G蛋白偶联受体在宿主抗结核分枝杆菌感染中的功能及作用机制

G蛋白偶联受体(GPCRs)在维持人体正常生理功能和细胞内稳态过程中发挥关键作用。GPCRs及其下游信号通路的表达失调是疾病发生发展的重要标志。近年来,结核病的防治面临着更加严峻的挑战,亟需研发安全、价廉、敏感的新型抗结核药物。其中,基于宿主导向治疗策略的新型抗菌药物受到广泛关注,而GPCRs作为宿主发挥免疫表达调控作用的受体之一,可作为宿主导向的抗结核潜在治疗靶标,然而GPCRs作为重要的药物研究靶点在结核病领域的研究尚显不足。笔者总结了近年来发现的GPCRs在宿主细胞应答结核分枝杆菌感染中所发挥的功能,系统综述了趋化因子受体类GPCRs、孤儿GPCRs及其他GPCRs在调控宿主细胞信号转导中发挥的关键作用和分子机制,为基于GPCRs的抗结核药物研发提供依据。

FKN影响动脉粥样硬化信号传导机制及G-蛋白在其中作用的研究

目的探讨鸟苷酸结合蛋白(G-蛋白)对fractalkine(FKN)诱导单个核细胞合成NF-κB、TNF-α的影响及FKN-CX3CR1可能存在的一条信号传导机制,并研究G-蛋白在其中的作用。方法抗凝血用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞。将每份提取的单个核细胞分为空白对照组、FKN组及百日咳毒素(PTX)组。应用免疫组化检测各组单个核细胞中NF-κB表达情况,酶联免疫法检测各组培养液中TNF-α的表达水平。结果(1)FKN诱导组较空白组NF-κB、TNF-α表达明显增多,G-蛋白阻断剂PTX组较FKN组NF-κB、TNF-α表达明显减少。结论(1)FKN-CX3CR1有促进动脉粥样硬化形成的作用,CX3CR1为G-蛋白偶联受体,FKN与CX3CR1结合以后,可以通过与G-蛋白偶联,启动细胞内信号传导机制。

G-蛋白偶联受体的功能测定和高通量药物筛选

G 蛋白偶联受体家族是药物开发中最大的一类药物靶点 ,高通量药物筛选是开发药物早期阶段的最重要工具之一。根据G 蛋白偶联受体与配体结合及激发的信号通路 ,人们设计了各种可行的功能测试方法 ,用于G 蛋白偶联受体为药靶的高通量药物筛选 ,如 :微体积荧光数字图像测定技术 (Fluorometicmicrovolumeassaytechnology ,FMAT)、荧光偏振 (Fluoresencepolarization ,FP)、竞争性ELISA (Com petitiveenzyme linkedimmunosorbent)、闪烁邻近测定法(Scintillation proximityassay ,SPA)、载黑色素细胞测定法(Melanophoreassay)、报告基因测定法 (Reportergeneassay)和钙离子测定法等测定方法。在这些方法中 ,报告基因测定法和钙离子测定法占了主导地位。非放射性、无需底物和辅助剂的报告基因测定方法和荧光钙离子指示剂的钙离子测定方法可能是将来G

G-蛋白偶联雌激素受体在肾阴虚和肾阳虚小鼠睾丸中的表达及其与生殖功能的关系

目的:探讨肾阴虚与肾阳虚雄性小鼠睾丸G-蛋白偶联雌激素受体(GPER)的定位与表达,及其对肾阴虚与肾阳虚雄性小鼠生殖功能的影响。方法:将6周龄雄性昆明小鼠随机分为正常组、肾阳虚组和肾阴虚组。采用矿场实验、高架十字迷宫、游泳力竭等评价小鼠精神萎靡程度和自主活动次数等行为学改变;电化学发光法检测睾酮(T)和雌二醇(E2),并计算T/E2;全自动精子分析仪检测精液质量;与雌鼠合笼后记录雌鼠产仔数,计算雄鼠平均育仔数;免疫组织化学和免疫荧光染色检测GPER在小鼠睾丸中的定位和表达。结果:与肾阴虚组比较,肾阳虚组小鼠开臂进入次数百分率和中央区进入次数明显减少,同时,游泳力竭时间缩短更为明显(P<0.05),但开臂滞留和中央区滞留时间百分率无明显差异(P>0.05)。与肾阴虚组比较,肾阳虚组小鼠附睾精子计数和活动精子百分率明显减少,且育仔数显著下降(P<0.05);精子畸形率略有升高(P>0.05);血清T水平明显降低(P<0.05),E2水平略有下降(P>0.05),T/E2明显下降(P<0.05)。肾阴虚和肾阳虚小鼠睾丸GPER均表达于睾丸间质细胞的细胞质内,细胞核和细胞膜表达为阴性,肾阳虚小鼠睾丸GPER的表达显著高于肾阴虚组(P<0.05)。结论:肾阳虚与肾阴虚小鼠均出现精子数量与育仔数下降,精子畸形率增加,但以肾阳虚小鼠更为明显,这种改变可能与肾阳虚小鼠睾丸GPER表达增加有关,从而造成血清T水平及T/E2比值下降。

