ALA-PDT对SW480结肠癌细胞周期阻滞作用及对G_1/S关卡调控因子的影响

目的:了解光动力疗法对结肠癌SW480细胞的周期阻滞作用与G1/S关卡调控因子之间的联系. 方法:对体外培养的SW480结肠癌细胞进行ALA-PDT实验,使用流式细胞仪技术观测基于δ-氨基乙酰丙酸的光动力疗法对SW480细胞的细胞周期阻滞作用,应用免疫细胞化学技术检测光动力疗法对G1/S关卡调控因子Chk2,P21wAF1/Cip1/Sdi1,CyclinD1蛋白表达的影响. 结果:基于δ-氨基乙酰丙酸的光动力疗法可在其作用后早期诱导SW480细胞产生G0-G1细胞周期阻滞,G0/G1期比例显著增加,而S期和G2/M期比例明显下降,且呈时间依赖性变化;光动力作用诱导SW480细胞G1/S关卡调控因子Chk2,P21wAF1/Cip1/Sdi1蛋白表达增高,降低CyclinD1 蛋白表达,与G1/S期阻滞进程相一致,均呈时间依赖性变化. 结论:基于δ-氨基乙酰丙酸的光动力疗法可诱导SW480 细胞产生G0-G1细胞周期阻滞,光动力疗法对SW480细胞的G0-G1期阻滞作用与其对多个G1/S关卡调控因子的调节事件有关.

RGS1在不同反应性卵巢颗粒细胞中的表达及影响

目的探究G蛋白信号转导调控因子1(regulator of G-protein signalling1,RGS1)在不同反应性卵巢颗粒细胞中的表达及影响。方法非随机选取2022年3—12月于海南省妇女儿童医学中心生殖医学中心接受体外受精-胚胎移植治疗的90例不孕症患者的卵巢颗粒细胞进行体外培养并研究。根据卵巢对外源性促性腺激素的刺激性做出的卵巢不同反应性分为卵巢低反应组(n=30)、高反应组(n=30)、正常反应组(n=30)。比较3组RGS1的表达水平,分析RGS1的表达水平与卵巢反应性的关系。结果高反应组RGS1表达水平高于正常反应组与低反应组,差异有统计学意义(P<0.05)。RGS1表达水平越高,卵巢反应性越高,二者呈正相关(r=0.49,P<0.001)。结论RGS1在不同反应性卵巢颗粒细胞中表达水平存在差异。

肺岩宁颗粒干预细胞周期G_1/S检测点调控信号抗Lewis肺癌细胞增殖的研究

目的观察肺岩宁颗粒对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长、肿瘤细胞周期分布,以及G1/S检测点调控信号RB-E2F1生物轴的影响。方法采用C57BL/6小鼠,造模并随机分为6组:模型组、顺铂组、肺岩宁煎剂组(煎剂组)、肺岩宁颗粒低剂量组(低剂量组,0·3g)、肺岩宁颗粒中剂量组(中剂量组,0·6g)、肺岩宁颗粒高剂量组(高剂量组,1·2g)。造模后顺铂组1、3、5天腹腔注射顺铂0·1mg,其他各组分别灌胃给药14天,观察各组治疗后抑瘤率、瘤重、体重,流式细胞术检测细胞周期时相分布,RT-PCR测定肿瘤组织视网膜母细胞瘤蛋白(RB)-腺病毒E2启动子结合转录因子(E2F1)的mRNA表达,Western blot检测RB、E2F1蛋白表达。结果各用药组瘤重低于模型组(P<0·05,P<0·01),中剂量组体重明显高于模型组和顺铂组(P<0·05,P<0·01)。流式细胞术发现中剂量组的G0/G1比例较模型组、顺铂组和煎剂组显著增多(P<0·01),癌细胞增殖指数明显降低(P<0·01,P<0·05)。RT-PCR显示中剂量组E2F1mRNA水平明显低于模型组、顺铂组和煎剂组(P<0·01);中剂量组RBmRNA表达明显高于模型组、顺铂组和煎剂组(P<0·01)。Western blot分析显示中剂量组较模型组和顺铂组明显抑制E2F1蛋白表达(P<0·05),并较模型组、顺铂组和煎剂组明显增加RB蛋白表达(P<0·05)。结论肺岩宁颗粒抑制Lewis肺癌肿瘤生长与干预细胞周期时相分布有关,能使癌细胞较多的阻滞在细胞周期G0/G1期,通过抑制E2F1,增强RB表达,从而干预细胞周期G1/S检测点信号通路中RB-E2F1生物轴实现抗肺癌增殖。

