赤羽病病毒G1蛋白生物信息学分析及截短基因的真核表达

为得到赤羽病病毒(AKV)G1蛋白的截短表达产物作为诊断抗原,通过PCR扩增、酶切、连接、转化等技术手段,成功克隆出优势抗原结合表位区Thr189-Val 397对应的目的基因G1-2。将目的基因克隆至昆虫杆状病毒表达载体pFastBac HTB,将该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒Bacmid-AKV-G1-2,用Cellfectin ReagentⅡ介导转染sf9细胞,获得重组蛋白,Western blot法检测和分析重组蛋白表达情况。软件分析结果表明189~397 aa肽段为亲水性蛋白,存在跨膜区,该蛋白存在多个潜在的磷酸化位点,具有丰富的潜在抗原表位,属于优势抗原肽段,选取该肽段进行截短真核表达,以AKV抗体阳性血清进行Western blot鉴定,重组蛋白能被特异性识别,出现预期蛋白反应条带,表明G1-2蛋白成功表达,分子量约为27 kDa。本研究为进一步开展截短表达产物为抗原的赤羽病病毒诊断试剂研制奠定了基础。

丹参对大鼠持续局灶性脑缺血后神经元cyclin G1蛋白表达的影响

目的:观察大鼠局灶性脑缺血后神经元内细胞周期蛋白G1(cyclin G1)的蛋白表达与神经细胞凋亡的关系以及丹参对其的影响。方法:采用线栓法大鼠大脑中动脉持续栓塞模型,应用免疫组化和TUNEL染色方法观察缺血组、丹参组和对照组神经元阳性细胞染色数量和分布情况。结果:缺血组cyclin G1蛋白自缺血后1h开始表达增加,缺血后3h达高峰,72h恢复至对照组水平;凋亡细胞自缺血后12h开始表达,缺血后72h达高峰。丹参组仅在缺血12h时间点cyclin G1蛋白表达较缺血组明显增加(P<0.01);凋亡细胞在缺血后12,24和48h均减少(P<0.05),缺血后72h明显减少(P<0.01)。相邻切片可见cyclin G1蛋白表达和凋亡细胞染色区域基本相同。结论:cyclin G1蛋白在缺血后神经元内表达增加与缺血性神经细胞的凋亡无关,而可能与缺血神经细胞的自我保护适应性和损伤修复有关;丹参可能通过增加cyclin G1的表达,增加神经细胞的缺血损伤适应性,从另一方面发挥其神经细胞的保护作用。

黏附性G蛋白偶联受体F1在胰腺导管腺癌中的表达及其促进癌症进展的机制研究

目的·分析黏附性G蛋白偶联受体F1(adhesion G protein-coupled receptor F1,ADGRF1)在胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)发生及发展过程中的表达变化,探究ADGRF1对PDAC细胞增殖的影响以及促进PDAC进展的潜在分子机制。方法·基于癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库和基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库分析ADGRF1在正常胰腺组织及PDAC组织中的mRNA水平表达。利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)检测ADGRF1在正常胰腺导管上皮细胞hTERT-HPNE及多种PDAC细胞中的表达情况。利用免疫组织化学染色(immunohistochemistry staining,IHC)检测PDAC患者的癌组织及癌旁组织中ADGRF1的表达差异。转染小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)敲低ADGRF1后,通过CCK8和平板克隆形成实验检测PDAC细胞AsPC-1、SW1990增殖能力的变化。构建稳定过表达ADGRF1的Patu8988细胞,通过CCK8实验检测过表达ADGRF1引起的PDAC细胞增殖变化。利用RNA测序(RNA-sequence,RNA-seq)、基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)和免疫浸润分析预测与ADGRF1促进PDAC癌症进展相关的信号通路。结果·TCGA数据库和GEO数据库的分析结果显示ADGRF1 mRNA在PDAC组织中的表达高于正常胰腺组织(均P=0.000)。qPCR和Western blotting结果显示,与hTERT-HPNE细胞相比,多种PDAC细胞中ADGRF1的mRNA和蛋白水平均有所上调(均P<0.05)。IHC结果显示ADGRF1在PDAC患者癌组织中的表达也高于癌旁组织。此外,下调ADGRF1能够抑制PDAC细胞AsPC-1、SW1990的增殖能力;而过表达ADGRF1则促进Patu8988细胞的增殖能力(均P<0.05)。RNAseq、GSEA富集分析和免疫浸润的结果显示,ADGRF1的表达与干扰素α(interferon-α,IFN-α)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)等信号通路有关。结论·ADGRF1在PDAC细胞和组织中高表达,促进PDAC细胞的增殖,其机制可能与多个免疫相关信号通路有关。

