ALA-PDT对SW480结肠癌细胞周期阻滞作用及对G_1/S关卡调控因子的影响

目的:了解光动力疗法对结肠癌SW480细胞的周期阻滞作用与G1/S关卡调控因子之间的联系. 方法:对体外培养的SW480结肠癌细胞进行ALA-PDT实验,使用流式细胞仪技术观测基于δ-氨基乙酰丙酸的光动力疗法对SW480细胞的细胞周期阻滞作用,应用免疫细胞化学技术检测光动力疗法对G1/S关卡调控因子Chk2,P21wAF1/Cip1/Sdi1,CyclinD1蛋白表达的影响. 结果:基于δ-氨基乙酰丙酸的光动力疗法可在其作用后早期诱导SW480细胞产生G0-G1细胞周期阻滞,G0/G1期比例显著增加,而S期和G2/M期比例明显下降,且呈时间依赖性变化;光动力作用诱导SW480细胞G1/S关卡调控因子Chk2,P21wAF1/Cip1/Sdi1蛋白表达增高,降低CyclinD1 蛋白表达,与G1/S期阻滞进程相一致,均呈时间依赖性变化. 结论:基于δ-氨基乙酰丙酸的光动力疗法可诱导SW480 细胞产生G0-G1细胞周期阻滞,光动力疗法对SW480细胞的G0-G1期阻滞作用与其对多个G1/S关卡调控因子的调节事件有关.

DNA损伤关卡及分子机制研究进展

DNA损伤会引发多种细胞反应,包括DNA修复、细胞周期延迟或阻滞、细胞凋亡等。其中细胞周期延迟或阻滞是通过DNA损伤关卡完成的。DNA损伤关卡主要包括3个组成部分,即感应因子(如ATM和ATR)、信号传导因子(如Chk1和Chk2)和效应因子(包括多种能激活CDKs的磷酸酯酶,如Cdc25A、Cdc25B和Cdc25C)。DNA损伤关卡主要包括G1/S、S和G2/M关卡。DNA损伤发生在G1期时,通过ATM-Chk2-Cdc25A或ATR-Chk1-Cdc25A途径启动G1/S阻滞,随后是由p53介导的G1/S期阻滞的维持过程。在S期发生的DNA损伤引发的S期关卡的激活主要通过两条途径即ATM(ATR)-Chk2(Chk1)-Cdc25A-Cdk2途径和ATM-NBS1/SMC1途径,阻滞DNA的复制。G2/M期关卡的作用是阻止在G2期DNA受损的细胞进行有丝分裂,根据损伤的形式不同,分别激活ATM-Chk2-Cdc25和ATR-Chk1-Cdc25两条通路,抑制Cdc2/CyclinB的活性,阻止细胞进入M期。

汉黄芩素对结肠癌LoVo细胞增殖、凋亡和周期及G_1/S关卡调控因子的影响

目的探讨汉黄芩素对人结肠癌LoVo细胞体外增殖、凋亡和周期及G_1/S关卡调控因子的影响,为其临床应用提供理论依据。方法汉黄芩素处理LoVo细胞后,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,Graphpad计算IC50;FCM检测细胞周期和凋亡率;Western blot检测G_1/S关卡调控因子蛋白表达。结果与对照组相比,汉黄芩素对LoVo细胞增殖抑制作用呈现时间和剂量依赖性(P<0.05);24、48和72 h的IC_(50)分别是198.7、65.1和38.6μmol·L^(-1)。不同浓度汉黄芩素作用48 h后,汉黄芩素组LoVo细胞凋亡率均明显高于对照组,且呈现出剂量依赖性(P<0.05);LoVo细胞G_0/G_1期比例增大(P<0.05),S期比例减少(P<0.05),G2/M期比例变化不明显(P>0.05);随着汉黄芩素浓度增加,Cyclin D1、Cyclin E、CDK2和CDK4蛋白相对表达量均逐渐下调(P<0.05),而p21和p27蛋白相对表达量则逐渐上调(P<0.05)。Spearman相关分析显示,LoVo细胞G_0/G_1期比例与p21和p27蛋白表达呈正相关,而与Cyclin D1、Cyclin E、CDK2和CDK4蛋白表达呈负相关。结论汉黄芩素通过G_1/S关卡调控因子蛋白表达来阻滞结肠癌LoVo细胞于G_0/G_1期,进而有效地抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,提示汉黄芩素在结肠癌的辅助治疗中有一定的应用前景。

氯乙烯对肝细胞周期G_1/S关卡相关蛋白表达影响

目的探讨氯乙烯(VCM)对细胞周期G1/S关卡功能影响及可能的机制。方法将人正常肝细胞HL-7702暴露于VCM气体(体积分数为0.8%、2.5%、7.5%、15.0%和30.0%)和空气(对照组)48 h后用流式细胞仪检测HL-7702细胞周期;Western blot测定细胞中G1/S关卡相关蛋白表达水平。结果染毒48 h后,在<7.5%剂量时,HL-7702细胞G0/G1期细胞百分数随染毒剂量增加呈上升趋势,与对照组[(73.35±1.56)%]比较,7.5%剂量组G0/G1期细胞百分比[(78.52±4.46)%]升高,差异有统计学意义(P<0.01);与对照组[(12.85±0.02)%]比较,2.5%剂量组S期细胞百分比[(10.97±0.17)%]下降,差异有统计学意义(P<0.05);细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK 4)和P16蛋白表达量均呈上升趋势,与对照组比较,7.5%剂量组HL-7702细胞CDK 4、P16表达[分别为(1.43±0.51)、(0.80±0.30)]均升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论低剂量VCM染毒可使肝细胞发生G1期阻滞,高剂量时G1期阻滞作用消失;其机制主要与上调P16、CDK 4蛋白表达有关。