G蛋白耦联受体激酶结合蛋白1通过调节细胞外调节激酶1/2的活性促进成骨细胞迁移

目的探索G蛋白耦联受体激酶结合蛋白1(GITI)在成骨细胞迁移中的作用,并分析其机理。方法通过Western blot方法检测GIT1蛋白在鼠的成骨细胞内的表达；用免疫荧光染色方法确定：在血小板衍生生长因子(PDGF)不刺激和刺激的条件下,GIT1和细胞外调节激酶1/2(ERK1/2)在成骨细胞内的位置；用共同免疫沉淀的方法测定GIT1和ERK1/2相互结合,并且用免疫荧光双染的方法确定这两种蛋白相互结合的位置；用包含GIT1-RNA发夹结构的腺病毒感染成骨细胞后,用免疫荧光染色方法确定磷酸化ERK1/2(pERK1/2)在成骨细胞内的位置,用划痕愈合法检测在PDGF刺激下的迁移能力。结果在成骨细胞内,PDGF刺激导致了GIT1和ERK1/2的相互结合,并且这种结合发生在成骨细胞的局部粘附内。包含GIT1-RNA发夹结构的腺病毒明显抑制了pERK1/2招募至成骨细胞局部粘附内以及PDGF所刺激的成骨细胞的迁移。结论在PDGF刺激下,GIT1招募pERK1/2至成骨细胞的局部粘附内,从而促进成骨细胞的迁移。

周期性应力通过G蛋白耦联受体激酶结合蛋白1调控髓核细胞细胞外基质的表达

目的 观察周期性应力下G蛋白耦联受体激酶结合蛋白1（Git1）对大鼠髓核细胞细胞外基质表达的影响.方法 首先将细胞玻片分为对照组和加压组,通过Western blot检测两组Git1蛋白的表达,荧光实时定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测两组细胞外基质的表达变化.然后使用小干扰RNA（siRNA）阻断Git1蛋白,分为对照组、Git1 siRNA组、siRNA阴性对照组,在加压环境下比较各组细胞外基质的表达变化.结果 加压组细胞的Git1蛋白表达（1.372±0.205）较对照组（0.478 ±0.186）明显增高,加压组细胞外基质的基因表达较对照组明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）.siRNA处理细胞后,Git1 siRNA组Git1蛋白表达（0.587±0.142）较对照组（1.041±0.103）明显降低.加压环境下,Git1 siRNA组细胞外基质的基因表达较对照组和siRNA阴性对照组明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 周期性压力能促进髓核细胞细胞外基质的表达,Git1在压力传导中起信号传递作用.