流体切应力促成骨细胞通过细胞周期G1/S调控点机制的研究

[目的]探讨流体切应力(FSS)促成骨细胞增殖、分化作用与细胞周期从G1期向S期转化机制的关系,为确立最佳生理应力刺激骨再生提供依据。[方法]从KM乳鼠颅盖骨提取原代成骨细胞,在体外流体小室内分别受FSS(12dyn/cm2)作用0、0.25、0.5、1、2、4h,通过MTT法分析细胞增殖能力,并利用碱性磷酸酶(ALP)的表达评价其分化能力;通过流式细胞仪、免疫荧光染色和RT-PCR测定细胞周期G1/S百分比、细胞周期依赖激酶2和4(CDK2、CDK4)的活性改变及E2F1、p27mRNA的表达实现FSS促成骨细胞由G1期转向S期的测定。[结果]FSS促增殖作用在短期(0.25h、0.5h)明显,并且细胞生长曲线前移;但在1、2、4h却有明显抑制增殖作用。FSS同样增加了ALP的活性,尤其在应力作用0.25、0.5h时显著(比对照达128%和158%);而应力作用1、2、4h后减低了ALP的表达。在FSS作用1h内细胞周期S期百分比增高,作用0.5h后与对照组比较明显增高(P<0.05);但随着时间的增加细胞周期S期百分比开始下降,当作用时间持续4h后S期百分比下降明显(P<0.05)。流体切应力增加了活化pRb的CDK2、CDK4的活性,而且与CDK2相关的E2F1表达量也明显增加;而细胞周期依赖激酶抑制剂p27在流体切应力作用下有所下降。其中流体切应力在0.25h、0.5h明显增加了E2FlmRNA的表达水平(P<0.05),此效应在作用1h后减退。[结论]适宜的流体切应力通过上调CDK2、CDK4及E2F1,下调p27,使细胞从G1期转化到S期,在流体切应力促成骨细胞增殖、分化机制中起重要作用;并且这种作用有明显的FSS作用时间限制性。

G1/S检测点调控机制研究进展

G1/S检测点是细胞增殖的关键步骤,细胞在该点对DNA损伤、各类信号传导因子等复杂的细胞内外信号进行整合和传递,决定细胞是否进行分裂或发生凋亡.G1/S检测点的调控涉及到正性调控子(如CDK-cyclins和E2Fs)与负性调控子(如CDKIs)间相互作用,蛋白质泛素化、CDC25、信号转导系统等对其调控也至关重要.以下针对G1/S检测点调控机制研究的最新进展作一综述.

G_1细胞周期调控因子与肿瘤

细胞周期调控是指各种调控因子在细胞周期检测点的控制下通过自身的激活和灭活,使细胞启动和完成细胞周期重要事件,并保障这些事件按次序正常进行.细胞周期调控因子包括正调控因子细胞周期蛋白(Cyclins)、细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)及负调控因子细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶抑制剂(CDIs).细胞周期正调控因子的过度表达、异常活跃及负调控因子的表达缺失以及检测点的异常而导致细胞周期紊乱而致癌.

细胞周期G_1/S期调控元件异常与卵巢癌关系研究进展

细胞周期调控需要有多个元件参与,起关键作用的在于G1/S期调控元件,包括p21,p27,p53,p16,p15,CyclinE,CyclinD,CDK2,CDK4和CDK6等。对卵巢癌组与正常对照组的研究常发现在卵巢癌组有p53高表达且p21低表达,或p27低表达,或p16和p15缺失,或CyclinD1过度表达,表明这些因素与卵巢癌的发生、发展有关。对卵巢癌预后指标的研究发现p53高表达且p21缺失,或p16和p15缺失,或CyclinD1高表达,或CyclinE高表达与患者预后差显著相关,而p16和p15缺失组或p21低表达组常表现为对铂类化疗不敏感。

G_1细胞周期调控因子与癌

细胞周期中的Ｇ１期是增殖细胞唯一能够接受从外界传入的增殖和增殖抑制信息的时期。癌基因和抑癌基因产物及由抑癌基因诱导产生的Ｃｄｋ抑制蛋白质群，通过Ｇ１控制点而发挥作用。探讨Ｇ１调控机理可能为从细胞周期角度研究癌变机理和对癌症基因治疗提供重要依据。

