敲除G0S2基因对绵羊卵巢颗粒细胞增殖、类固醇激素及相关基因表达的影响

本文旨在探究G0S2基因对绵羊卵巢颗粒细胞增殖,雌激素(E_(2))和孕酮(P_(4))分泌,以及类固醇分泌相关基因和细胞凋亡基因表达的影响。采集小尾寒羊新鲜卵巢,用割吸法收集中小卵泡的卵泡液,离心分离颗粒细胞,分为试验组和对照组,试验组采用CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除G0S2基因,获得重组表达载体PX458-sgRNA-G0S2转染至颗粒细胞;对照组转染PX458质粒至颗粒细胞。检测颗粒细胞活力和凋亡情况,以及E_(2)和P_(4)水平及相关基因的表达量。结果表明,试验组G0S2 mRNA的表达量及蛋白水平极显著低于对照组(P<0.01),分别降低了66%和70%,G0S2敲除成功。试验组颗粒细胞的增殖活力显著高于对照组(P<0.05),细胞凋亡率极显著下降56%(P<0.01)。试验组E_(2)水平显著高于对照组(P<0.05),P_(4)水平显著低于对照组(P<0.05)。试验组颗粒细胞中StAR、CYP11、3β-HSD的表达量极显著低于对照组(P<0.01),CYP19的表达量极显著高于对照组(P<0.01)。与对照组相比,试验组颗粒细胞中Caspase3和Bax的表达极显著下调(P<0.01),Bcl-2的表达极显著上调(P<0.01)。上述结果表明,敲除G0S2基因能促进在绵羊卵巢颗粒细胞的增殖,抑制其凋亡,通过下调StAR、CYP11、3β-HSD,上调CYP19的表达影响E_(2)和P_(4)的分泌。

G0S2抑制ALV-J在鸡巨噬细胞中增殖

G0/G1期开关基因2(G0/G1 switch 2,G0S2)在脂肪稳态、细胞增殖和肿瘤发生等生物学过程中扮演着重要角色,而有关G0S2基因在家禽抗病毒免疫中的研究相对甚少。为探讨G0S2基因在鸡巨噬细胞中的抗病毒作用及其机制,构建G0S2真核表达载体并转染鸡巨噬细胞系HD11细胞,通过荧光定量PCR和Western blot检测G0S2过表达对J亚群禽白血病病毒(ALV-J)复制水平、天然免疫基因TLR3和糖酵解关键调控基因MYC表达的影响。结果表明:G0S2过表达可显著抑制ALV-J在HD11细胞中增殖。G0S2显著上调HD11细胞内双链RNA(dsRNA)识别受体基因TLR3表达,并抑制糖酵解调控基因MYC表达,说明激活TLR3表达和抑制MYC表达可能是G0S2基因抑制ALV-J在巨噬细胞中增殖的重要机制。综上,该研究揭示了鸡G0S2在巨噬细胞中的抗病毒功能及其作用机制,为今后研究G0S2的功能及其宿主遗传抗性提供了参考依据。

G0S2基因在胶质瘤中的表达及生物学意义

目的分析G0S2(G0S2G0/G1 switch 2)基因与胶质瘤预后及恶性程度的相关性。方法应用生物信息学技术对GSE33331芯片进行分析得出差异性表达的基因G0S2,并使用DAVID、TCGA数据库(The Cancer Genome Atlas)对该基因进行GO(Gene Ontology)分析及生存分析,使用实时荧光定量PCR方法研究G0S2与胶质瘤级别的相关性。结果生物信息学分析结果提示G0S2是芯片中表达差异第3显著的基因(log FC=-2.53672,P<0.001),该基因参与肿瘤的脂质、分子等代谢过程,高表达该基因的胶质瘤患者生存时间显著下降(Chisq=150,P<0.001)。此外通过40例胶质瘤的q PCR结果证实G0S2在高级别与低级别胶质瘤中差异表达(t=3.168,P=0.003)。结论 G0S2基因表达水平与胶质瘤恶性程度及预后相关。

二甲双胍对非酒精性脂肪肝的缓解与AMPK-G0S2信号通路的关系

目的:探讨二甲双胍对G0期G1期转换基因2(G0S2)的调控作用在非酒精性脂肪肝(NAFLD)治疗中的作用机制。方法:在动物水平12只雄性ob/ob小鼠随机分为二甲双胍组,对照组。在小鼠药物处理期间测量小鼠体重,实验结束时称量小鼠的进食量,肝脏的重量,检测肝脏组织中脂质含量。实时荧光定量PCR和Western blotting在RNA水平和蛋白水平检测小鼠肝脏组织中AMPK信号通路相关分子以及G0S2的变化。结果:二甲双胍组ob/ob小鼠体重明显低于对照组,且摄食量没有明显差异。二甲双胍组ob/ob小鼠肝脏组织重量以及脂质含量均低于对照组。在分子水平上二甲双胍显著激活ob/ob小鼠肝脏组织中AMPK信号通路且下调G0S2蛋白表达。结论:二甲双胍通过激活AMPK信号通路下调G0S2的表达,促进脂肪分解进而有效的缓解NAFLD。