ADGRV1多态性与子宫颈癌关联性研究

目的探讨粘附G蛋白偶联受体V1(ADGRV1)基因多态性与子宫颈癌易感性之间是否存在关联性。方法采取病例对照(1∶1)匹配研究法,分析ADGRV1基因多态性与子宫颈癌易感性是否有关,同时对子宫颈癌患者ADGRV1基因的rs59661306位点基因分布在不同病理特征间作对比。结果ADGRV1基因的rs59661306位点携带GA及GG基因型的个体比携带AA基因型的个体患子宫颈癌的风险显著增大,相应的OR(95%CI)为4.20(1.64~10.72)和3.22(1.23~8.38)。ADGRV1基因的rs59661306位点基因分布在高危人乳头瘤病毒(HPV)感染、肿瘤家族史者、鳞状细胞癌抗原(SCC)不同值中的差异有统计学意义(P<0.05),在淋巴结转移、病理类型、临床分期等临床病理特征中差异无统计学意义。在ADGRV1基因的rs59661306位点携带GA及GG基因型比携带AA基因型的个体更易伴高危HPV感染,相应的OR(95%CI)为13.70(2.32~80.80)和17.53(2.76~111.30)。携带AA基因型的子宫颈癌个体不易伴有家族性肿瘤史。结论ADGRV1基因的rs59661306位点基因多态性与子宫颈癌发病风险有一定相关性,在部分高危环境因素中促使子宫颈癌发生。

血清可溶性神经调节蛋白-1、G蛋白偶联雌激素受体-1在急性胰腺炎患者病情及预后评估中临床价值研究

目的探讨血清可溶性神经调节蛋白-1(sNRG-1)、G蛋白偶联雌激素受体-1(GPER-1)在急性胰腺炎(AP)患者病情及预后评估中的临床价值。方法选取自2019年6月至2022年6月邯郸市第一医院收治的106例AP患者为研究对象,根据AP病情严重程度分为轻症组(n=49)、中重症组(n=36)及重症组(n=21);根据预后生存情况分为存活组(n=83)与死亡组(n=23)。采用酶联免疫吸附法检测血清sNRG-1、GPER-1水平。采用受试者工作特性(ROC)曲线评估血清sNRG-1、GPER-1及两者联合检测对AP患者预后的评估价值。采用多因素Logistic回归分析探讨AP患者预后影响因素。结果中重症组、重症组患者血清sNRG-1水平低于轻症组,且重症组低于中重症组;中重症组、重症组患者血清GPER-1水平高于轻症组,且重症组高于中重症组,差异均有统计学意义(P<0.05)。存活组与死亡组病情严重程度、入院急性生理与慢性健康评分(APACHEⅡ)、白细胞计数、C反应蛋白、血肌酐、乳酸脱氢酶、血淀粉酶、血脂肪酶、sNRG-1、GPER-1比较,差异有统计学意义(P<0.05)。APACHEⅡ评分≥12分、sNRG-1≤17.74 pg/ml、GPER-1≥4.82 pg/ml是影响AP患者预后的独立危险因素(P<0.05)。血清sNRG-1、GPER-1预测AP患者预后的ROC曲线下面积分别为0.846、0.753。两者联合预测AP患者预后的ROC曲线下面积为0.917,特异度为86.75%,灵敏度为86.96%。结论血清sNRG-1低表达、GPER-1高表达与AP患者的病情严重程度及预后有关,有望作为评估AP患者预后的生物学指标。

