McAb-ELISA检测丝虫特异IgG_4的应用研究

目的 探讨McAb -ELISA检测丝虫特异IgG4在丝虫感染监测中的应用价值。方法 利用生化免疫技术 ,经细胞融合 ,建立起 7株对IgG4表现为单一反应性的单克隆抗体 (McAb)。以此为探针 ,采用ELISA方法检测丝虫特异IgG4。结果 检测班氏微丝蚴血症者血清的敏感性为 96 3% (10 4 / 10 8) ,测得IgG4的最低限量为 0 0 1ul/ml;检测丝虫病非流行区健康者、肠道线虫感染者、华支睾吸虫感染者和囊虫病患者等血清均呈阴性 ,未出现交叉反应 ,特异性为 10 0 %。经现场应用研究 ,同样获得良好的实用性 ,有效地反映出当地丝虫病流行与感染状况。结论 该技术是监测丝虫感染的理想方法。

ELISA和ABC免疫组化染色法在肿瘤McAbs筛选中的比较研究

本文比较分析了ELISA和ABC两种方法在肿瘤McAbS筛选应用中的一些利弊关系。结果表明,ELISA测出为阳性并与结肠癌细胞系反应的99.5％(198/199)孔杂交瘤细胞所分泌的抗体,经ABC法染色后是不与其癌组织反应的,其中只有0.5％(1/199)孔细胞的抗体才是这两种方法同时均能测得为阳性和是有意义的。而ABC法不仅可检出ELISA阳性的抗体,而且亦能检出ELISA漏筛为性阴、最终是有意义的理想抗体。

旋毛虫病McAb快速ELISA诊断盒的研制与应用

本研究建立了McAb快速诊断猪旋毛虫病的ELISA试剂盒,应用旋毛虫单克隆抗体系和层析纯化抗原(PAA)与旋毛虫肌幼虫排泄一分泌抗原(ES)作常规ELISA平行检测61头人工感染旋毛虫病猪血样,阳性率均为100％,检测健康猪血样1082头,阴性率也为100％,检测疫区自然感染猪血样1253头,阳性率分别为1.44％和1.12％,随机抽采175头猪血样和肉样作旋毛虫病消化法,常规法和快速法对比试验,诊断符合率分别为100％、97.6％和95.34％。通过对25万多头活猪检测证明,该诊断盒具有良好的灵敏性、特异性和重复性,深受广大检疫人员的欢迎。

检测非洲猪瘟McAb-ELISA竞争试剂盒的建立及初步应用

用基因重组技术制备的非洲猪瘟蛋白P54免疫BALB/C小鼠,将免疫鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用有限稀释法进行克隆,获得能稳定分泌抗ASFV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。使用该单克隆抗体,建立了检测血清中非洲猪瘟抗体的竞争法ELISA。实验结果表明:ELISA竞争法特异性高,无交叉反应,灵敏度高于间接免疫荧光法,可用于猪血清的非洲猪瘟抗体检测。该法的建立对非洲猪瘟实验诊断的标准以及流行病学调查具有重要的现实意义。

直接法McAb-Dot-ELISA检测日本血吸虫感染耕牛血清循环抗原的研究

将抗日本血吸虫单克隆抗体标记辣根过氧化物酶,进行直接法单克隆抗体斑点酶联免疫吸附试验(McAb-Dot-ELISA),检测日本血吸虫感染耕牛的血清循环抗原。结果,该方法对实验感染耕牛的阳性检出率为100％(32/32);对安徽、江西和湖南3省血吸虫病流行区自然感染耕牛(粪孵阳性)的阳性检出率分别为93.93％(418/445),88.50％(100/113)和81.71％(143/175);对健康耕牛的阴性符合率为98.51％(66/77),对16份感染锥虫和8份实验感染肝片吸虫的耕牛血清均未见交叉反应。提示,该方法具有操作简便、快速等优点,可作为一种新的耕牛血吸虫病免疫诊断方法在疫区基层推广应用。

McAb-RIHA和McAb-Dot-ELISA检测急性血吸虫病患者尿排泄抗原的效果比较

本研究建立了冰冻—加热浓缩法，将尿样浓缩20倍。应用MCAb-RIHA和McAb-Dot-ELISA平行对比检测了43份急性血吸虫病患者和101份健康人尿样，两法的阳性检出率分别为81．39％和69．76％；假阳性率分别为14．85％和0％。应用MCAb-RIHA和MCAb－Dot－ELISA对比检查55份华枝睾吸虫病患者和49份钩虫病患者尿样，前者出现的交叉反应率分别为16．36％和14．28％；后者出现的交叉反应率均为0％。

