黄杜鹃根化学成分及镇痛网络药理学研究

研究黄杜鹃根的化学成分及镇痛的作用机制,为揭示黄杜鹃根镇痛药效物质基础提供理论依据。本文运用大孔树脂、硅胶柱色谱和制备色谱对黄杜鹃根进行化学成分分离,利用^(1)H NMR、^(13)C NMR、MS等波谱数据鉴定化合物的结构;综合成分结果联合网络药理学分析黄杜鹃根镇痛作用的主要靶点和关键通路。结果表明,共分离鉴定得到9个化合物:3个二氢查尔酮类化合物,分别是4’-O-甲基根皮苷(1)、根皮素4’-O-葡萄糖苷(2)、根皮素(3);3个三萜类化合物,分别是齐墩果酸(4)、白桦酸(5)、熊果酸(6);3个脂肪酸类化合物,分别是棕榈酸(7)、硬脂酸(8)、山嵛酸(9);网络药理学结果表明,分离得到的9个化合物主要作用在MAPK1、MAPK3、MAPK8、IL-6、CASP3等靶点,通过调控花生四烯酸代谢、炎症介质对色氨酸通道等信号通路发挥抗炎镇痛作用。该研究初步阐明黄杜鹃根的化学成分及潜在的作用机制,为筛选黄杜鹃根镇痛的药效成分及深入阐明作用机制提供了理论依据。

基于TLR4/MyD88/NF-κB信号轴探讨闹羊花毒素Ⅲ对类风湿关节炎的影响

目的本研究旨在探讨闹羊花毒素Ⅲ调控TLR4、MyD88和NF-κB的机制,以及闹羊花毒素Ⅲ对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的影响。方法RA大鼠模型通过Ⅱ型胶原诱导构建。随机将Wistar大鼠分成6组(n=8):假手术组(Sham组)、RA模型组(Model组)、阳性药物雷公藤组[TWG组,50 mg·(kg·d)^(-1)]、闹羊花毒素Ⅲ低剂量组[R-ⅢLo组,0.06 mg·(kg·d)^(-1)]、中剂量[R-ⅢMi组,0.12 mg·(kg·d)^(-1)]和高剂量组[R-ⅢHi组,0.24 mg·(kg·d)^(-1)]。测定各组大鼠的关节炎指数(arthritis index,AI);采用HE染色、ELISA、Western blot和RT-qPCR检测闹羊花毒素Ⅲ对TLR4/MyD88/NF-κB信号轴及RA的影响。结果与Model组比较,闹羊花毒素Ⅲ处理显著降低了RA大鼠的AI评分(P<0.05)。闹羊花毒素Ⅲ对滑膜组织的恶性增生和炎症细胞浸润有明显的抑制作用。与Model组比,闹羊花毒素Ⅲ各剂量组的TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17、VEGF、MMP-2、MMP-9、TLR4、MyD88、p-NF-κB/NF-κB因子的水平降低且呈浓度依赖性(P<0.05)。与TWG组比,R-ⅢLo和R-ⅢMi组的。TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-17、VEGF、MMP-2、MMP-9、TLR4、MyD88、p-NF-κB/NF-κB因子的水平升高(P<0.05),而R-ⅢHi组无显著差异(P>0.05)。结论闹羊花毒素Ⅲ可以通过下调TLR4、MyD88、NF-κB因子的表达水平来改善RA。本研究为利用闹羊花毒素Ⅲ治疗RA提供了一定的实验基础。