P15^(INK4b)对人黑色素瘤细胞周期及G_1期相关调控基因的影响

人黑色素瘤细胞A375是P15^(INK4b)缺失细胞系,通过细胞转染技术将外源P15^(INK4b)cDNA转染A375细胞,经PCR和Western blot检测,证明构建了P15^(INK4b)稳定表达细胞模型MLIK6。流式细胞光度术结果显示,与对照组MLC2相比,MLIK6细胞G_1期升高11％,S期下降14％。利用TdR-N_2O同步法所得同步的MLIK6和MLC2的M期细胞比例分别达到89.1％和76.8％,而G_1期的比例分别为74.3％和76.4％。~3H-TdR掺入的结果显示,MLIK6从G_1期进入S期的时间比MLC2延长2 h,并且掺入强度明显减弱。进一步探讨P15^(INK4b)对G_1/S相关调控基因的影响,发现G_1期的MLIK6细胞在诱导P27表达升高的同时,cyclinD1,CdK4,cyclinE和c-myc的蛋白水平均降低,其中cyclinD1的抑制在晚G_1期附近最显著,而对cyclinE的抑制则在G_1/S转换处表现突出,癌基因c-myc表达受到明显抑制并贯穿于G_1→S全部时间进程中。说明P15^(INK4b)是通过对G_1期不同阶段细胞周期引擎分子cyclinD1,CdK4,cyclinE和癌基因c-myc的抑制及增加CKI P27延缓了G_1/S进程。

乌鲁木齐地区汉族支气管哮喘儿童ADAM33基因S2位点与TGF-β1、ERK水平相关性分析

目的探讨乌鲁木齐支气管哮喘汉族儿童解整合素-金属蛋白酶33(ADAM33)基因S2、转化生长因子-β1(TGF-β1)、胞外信号调控激酶(ERK)水平的相关性,期望从表观遗传学的水平为哮喘的防治提供新的思路与靶点。方法选择2018年7月—2019年7月新疆医科大学第五附属医院及第一附属医院门诊及入院,3~14岁的汉族支气管哮喘患儿78例作为哮喘组,选择预防保健科就诊的同期45例汉族非哮喘儿童作为非哮喘组。对ADAM33 S2采用聚合酶链反应进行分型,IgE、TGF-β1及ERK水平用酶联免疫吸附分析法检测,比较基因型及等位基因频率在哮喘组与非哮喘组中的差异,进行三者相关性分析。结果两组ADAM33 S2基因型及等位基因频率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。非哮喘组IgE、TGF-β1、ERK水平低于哮喘组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。TGF-β1与ADAM33 S2、ERK呈正相关(r>0,P<0.05),ADAM33S基因S2与ERK无相关性(P>0.05)。结论乌鲁木齐汉族哮喘儿童易感基因之一可能是ADAM33基因S2。哮喘组IgE、TGF-β1及ERK指标均高于非哮喘组。TGF-β1可能上调汉族哮喘儿童ADAM33基因S2表达。ERK可能会上调TGF-β1的分泌。

汉黄芩素对结肠癌LoVo细胞增殖、凋亡和周期及G_1/S关卡调控因子的影响

目的探讨汉黄芩素对人结肠癌LoVo细胞体外增殖、凋亡和周期及G_1/S关卡调控因子的影响,为其临床应用提供理论依据。方法汉黄芩素处理LoVo细胞后,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,Graphpad计算IC50;FCM检测细胞周期和凋亡率;Western blot检测G_1/S关卡调控因子蛋白表达。结果与对照组相比,汉黄芩素对LoVo细胞增殖抑制作用呈现时间和剂量依赖性(P<0.05);24、48和72 h的IC_(50)分别是198.7、65.1和38.6μmol·L^(-1)。不同浓度汉黄芩素作用48 h后,汉黄芩素组LoVo细胞凋亡率均明显高于对照组,且呈现出剂量依赖性(P<0.05);LoVo细胞G_0/G_1期比例增大(P<0.05),S期比例减少(P<0.05),G2/M期比例变化不明显(P>0.05);随着汉黄芩素浓度增加,Cyclin D1、Cyclin E、CDK2和CDK4蛋白相对表达量均逐渐下调(P<0.05),而p21和p27蛋白相对表达量则逐渐上调(P<0.05)。Spearman相关分析显示,LoVo细胞G_0/G_1期比例与p21和p27蛋白表达呈正相关,而与Cyclin D1、Cyclin E、CDK2和CDK4蛋白表达呈负相关。结论汉黄芩素通过G_1/S关卡调控因子蛋白表达来阻滞结肠癌LoVo细胞于G_0/G_1期,进而有效地抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,提示汉黄芩素在结肠癌的辅助治疗中有一定的应用前景。