宫颈癌组织IGHG1、TRIM14表达及其临床意义

目的探究宫颈癌组织免疫球蛋白G1重链恒定区(IGHG1)、三结构域蛋白14(TRIM14)的表达及其临床意义。方法收集2019年3月至2020年3月于保定市妇幼保健院收治的82例宫颈癌患者作为研究对象,术中取其肿瘤组织及癌旁组织,并根据3年随访情况分为预后良好组与预后不良组。采用免疫组化法检测宫颈癌肿瘤组织与癌旁组织中IGHG1和TRIM14的蛋白表达水平。采用多因素Logistic回归分析影响宫颈癌患者预后的因素,受试者特征工作(ROC)曲线用于分析宫颈癌患者肿瘤组织中IGHG1和TRIM14蛋白表达水平对预后的预测价值。结果与癌旁组织相比,宫颈癌肿瘤组织中IGHG1和TRIM14蛋白表达水平显著升高(t值分别为34.193、38.697,P<0.05)。IGHG1和TRIM14蛋白表达水平与患者TNM分期、肿瘤分化程度、淋巴结转移有关(t值介于2.092~20.208之间,P<0.05)。与预后良好组相比,预后不良组宫颈癌患者的肿瘤组织中IGHG1和TRIM14蛋白表达水平显著升高(t值分别为8.708、7.534,P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,IGHG1、TRIM14蛋白表达是宫颈癌患者发生不良预后的危险因素,其OR值及95%CI分别为3.547(2.364~5.322)、7.218(2.027~25.704)。ROC分析显示IGHG1、TRIM14联合预测宫颈癌患者预后的曲线下面积为0.957,灵敏度和特异度分别为78.00%和98.25%。结论宫颈癌患者肿瘤组织中IGHG1和TRIM14蛋白水平高表达,与预后有关,可能是宫颈癌预后评估的生物标志物。

冠心病患者ABCG1、ANGPTL2启动子区甲基化与心力衰竭发生的关系研究

目的分析冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G1(ABCG1)、血管生成素样蛋白2(ANGPTL2)启动子区甲基化与心力衰竭(心衰)发生的关系。方法选取2020年3月至2022年3月于湖南省第二人民医院收治的冠心病患者120例。根据是否发生心衰,将患者分为合并心衰组(n=26)和不合并心衰组(n=94)。采用全自动生化仪检测血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)。采用心脏超声检查患者左室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)水平。特异性PCR检测ABCG1和ANGPTL2基因甲基化。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测ABCG1和ANGPTL2基因mRNA表达水平。Logistic回归分析探讨影响冠心病患者发生心衰的因素。结果两组患者LDL-C、LVEF、LVEDD、LVESD、ABCG1、ANGPTL2基因启动子区甲基化等方面比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。LVESD、LVEF、ABCG1甲基化和ANGPTL2甲基化是冠心病患者发生心衰的危险因素。ABCG1甲基化、ANGPLT2甲基化患者中LVESD水平均高于未甲基化患者(P<0.05)。ABCG1甲基化、ANGPLT2甲基化患者中LVEF水平均低于未甲基化患者(P<0.05)。合并组ABCG1、ANGPTL2基因甲基化的患者mRNA的表达量明显低于非甲基化患者(P<0.05)。结论ABCG1和ANGPTL2基因甲基化是冠心病患者发生心衰的危险因素,检测上述两基因甲基化状态可为诊治冠心病心衰提供理论支持。