精神分裂症与神经调节素1、G72及G-蛋白信号转导调节子4基因的关联研究

目的 探索神经调节素1（NRG1）、G72、G-蛋白信号转导调节子4（RGS4）基因变异的独立或联合作用与精神分裂症的关联。方法 采用酶切或测序方法,对315例精神分裂症患者和347例正常对照者NRG1、G72、RGS4基因的13个单核苷酸多态性（SNPs）位点进行基因型检测和遗传关联分析。应用Lo-gistic回归分析和风险或保护基因型分层后卡方检验评估三基因的交互作用。结果 单位点关联分析发现,NRG1的5个SNPs、G72的1个SNP、RGS4的2个SNPs与精神分裂症关联（P〈0.05）。Logistic回归分析构建了三个基因交互作用模型,各自变量的OR分别为：nrg1=3.58,rgs4=1.24,g72_rs947267=1.45,nrg1＊rgs4=3.03,nrg1＊g72_rs947267=1.06。应用基因型分层后卡方检验表明,三基因存在协同风险效应（OR=2.35～4.05;P〈0.05）。结论 NRG1、G72及RGS4基因的单独或交互作用与精神分裂症关联。

冠心病患者血清抗G-蛋白偶联受体自身抗体的分布特性

目的探讨冠心病患者血清中抗G-蛋白偶联受体自身抗体的分布特征。方法选择冠心病患者131例,正常健康体检者100名,采用链酶亲和素-酶联免疫吸附试验(SA-ELISA)测定其血清中抗G-蛋白偶联型β1AR、Μ2R、α1AR自身抗体。结果①冠心病患者血清抗G-蛋白偶联型β1AR、Μ2R、α1AR自身抗体的阳性率分别为20.6%(27/131)、16.8%(22/131)、39.7%(52/131),明显高于正常对照组的7.0%(7/100)、8.0%(8/100)、15.0%(15/100)(P<0.05);②冠心病组抗β1AR、Μ2R、α1AR自身抗体阳性患者的平均抗体滴度分别为1:(87.3±3.1)、1:(92.5±2.4)、1:(101.2±2.6),明显高于正常对照组的1:(14.6±2.7)、1:(21.4±2.2)、1:(26.6±3.8)(P<0.01)。结论冠心病患者血清中不仅存在抗G-蛋白偶联型β1AR、Μ2R和α1AR自身抗体,而且抗体阳性率和滴度也明显高于正常对照组,提示这些自身抗体的出现及其介导的自身免疫反应可能参与冠心病的病理生理过程。

糖尿病心肌病患者与抗G-蛋白偶联型受体血管紧张素Ⅱ1型受体和肾上腺素能α_1受体自身抗体的初步研究

目的 :探讨抗G 蛋白偶联型受体血管紧张素Ⅱ 1型受体 (AT1受体 )和肾上腺素能α1受体 (α1受体 )自身抗体是否与糖尿病心肌病发病有关。方法 :以合成的AT1与α1受体多肽片段为抗原 ,应用酶联免疫吸附测定技术 ,检测 196例住院及门诊体检者血清中抗G 蛋白偶联型受体AT1和α1受体自身抗体 ,其中糖尿病心肌病患者 46例 (糖尿病心肌病组 ) ,2型糖尿病 5 2例 (糖尿病组 ) ,高血压无靶器官受损患者 5 8例 (高血压组 )及正常对照组 40例。结果 :糖尿病心肌病组抗AT1受体自体抗体阳性率和抗α1受体自身抗体阳性率 ,明显高于糖尿病组、高血压组以及正常对照组 ,有显著性差异 (P均 <0 .0 5～ 0 0 1)。结论 :免疫学机制可能参与糖尿病心肌病病理生理过程。

