贝母素乙通过诱导G0/G1期阻滞抑制结肠癌细胞的增殖

目的:探讨贝母素乙对结肠癌HCT116细胞增殖的抑制作用及其分子机制。方法:利用不同浓度的贝母素乙处理人结肠癌细胞HCT116和正常结肠上皮细胞CCD841 CON,通过CCK-8法和结晶紫染色法检测贝母素乙对HCT116和CCD841 CON细胞增殖活力的影响,流式细胞术和WB法检测贝母素乙对HCT116细胞周期及其细胞周期相关蛋白表达的影响。构建HCT116移植瘤裸鼠模型和AOM/DSS结肠癌小鼠模型,观察贝母素乙对小鼠模型肿瘤生长和OS的影响,免疫组化法和WB法检测对移植瘤或肿瘤组织中细胞周期相关蛋白CDK4、CDK6和cyclin D1表达的影响。结果:贝母素乙可显著抑制结肠癌HCT116细胞的增殖能力(P<0.01),诱导HCT116细胞周期G0/G1期阻滞(P<0.01),降低CDK4、CDK6和cyclin D1的蛋白表达水平(均P<0.01)。荷瘤小鼠实验结果显示,贝母素乙(0.75 mg/kg)显著抑制HCT116细胞移植瘤的生长并延长荷瘤裸鼠的OS(P<0.05或P<0.01),降低AOM/DSS模型小鼠的体质量、延长OS、减少癌变肠组织的肿瘤个数和肿瘤体积,下调肿瘤组织中CDK4、CDK6和cyclin D1的蛋白表达(P<0.01或P<0.05)。结论:贝母素乙通过下调CDK4、CDK6和cyclin D1的表达水平,引起细胞周期G0/G1期阻滞,从而抑制结肠癌HCT116细胞的增殖。

奥曲肽通过G_0/G_1期阻滞抑制胆管癌细胞的增殖

为观察四种胆管癌细胞系 (RBE、NEC、QBC939、SSP 2 5 )是否能够表达生长抑素受体 (SSTR) ,以及八肽生长抑素类似物奥曲肽 (OCT)对胆管癌细胞的抑制作用 ,采用逆转录 聚合酶链反应方法检测四种细胞系 2 ,3型SSTR的表达 ;四氮唑蓝法检测不同浓度OCT (10、 1、 0 1、 0 0 1和 0 0 0 1mg L)在体外对胆管癌细胞增殖的影响。并应用碘化丙啶 (PI)及AnnexinV PI染色后于流式细胞仪检测经OCT作用后胆管癌细胞的细胞周期和凋亡情况。结果显示四种胆管癌细胞系均可以表达SSTR2 mRNA ,但未检测到SSTR3mRNA的表达。体外 10、 1和0 1mg LOCT明显抑制四种胆管癌细胞的增殖 (与各自对照组相比 ,P <0 0 5 ) ;1mg LOCT作用 4 8h后流式细胞分析表现为G0 G1 期细胞增加 ,S期和G2 M细胞减少 (与各自对照组相比 ,P <0 0 1) ,但没有明显凋亡发生。从而证明OCT抑制胆管癌细胞增殖的机制主要与引起细胞周期阻滞有关 ,而不是促进凋亡。对于表达生长抑素受体的胆管癌 。

胆碱拮抗剂R2HBJJ诱导非小细胞肺癌细胞G0／G1期阻滞并抑制细胞增殖

目的：评价胆碱拮抗剂R2HBJJ对非小细胞肺癌细胞生长的影响，探讨其作用机制。方法：SRB法测定细胞活力，RT—PCR检测受体表达，

人肾小管上皮细胞血清饥饿法同步化方法的研究

目的:探讨采用血清饥饿法建立将人肾小管上皮细胞(HKC)的同步化方法。方法:将HKC分为6个不同低血清浓度组及对照组,分别采用胎牛血清浓度为0、1、2、3、4、5和100 mL/L的DMEM培养液培养24 h。根据流式细胞术结果选择的最佳同步化HKC的胎牛血清浓度。将HKC的同步化处理时间分别延长为24 h、48 h和72 h,选择最佳同步化时间。用MTT法绘制生长曲线观察血清饥饿处理对HKC生长的影响。采用免疫细胞化学方法验证血清饥饿同步化处理HKC的效果。结果:选择无血清(0 mL/L)和1 mL/L为HKC最佳同步化的胎牛血清浓度,选择48 h为HKC同步化最佳时间。细胞生长曲线表明采用1 mL/L胎牛血清的DMEM培养液培养48 h后恢复正常培养的HKC细胞,其生长曲线更接近于正常培养的细胞。Brdu进一步证明,用1 mL/L胎牛血清的DMEM培养液培养48 h可以使90%以上的HKC细胞处于G0/G1期。结论:用1 mL/L胎牛血清的DMEM培养液培养48 h可获得90%以上的G0/G1期HKC。

