Ficoll分离液在Sephadex G-100微柱凝胶血型卡中的应用

目的 探讨Sephadex G-100微柱凝胶血型卡加入Ficoll分离液后的性能和应用.方法 在Sephadex G-100微柱凝胶血型卡中加入Ficoll分离液,制作成Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡,对200例标本进行ABO和Rh（D）血型测定,并与进口的强生血型卡和Sephadex G-100血型卡法进行比对.分别用37℃孵育强生血型卡、45℃孵育强生血型卡和45℃孵育Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡三种方法对6例低、中、高不同效价的冷凝集素标本进行ABO和Rh （D）血型测定,同时进行反定型血型检测.分别用强生血型卡、Sephadex G-100血型卡和Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡对26例溶血标本进行ABO和Rh （D）血型测定.结果 自制Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡检测200例标本的血型结果,A型55例,B型46例,O型92例,AB型7例,Rh （D）均为阳性,与强生血型卡和Sephadex G-100微柱凝胶血型卡结果相同.自制血型卡检测抗D抗体平均滴度为1：256,与Diana凝胶卡灵敏度相同,明显优于传统试管法（P＜0.05）.45℃孵育Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡检测6例冷凝集素标本血型结果正确,正反定型一致,37℃和45℃孵育强生血型卡检测冷凝集素标本血型分别有3例和2例结果不正确,造成假阳性.Ficoll分离液-微柱凝胶血型卡检测26例溶血标本血型结果正确,强生血型卡和Sephadex G-100血型卡检测溶血标本血型分别有6例和10例结果不正确.结论 研制Ficoll分离液-Sephadex G-100微柱凝胶血型卡适用于血型鉴定.对于冷凝集和溶血标本血型鉴定有明显优势.该卡具有准确、灵敏、特异、试剂制备工艺简单、成本低等优点,具有较好的推广应用和开发价值.

凝胶排阻层析纯化破伤风抗毒素条件优化的研究

目的:探讨凝胶排阻层析纯化破伤风抗毒素的条件。方法:使用Sephadex G-100装柱,以紫外检测蛋白质特征峰A280nm绘制的散点图为评价指标,采用单因素试验考察不同流速、洗脱剂、样品浓度对破伤风抗毒素蛋白分离的影响;经非还原型SDS-PAGE凝胶电泳后对染色结果进行扫描对比;按照《中国药典》异常毒性检查法对纯化后的组分进行安全性检查。结果:凝胶排阻层析纯化破伤风抗毒素的最佳条件为以磷酸盐缓冲液(pH6.5)为洗脱液,样品浓度为100%,流速为0.3 mL/min;SDS-PAGE凝胶电泳结果表明在该条件下可以较好地纯化破伤风抗毒素有效成分F(ab')2;异常毒性检查结果为小鼠及豚鼠均正常存活,无异常毒性。结论:优化的凝胶排阻层析条件可以较好地纯化破伤风抗毒素有效成分,且安全无毒,为进一步推动该类生物制品的质量提高提供参考。

玛咖多糖提取工艺的优化及其抗氧化活性

为了更好地开发和利用云南地区的功能食品玛咖,选取玛咖多糖作为研究对象,在单因素试验基础上设置响应面优化试验对玛咖多糖提取工艺进行优化以提高玛咖多糖提取效率,并测定玛咖多糖的抗氧化性强弱,评价玛咖多糖的活性价值;采用Sephadex G-100凝胶层析纯化玛咖多糖,用去离子水进行洗脱(洗脱速度为1mL/min),通过多糖对羟自由基、DPPH自由基、ABTS自由基的清除效率研究玛咖多糖的抗氧化性作用。结果表明:在液料比59mL/g、浸提温度82℃、提取时间157min的条件下,玛咖多糖的提取率为9.60%。对纯度为65.6%的玛咖粗多糖进行纯化,得到纯度为90.7%的纯化多糖。当粗多糖和纯多糖浓度为6mg/mL时,对羟自由基和DPPH自由基的清除率达到最大,分别为63.9%、46.5%和72.8%、81.7%;粗多糖浓度为5mg/mL时,对ABTS自由基清除率达到最大,为61.4%;纯多糖浓度为8mg/mL时,对ABTS自由基的清除率最大,为83.8%。

桑黄菌丝球多糖的分离纯化

桑黄菌丝球多糖经大孔树脂除蛋白、DEAE-纤维素初步纯化后得到三个组分,其中Ap2含量最多,且有两个峰部分重叠,将Ap2过Sephadex G-100凝胶柱层析进一步纯化,得到Ap2-1和Ap2-2两个单一多糖组分,纯化后的多糖各组分经紫外光谱分析不含蛋白质和核酸,整个分离纯化过程,多糖的回收率仅为48%,但纯度达到了96%。

绣球菌酸性多糖的分离纯化、结构鉴定及抗氧化活性研究

采用超声波辅助水提醇沉法提取绣球菌(Sparasis crispa)多糖,并通过HZ-830大孔树脂、DEAE-52纤维素及Sephadex G-100凝胶纯化,收集绣球菌多糖SCP-Ⅱ;采用苯酚硫酸法和间羟基联苯法分别测定SCP-Ⅱ中总糖和糖醛酸含量;采用紫外-可见光谱、高效凝胶渗透色谱、离子色谱、红外光谱、扫描电镜和原子力显微镜对其结构进行鉴定;通过测定总还原力、清除DPPH、OH和O-2自由基的能力来研究其体外抗氧化活性。结果表明:SCP-Ⅱ的总糖、糖醛酸含量分别为98.7%、17.8%,相对分子质量为5.8×10^3,单糖组成为半乳糖、葡萄糖、木糖、果糖(摩尔比为2∶7∶1∶2);其具有一定的清除自由基能力,清除DPPH、OH、O2^-自由基的IC 50分别为1.64、0.94 mg/mL和7.25 mg/mL。

玉竹糖蛋白分离纯化及其体外抗氧化能力

采用磷酸缓冲液浸提法提取玉竹糖蛋白粗品(Polygonatum odoratum glycoprotein,PDG),经葡聚糖凝胶G-100和刀豆凝集素A分离纯化,得到糖蛋白组分PDG1和PDG3,经高效液相色谱测定其分子质量,并检测PDG、PDG1和PDG3的体外抗氧化活性。结果表明,PDG1和PDG3的分子质量分别为186 k D和28.3 k D;玉竹糖蛋白具有一定的还原能力,对羟自由基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基具有较强的清除作用,对脂质过氧化具有抑制作用,且在一定质量浓度范围内(1~10 mg/m L)存在剂量关系,其抗氧化能力随着玉竹糖蛋白质量浓度的增加而增强,PDG1和PDG3的抗氧化能力优于PDG。

晋产藜麦糖蛋白的提取纯化及含量测定

目的:从晋产藜麦中提取糖蛋白并且进行纯化,推出糖蛋白之间的键连接方式及含量测定。方法:提取工艺条件为提取温度95℃、提取时间1 h、提取次数2次,得到藜麦中粗品糖蛋白;通过DEAE-52纤维素柱层析、Sephadex G-100葡聚糖凝胶层析分离纯化,最终得出1种藜麦糖蛋白;经过薄层色谱法对纯度进行检验,并对其进行定性鉴定,根据苯酚-硫酸法测得藜麦糖蛋白含糖量,利用β-消去反应测定藜麦中糖蛋白中糖肽键连接方式,通过黏度法确定藜麦糖蛋白的分子质量。结果:糖含量为16.41%,糖肽键连接方式初步定为O-糖苷键,通过黏度法确定藜麦糖蛋白的分子质量为7624.95。