猪流感二价灭活疫苗对H1N1亚型流行毒株的攻毒保护效果

旨在评价猪流感二价灭活疫苗(H1N1 LN株+H3N2 HLJ株)对2021年国内H1N1亚型猪流感流行毒株的交叉保护效果。将10头4周龄健康易感猪随机均分为疫苗接种组和对照组,疫苗接种组每头接种疫苗2 mL,首免14 d后进行二免,对照组未接种疫苗;首免后28 d,每头猪经气管内注射A/Swine/Jiangsu/NL33/2021(H1N1)(简称NL33株)4.0 mL;综合临床症状、鼻拭子病毒分离和肺脏病变3个方面进行判定。结果:试验组保护率为80%,对照组发病率为100%。综上,猪流感二价灭活疫苗(H1N1 LN株+H3N2 HLJ株)接种对2021年国内流行的H1N1亚型猪流感病毒攻击产生了较好的交叉保护效果,猪群接种该疫苗后能有效抵抗猪流感流行毒株的攻击。

H5、H7亚型二价灭活疫苗悬浮培养工艺及免疫效果研究

为获得高质量禽流感灭活疫苗候选株,研究其遗传稳定性与免疫原性。将利用反向遗传技术构建的H5N2亚型(rD8株)和H7N9亚型(rGD76株)AIV分别在MDCK悬浮细胞上传代培养,检测各代病毒液的血凝效价,并制备二价油乳剂灭活疫苗免疫4周龄SPF鸡。免疫后21d检测两种亚型抗体的HI效价,分别用H5N1亚型和H7N9亚型效检毒株对免疫鸡群进行攻毒保护实验。两株病毒传代后其血凝效价rD8株可达8log2,rGD76株可达9log2,与亲本毒株基本一致。对传代后的第1、5、15代病毒液进行HA、NA基因测序分析,各代次序列同源性较高,关键位点氨基酸序列未发生变异,与亲本毒株保持一致。实验鸡免疫后21d,血清中H5亚型HI抗体几何平均值为8.0log2,H7亚型HI抗体几何平均值为 8.4log2,攻毒后5d各组试验鸡均未检测到有排毒现象。两株病毒经传代后逐渐适应了悬浮培养的MDCK细胞,血凝效价稳定,且均具有较好的免疫原性,可作为禽流感疫苗种毒。

重组禽流感病毒二价灭活疫苗对H5N1亚型7.2分支病毒的攻毒保护性研究

为有效防控2006年以来出现的H5亚型7.2分支禽流感病毒(AIV)引起的免疫鸡群高致病性禽流感(HPAI)的流行,我们构建了重组AIV Re-4疫苗株,研制出含有重组AIV Re-4株的H5亚型二价系列灭活疫苗,并在我国北方地区使用,有效地控制了其流行。2012年我国北方地区再次出现7.2分支病毒引起的HPAI疫情。为评估现有H5亚型二价系列灭活疫苗对该分支病毒的免疫保护效力,本研究首先通过SPF鸡进行免疫攻毒试验评估。结果表明,分别以每羽份(0.3 mL/只)的Re-5+Re-4株和Re-6+Re-4株重组AIV H5二价油乳剂灭活疫苗免疫SPF鸡,免疫3周后针对重组AIV Re-4株的HI抗体均达到8 log2以上;经鼻腔接种7.2分支AIV CK/NX/2/12株(100 LD50)攻毒后,免疫鸡均获得完全保护,即无任何临床症状和排毒现象,而对照组SPF鸡全部发病死亡。此外,以哈尔滨当地养殖场中免疫H5亚型AIV灭活疫苗的48只商品蛋鸡进行攻毒试验,结果显示,商品蛋鸡血清中针对重组AIV Re-4株HI抗体平均滴度为8.3 log2,采用相同方式攻毒后也获得完全保护。本研究结果表明,Re-5+Re-4株和Re-6+Re-4株重组AIV H5二价灭活疫苗均能够对H5亚型7.2分支病毒的攻击提供良好的免疫保护效果。

猪瘟活疫苗-猪口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗联合免疫效果的评价

为建立一种既有效又简便的猪瘟活疫苗(CSF)和猪口蹄疫O型、A型二价灭活疫苗(FMD O-A)联合免疫方法,达到“一针多防”的目的,通过动物免疫试验,评价了CSF和FMD O-A联合免疫的可行性。采用左、右各一针同步2点接种试验猪群(联合免疫),以2种疫苗分别单独免疫的猪群为对照,在免疫前0 d、免疫后14、40、60和90 d采集血清检测2种疫苗对应的抗体。经统计学分析发现,2种疫苗的联合免疫不影响其抗体的产生,并且能够保持抗体在猪群个体间的稳定分布。