羊踯躅含药血清对TNF-α诱导的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖及炎症因子分泌的影响

目的探究羊踯躅含药血清对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes,RA-FLS)增殖和炎症因子分泌的影响和作用机制,为临床治疗RA提供理论及实验依据。方法将细胞分为空白组、模型组、雷公藤多苷组、5%和10%空白血清组及5%和10%羊踯躅含药血清组。RA-FLS经TNF-α(10 ng/mL)处理24 h以构建RA细胞模型。CCK-8检测细胞增殖情况。采用ELISA检测炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)、白细胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)和γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)的含量。Western blot检测蛋白激酶B(protein kinase B,AKT1)、磷酸化AKT1(phosphorylated AKT1,p-AKT1)、原癌基因c-JUN、p-c-JUN、p65、p-p65、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)蛋白表达水平。结果与未用羊踯躅含药血清处理的正常RA-FLS相比,用5%和10%羊踯躅含药血清处理的细胞增殖活性在48 h内没有明显的变化(P>0.05),而用20%和30%羊踯躅含药血清处理的细胞增殖活性明显降低(P<0.05)。与空白组相比,模型组的细胞增殖活性显著上升(P<0.05);与5%和10%空白血清组相比,5%和10%羊踯躅含药血清组的细胞增殖活性均显著降低(P<0.05)。与空白组相比,模型组的IL-1β、IL-17A、IL-6、IL-2和IFN-γ水平均明显升高(P<0.05);与5%和10%空白血清组相比,5%和10%羊踯躅含药血清组的IL-1β、IL-17A、IL-6、IL-2和IFN-γ水平明显下降(P<0.05)。与空白组相比,模型组的EGFR表达量以及AKT1、c-JUN和p65的磷酸化水平均明显升高(P<0.05);与5%和10%空白血清组相比,5%和10%羊踯躅含药血清组的EGFR表达量以及AKT1、c-JUN和p65的磷酸化水平显著降低(P<0.05)。此外,10%羊踯躅含药血清的效果比5%羊踯躅含药血清更为显著(P<0.05)。结论羊踯躅含药血清能抑制TNF-α诱导的RA-FLS增殖及促炎因子的分泌,其机制可能与调控EGFR、核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、AKT和c-Jun N末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)通路有关。

羊踯躅的代谢组学研究

目的:鉴定羊踯躅花、茎、叶的全部代谢物和不同部位间含量有差异的代谢物,分析差异代谢物的代谢通路。方法:采用广泛非靶向代谢组学对羊踯躅不同部位的代谢物进行比较分析。结果:共鉴定出535个代谢物,其中包括金合欢素、落新妇苷、苔黑酚龙胆二糖苷、去甲蟛蜞菊内酯、补骨脂定、秦皮素、络塞维等49个在其他植物中分离鉴定出的具有药用活性的化合物;鉴定出差异代谢物202个,包括β-氰基丙氨酸、蜀黍苷和黄曲霉毒素G23个有毒代谢物,且这3个有毒代谢物分别在花、茎、叶中含量最高;鉴定出百里香酚、丹皮酚、欧芹酚、东莨菪内酯、异泽兰黄素、野鸢尾黄素、石蒜碱和豆甾醇8个有药用价值的化合物,其在花、茎、叶中含量差异有统计学意义;排名前4位的差异代谢物通路中,花、茎、叶共有的通路为精氨酸生物合成,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,以及氨酰基-tRNA生物合成通路,其中涉及花的通路还包括氰基氨基酸代谢通路。结论:羊踯躅中存在丰富的天然药用活性产物,使其药用价值并不限于毒性成分;氨基酸的合成与代谢是不同部位代谢物差异的主要原因。研究结果可为进一步筛选解析羊踯躅中药用价值较高的关键代谢物提供参考。

中国樱桃正反交F_(1)代果实主要性状的遗传分析

【目的】通过观测分析中国樱桃地方种质‘南早红’(早熟,橙红)和‘红妃’(紫红,综合性状优良)杂交F_(1)代果实主要性状的遗传表现,探究果实主要性状遗传规律,为优异性状基因挖掘奠定工作基础,也为新品种选育和杂交亲本选择与选配提供参考依据。【方法】田间调查和测试分析‘南早红’(NZH)和‘红妃’(HF)正、反交F1代群体(n=226)果实大小(单果质量、果实纵径、横径、侧径)、风味(可溶性固形物、可溶性糖、可滴定酸)、颜色(果实花色苷含量)、形状(果形指数)、果实生育期、果柄长度等17个性状的遗传变异,分析其遗传倾向并预测遗传模式。【结果】正交(‘南早红’ב红妃’)和反交(‘红妃’ב南早红’)F1群体单果质量分离广泛,分别为2.59-7.46和2.45-6.48 g,但平均单果质量(4.30 g、4.05 g)均小于中亲值(4.58 g)。可溶性固形物和可溶性糖含量杂种优势明显,前者正、反交群体均值分别为14.55%和14.51%,高于亲本HF(12.97%)和NZH(11.36%),超高亲率分别达78.52%和76.09%;可滴定酸在正、反交群体中的均值(0.67 g/100 mL、0.59 g/100 mL)略低于中亲值(0.63 g/100 mL),低低亲率为47.92%和41.94%。F1果皮颜色也呈现连续变异,包括橙红、红色、紫红和黑紫等类型,以红色为主。果实花色苷含量变异较大,分布范围分别为3.12-112.51和1.80-79.94 mg·kg^(-1)。果实生育期在正反交F1群体中存在差异,正交的比反交的短2 d。果柄长度表现为超亲遗传,超高亲率分别为49.25%和43.33%。遗传模型预测表明,正、反交11个果实性状最适遗传模型的主基因数目完全一致,果实纵径和果实生育期为1对主基因,其他性状均为2对主基因。【结论】中国樱桃杂交F_(1)代果实主要性状均为多基因控制连续分布的数量性状,其中单果质量、果实纵径、横径、侧径、可滴定酸、花色苷含量呈变小的趋势,可溶性固形物、可溶性糖和果柄长度呈增大的趋势。

