应用Protein G纯化细胞培养上清中的大鼠单抗

用ｍｉｎｉＰｅｒｍ系统旋转连续培养大鼠杂交瘤细胞株，获得大量含抗鼠ＩＬ－４（ＩｇＧ１）和ＩＬ－５（ＩｇＧ１和ＩｇＧ２ａ）抗体的培养上清；经ＰＭ１０膜超滤、５０％饱和硫酸铵沉淀及链球菌Ｇ蛋白－琼脂糖亲和层析纯化ＩｇＧ单抗。结果每升杂交瘤细胞培养上清得到大鼠ＩｇＧ２２～３６ｍｇ；１次可纯化抗体达２０ｍｇ；经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及ＥＬＩＳＡ鉴定，所得到的抗体纯度高、活性保持良好。

肾上腺素致心肌细胞肥大的机制

目的 :探讨肾上腺素致心肌细胞肥大中的机制。方法 :在培养新生大鼠心肌细胞上 ,通过测量心肌细胞表面积和 [3H]-Leu的掺入量来判断心肌细胞肥大。结果 :肾上腺素能明显增加心肌细胞表面积和 [3H]-Leu的掺入量 ,α受体阻滞剂 (酚妥拉明 )、β受体阻滞剂 (心得安 )、百日咳毒素 (PTX)和蛋白激酶C(PKC)抑制剂 (calphostinC)均可抑制肾上腺素诱导的心肌细胞表面积和 [3H]-Leu的掺入量增加。结论 :肾上腺素诱导的心肌细胞肥大与肾上腺能受体 (α受体和 β受体 )激动有关 ,并通过G蛋白和PKC介导。

重组呼吸道合胞病毒G蛋白保守域的腺病毒载体疫苗的研究

目的以非复制型的5型人腺病毒(human adenovirus type 5,Ad5)为载体,构建重组呼吸道合胞病毒G蛋白(RSV-G)保守域的腺病毒载体疫苗,利用小鼠评价其免疫原性及免疫保护效果。方法利用分子克隆方法构建插入能串联表达A亚型和B亚型RSV-G保守域(Gbcc和Gacc)的重组Ad5载体质粒(Ad5-Gbcc-Gacc)并转染HEK293A细胞,获得重组腺病毒Ad5-Gbcc-Gacc;通过多酶切鉴定病毒Ad5-Gbcc-Gacc的基因组,用Western blot验证Gbcc-Gacc基因的表达水平;重组腺病毒通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠1次,在第6周用RSV Long毒株对小鼠以滴鼻的方式进行攻毒。用酶联免疫吸附试验(Elisa)检测和评价免疫小鼠血清IgG及抗体亚型,用微中和检测的方法测定中和抗体水平,同时每天记录小鼠攻毒前后的体重,并检测小鼠肺组织的病理变化、肺和鼻组织中RSV病毒拷贝数。结果Western blot及多酶切鉴定结果与预期相符,表明重组腺病毒拯救成功。Ad5-Gbcc-Gacc在小鼠体内可以诱导较高滴度的特异性IgG、中和抗体水平及Th1/Th2平衡的免疫反应。与未免疫小鼠比较,经Ad5-Gbcc-Gacc免疫小鼠攻毒后肺部只有轻微病理损伤,且肺部及鼻甲的病毒拷贝数降低。结论Ad5-Gbcc-Gacc具备良好的免疫原性,并能对RSV感染小鼠有一定的保护作用,为进一步研制基于G蛋白的RSV疫苗奠定了基础。