血管性血友病因子A1分子在大肠杆菌中的可溶性表达及功能鉴定

背景:血管性血友病因子A1通过介导随流血小板在受损血管部位的黏附在初始止血中发挥至关重要的作用,但重组A1在原核中多为包涵体表达,不利于纯化及体外的功能研究。目的:在大肠杆菌中稳定高效表达可溶性野生型血管性血友病因子A1以及突变型血管性血友病因子G1324S,并研究其生物学功能。方法:将血管性血友病因子A1(野生型)、血管性血友病因子G1324S(功能失去型突变体)重组质粒分别转化到感受态细胞DH5α中,筛选提取质粒。将提取的质粒分别转化到大肠杆菌(E.coli)BL21、E.coli M15中,筛选挑单克隆菌于LB培养基,扩大培养。比较溶菌酶破碎法和超声波破碎法两种不同的裂菌方法,使目的蛋白血管性血友病因子A1的可溶性表达,经过Ni柱亲和层析纯化蛋白,用SDS-PAGE和Western-blot鉴定纯化的血管性血友病因子A1、血管性血友病因子G1324S纯度和免疫学活性;采用流动腔实验系统分析在不同流体剪应力条件下,血小板在两种目的蛋白上的黏附能力。结果与结论:每100 mL上清液可分别纯化得到5.77 mg血管性血友病因子A1,6.83 mg血管性血友病因子G1324S纯品,并具有较高的纯度和免疫学活性。流动腔结果显示,对每个剪切应力下铺设不同A1分子的底板进行两两比较,随着流体剪应力从0.1 Pa提高1 Pa,G1324S突变组所黏附细胞数下降的幅度(46.8%)要远高于野生型组(20.5%),说明突变后的A1分子的功能有所减弱。结果表明纯化的蛋白介导血小板黏附的能力与临床特征一致,野生型血管性血友病因子的结合活性明显高于突变型。

细胞周期调控因子的研究进展

细胞周期调控是细胞周期在不同时相的调控点受到调节因子的调控,其中有二个调控点最重要,Ｇ１/Ｓ期,Ｇ２/Ｍ期,已有二类细胞周期调控因子被发现,分别是细胞周期蛋白依赖性激酶ＣＤＫ(ｃｅｌｌ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｋｉｎａｓｅ)和细胞周期蛋白(ｃｙｃｌｉｎ),它们之间的相互作用调控细胞周期的进程。

g因子取负值的讨论

本文讨论了各种耦合情况下原子部分g因子为负值的条件,并说明由此可能产生的影响.

小干扰RNA抑制LRP16基因表达限制了MCF-7乳腺癌细胞增殖

雌激素雌二醇上调人乳腺癌细胞MCF 7中LRP16基因表达 ,该基因过表达促进MCF 7细胞增殖 .为进一步探讨LRP16基因不同表达水平对MCF 7细胞增殖的影响以及对雌激素的反应性增殖能力 ,采用针对LRP16基因特异的小干扰RNA策略 ,通过逆转录病毒介导及抗性筛选构建了LRP16基因被稳定抑制的 2个MCF 7细胞系 ,针对绿色荧光蛋白的干扰序列作为阴性对照 .Northern印迹实验检测了LRP16基因在各个细胞株中mNRA的水平 ,与对照组细胞比较 ,针对LRP16基因不同位置的 2个小干扰RNA可分别将该基因抑制 90 %和 6 0 % .细胞增殖试验结果显示 ,MCF 7细胞中LRP16基因表达抑制率越高 ,细胞增殖速率减慢越显著 (P <0 0 5 ) ;软琼脂集落形成试验结果显示 ,抑制LRP16基因在MCF 7细胞中表达 ,限制了细胞锚定非依赖性生长 ;细胞周期分析结果表明 ,LRP16基因抑表达使MCF 7细胞G1 S周期转换受抑 ;Western印迹结果表明 ,LRP16基因表达抑制的细胞中细胞周期蛋白E及细胞周期蛋白D1蛋白水平显著下调 ,但未检测到P5 3及Rb蛋白表达水平的影响 .雌二醇刺激的增殖实验结果显示 ,抑制LRP16基因表达没有消除MCF 7细胞的反应性增殖特征 .上述结果表明 ,LRP16基因表达量与MCF 7细胞增殖能力密切相关 ,抑制其表达可有效限制MCF 7细胞的增殖能力 ,提?