胆汁酸G-蛋白偶联受体通过p38 MAPK通路诱导巨噬细胞IL-1β、TNF-α和IL-6的转录

目的观察胆汁酸G-蛋白偶联受体(G protein-coupled receptor for bile acids,TGR5)被齐墩果酸(oleanolicacid,OA)激活后对RAW264.7细胞白细胞介素-1(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)转录的影响及其机制的探讨。方法通过实时荧光定量(Real-time)PCR法检测OA作用不同时间RAW264.7细胞和原代枯否细胞IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA的表达;并进一步分析在RAW264.7细胞中加入3种不同信号通路的抑制剂对上述3种炎症因子mRNA表达的影响。OA作用RAW264.7细胞和原代枯否细胞不同时间后,Western blot分析p38 MAPK的磷酸化水平。结果 OA刺激RAW264.7细胞6、12、24 h后,IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达明显升高。OA作用于分离的原代枯否细胞3 h和6 h后,也可观察到相同的结果。p38 MAPK特异性抑制剂SB203580可以明显地抑制OA诱导的RAW264.7细胞内IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA的表达,但PKA和NF-κB的抑制剂无此作用。RAW264.7细胞和原代枯否细胞经OA刺激后,p38 MAPK磷酸化水平明显增强。结论 TGR5可能通过活化p38 MAPK磷酸化诱导炎症细胞IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA的表达,提示TGR5在无其他刺激因素作用下,具有诱导炎症因子表达的作用。

高度糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞G-蛋白亚基基因表达的影响

目的 :研究高度糖基化终产物 (AGEs)对G 蛋白亚基基因表达的影响 ,了解G 蛋白在AGEs介导的胞内信号转导途径中的作用。方法 :利用半定量RT PCR技术分析大鼠主动脉平滑肌细胞受AGEs作用后G 蛋白亚基Goα、GsαmRNA的改变。结果 :AGEs在大鼠主动脉平滑肌细胞中上调Gsα的表达 ,但却使GoαmRNA水平显著下降。结论 :G

不同浓度短链脂肪酸对奶牛瘤胃上皮细胞免疫反应、紧密连接蛋白和G-蛋白偶联受体41表达的影响

本试验旨在研究不同浓度短链脂肪酸(SCFAs)对奶牛瘤胃上皮细胞(BRECs)免疫反应、紧密连接蛋白和G-蛋白偶联受体41(GPR41)表达的影响以及GPR41与促炎症因子、趋化因子和紧密连接蛋白之间的关系。试验设计4个试验组,分别用20、50、100和150 mmol/L SCFAs培养BRECs 24 h后提取总RNA,每组3个重复。结果显示:1) SCFAs浓度为100和150 mmol/L SCFAs时,促炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA相对表达量显著高于SCFAs浓度为20和50 mmol/L时(P<0.05)。2)随着SCFAs浓度的增加,CXC趋化因子配体3(CXCL3)、CXC趋化因子配体5(CXCL5)和CXC趋化因子配体8(CXCL8)的mRNA相对表达量逐渐下调,以SCFAs浓度为150 mmol/L时最低。SCFAs浓度为100 mmol/L时,GPR41的mRNA相对表达量显著高于SCFAs浓度为20和50 mmol/L时(P<0.05)。3) SCFAs浓度为150 mmol/L时紧密连接蛋白闭合蛋白-1(Claudin-1)和闭锁小带蛋白-1(ZO-1)的mRNA相对表达量最低,且显著低于SCFAs浓度为20和50 mmol/L时(P<0.05)。4)相关性分析表明,GPR41的mRNA相对表达量与促炎症因子TNF-α的mRNA相对表达量呈显著正相关(P <0.05),与趋化因子CXCL3、CXCL5和CXCL8的mRNA相对表达量呈显著负相关(P<0.05),与紧密连接蛋白Claudin-1和ZO-1的mRNA相对表达量呈负相关趋势(0.05≤P<0.10)。综上所述,高浓度(100和150 mmol/L)SCFAs诱导BRECs的促炎症反应,抑制趋化因子表达和免疫反应,减少紧密连接蛋白的表达,破坏瘤胃上皮的屏障功能。

G-蛋白及其在植物信号转导中的作用

ＧＴＰ结合蛋白（ＧＴＰ－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ）在生物体内有数种类型，包括转录因子、微管蛋白和信号转导蛋白，最后一种已成为当今研究的热点。结合ＧＴＰ的调节蛋白（ＧＴＰ－ｂｉｎｄｉｎｇｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｐｒｏｔｅｉｎｓ，简称Ｇ－蛋白）于７０年代...