奥曲肽对人胃癌细胞株抑制作用机制的实验研究

目的 研究奥曲肽 (OCT)对人胃癌细胞株MKN45生长的调控机制。方法 采用流式细胞术分析OCT1 0 -3 g L对MKN45细胞的周期分布的影响。结果 1 0 -3 g L这一浓度可诱导MKN45出现G0 G1 阻滞 ,于加入OCT后 6h开始 [(63 .67± 3 .92 ) % ] ,2 4h最显著 [(75 .0 5± 3 .42 ) % ] (P <0 .0 5) ,36h已消失 ;与对照组 [(7.0 3±0 .54) % ]相比 ,2 4hG2 M期细胞比例亦减少 [(2 .41± 1 .97) % ] ,但OCT未改变亚二倍体细胞的比例。结论 OCT可抑制人胃癌细胞株MKN45的生长 ,其作用机制之一是诱导细胞出现G0 G1

SMYD3对氯化钴诱导T47D乳腺癌细胞缺氧的影响分析

为了探究组蛋白甲基化酶SMYD3是否会对氯化钴(CoCl_2)诱导乳腺癌细胞缺氧损伤作用产生影响,采用MTT法和流式细胞术检测不同浓度的CoCl_2(0、50、100、200、400,μmol/L)给药24,h以及联合转染过表达质粒使SMYD3过表达后对T47D细胞的增殖及细胞周期的影响;实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)检测其对SMYD3转录表达的影响情况.MTT和流式细胞术结果显示:CoCl_2可剂量依赖性地对T47D乳腺癌细胞的增殖产生抑制作用(P<0.01),并诱导产生G0/G1期细胞周期阻滞(P<0.05).CoCl_2可以抑制SMYD3的转录(P<0.01).利用siRNA抑制内源性SMYD3表达后同样可诱导细胞发生G0/G1期阻滞(P<0.05),而转染外源质粒使SMYD3过表达则可明显拮抗CoCl_2所诱导的G0/G1期阻滞及对细胞的杀伤作用.CoCl_2对T47D细胞的周期调控作用可能与抑制SMYD3的表达有关,SMYD3的过表达可提升肿瘤细胞在缺氧环境下的存活能力.

黄芪总黄酮对K562细胞凋亡及细胞周期的影响

白血病是严重危害人类健康的恶性肿瘤,儿童尤其多见。黄芪总黄酮（total flavonoids of Astragalus,TFA）是从蒙古黄芪中分离的抗氧化、清除自由基的主要活性成分[1,2],

丹参酮衍生物对K562细胞的生长抑制及诱导凋亡作用研究

目的研究丹参酮衍生物对人红白血病细胞株K562的生长抑制以及诱导凋亡作用。方法MTT比色法检测不同浓度丹参酮1、丹参酮2和丹参酮B对K562细胞的增殖抑制作用；PI单染法检测3者对K562细胞周期的影响；Annexin V／PI双染法检测3者对K562细胞诱导凋亡的作用。结果丹参酮1和丹参酮B能够抑制K562细胞增殖，C50分别为5．22和15．11μmol·L^-1，且分别在2．5～10μmol·L^-1和10～40μmol·L^-1剂量范围内，G0／G1期细胞比例的增加及早期凋亡细胞百分率的提高均呈剂量相关性；丹参酮2在100μmol·L^-1的剂量下，对K562细胞的抑制率仅为27．8％，无诱导其凋亡作用，但可以使G0／G1期细胞增多。结论丹参酮1和丹参酮B抑制K562细胞增殖，阻滞其于G0／G1期并诱导细胞凋亡；丹参酮2对K562细胞没有明显生长抑制及诱导凋亡作用，但可将其阻滞于G0／G1期。