血清sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1在非小细胞肺癌患者中的表达及相关性分析

目的探讨血清可溶性MHC-I类链相关蛋白A(sMICA)、增殖细胞核抗原(PCNA)、G蛋白偶联受体相关分选蛋白1(GASP-1)、组织金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的表达及与病理分型的相关性。方法2020年7月至2022年8月诊治的86例NSCLC患者作为研究对象,并设立为观察组,同期选取43例健康体检者设立为对照组;并根据不同病理分型将观察组分为腺癌组(n=33)和鳞癌组(n=53),对比血清sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1;并采用Logistic回归模型分析sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1对非小细胞肺癌的影响;采用ROC曲线模型分析sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1诊断非小细胞肺癌的AUC、敏感度及特异度。结果观察组的sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1均高于对照组(P<0.05)。腺癌组的sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1均高于鳞癌组(P<0.05)。二元Logistic回归模型分析显示,sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1高表达会对非小细胞肺癌的发生产生影响(P<0.05)。ROC曲线分析显示,sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1及四项联合诊断NSCLC的AUC值分别为(0.750、0.654、0.819、0.788、0.843,P均<0.05),敏感度分别为57.00%、46.50%、67.40%、90.70%、79.10%;特异度分别为93.00%、93.00%、88.40%、58.10%、86.00%。结论sMICA、PCNA、GASP-1、TIMP-1在NSCLC患者中呈高表达趋势,其表达水平会随病理分型而升高。

Takeda G蛋白偶联受体5在血管平滑肌细胞增殖和迁移中的作用

目的探讨Takeda G蛋白偶联受体5(Takeda G protein-coupled receptor 5,TGR5)在小鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖和迁移中的作用及机制。方法用血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF-BB)诱导VSMCs增殖、迁移,以INT-777特异性激活TGR5,CCK-8试剂盒及增殖细胞核抗原(Ki-67)免疫荧光染色用于检测细胞增殖能力,划痕试验用于检测细胞迁移能力。Western blot检测TGR5蛋白水平变化。为探究TGR5在血管内膜增生中的作用,将40只雄性野生型C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、内膜损伤组、假手术+UDCA(熊去氧胆酸,TGR5激动剂)组及内膜损伤+UDCA组,每组10只。造模完成后按组分别予以口服普通维持饲料及含0.5%UDCA的普通维持饲料,持续21 d后分别取材,HE染色观察颈动脉内膜增生程度,Ki-67免疫荧光染色观察颈动脉内膜血管平滑肌增殖变化。结果特异性激活TGR5明显降低VSMCs增殖活力及Ki-67阳性细胞率,同时使VSMCs划痕愈合速度减慢。特异性激活TGR5使细胞内UCP2表达增加、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平降低。过氧化氢恢复细胞内ROS水平后,TGR5抑制VSMCs增殖迁移的作用被削弱。激活TGR5能减轻颈动脉损伤后内膜增生。结论TGR5可能通过UCP2改善细胞内氧化应激,从而抑制小鼠VSMCs的增殖和迁移。

敲减G蛋白偶联受体1抑制人肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨G蛋白偶联受体1(GPR1)对人肝癌(HCC)细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测人类HCC细胞系(Huh7、QGY-7703、HCCLM3、Hep3B、HepG2)、人肝永生化细胞系(THLE2)中GPR1 mRNA的表达,蛋白质印迹(western blotting)验证敲减GPR1后蛋白的表达;采用靶向shRNA敲减HCC Huh7和QGY-7703细胞系中的GPR1,细胞增殖实验(CCK-8)分析敲减GPR1后HCC细胞的增殖能力,细胞划痕实验分析敲减GPR1后HCC细胞的迁移能力,细胞侵袭实验(Transwell)分析敲减GPR1后HCC细胞的侵袭能力。结果:GPR1在HCC Huh7细胞和QGY-7703细胞中呈高表达(P<0.01),敲减GPR1后,与shNC组相比,sh GPR1组HCC细胞的增殖、迁移及侵袭能力均减弱(P<0.01)。结论:GPR1是促癌因子,敲减GPR1可能抑制人HCC细胞的增殖、迁移及侵袭。