溶血磷脂酰胆碱G-蛋白偶联受体G2A的研究

溶血磷脂酰胆碱(LPC)高亲和G-蛋白偶联受体G2A(GPCR G2A)是最大的细胞膜受体家族成员之一,具有七螺旋跨膜肽段结构。近年发现GPCR G2A与动脉粥样硬化和红斑狼疮等免疫性疾病的发病密切相关。随着生物技术及分子生物学的发展,GPCR G2A的研究已取得了很大的进展。现就GPCR G2A结构、分布、生理功能和信号传导作一简述。

性别决定区Y框蛋白2、含亮氨酸重复序列G-蛋白偶联受体5在宫颈癌中的表达及与临床病理特征的关系分析

目的探讨性别决定区Y框蛋白2(Sox-2)、含亮氨酸重复序列G-蛋白偶联受体5(Lgr5)在宫颈癌中的表达及与临床病理特征的关系。方法收集2016年3月至2017年9月郑州市妇幼保健收治的经病理检查证实的74例宫颈癌、39例宫颈上皮内瘤变及36例正常宫颈组织石蜡包埋标本,应用免疫组化S-P法检测上述组织标本Sox-2、Lgr5蛋白表达情况,并分析Sox-2、Lgr5蛋白表达与宫颈癌患者性别、体质量、病理类型、肿瘤分化程度、临床分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移之间的关系。结果Sox-2、Lgr5蛋白在宫颈癌组织中阳性表达率分别为77.03%、79.73%,均高于宫颈上皮内瘤变组织(38.46%、41.03%)和正常宫颈组织(5.56%、2.78%),差异均有统计学意义(P均<0.05)。Sox-2、Lgr5蛋白在宫颈癌组织中阳性表达率与患者性别、体质量、病理类型均无关(P均>0.05);Sox-2、Lgr5蛋白在宫颈癌组织中阳性表达率与患者的肿瘤分化程度、临床分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关,肿瘤分化程度为低分化、临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤浸润深度为T3~T4、有淋巴结转移患者Sox-2、Lgr5蛋白在宫颈癌组织中阳性表达率高于肿瘤分化程度为高中分化、临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤浸润深度为T1~T2及无淋巴结转移患者(P均<0.05)。结论Sox-2、Lgr5在宫颈癌中均呈高表达,且表达水平与患者疾病进展有着密切关系。

乳腺浸润性导管癌患者术后癌组织中真核翻译起始因子4e、3h和富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体5表达特征

目的检测乳腺浸润性导管癌患者术后癌组织中真核翻译起始因子(EIF)4e、3h和富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体(LGR)5的表达及其相关性。方法 132例乳腺浸润性导管癌术后组织蜡块及临床资料为研究组,经病理证实为正常乳腺小叶和导管上皮组织85例为对照组,选择EIF4e、3h和LGR5的多克隆性抗体,应用免疫组化SP法检测3种蛋白的表达。结果研究组EIF4e、3h和LGR5表达阳性率明显高于对照组,研究组EIF4e、3h和LGR5表达与肿瘤最大径、脉管浸润、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和Ki67的表达均具有相关性,EIF4e表达与淋巴结转移相关。研究组EIF4e和3h、EIF3h和LGR5表达正相关。结论乳腺浸润性导管癌患者术后组织中EIF4e、3h和LGR5高表达且具有协同作用,三者参与肿瘤的发生和进展,术后联合检测EIF4e、3h和LGR5的表达可能对判断预后有一定价值。