重组鸡白细胞介素6对重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-6株+Re-7株)免疫增强作用的观察

为评价重组鸡白细胞介素6(rChIL-6)在商品鸡体内对重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-6株+Re-7株)免疫增强作用,将rChIL-6与重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-6株+Re-7株)采用肌肉注射方式免疫57日龄麻鸡,分别在疫苗接种前和接种后第7、14、21、35、42天,检测H5N1亚型禽流感病毒(Re-6、Re-7)血凝抑制(HI)抗体水平。结果表明:与灭活疫苗同时注射rChIL-6组比单一注射疫苗组的H5N1 Re-6抗体滴度可提高1.6 log2,Re-7抗体滴度可提高1.8 log2。提示rChIL-6对重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1,Re-6株+Re-7株)有显著的免疫增强作用。

最新4种猪口蹄疫O型灭活疫苗及O型-A型二价灭活疫苗免疫效果评估

试验选用政府招标的2家公司生产的猪口蹄疫O型灭活疫苗及猪口蹄疫O型-A型二价灭活疫苗共4种疫苗对健康仔猪按免疫程序进行试验,采用ELISA方法检测不同阶段抗体水平,以期评估不同猪口蹄疫疫苗的免疫效果。试验结果表明,2种O型疫苗免疫21 d后,其抗体阳性率就达70%,二免后抗体效价可达8log2~9log2,抗体合格率高达100%,抗体保护力持久;O型-A型二价灭活苗需2次以上免疫,才能产生较好的抗体保护力度。政府招标购买的疫苗均能产生较好的免疫效果,O型灭活苗免疫效果优于O型-A型二价灭活苗;建议口蹄疫免疫实行二次免疫,间隔28~30 d,必要时进行三免。

奶牛口蹄疫O型-亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗免疫效果对比试验

为了解兰州地区奶牛口蹄疫O型-亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗的免疫效果,科学评价免疫质量以及合理制定口蹄疫疫苗免疫程序,本研究应用液相阻断ELISA和O型正向间接血凝检测方法分别对目前兰州地区使用的4种口蹄疫二价灭活疫苗的免疫效果进行了对比。结果表明,兰州地区使用的4种口蹄疫O型-亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗的O型和亚洲Ⅰ型口蹄疫保护性抗体诱导能力参差不齐,其中以B公司O型-亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗的抗体诱导能力最强,其他3个公司的疫苗则相对较差。

新疆成年绵羊对口蹄疫Asia-Ⅰ型与O型二价灭活疫苗免疫效果观察

与牛和猪的口蹄疫（foot—and—mouth disease，FMD）相比，绵羊FMD通常不表现出明显的临床症状，但其在FMD流行病学中的传播作用不可低估。本研究选择有免疫接种史的成年绵羊来验证3种FMD二价灭活疫苗的免疫效果，并进行跟踪免疫监测。实验结果表明，3种疫苗免疫绵羊30d后，所有被检绵羊的血清0型和Asia一工型ELISA抗体滴度≥lg2．19，在此后的不同检测时间段分别达到峰值，随后下降，免疫150d时，被检绵羊的0型和Asia-Ⅰ型ELISA抗体滴度仍维持在lgl．86～lg2．20。实验结束时，3种疫苗的O型ELISA抗体合格率≥70％，Asia-Ⅰ型ELISA抗体的合格率≥80％，均达到了国家标准。这些结果提示，在我国FMD防控计划中，对有免疫接种史的成年绵羊每年2次接种二价灭活FMD疫苗是可行的。

水貂出血性肺炎二价灭活疫苗的候选株评价及疫苗制备

为了获得针对水貂出血性肺炎的特异性疫苗,试验从分离自2012年水貂出血性肺炎病例的24株绿脓杆菌中筛选出血清G型(D4株)与血清C型(C1株)各1株;同时研制血清G型、血清C型及血清G-C型二价灭活疫苗,分别免疫小鼠与水貂,攻病原菌,测定疫苗的保护率、血清抗体消长规律。结果表明:分离株D4与C1在30代内菌体含量稳定,D4株在24代内毒力稳定,C1株在21代内毒力稳定;血清G型与C型单价疫苗都可对50倍LD50本型病原菌产生完全保护,二价灭活疫苗可对50倍LD50血清G型与C型病原菌完全保护。一免后第21天小鼠血清抗体水平达到峰值,抗G型与C型菌中和抗体效价为1∶3 200,1∶6 400,在35 d后抗体水平下降;二免后,水貂55 d内血清中和抗体维持在较高水平。说明D4株与C1株可以作为良好的水貂出血性肺炎疫苗的候选株,制备的二价灭活疫苗能对水貂产生良好保护力,为水貂出血性肺炎防治奠定坚实基础。