白藜芦醇抑制胆囊癌细胞生长与诱导细胞凋亡的实验研究

目的探讨白藜芦醇(Res)对胆囊癌细胞(GBC)和正常成纤维细胞(3T3)体外增殖的影响,进而观察Res对GBC和3T3细胞凋亡的影响。方法MTT法测定肿瘤细胞生长抑制率;流式细胞术分析细胞周期,检测细胞凋亡;SABC法检测细胞bcl2、cmyc、p53蛋白表达。结果Res呈浓度依赖性抑制GBC细胞的生长与增殖(P<0.01),抑制率最高可达54%。Res能明显诱导GBC细胞凋亡,凋亡率最高为30.52%;处理组较对照组G1期细胞由34.88%上升至55.47±3.95%,S期细胞减少8.41%～17.54%,呈明显的G0/G1期阻滞现象。GBC细胞的bcl2、cmyc基因蛋白表达降低,而p53基因蛋白表达增强。结论Res能通过诱导GBC细胞凋亡而抑制其生长与增殖,但对3T3细胞无此作用。

鬼针草提取物对Hela细胞及A549细胞增殖及细胞周期的影响

目的研究鬼针草提取物(BPE)对Hela细胞及A549细胞体外增殖的抑制作用及对细胞周期的影响。方法常规MTT法分析BPE对Hela细胞及A549细胞体外增殖的抑制作用并计算IC50;Hochest33342染色分析10μg/mLBPE对肿瘤细胞的凋亡诱导作用;流式细胞术分析BPE对肿瘤细胞周期的影响。结果BPE能抑制Hela细胞及A549细胞的体外增殖并呈剂量依赖性,IC50分别为10.34μg/mL及8.31μg/mL;Hochest染色证实BPE能诱导肿瘤细胞凋亡;流式细胞术分析证实BPE能将肿瘤细胞阻滞在G0/G1期。结论鬼针草能使细胞停滞于G0/G1期,并能诱导肿瘤细胞凋亡从而抑制肿瘤细胞的增殖。

小干扰RNA抑制MG-63细胞cyclin A2基因的表达

目的利用小干扰RNA(siRNA)抑制骨肉瘤及正常成纤维细胞中cyclin A2基因的表达,并观察其对细胞生物活性的影响。方法设计并化学合成3对针对cyclin A2基因的siRNA,用Oligofectamine分别将其转染到骨肉瘤细胞系MG-63及正常人成纤维细胞HSF中,以无义siRNA转染作为阴性对照;以real-time PCR、Western blot检测cyclin A2基因沉默效果,采用MTT、RT-PCR、流式细胞、克隆培养等方法评价抑制cyclin A2基因表达后细胞的生长状态,同时检测PCNA及cyclin B1表达的改变。结果3对siRNA均能使cyclin A2 mRNA的表达降低,其中siRNA,抑制率最高。在骨肉瘤细胞MG-63中,转染50 nmol/L的siRNA,48 h后,cyclin A2的mRNA及蛋白表达被抑制近80%,这导致细胞增殖抑制,80.1%的细胞被阻滞在G0/G1期,克隆形成能力下降至45.5%,同时,PCNA及cyclin B1的mRNA表达明显降低。对正常成纤维细胞HSF,虽然siRNA1能抑制近60%的cyclin A2 mRNA及蛋白表达,但细胞的增殖及克隆形成能力未受影响。结论针对cyclin A2基因的siRNA能有效降低细胞中cyclin A2 mRNA及蛋白的表达,抑制骨肉瘤细胞的生长,而对正常细胞影响不大。表明cyclin A2是骨肉瘤细胞增殖所依赖的关键基因,抑制其表达有望成为治疗骨肉瘤的新途径。

黄芪总黄酮和毛蕊异黄酮对K562细胞的抑制作用及其机制研究

目的:探讨黄芪总黄酮(total flavonoids of Astragali Radix,TFA)和毛蕊异黄酮在体外实验条件下对人红白血病K562细胞凋亡及细胞周期的影响。方法:以K562细胞为实验对象,运用MTT方法测定不同浓度TFA和毛蕊异黄酮对K562细胞的增殖抑制作用,PI单染法检测药物对K562细胞周期的作用,Annexin V/PI双染法检测药物对K562胞诱导凋亡的影响,并且应用RT-PCR技术检测药物作用下K562细胞中Cyclin D1 mRNA水平表达的变化。结果:与阴性对照组相比,TFA及毛蕊异黄酮处理24 h后,TFA和毛蕊异黄酮对K562细胞有明显的抑制作用,其IC50分别为98.63,130.32 mg.L-1;TFA在100 mg.L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为7.8%,毛蕊异黄酮在130 mg.L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为5.8%;药物对K562细胞持续作用24 h后,可以使G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少;经IC50剂量的药物处理后,K562细胞内的Cyclin D1 mRNA水平明显降低。结论:TFA和毛蕊异黄酮具有抑制K562细胞增殖作用;将细胞生长周期阻滞在G0/G1期以及降低细胞内Cyclin D1 mRNA水平可能是它们抑制K562细胞生长的主要作用机制。