50份中国樱桃品种资源的果实质地品质评价

中国樱桃[Cerasus pseudocerasus(Lindl.)G.Don],俗称樱桃、小樱桃,为蔷薇科(Rosaceae)李亚科(Prunoideae)樱属(Cerasus Mill.)植物,是起源于中国的特色核果类果树,已有3000余年的栽培历史[1]。中国樱桃具有早花早熟习性和高观赏价值,果实风味浓郁,兼具营养和保健价值,素有“果中珍品”和“春果第一枝”的美誉[2]。此外,中国樱桃适应性广,抗逆性强,能够适应多种环境和气候条件,在当前的乡村振兴和都市现代农业发展中具有重要地位和作用[3-4]。

中药材草龙中荭草苷、异荭草苷含量的测定

建立一种测定中药材草龙[Ludwigia hyssopifolia(G.Don)Exell]中荭草苷、异荭草苷含量的HPLC方法。采用COSMOSIl5 C18-PAQ色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.2%甲酸水(15∶85)为流动相,等度洗脱,流速1.0 mL/min,柱温40℃,检测波长340 nm。结果表明,荭草苷在0.0016~0.0164μg/μL、异荭草苷在0.0019~0.0189μg/μL水平上呈良好的线性关系(r>0.9990),荭草苷和异荭草苷的平均加样回收率分别为109.37%和96.40%,RSD均小于3.0%;精密度、稳定性和重复性试验的RSD均小于3.0%。该方法准确、稳定、重复性好,可用于中药材草龙的质量控制。

真菌诱导子对长春花愈伤组织中吲哚生物碱积累的影响

目的 研究分别来源于镰刀菌 Fusarium solani和黑曲霉 Aspergillum niger的真菌诱导子 (fungal elici-tors)对长春花愈伤组织中吲哚生物碱积累的影响。方法 用真菌诱导子对长春花愈伤组织进行诱导处理后提取吲哚总碱 ,并用 RP- HPL C法测定其中阿玛碱和长春质碱含量。结果 两种真菌诱导子对吲哚总碱及其中阿玛碱和长春质碱的积累均有较明显的正向调节作用 ,并且确立了真菌诱导子最佳处理时间。

濒危黄杜鹃的离体快速繁殖体系研究

以濒危野生黄杜鹃(Rhododendron molleG.Don)茎尖为试材,比较研究3种不同基本培养基和9个激素浓度组合对不定芽增殖的影响,以建立黄杜鹃的快速繁殖体系。结果表明:3种不同基本培养基对野生黄杜鹃不定芽增殖的效果差异显著;相同激素种类与浓度下,WPM培养基上的不定芽增殖系数最大,达10.5。激素种类与浓度对黄杜鹃不定芽的增殖影响差异很大,以单独使用1.0 mg/L ZT最佳,再生率达100%,不定芽增殖系数为10.5。综合分析显示,黄杜鹃不定芽增殖的最佳培养条件为WPM+ZT 1.00 mg/L;健壮、整齐一致的不定芽在1/2 WPM+0.05 mg/L NAA上生根,40 d后生根率可达86.7%,驯化成活率达92.86%。