牛羊注射口蹄疫O型-亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗免疫抗体消长检测与分析

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的以偶蹄动物为主的急性、热性、高度传染性疫病,对畜牧业危害极大.为了科学制定免疫程序,有效防控疫病,2012年春防中,我们开展了牛羊注射口蹄疫O型—亚洲1型二价灭活疫苗免疫抗体消长检测试验.现将检测结果分析报告如下：

口蹄疫病毒O型、亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗的研究

对O型口蹄疫病毒OHM/02株和亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒AsiaⅠ-KZ/03株进行了部分生物学特性分析,结果表明它们对牛的毒力较强,传代后毒力稳定,OHM/02株半数感染量(ID50)在107.5～108.25/0.2mL,AsiaⅠ-KZ/03株半数感染量(ID50)在106.75～107.5/0.2mL之间,适合做检验用毒;同时该2株毒易感染乳鼠,适应BHK21细胞,对乳鼠毒的半数致死量(LD50)OHM/02株毒在107.0～109.0/0.2mL,AsiaⅠ-KZ/03株毒在107.0～108.5/0.2mL;通过攻毒保护试验证实,病毒的免疫原性良好,制备的细胞毒灭活疫苗均达到3个以上的PD50。通过病毒大规模生产工艺的探索(转瓶培养和悬浮培养)、疫苗佐剂的研究、免疫持续期的监测和安全性等试验,成功研制了口蹄疫病毒O型、亚洲Ⅰ型二价灭活疫苗,获农业部新兽药注册证书。

HPLC-UV法检测EV71-CA16二价手足口病灭活疫苗原液相关抗原纯度的方法建立与评价

为建立一种准确可靠的高效液相色谱-紫外(HPLC-UV)方法,检测EV71-CA16二价手足口病(HFMD)灭活疫苗原液中的相关抗原,肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CA16)的纯度。本文采用Waters体积排阻色谱柱(SEC,UltrahydrogelTM 2507.8×300 mm,6μm),流动相为0.01 mol/L的PBS中再加入0.1 mol/L氯化钠溶液,等度洗脱,流速0.3 mL/min,检测波长280 nm,进样量50μL,柱温21℃,进行EV71与CA16病毒原液的纯度检测,并对该方法的检测限、拖尾因子、专属性、重复性及检测范围进行验证。结果显示,2种抗原的灵敏度溶液的信噪比(S/N)分别为37.053和47.710,均远大于3,各试样的拖尾因子均小于3;CA16原液和EV71原液经HPLC分离纯化后的目标抗原峰馏分经SDS-PAGE和Western-Blot特异性鉴定,结果显示,色谱峰样品组成分别为CA16和EV71的2种病毒衣壳的结构蛋白,表明本检测方法专属性高。不同浓度的EV71与CA16病毒抗原经多次检测后,各浓度条件下的峰面积百分比与保留时间的RSD均小于1%,重复性良好。不同抗原浓度批样品检测结果显示,CA16原液抗原浓度在89 U/mL~26398 U/mL之间,EV71原液抗原浓度在170 U/mL~9074 U/mL之间时,2种抗原溶液经多次检测统计显示峰面积百分比与保留时间的RSD均小于1%,本方法在该抗原浓度范围内准确可靠,适用于EV71-CA16二价手足口病灭活疫苗原液中病毒抗原纯度的检测。

重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗免疫效果试验

禽流感是由A型流感病毒引起的一种禽类急性败血性、高度接触性传染病。对家禽进行禽流感疫苗的预防接种是我国采取防制禽流感的主要措施之一，可以通过检测血清免疫抗体的血凝抑制效价来反映机体的免疫状态和抵抗力。为了了解重组禽流感病毒H5二价灭活疫苗（H5N1，Re-4株＋Re-5株）免疫抗体的消长规律，特制定本试验方案，具体如下：

重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(Re-4+Re-6)试验报告

高致病性禽流感是人畜共患病，在特定环境下，可感染人，当人感染高致病性禽流感后，死亡率较高，并且严重危害公共安全卫生。由于禽流感毒株的不断变异，为了有效地防控禽流感疫情的发生，2012年农业部推出重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（Re-4＋Re-6），为了保证新疫苗的安全使用，昌平区动物疫病预防控制中心在新疫苗大批使用前先做小范围试验。