McAb-Dot-ELISA检测牛日本血吸虫病血清循环抗原

目的 应用 Mc Ab- Dot- EL ISA检测牛日本血吸虫病血清循环抗原并观察其与现场粪孵结果的符合情况。方法 用辣根过氧化物酶标记日本血吸虫单抗 SSJ14 ;应用 Mc Ab- Dot- EL ISA检测现场和实验室感染牛日本血吸虫血清循环抗原。结果 检验酶标单抗的特异性和敏感性显示该株单抗有较高的特异性和敏感性 ,用实验室感染血吸虫病的阳性牛血清及阴性血清检测有 10 0 %的符合率 ,检测现场采集血清的循环抗原的结果和粪孵结果对比 ,总符合率达到 82 .91%。结论 SSJ14单抗和由此研制的 Mc Ab- Dot- EL ISA方法能应用于牛日本血吸虫病血清循环抗原的检测。

ABC-McAb ELISA和BA-FA技术检测HSV抗原及其在眼科临床诊断中的应用

将生物素—亲和素放大系统(BAS)与McAb ELISA 及FA 技术结合,建立ABC-McAb 和BA-FA 技术,并与组织培养相结合初步应用于眼科临床检测HSV 抗原。实验表明ABC-McAb ELISA 的灵敏度比McAb ELISA 高2.5～4倍,特异性较好,与其它感染眼部的病毒无交叉反应,与病毒分离符合率达96%,特异性95%;BA-FA 技术可直接进行临床标本检测,与病毒分离阳性一致率达91%,该技术与组织培养相结合可明显提高培养24小时阳性检出率。

McAb快速ELISA诊断旋毛虫病

作者应用抗人IgG McAb酶结合物,吸附面积较大的聚氯乙烯载体和无毒底物3,3′,5,5′四甲基联苯胺来研究简便、恢速的ELISA方法,其诊断旋毛虫病的效果良好。McAb快速ELISA诊断旋毛虫病具有以下的优点:1.采用吸附表面积较大的PVC载体,提高了试验的敏感性,而且PVC薄膜载体价廉,成本较原来的降10倍;2.此法以目视判断为主,可以不要任何仪器设备。PVC载体孔间距离大,可防止PS反应板因光线衍射对目视判断结果的干扰;3.采用抗人IgG McAb酶结合物,不仅酶结合物效价高,而且反应的本底很清晰,便于观察判断结果;4.用无毒底物TMB代替OPD,不需在临用前新鲜配制,省时间又安全;5.本研究采用预固相抗原方法,减少了试验操作程序,同时通过提高反应系统浓度来缩短孵育时间,使本法达到了操作简便、反应快速。

McAb捕获抗原检测EDS76病毒抗体的ELISA方法的建立和应用

将三株EDS76病毒单克隆抗体IgG混合,包被ELISA板,捕获病毒抗原后用于检测鸡血清中的EDS76抗体,以OD490nm>0.3,P/N>2.1判为阳性结果。经测定,待检血清做1∶100倍稀释时可以很好地区分阴阳性。所建方法与鸡的其它传染病血清无交叉反应,可被免抗EDS76病毒高免血清竞争性抑制。对11个鸡场330份未接种EDS76疫苗的产蛋鸡血清检测结果表明,血清阳性率最高可达93.33%。

应用McAb及BAS建立三种不同ELISA检测人血清总IgE

Chandler与Rao于1983年分别用抗人IgE单克隆抗体(Monoclonal Antibodies,McAb)及生物素一亲和素系统(Biotin—Avidin system,BAS)检测人血清总IgE,本文拟以酶联免疫吸附试验(Enzyme—Linked immunosorbent assay,ELISA)为基础。

McAb-ELISA法检测单纯疱疹病毒抗原

单纯疱疹病毒(HSV)分为HSV-1型和HSV-2型,以密切接触为主要传播途径,引起多种疱疹性疾病。其中HSV-2型是引起妇女宫颈糜烂、阴道炎的主要病原之一。

ELISA法快速测定McAb培养上清中鼠源IgG质量浓度

用小鼠IgG纯品免疫新西兰大白兔,获得兔抗小鼠IgG多克隆抗体。以兔抗小鼠IgG多抗包被聚苯乙烯微孔板,配以辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠IgG抗体和以3,3’5,5-四甲基联苯胺(TMB)为底物,建立了快速测定McAb培养上清中鼠源IgG的双抗体夹心ELISA方法。该方法的检测线性范围是7.02ng/mL至449.38ng/mL之间,回收率在94.83%-115.15%之间,变异系数在1.45%-9.94%之间。显然用该方法测定McAb培养上清中鼠源IgG质量浓度是可行的。

