c-myc、Rb及细胞G_1期调控蛋白在乳腺癌中的表达

目的 探讨乳腺癌中c-myc、Rb蛋白及cyclin E、cyclin D1等细胞G1期调控蛋白的表达、相互关系及其意义。方法 应用免疫组化检测57例乳腺癌患者组织中4种蛋白的表达情况。结果 c-myc、cyclin E及cyclin D1在乳腺癌中表达的阳性率均高于乳腺纤维腺瘤(p<0.05);Rb在乳腺癌中的阳性率低于乳腺纤维腺瘤(p<0.05)。乳腺浸润性导管癌中cyclin E的表达与c-myc蛋白正相关。乳腺导管内癌中cyclin D1的表达与Rb蛋白正相关。结论 在乳腺浸润性导管癌发展的不同阶段,细胞周期异常的机制可能不同。cyclin D1在乳腺导管内癌中的过表达可能部分依赖于Rb蛋白的表达。c-myc引起的细胞周期调控异常在乳腺癌发病中为较晚期事件。细胞周期调控成分的异常与乳腺癌的发病机制关系密切。

cyclin D1反义寡核苷酸对胃癌细胞生长和G_1期调控的影响

目的 研究cyclinD1反义寡核苷酸 (ASODN )对胃癌细胞SGC790 1和HS746T的生长、细胞周期和G1期调控的影响。方法 采用脂质体LipofectAMINE 2 0 0 0包裹硫代修饰的cyclinD 1ASODN转染细胞 ,观察量效曲线和生长曲线 ,应用RT PCR检测cyclinD1mRNA的表达 ,流式细胞仪检测细胞周期 ,并用免疫组织化学技术检测胃癌细胞中cyclinD 1、p2 1、p2 7、pRb蛋白的表达。结果 cyclinD 1ASODN对胃癌细胞产生剂量依赖性的抑制效应 ,0 .2 μmol/LcyclinD 1ASODN转染 2 4h能显著抑制胃癌细胞生长 ,cyclinD 1mRNA表达分别是对照组的 2 6.3 % (SGC790 1)和 17.3 % (HS746T ) ,G0 /G1期比例明显增加 ,并使 2种细胞中cyclinD 1、pRb表达降低 ,p2 1表达升高 ,在HS746T中p2 7表达下降 ,但在SGC790 1中 p2 7表达无改变。 结论 cyclinD1反义寡核苷酸能有效抑制胃癌细胞的生长 ,降低cyclinD1mRNA表达水平 。

蛋白激酶Cα对人正常肝和肝癌细胞周期及G_1期相关调控因子cyclinD1、cyclinE的影响

目的 探讨蛋白激酶Cα(PKCα)对人正常肝和肝癌细胞周期的作用和对G1 期相关调控因子的影响。 方法 通过细胞转染技术将PKCαcDNA正向插入的真核表达质粒PXJ4 1 PKCα导入正常肝细胞 (L 0 2 ) ,并利用本室已构建的表达反义PKCα的BEL 74 0 2细胞 (HT6 )检测细胞的生长曲线 ,细胞周期以及细胞对G1 期相关调控因子cylinD1和cyclinE的影响。 结果 构建了稳定过表达PKCα的人正常肝细胞模型 (LT3) ,过表达PKCα可促进L 0 2细胞增殖 ,促进细胞由G1 期向S期的过渡 ;cyclinD1和cyclinE的蛋白水平上升 ,反之表达反义PKCα的BEL 74 0 2细胞 (HT6 )增殖被抑制 ,阻抑细胞由G1 期向S期的过渡 ,cyclinD1和cyclinE的蛋白水平下降。 结论 从正反两个方面表明 ,PKCα可通过作用于G1 期相关周期蛋白的水平影响G1 S期的进程。

小干扰RNA抑制LRP16基因表达限制了MCF-7乳腺癌细胞增殖

雌激素雌二醇上调人乳腺癌细胞MCF 7中LRP16基因表达 ,该基因过表达促进MCF 7细胞增殖 .为进一步探讨LRP16基因不同表达水平对MCF 7细胞增殖的影响以及对雌激素的反应性增殖能力 ,采用针对LRP16基因特异的小干扰RNA策略 ,通过逆转录病毒介导及抗性筛选构建了LRP16基因被稳定抑制的 2个MCF 7细胞系 ,针对绿色荧光蛋白的干扰序列作为阴性对照 .Northern印迹实验检测了LRP16基因在各个细胞株中mNRA的水平 ,与对照组细胞比较 ,针对LRP16基因不同位置的 2个小干扰RNA可分别将该基因抑制 90 %和 6 0 % .细胞增殖试验结果显示 ,MCF 7细胞中LRP16基因表达抑制率越高 ,细胞增殖速率减慢越显著 (P <0 0 5 ) ;软琼脂集落形成试验结果显示 ,抑制LRP16基因在MCF 7细胞中表达 ,限制了细胞锚定非依赖性生长 ;细胞周期分析结果表明 ,LRP16基因抑表达使MCF 7细胞G1 S周期转换受抑 ;Western印迹结果表明 ,LRP16基因表达抑制的细胞中细胞周期蛋白E及细胞周期蛋白D1蛋白水平显著下调 ,但未检测到P5 3及Rb蛋白表达水平的影响 .雌二醇刺激的增殖实验结果显示 ,抑制LRP16基因表达没有消除MCF 7细胞的反应性增殖特征 .上述结果表明 ,LRP16基因表达量与MCF 7细胞增殖能力密切相关 ,抑制其表达可有效限制MCF 7细胞的增殖能力 ,提?