猪传染性胸膜肺炎二价(血清7型+血清8型)灭活疫苗的制备及对小鼠免疫效果的评价

为制备猪传染性胸膜肺炎(PCP)二价(血清7型H170株+8型HB1株)灭活疫苗,并评价其对小鼠的免疫效果,本研究以2株猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)(编号/血清型分别为H170/APP7、HB1/APP8)为疫苗株,复苏培养后调整活菌浓度分别为1.0×10^(9) cfu/mL、2.0×10^(9) cfu/mL、4.0×10^(9) cfu/mL,甲醛灭活后相同浓度的两种菌液等体积混合,再与等体积ISA 201 VG矿物油佐剂乳化后制成PCP二价灭活疫苗,分别命名为A-1、A-2和A-3。以昆明鼠为实验动物模型,将A-1、A-2、A-3和PCP商用二价灭活疫苗均以0.2 mL/只分别经颈背部皮下多点注射免疫小鼠(A~D组),对照组小鼠(E组)注射等体积灭菌生理盐水。于首免后21 d和二免后14 d收集各组小鼠血清,采用间接ELISA测定各组小鼠血清中IgG抗体水平和相关细胞因子(IL-4、IL-10、IFN-γ、TNF-β、MCP-1)含量;同时采用血清杀菌试验测定各组小鼠血清中功能性抗体水平。分别于首免后21 d和二免后14 d剖杀各组小鼠,制备脾淋巴细胞悬液,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定各组小鼠脾淋巴细胞增殖指数(SI),采用流式细胞术测定其外周血中CD4^(+)与CD8^(+)T淋巴细胞亚群百分比。为了评价该二价灭活疫苗的攻毒保护效果,于二免后14 d分别采用CVCC265、CVCC266标准菌株以腹腔注射的方式对各组小鼠攻菌(5 LD50/只),实验设未免疫攻菌组(F组),攻菌后观察各组小鼠的临床症状,统计免疫保护率。攻菌后3 d和7 d采集小鼠脏器,采用平板计数法测定各组织荷菌数,分析攻毒菌株在小鼠体内的定植情况,通过制作肺、肝、脾、肾脏切片观察其组织病理学变化。结果显示,与E组相比,A~D组小鼠血清中IgG抗体含量及相关细胞因子水平均显著升高(P<0.05),且均能诱导小鼠血清中功能性抗体水平的持续升高,二免后14 d的免疫小鼠血清均具有良好的杀菌效果;A~D组小鼠的SI、外周血CD4^(+)与CD8^(+)T细胞亚群百分比均显著升高(P<0.05)。攻菌试验结果显示,A~D组小鼠对CVCC265菌株攻击的免疫保护率依次为60%、60%、80%、80%,对CVCC266菌株攻击的免疫保护率依次为60%、60%、80%、60%。攻菌后7 d,与F组相比,A~C组小鼠各脏器(肺、肝、肾、脾)细菌定植量显著降低且低于D组(P<0.05);A、B组小鼠各脏器病理变化均较轻微,C组各脏器则无明显病理变化,E组小鼠各脏器均无明显病理变化,而F组小鼠各脏器均有明显病理变化。上述结果表明,该PCP二价灭活疫苗可诱导小鼠机体产生良好的体液免疫和细胞免疫反应,有效抵抗血清7型、8型APP标准菌株的攻击,其中高浓度组(4.0×10^(9) cfu/mL)免疫效果更佳,可作为PCP二价(7型+8型)灭活疫苗的候选疫苗。本研究首次制备了新型PCP二价灭活疫苗并初步评价其免疫效果,为PCP多价疫苗的开发提供了技术储备。

鸭免疫重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗抗体消长规律观察

疫苗免疫仍是预防禽流感的有效手段之一，被一些国家和地区采用。有关禽流感疫苗的免疫效果及抗体消长规律国内学者做了一些研究工作，但作为我国现阶段使用的主要疫苗，重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗（HSN1，Re-5株＋Re-4株）免疫鸭的抗体动态变化尚未见报道。

口蹄疫O型、AsiaⅠ型二价灭活疫苗的研制与应用

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的急性、热性、高度接触性的烈性传染病，一旦发病极易形成暴发大流行，发病率几乎达100％，不易控制和消灭，国际兽医局（OIE）一直将其列为A类动物疫病之首，我国将其规定为一类疫病。因该病的发生，往往对一个国家的畜牧业生产、肉品供应、畜产品国际贸易及外交政治关系造成重大负面影响，又称为“政治经济病”。