检测莱姆病McAb-ELISA竞争法的建立及初步应用

用自制的莱姆病单克隆抗体VLG2 F9株,建立了检测血清中莱姆病抗体的ELISA非限制性竞争法。用超声波粉碎、高速离心相结合制备可溶性抗原;用羟基磷灰石层析法对单克隆抗体进行纯化均获得了满意结果。实验结果表明,ELISA竞争法特异性高、稳定性和可重复性好,操作简便,可用于不同种动物血清的检测,用该方法检测92份人血清阳性率22.8％,同时测定101份牛血清阳性率为69.9％,该法用于莱姆病的实验诊断尚属首次。该法的建立对莱姆病实验诊断的标准化以及流行病学调查具有重要的实际意义。

McAb-RIHA和McAb-ELISA检测急性血吸虫病患者尿排泄抗原的效果比较

本研究建立了冰冻-加热浓缩法,将尿样浓缩20倍。应用McAb-RIHA和McAb-Dot-ELISA平行对比检测了83份急性血吸虫病患者和101份健康人尿样,两法的阳性检出率分别为78.31％和65.06％;假阳性率分别为14.85％和0％。就用McAb-RIHA和McAb-Dot-ELISA对比检查55份华枝睾吸虫病患者和49份钩虫病患者尿样,前者出现的交叉反应率分别为16.36％和14.28％;后者出现的交叉反应率均为0％。

McAb-RIHA和McAb-Dot-ELISA检测尿中循环抗原诊断日本血吸虫病的研究

通过建立的冰冻—加热浓缩法,将尿样浓缩20倍。应用 McAb-RIHA 和 McAb-Dot-ELISA 平行对比检测了83份急性血吸虫病患者和110例慢性血吸虫病尿样。前者两法的阳性检出率分别为78.31%和65.06%。后者两法的阳性检出率分别为20%和10%。检测101份健康人尿样。两法的假阳性率分别为14.85%和0%。应用 McAb-RIHA 和 McAb-Dot-ELISA对比检查55份华枝睾吸虫病患者和49份钩虫病患者尿样,前者出现的交叉反应率分别为16.36%和14.28%。后者出现的交叉反应率均为0%。12例尿路感染病人中5例含有蛋白的尿样加热前 McAb-Dot-ELISA 检测均阳性,而经76℃2h 加热后均为阴性。

McAb夹心法ELISA检测血清单纯疱疹病毒2型糖蛋白gC型特异性抗体

建立了检测单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白gC型特异性抗体的方法。用本法同免疫荧光血清分型,抗原竞争ELISA和微量中和实验(MNT)进行了比较,检测HSV-2抗体的感度均优于后3种方法。实验结果表明:本法特异、敏感、简便。不仅可用于区分人群中HSV感染型别的流行病学调查,也适用于HSV-2糖蛋白gC的特异性研究。

旋毛虫病McAb快速ELISA诊断盒的应用研究

本试验应用McAb快速ELISA诊断盒,对感染了4个旋毛虫隔离种的猪定期检测其血清中抗体出现情况。结果表明,猪旋毛虫和猪旋毛形线虫(T.spiralis)在感染24天后、犬旋毛虫和本地毛形线虫(T.natica)31天后,可在猪血清中检出抗体;在抗体出现时间上前二者较后二者早7天左右。

华支睾吸虫排泄分泌抗原McAb的制备及双抗夹心ELISA的初步建立

目的以华支睾吸虫排泄分泌抗原(ESA)免疫小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体,并建立一种可检测ESA的双抗体夹心酶联免疫吸附试验的方法。方法用ESA免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,筛选杂交瘤细胞株,制备高效价单克隆抗体并鉴定;单抗经HRP标记和配对筛选,建立双抗夹心ELISA并分析其特异性及灵敏度。结果成功制备出抗华支睾吸虫ESA McAb:B7、F1;抗体类型均为IgG1,抗体滴度高,特异性好,以筛选到的两株单抗建立双抗夹心ELISA法,最佳线性范围为0.014~0.248μg/mL(R2=0.996 9),最低检出限为0.014μg/mL。结论初步建立了检测华支睾吸虫ESA的免疫诊断方法。