氟尿嘧啶对人结直肠癌CA-Ⅱ细胞G_1/S期进程和细胞周期调控的影响

目的探讨氟尿嘧啶(5-FU)对结直肠癌细胞G1/S期进程和周期调控的影响;并观察治疗结果是否有药物剂量依赖性。方法采用细胞周期同步化方法,观察结直肠癌化疗主要药物5-FU对人结直肠癌细胞CA-ⅡG1/S期进程的影响,并探讨不同的区域化疗药物浓度与肿瘤杀伤作用的量效关系;并通过RT-PCR方法检测癌细胞在该时期内P16/cyclinD1/CDK4/Rb调控途径转录水平的改变。结果5-FU能够明显延长CA-Ⅱ细胞G1/S期的进程,阻抑细胞周期进展,其阻抑程度对5-FU有剂量依赖性;5-FU同时还可引起癌细胞G1/S期P16基因的转录增强,cyclinD1基因的转录减弱。结论高浓度药物所产生的细胞周期G1/S期阻滞作用可能是5-FU杀伤结直肠癌细胞的机制之一。

G_1/S检测点调控与癌变多阶段的关系

G1 / S检测点 (checkpoint)调控是细胞周期调节通路中关键的限速步骤 ,该检测点调控异常与肿瘤多因素、多阶段和多步骤的发生密切相关。对细胞周期检测点的深入了解 ,有助于阐述在肿瘤癌变多阶段过程中细胞周期检测点调控失常与癌变的分子机制 ,并为药物的设计和基因治疗提供了合理的依据。

DNA损伤关卡及分子机制研究进展

DNA损伤会引发多种细胞反应,包括DNA修复、细胞周期延迟或阻滞、细胞凋亡等。其中细胞周期延迟或阻滞是通过DNA损伤关卡完成的。DNA损伤关卡主要包括3个组成部分,即感应因子(如ATM和ATR)、信号传导因子(如Chk1和Chk2)和效应因子(包括多种能激活CDKs的磷酸酯酶,如Cdc25A、Cdc25B和Cdc25C)。DNA损伤关卡主要包括G1/S、S和G2/M关卡。DNA损伤发生在G1期时,通过ATM-Chk2-Cdc25A或ATR-Chk1-Cdc25A途径启动G1/S阻滞,随后是由p53介导的G1/S期阻滞的维持过程。在S期发生的DNA损伤引发的S期关卡的激活主要通过两条途径即ATM(ATR)-Chk2(Chk1)-Cdc25A-Cdk2途径和ATM-NBS1/SMC1途径,阻滞DNA的复制。G2/M期关卡的作用是阻止在G2期DNA受损的细胞进行有丝分裂,根据损伤的形式不同,分别激活ATM-Chk2-Cdc25和ATR-Chk1-Cdc25两条通路,抑制Cdc2/CyclinB的活性,阻止细胞进入M期。

G_1期细胞周期调控因子与脑胶质瘤的研究进展

分子生物学的研究表明在细胞发生恶性转化的过程中Ｇ１期细胞周期调控因子起着关键性的作用。近年与胶质瘤相关的研究显示,Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１和Ｃｙｃｌｉｎ Ｅ等起正调节作用的因子在胶质瘤中存在过表达现象,而起负调节作用的Ｐ１５、Ｐ１６基因在胶质瘤中多表现为以纯合性缺失为主的变异,Ｐ２１、Ｐ２７基因虽无明显变异,却以量的方式在胶质瘤的发生中发挥作用。这些Ｇ期调控因子均被证明与胶质瘤的恶性程度和细胞增殖活性相关,既是鉴别良恶性和判断预后的指标,又是基因治疗的候选靶基因。