肺癌患者GASP-1、LCN2和TPX2的表达水平及其与TNM分期和预后的相关性分析

目的探究肺癌患者血清G蛋白偶联受体相关分选蛋白1(GASP-1)、脂质运载蛋白-2(LCN2)、Xklp2靶蛋白(TPX2)表达水平及其与TNM分期和预后的相关性。方法选取2019年4月至2022年5月在南部战区总医院接受诊疗的92例肺癌患者作为观察组,同期选取92例健康体检者作为对照组。采集所有研究对象的外周静脉血样,检测血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平。将观察组按预后情况分为预后良好组和预后不佳组,比较2组患者血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平。分析肺癌患者血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平与TNM分期和预后的相关性。结果观察组血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平高于对照组(P<0.05);观察组TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期的肺癌患者血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平高于TNM分期为Ⅰ、Ⅱ期的肺癌患者(P<0.05),TNM分期为Ⅳ期的患者血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平均高于TNM分期为Ⅲ期的患者(P<0.05)。预后良好组血清GASP-1、LCN2、TPX2水平均低于预后不佳组(P<0.05);观察组治疗前血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平均与TNM分期呈正相关(P<0.05),治疗后血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平均与预后呈负相关(P<0.05)。结论血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平与肺癌患者的TNM分期相关,在对症治疗后检测上述血清指标,可在一定程度上反映患者预后情况,为临床提供参考。

G蛋白偶联雌激素受体1在骨代谢中作用的研究进展

G蛋白偶联雌激素受体1(G protein-coupled estrogen receptor 1,GPER1)是一种雌激素的膜受体,其通过快速的细胞多效应作用引发下游反应,对成骨细胞的增殖分化产生影响。因此,GPER1在雌激素介导的骨代谢中有着重要作用。本文对GPER1在骨代谢中的作用作了简要总结,包括GPER1在青春期参与骨生长的过程,在机体不同雌激素水平下的骨代谢中体现出的不同功能,以及其与其他受体共同作用参与了骨代谢。

RGS1在不同反应性卵巢颗粒细胞中的表达及影响

目的探究G蛋白信号转导调控因子1(regulator of G-protein signalling1,RGS1)在不同反应性卵巢颗粒细胞中的表达及影响。方法非随机选取2022年3—12月于海南省妇女儿童医学中心生殖医学中心接受体外受精-胚胎移植治疗的90例不孕症患者的卵巢颗粒细胞进行体外培养并研究。根据卵巢对外源性促性腺激素的刺激性做出的卵巢不同反应性分为卵巢低反应组(n=30)、高反应组(n=30)、正常反应组(n=30)。比较3组RGS1的表达水平,分析RGS1的表达水平与卵巢反应性的关系。结果高反应组RGS1表达水平高于正常反应组与低反应组,差异有统计学意义(P<0.05)。RGS1表达水平越高,卵巢反应性越高,二者呈正相关(r=0.49,P<0.001)。结论RGS1在不同反应性卵巢颗粒细胞中表达水平存在差异。

G蛋白偶联胆汁酸受体1调控机体炎症信号通路的研究进展

G蛋白偶联胆汁酸受体1(GPBAR1)与胆汁酸(BAs)及其衍生物结合后,激活下游通路传导,调控动物的多种代谢过程。GPBAR1通过核转录因子κB(NF-κB)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体信号转导通路,调节动物体炎症反应。因此,本文重点阐述GPBAR1对动物炎症通路的调控进展,为BAs及其衍生物成为治疗炎症性疾病的潜在药物提供参考。