富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体5、血管内皮生长因子及其受体2在胃腺癌组织中表达

目的应用免疫组化方法检测胃腺癌中富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体(LGR)5、血管内皮生长因子(VEGF)和其受体(VEGFR)2的表达。方法 58例胃腺癌患者的临床资料及术后蜡块组织作为研究组,选择上述患者在距肿物边缘>5 cm、经病理主治医师证实为非癌组织的胃黏膜组织的蜡块组织47例作为对照组,应用免疫组化方法检测LGR5、VEGF和VEGFR2的表达。结果研究组中LGR5、VEGF和VEGFR2的阳性率均明显高于对照组,研究组中LGR5、VEGF和VEGFR2的阳性率与浸润深度和脉管浸润相关,LGR5的阳性率与分化程度、Ki67增殖指数相关,VEGF和VEGFR2的表达与肿瘤的最大径相关。相关性分析显示研究组中LGR5和VEGF、VEGF和VEGFR2均具有正相关性。结论 LGR5、VEGF和VEGFR2在胃腺癌术后组织中高表达,三者可以促进肿瘤的形成和进展。LGR5可能与VEGF和VEGFR2蛋白的表达有协同作用。

G-蛋白结构及信号传导机制研究进展

1 G-蛋白的结构及种类 G蛋白是由α、β、γ三个亚单位组成的异构三聚体,其中目前已发现Gα20种,是三种亚单位中最重要的一种,称功能性亚单位。Gβ、Gγ分别有6种和12种,可协调细胞反应。G蛋白有数类:Gs、Gi、Gq、Go、Gt和G12/13等,每一种G蛋白又包含许多亚类共计30余种,这些G蛋白分别含有不同的亚单位,具有相似的结构和功能,其间氨基酸序列具高度同源性。它们分别接受不同的膜受体传来的信号,作用于相应的细胞效应酶,从而发挥信息传递及其他调节功能。

G-蛋白耦联受体、组织蛋白酶-D和CD133在结肠腺癌中的表达及相关性

目的检测结肠腺癌中富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体(LGR)5、组织蛋白酶-D(Cath-D)和白细胞分化抗原133(CD133)的表达,探讨其关系及临床意义。方法选择130例结肠腺癌术后留取的蜡块及患者的临床资料作为观察组,77例结肠黏膜上皮内瘤变的患者作为对照组,77例正常结肠黏膜组织作为正常对照组,采用免疫组化方法检测3组中LGR5、Cath-D和CD133的表达。结果 3组LGR5、Cath-D和CD133表达的阳性率差别有统计学意义(P<0.000 1)。观察组中LGR5、Cath-D和CD133的表达均与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期密切相关,线性相关分析显示观察组中LGR5和CD133的表达具有正相关性,而其他指标之间无相关性。结论结肠腺癌中LGR5、Cath-D和CD133高表达,LGR5和CD133具有的协同正向作用,对肿瘤进展具有明显的促进作用。联合检测LGR5、Cath-D和CD133的表达可能对判断预后和协助临床分期有一定价值。

高压处理对牛骨骼肌G-肌动蛋白结构的影响

从牛骨骼肌中提取G-肌动蛋白,并用0.1～400MPa高压处理,对G-肌动蛋白的荧光光谱、质量中心、表面巯基含量、芳香族表面疏水性残基的变化进行分析,探讨G-肌动蛋白的结构变化。在0.1～100MPa处理时G-肌动蛋白荧光强度呈下降趋势,在200～400MPa处理时荧光强度呈上升趋势,荧光强度峰值的极大波长发生蓝移。100MPa压力下G-肌动蛋白质量中心稍微下降,但压力在100～300MPa时质量中心呈上升趋势。表面巯基含量随着压力的增高有明显上升趋势。随着压力的升高芳香族表面疏水性残基的荧光强度升高,压力为300MPa时显示最高值。从此结果可推测超高压处理引起的G-肌动蛋白三级结构变化是不可逆变化。

北京鸭红细胞膜G-蛋白与磷酯酶C的偶联及腺苷受体的调节

GDP、GTP和GTPγS激活北京鸭红细胞膜上的磷酯酶C,在10^(-7)～10^(-4)mol/L的范围内,使磷酸肌醇产量增加。其中GTPγS作用最强,分别使IP_2和IP_3增强550％和580％。GTP与GDP的效力相近,使IP_2增加140％和150％;IP_3增加230％和330％。A-嘌呤能受体激动剂6-N-cyclohe-xyladenosine(CHA)对抗ATP通过P-嘌呤能受体激活的磷酯酶C,使其活性下降60％。CHA的这种作用可被其特异拮抗剂8-cyclopentyl-1,3-dimethylxanthine对抗。以上结果表明鸭红细胞是研究受体、G-蛋白及磷酯酶C偶联的良好模型。表明不同嘌呤能受体在调节磷酯酶C中的相反作用。