雪松松针二氯甲烷提取物的化学成分研究

目的:研究雪松Cedrus deodara松针二氯甲烷提取物的化学成分。方法:采用硅胶和Sephadex LH-20等柱色谱方法对其化学成分进行分离和纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定结构。结果:从雪松松针95%乙醇提取物的二氯甲烷萃取部位分离得到9个化合物,分别鉴定为:豆甾醇(1)、齐墩果酸(2)、对羟基苯甲醛(3)、β-谷甾醇(4)、丁香脂素(5)、胡萝卜苷(6)、对羟基苯甲酸(7)、没食子酸甲酯(8)、没食子酸(9)。结论:除了化合物4外,其余8个化合物均为首次从该属植物针叶中分离得到。

得自小根蒜及薤中的几种含氮化合物

从中药薤白的主要基源植物小根蒜（ＡｌｌｉｕｍｍａｃｒｏｓｔｅｍｏｎＢｕｎｇｅ）鳞茎中首次分得５种化合物。它们是腺苷（Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ，１）、胸苷（Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ，２）、２，３，４，９－四氢－１－甲基－１Ｈ－吡啶骈［３，４－ｂ］吲哚－３－羧酸（２，３，４，９－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ－１－ｍｅｔｈｙｌ－１Ｈ－ｐｙｒｉｄｏ［３，４－ｂ］ｉｎｄｏｌｅ－３－ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃａｃｉｄ，３）、２，３，４，９－四氢－１Ｈ－吡啶骈［３，４－ｂ］吲哚－３－羧酸（２，３，４，９－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏ－１Ｈ－ｐｙｒｉｄｏ［３，４－ｂ］ｉｎｄｏｌｅ－３－ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃａｃｉｄ，４）和丁香甙（Ｓｙｒｉｎｇｉｎ，５）．从另一种基源植物薤（Ａ．ｃｈｉｎｅｎｓｅＧ．Ｄｏｎ）鳞茎中分得腺苷（１）、色氨酸（Ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ，６）和化合物（４）．

响应面法优化藠头中皂苷的提取工艺研究

利用响应面法对超声提取藠头皂苷的工艺进行优化。实验研究了超声条件下影响藠头皂苷提取的几个因素,包括超声时间、乙醇浓度、料液比、超声温度,并通过响应面法优化提取工艺。根据中心组合设计原理采用三因子三水平的响应面分析法,通过对各因子显著性和交互作用的分析,得出了超声提取藠头皂苷的最佳工艺条件为:乙醇浓度71%,超声温度55℃、料液比1:16,此时藠头皂苷的得率为3.71%。说明响应面法能较好地对藠头皂苷的超声提取工艺进行回归分析和参数优化。

响应面法优化内部沸腾法提取生米藠头多糖

采用响应面法对内部沸腾法提取生米藠头多糖的工艺条件进行优化。在单因素试验的基础上选取提取时间、提取温度、液料比3因素,利用Box-Benhnken试验和响应面分析法,研究了各自变量交互作用及其对生米藠头多糖得率的影响,模拟得到二次多项式回归方程的预测模型。结果表明内部沸腾法提取生米藠头多糖的最佳提取条件为:提取温度85℃,提取时间6min,液料比171。在此条件下可达到较高生米藠头多糖得率,即34.7%。

汉江樱桃果实发育的品质变化及贮藏物流保鲜技术研究

为探明汉江樱桃[Cerasus pseudocerasus(Lindl.)G.Don]在生长发育过程中的品质变化,采用不同处理对其保鲜效果进行分析,比较果实在发育过程中单果重、果柄拉力、糖度的动态变化;分别在25℃、0℃、0℃+气调(80%N_2+15%CO_2+5%O_2)不同贮藏条件下比较果实腐烂率和预冷物流后果实好果率的差异。结果表明,樱桃果实在硬核期、转色期、七成熟、八成熟、九成熟的单果重分别是0.80、1.50、2.34、3.03、3.24 g;果实成熟度越高,果柄拉力越小;不同成熟期的糖度分别为7.55%、10.04%、13.62%、15.40%、16.34%;果实在25℃环境下,贮藏至第四天腐烂率达72%,0℃环境下,第四天腐烂率仅4%,而在0℃+气调条件下,无腐烂现象发生。果实在预冷24 h后物流运输41 h,好果率达90%。因此汉江樱桃在低温+气调的条件下保鲜效果优于单独低温冷藏。