GPRIN1在神经调节及恶性肿瘤中的研究进展

G蛋白调节神经突起生长诱导物1(GPRIN1)是一种分布于细胞膜、突触和细胞内囊泡的膜结合蛋白,其在神经元突触发生和调节、细胞凋亡与骨架重塑、恶性肿瘤的增殖、迁移、侵袭及预后等方面有重要作用。GPRIN1调控肿瘤细胞免疫微环境、影响肿瘤耐药等作用已经成为新型抗肿瘤治疗靶点的研究热点。本文将近年来GPRIN1在神经元突触发生和调节中的作用及GPRIN1调节恶性肿瘤发生发展方面的相关研究作一综述。

Gαi1/3蛋白介导Akt-GSK3β-NFATc1信号通路调控破骨细胞分化机制研究

目的观察G蛋白抑制性α亚单位1/3(Gαi1/3蛋白)对骨髓源性巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMMs)向破骨细胞分化的调控作用及其作用机制。方法采用慢病毒敲减及基因敲除策略,获取scr-shRNA、Gαi1/3-shRNA及Gαi1/3双敲除(Gαi1/3-double knock out,Gαi1/3-DKO)三种BMMs,加入巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,MCSF)、核因子κB受体活化因子配体(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL),MCSF+RANKL处理30 min,采用Western Blot对Akt-GSK3β-NFATc1信号通路中蛋白表达进行检测。MCSF和RANKL联合诱导scr-shRNA、Gαi1/3-shRNA BMMs 4 d染色后观察破骨细胞细胞核数目、破骨细胞大小及数量。予小鼠骨质疏松模型右侧股骨干骺端微量注射慢病毒scr-shRNA及Gαi1/3-shRNA,观察敲减Gαi1/3对于小鼠骨质丢失的逆转作用。结果敲减、敲除Gαi1/3对MCSF及MCSF+RANKL诱导Akt-GSK3β-NFATc1通路中关键蛋白(p-Akt473、p-GSK3β、NFATc1)的活化产生抑制作用。同时,敲减Gαi1/3抑制破骨细胞的分化以及抑制骨质疏松模型中小鼠骨质丢失。结论Gαi1/3蛋白通过介导Akt-GSK3β-NFATc1通路调控破骨细胞分化,可为临床治疗骨质疏松提供新的思路和治疗靶点。

舒洛地特对糖尿病足溃疡大鼠HIF-1α/GPER/VEGF通路及创面愈合的影响

目的探讨舒洛地特对糖尿病足溃疡(DFU)大鼠低氧诱导因子(HIF)-1α/G蛋白耦联雌激素受体(GPER)/血管内皮生长因子(VEGF)通路及创面愈合的影响。方法构建DFU模型大鼠,分为模型组和舒洛地特低、中、高剂量组(分别腹腔注射5、10、20 mg/kg舒洛地特),每组8只,另取8只大鼠设为对照组,连续给药14 d。给药0、3、7、14 d,检测大鼠血糖水平;给药7、14 d,计算创面愈合率;给药结束后,酶联免疫吸附试验(ELISA)印迹检测血清中白细胞介素(IL)-6、IL-8和肿瘤坏死因子(TNF)-α表达,苏木素-伊红(HE)染色观察创面组织病理变化,Western印迹检测创面组织HIF-1α、GPER、VEGF蛋白表达。结果与对照组相比,模型组和舒洛地特低、中、高剂量组血清IL-6、IL-8、TNF-α水平和给药0、3、7、14 d血糖水平均显著升高(P<0.05),创面组织中HIF-1α、GPER、VEGF蛋白水平和给药7、14 d创面愈合率均显著降低(P<0.05),创面组织中存在大量炎症细胞及少量新生毛细血管;与模型组相比,舒洛地特低、中、高剂量组血清IL-6、IL-8、TNF-α水平和给药3、7、14 d血糖水平均显著降低(P<0.05),创面组织中HIF-1α、GPER、VEGF蛋白水平和给药7、14 d的创面愈合率均显著升高(P<0.05),创面组织中存在少量炎症细胞及大量新生毛细血管;随着舒洛地特剂量的升高,血清IL-6、IL-8、TNF-α水平和给药3、7、14 d血糖水平逐渐降低,差异有统计学意义(P<0.05),创面组织中HIF-1α、GPER、VEGF蛋白水平和给药7、14 d大鼠创面愈合率均逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05),创面组织炎症细胞浸润程度逐渐减轻,新生毛细血管数量逐渐增多。结论舒洛地特可降低DFU大鼠血糖及炎症水平,激活HIF-1α/GPER/VEGF通路,促进新生毛细血管生成,改善创面愈合情况。