PXR激活在拮抗SH-SY5Y细胞凋亡中的作用

人神经母细胞瘤细胞SH—SY5Y细胞可以表达神经元特异性的酪氨酸羟化酶、多巴胺-B-羟化酶以及多巴胺转运体等，因此可用于建立帕金森病的体外模型。虽然帕金森综合症发病的确切机制至今尚不清楚，但众多的病理学资料证实该病患者存在中脑黑质多巴胺能神经元的凋亡。

低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞集落形成抑制作用的机制研究

目的初步探讨低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞集落形成抑制作用的机制。方法甲基纤维素集落形成实验检测低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞集落形成能力的影响；CCK-8法检测低浓度丰加霉素对K562细胞的生长抑制率；AnnexinV／PI双染流式细胞仪检测低浓度丰加霉素作用下的K562细胞凋亡率；PI单染流式细胞仪检测药物作用后细胞的周期分布改变；Western免疫印迹和实时定量PCR检测周期相关分子表达水平变化。结果低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞具有较强的集落形成抑制作用；可明显抑制K562细胞的生长，呈时间一剂量依赖性；尽管短时间（48h）的药物处理仅出现轻度的细胞凋亡和周期阻滞，但10nmol/L和30nmol/L的丰加霉素长时间（7d）作用后，K562细胞G0／G1期比例分别是（62．3±1．7）％和（76．9±0．7）％，与对照组（38．9±1．1）％相比差异具有高度统计学意义（P〈0．01）；低浓度丰加霉素长时间作用后诱导K562细胞周期相关分子P16蛋白水平和转录水平的高表达。结论丰加霉素在低浓度，长时间作用于人白血病K562细胞后，具有较强的集落形成抑制和生长抑制作用，此作用可能与诱导细胞周期相关分子p16高表达，导致细胞G0／G1期阻滞有关。

新型樟脑磺胺基肟醚衍生物的合成及抗肿瘤活性研究

利用药物设计中的活性拼接原理,以(+)-10-樟脑磺酸为原料,经酰氯化、酰胺化和缩合反应,设计合成了一系列樟脑磺胺基肟醚类衍生物,通过1HNMR、13CNMR和HRMS对其结构进行了表征.采用噻唑蓝(MTT)法对目标化合物对人肺腺癌细胞(A549)、人宫颈癌细胞(Hela)、人乳腺癌细胞(MCF-7)和人正常胚胎肝细胞(LO2)进行抗肿瘤活性评价。结果表明,大部分化合物显示出良好的抗肿瘤活性。其中,(+)-1-(7,7-二甲基-2-(苄氧基亚氨基)双环[2.2.1]庚烷-1-基)-N-(3-(三氟甲基)苯基)甲磺酰胺(4r)对三种细胞表现出最好的抗增值效果,IC50值分别为6.75、7.93和4.51μmol·L^(-1).采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Hoechst染色观察细胞形态变化.荧光探针DCFH-DA和JC-1分别用于检测细胞内活性氧水平和线粒体膜电位.初步机理研究表明,化合物4r可将MCF-7细胞阻滞在G0/G1期,可诱导活性氧产生和线粒体膜电位崩溃进而诱导细胞呈剂量依赖式凋亡.

异丹叶大黄素抑制膀胱癌细胞增殖的功能研究

利用不同浓度的异丹叶大黄素(Isorhapontigenin,ISO)处理膀胱癌细胞株5637后,通过MTT细胞毒性实验检测细胞增殖活性;用荧光定量RT-PCR方法检测UCA1基因表达;采用流式细胞术检测细胞周期的变化以及细胞划痕法检测细胞迁移活性;应用Western blotting检测ISO处理组与对照组细胞的迁移相关蛋白E-cadherin和N-cadherin的表达,最终揭示了ISO抑制膀胱癌的细胞株5637增殖与迁移的分子机制.结果表明:20μmol/L ISO对膀胱癌细胞株5637增殖具有明显抑制作用,与10μmol/LISO相比抑制作用显著提高.ISO可抑制膀胱癌细胞株5637迁移,并通过下调UCA1基因表达诱导G0/G1细胞周期阻滞从而抑制细胞增殖,且具有剂量依赖性.