P<0.01);与吗啡耐受组和假电针组比较,骨边刺电针组蓝斑核GRK5蛋白表达显著升高(P<0.01)。与假骨癌痛组比较,骨癌痛组大鼠蓝斑核β-arrestin2、p-PKCα蛋白表达显著增多(P<0.01);与吗啡耐受组和假电针组比较,骨边刺电针组蓝斑核β-arrestin2、p-PKCα蛋白表达显著降低(P<0.01)。与吗啡耐受组和假电针组比较,骨边刺电针组蓝斑核PKCα蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:骨边刺电针可有效干预骨癌痛吗啡耐受现象,其机制可能与增加蓝斑核GRK5,抑制β-arrestin2、PKCα及其磷酸化水平有关。

袖状胃切除术对肥胖合并糖尿病大鼠的降糖效果分析及机制探索

目的探讨袖状胃切除术(sleeve gastrectomy,SG)对肥胖合并糖尿病大鼠术后血糖的影响及相关机制。方法32只12周龄Goto-Kakizaki(GK)糖尿病大鼠随机分成4组:假手术组(A组)、袖状胃手术组(B组)、袖状胃手术+胆汁外引流组(C组)及袖状胃手术+胆汁外引流+齐墩果酸组(D组)。对比术前及术后各组空腹血糖及血胆汁酸变化。采用ELISA法检测各组血清GLP-1表达水平,采用Western blot检测末段回肠黏膜组织胆汁酸G蛋白耦联受体(TGR5)蛋白表达差异。结果术后4周A组血糖术前术后差异无统计学意义[(18.89±1.37)vs(18.87±1.53)mmol/L(P>0.05)],B组、D组血糖较术前明显降低[(18.74±1.33)vs(9.30±1.43)mmol/L(P<0.05),(19.10±1.21)vs(9.17±1.41)mmol/L(P<0.05)],C组术后血糖低于术前,但差异无统计学意义[(18.90±1.47)vs(16.81±1.76)mmol/L(P>0.05)];术后4周血清总胆汁酸水平A组术前术后差异无统计学意义[(2.6±1.0)vs(2.8±1.5)μmol/L(P>0.05)],B组术后胆汁酸水平明显高于术前[(2.4±1.4)vs(5.1±1.7)μmol/L(P<0.05)]、C组和D组术后胆汁酸水平则明显低于术前,差异有统计学意义[(2.7±1.3)vs(1.1±0.6)μmol/L,(2.7±1.2)vs(10±0.4)μmol/L(P<0.05)];术后4周各组大鼠血清GLP-1水平A组术前术后差异无统计学意义[(7.12±0.32)vs(7.22±0.19)μmol/L(P>0.05)],B组、D组术后较术前明显升高[(7.24±0.41)vs(15.11±0.74)μmol/L,(7.27±0.28)vs(16.09±0.14)μmol/L(P<0.05)],C组GLP-1术后术前相比差异无统计学意义[(7.07±0.32)vs(6.91±0.36)mmol/L(P>0.05)];B组和D组末端回肠的TGR5蛋白表达均较A组增高,而C组表达与A组相似。结论袖状胃切除术对T2DM大鼠降糖效果确切,SG治疗糖尿病的机制中,胆汁酸及其相关受体TGR5起到了重要的作用。