c-myc、Rb及细胞G_1期调控蛋白在乳腺癌中的表达

目的 探讨乳腺癌中c-myc、Rb蛋白及cyclin E、cyclin D1等细胞G1期调控蛋白的表达、相互关系及其意义。方法 应用免疫组化检测57例乳腺癌患者组织中4种蛋白的表达情况。结果 c-myc、cyclin E及cyclin D1在乳腺癌中表达的阳性率均高于乳腺纤维腺瘤(p<0.05);Rb在乳腺癌中的阳性率低于乳腺纤维腺瘤(p<0.05)。乳腺浸润性导管癌中cyclin E的表达与c-myc蛋白正相关。乳腺导管内癌中cyclin D1的表达与Rb蛋白正相关。结论 在乳腺浸润性导管癌发展的不同阶段,细胞周期异常的机制可能不同。cyclin D1在乳腺导管内癌中的过表达可能部分依赖于Rb蛋白的表达。c-myc引起的细胞周期调控异常在乳腺癌发病中为较晚期事件。细胞周期调控成分的异常与乳腺癌的发病机制关系密切。

His-tag不影响RSV重组蛋白G1F/M2的免疫原性

目的:观察His-tag是否影响RSV重组蛋白G1F/M2的免疫原性。方法:PCR扩增G1和F/M2基因片段,插入表达载体pET-His和pET-DsbA-His中,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,采用Ni+螯合亲和层析法纯化得His-G1F/M2和DsbA-His-G1F/M2,将后者用凝血酶消化,再经Ni+螯合亲和层析法纯化得G1F/M2,将His-G1F/M2和G1F/M2免疫BALB/c小鼠,用ELISA测定抗体滴度,MTT法测定细胞毒性T细胞活性(CTL)。结果:两种蛋白在BALB/c小鼠中诱导的RSV特异性抗体和CTL活性无显著差异。结论:His-tag不影响RSV重组蛋白G1F/M2的免疫原性。

周期蛋白G1反义硫代脱氧寡核苷酸对白血病细胞增殖的调控

为了探讨脂质体转染细胞周期蛋白 (cyclin)G1反义脱氧寡核苷酸 (ASON)对HL 6 0细胞增殖调控的作用 ,用针对cyclinG1mRNA 5′端编码区起始密码子 (ATG/AUG)的ASON ,通过脂质体导入HL 6 0细胞共培养后 ,用免疫组织化学法和RT PCR分别检测cyclinG1和mRNA水平的表达 ,用电镜、细胞原位凋亡检测法 (POD)、流式细胞术(FCM)及DNA凝胶电泳等方法检测细胞凋亡。结果表明 :cyclinG1ASON组与SON及空白对照组相比 ,ASON能特异地抑制cyclinG1及mRNA水平的表达 ,当ASON的浓度达到一定程度时 ,HL 6 0细胞的增殖及集落形成率均明显受抑制 ,出现细胞凋亡 ,并且此作用随ASON浓度的升高而增强。结论 :cyclinG1的特异反义脱氧寡核苷酸能封闭其蛋白及mRNA水平的表达 ,对白血病细胞的增殖有抑制作用 ,并可促使细胞凋亡 ,且有浓度依赖性。