含G0S2基因启动子的荧光素酶报告基因载体的构建

目的:克隆人G0S2基因启动子并构建荧光素酶报告基因载体,为进一步研究G0S2基因转录调控提供质粒。方法:利用PCR技术从人胚肾293A细胞基因组DNA中克隆获得G0S2基因启动子的DNA片段,将其克隆至pGL3-basic表达载体中,并转化人大肠杆菌DH5α,经限制性内切酶酶切、PCR及测序鉴定得到确认;将重组载体质粒与半乳糖苷酶表达质粒psV-β-Galactosidase共转染至大鼠血管平滑肌细胞(VSMC),检测细胞中荧光素酶的活性。结果:pGL3-G0S2-Promoter重组质粒插入片段和相邻序列正确,克隆的G0S2基因片段有启动子活性(P<0.05)。结论:成功构建了pGL3-G0S2-Promoter报告基因质粒,为进一步研究G0S2基因的表达奠定了基础。

G_0S_2基因参与调节鼠骨髓基质细胞向脂肪细胞分化

目的:探讨G0S2在调节鼠骨髓基质细胞向脂肪细胞分化过程中的作用。方法:利用原代培养小鼠骨髓基质细胞(Marrow strom cell,MSC),脂质体转染法将表达质粒pCAG-PPARγ2及含报告基因的pGL2-COL1A质粒共转染至MSC,G418筛选,RT-PCR检测PPARγ及G0S2 mRNA表达,免疫组化检测PPARγ的表达,westen blot检测G0S2的表达,油红O染色检测细胞内脂滴。结果:MSC在未分化状态下不表达G0S2,经PPARγ基因转染后,G0S2开始表达,转染细胞最终分化为脂肪细胞。结论:PPARγ通过调节G0S2启动子调节后者表达,进而调节MSC向脂肪细胞分化,G0S2基因参与调节MSC向脂肪细胞分化。

G_0S_2基因在食管癌组织中表达变化及对癌细胞增殖、凋亡的影响

目的观察G_0S_2基因在食管癌组织中的表达变化,并探讨其对食管癌细胞增殖、凋亡的影响。方法用qRT-PCR技术检测45例食管癌组织及其癌旁组织中G_0S_2基因表达。将培养好的食管癌KYSE-70细胞随机分为7组,Ad-Null组、Ad-G_0S_2组分别转染腺病毒介导的G_0S_2(Ad-G_0S_2)、空载体(Ad-Null),0、25、50、100μmol/L 5-氮杂-2-脱氧胞苷组分别给予0、25、50、100μmol/L的甲基化抑制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷进行处理,均培养24 h。用CCK-8法检测各组细胞增殖能力吸光度,用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率。结果 G_0S_2基因在食管癌组织和癌旁组织中的相对表达量分别为31.9±7.8、1,二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。与其他两组比较,Ad-G_0S_2组吸光度低(P均<0.05)、凋亡率高(P均<0.05),空白组与Ad-Null组吸光度、凋亡率比较差异无统计学意义(P均>0.05);随5-氮杂-2-脱氧胞苷浓度升高,细胞增殖能力降低、凋亡率升高(P均<0.05)。结论G_0S_2基因在食管癌组织中低表达,其可抑制食管癌细胞增殖,促进其凋亡。

血小板源性生长因子对血管平滑肌细胞G_0S_2mRNA表达的影响

目的:研究血小板源性生长因子(PDGF-BB)对血管平滑肌细胞(VSMC)G0S2基因mRNA表达的调控,并初步探讨其机制。方法:体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,逆转录实时定量聚合酶联反应(RT-QPCR)法测定PDGF-BBJVSMC中G0S2 mRNA表达影响的时效关系和量效关系;运用不同细胞信号通路阻断剂处理,研究PDGF-BB影响G0S2 mRNA表达的信号途径;转染含有G0S2基因启动子的荧光素酶报告基因质粒pGL3-G0S2-Promotor,检测PDGF-BB对G0S2基因启动子活性的影响。结果:PDGF-BB能够增加平滑肌细胞G0S2 mRNA表达,PDGF-BB诱导VSMC表达G0S2mRNA在12h后达峰值[20ng/ml增加(2.83±0.81)倍;10ng/ml增加(2.99±0.12)倍,P<0.05],随后降低。p38MAPK和PI3K/AKT信号通路阻断剂可显著抑制PDGF-BB诱导的G0S2mRNA表达(P<0.05),并且PI3K/AKT信号通路阻断剂可以明显降低G0S2 mRNA的基础表达水平。荧光素酶活性分析显示,PDGF-BB可增强G0S2基因启动子活性(P<0.05)。结论:PDGF-BB上调VSMC中G0S2基因mRNA的表达,并且可以增强G0S2基因启动子活性,p38MAPK和PI3K/AKT通路可能介导了这种作用。