目的通过在Sanger法测序体系中加入浓度梯度的甜菜碱,建立高辨识度的富含三核苷酸重复的高G-C含量DNA片段的测序体系。方法以G-C含量为72%无三核苷酸重复的Nogo-B基因cDNA的5’端序列(the 5’ terminal of Nago—BcDNA,Am-Nogo-B)...目的通过在Sanger法测序体系中加入浓度梯度的甜菜碱,建立高辨识度的富含三核苷酸重复的高G-C含量DNA片段的测序体系。方法以G-C含量为72%无三核苷酸重复的Nogo-B基因cDNA的5’端序列(the 5’ terminal of Nago—BcDNA,Am-Nogo-B)及G-C含量为74%的富含CAG重复与CCG重复的Huntingtin基因cDNA的5’端序列(the 5’ terminal of huntingtin cDNA,Am-HTT)为例,在Sanger法测序体系中加入浓度梯度的甜菜碱,比较测序结果。结果Am—Nogo—B与Am-HTT基因测序体系中最适宜的甜菜碱浓度相差较大。甜菜碱浓度在0.8~1.2mol/L之间时,Am-Nogo-B测序结果质量最佳。甜菜碱浓度在1.6~2.4mol/L之间时,Am-HTT基因的测序质量最好。结果具有良好的可重复性。结论不同碱基组成类型的高G-C含量DNA片段,即使G-C含量接近,最适宜测序体系中甜菜碱浓度不同。探索出了适宜于增加富含三核苷酸串联重复的高Gc含量DNA片段测序辨识度的体系,可作为类似DNA片段测序的参考方法。展开更多
文摘目的通过在Sanger法测序体系中加入浓度梯度的甜菜碱,建立高辨识度的富含三核苷酸重复的高G-C含量DNA片段的测序体系。方法以G-C含量为72%无三核苷酸重复的Nogo-B基因cDNA的5’端序列(the 5’ terminal of Nago—BcDNA,Am-Nogo-B)及G-C含量为74%的富含CAG重复与CCG重复的Huntingtin基因cDNA的5’端序列(the 5’ terminal of huntingtin cDNA,Am-HTT)为例,在Sanger法测序体系中加入浓度梯度的甜菜碱,比较测序结果。结果Am—Nogo—B与Am-HTT基因测序体系中最适宜的甜菜碱浓度相差较大。甜菜碱浓度在0.8~1.2mol/L之间时,Am-Nogo-B测序结果质量最佳。甜菜碱浓度在1.6~2.4mol/L之间时,Am-HTT基因的测序质量最好。结果具有良好的可重复性。结论不同碱基组成类型的高G-C含量DNA片段,即使G-C含量接近,最适宜测序体系中甜菜碱浓度不同。探索出了适宜于增加富含三核苷酸串联重复的高Gc含量DNA片段测序辨识度的体系,可作为类似DNA片段测序的参考方法。