葱属植物挥发油研究 Ⅲ 薤（Allium chinense G．Don）挥发油成分的研究

利用ＧＣ－ＭＳ联用方法对薤挥发油成分进行了分析，鉴定了１７种化合物，其中１６种为合成化合物。主要成分为二甲基三硫和甲基烯丙基三硫，含量分别为１９．８２％和２３．０６％，后者对血小板聚集有强烈抑制作用。

羊踯躅嫩叶离体培养和植株高效再生技术研究

【目的】建立羊踯躅嫩叶离体培养及植株高效再生体系。【方法】以羊踯躅新生嫩叶为外植体,筛选嫩叶愈伤组织诱导、再分化及生根培养基,并以再生植株茎节为试材,建立高效植株再生体系。【结果】最适合羊踯躅嫩叶愈伤组织诱导的培养基为1/2DR+2.40mg/L 2ip+0.80mg/L NAA,诱导率为99.5%;愈伤组织再分化的最佳培养基为1/2DR+2.90mg/L 2ip+0.01mg/L NAA+1.75mg/L KT,分化率为99.7%;适宜生根的培养基为1/4DR+0.06mg/L ZT+0.02mg/L NAA,生根率达99.0%。利用再生植株茎节的快繁结果表明,在28d的培养周期内,每节段平均增殖达5倍以上。【结论】成功建立了羊踯躅嫩叶愈伤组织诱导、再分化芽苗和植株高效再生体系,可以满足羊踯躅工厂化育苗的需要。

梓实化学成分研究

目的研究梓实Catalpaovata的化学成分。方法采用硅胶柱、SephadexLH-20柱、活性炭柱色谱分离纯化,通过理化常数和光谱分析鉴定化合物的结构。结果从梓实中分离得到8个化合物,根据波谱分析和理化数据,鉴定出其中的6个化合物分别为:梓醇(catalpol,)、梓苷(catalposide,)、熊果酸(ursolicacid,)、β-胡萝卜苷(β-daucosterol,)、二十九烷(nonacosane,)、β-谷甾醇(β-sitosterol,)。结论通过UV、IR、ESI-MS、HREI-MS、1H-NMR、13C-NMR、HMQC和HMBC分析,首次将化合物的碳氢NMR信号进行了全面的归属,另外化合物和为首次从该植物中分离得到。

梓木蒸汽爆破过程传热数值模拟初探

针对梓木蒸汽爆破过程中传热机理的数值模拟进行研究。考虑木材内部水分、湿空气与固相骨架物质的对传热的影响,基于傅里叶导热定律,建立一维梓木爆破过程中传热数学模型,利用有限差分数学思想结合Fortran语言编写该模型数值计算程序,并通过实验验证了模型的准确性。结果表明该模型可以较为准确的反应梓木蒸汽爆破过程中的加热过程,能够定量分析板材内的温度、压力随时间变化的规律。

八厘麻毒素的提取及其半数致死量研究

目的从干燥羊踯躅果实中提取八厘麻毒素并测定八厘麻毒素的半数致死量(LD50)。方法将羊踯躅果实粉碎后,经乙醇浸泡、加热回流、硅胶层析及重结晶获得八厘麻毒素。选取18～22g小鼠20只,予不同剂量八厘麻毒素灌胃给药,观察15min内小鼠死亡与存活状况,采用Dixon-Mood法计算LD50。结果 13kg羊踯躅果实共提取出3g八厘麻毒素,采用序贯法测得八厘麻毒素的LD50为7.609mg/kg。结论应设法减少或消除羊踯躅中有效成分八厘麻毒素的毒副作用,在临床应用中发挥其最佳降压效果。

黑暗和光照对长春花培养细胞生长和生理生化特性的影响

以长春花(Catharanthusroseus(L.)G.Don)幼嫩叶片为外植体,在MS+NAA0.5mg/L+2,4-D0.5mg/L+6BA2.0mg/L培养基上诱导形成愈伤组织,愈伤组织置于不同条件下培养。结果表明,黑暗和光照下,培养细胞的生长周期为27d;过氧化物酶(POD)活性和超氧化物歧化酶(SOD)活性均出现2个峰值。对长春花总生物碱含量和总产量亦做了研究,结果发现最佳的收获时期为第27d。