蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60细胞凋亡前G_2/M期阻滞及机制

背景和目的:蛋白酶体(proteasome)抑制剂能够诱导多种肿瘤细胞凋亡,是一种潜在的有应用前景的抗肿瘤剂。本研究旨在探讨蛋白酶体抑制剂MG132(Z-Leu-Leu-Leu-CHO)诱导白血病细胞HL-60凋亡和G2/M期阻滞的机制。方法:采用荧光显微镜观察、流式细胞术和免疫印迹研究测定MG132诱导HL-60细胞凋亡和周期阻滞及机制。结果:2μmol/L的MG132能够有效地诱导HL-60细胞凋亡,用药后24h就显现有细胞凋亡;在MG132诱导HL-60细胞凋亡出现之前有一个明显的G2/M期阻滞,加MG132后12h时G2/M期时相百分比为63.42±2.02;24h时加MG132组细胞凋亡为16.67±1.48,与对照组G2/M期时相百分比为7.29±3.01及细胞凋亡为0相比,两者之间有显著性差别(P<0.01);咖啡因CAF能够减少MG132诱导HL-60细胞出现的G2/M期阻滞,同时也减少凋亡细胞的比例;细胞周期检查点的负调控因子p21waf/cip1蛋白在加MG132处理后3h有明显的表达,但并未能检测到p53和p27蛋白。结论:MG132诱导HL-60细胞凋亡之前有一个明显的G2/M期阻滞,p21蛋白表达明显上调提示:是p21waf/cip1而不是p53或其同源蛋白参与了其中的调控。

Gadd45介导抑癌基因BRCA1诱导的G_2/M期阻滞

背景与目的:目前已经肯定,抑癌基因BRCA1是细胞周期监测点调控的重要因子,但BRCA1在细胞周期阻滞中的作用机制尚不完全清楚。本研究的目的是探讨Gadd45在BRCA1诱导的细胞周期阻滞中所起的作用。方法:应用转染、流式细胞仪细胞筛选(分选)、Westernblot检测分析BRCA1诱导Gadd45的表达;利用CAT酶活性测定的方法检测外源BRCA1对Gadd45启动子所起作用;以流式细胞周期分析方法检测反义Gadd45转染对BRCA1诱导的细胞G2/M期阻滞的影响;采用细胞生长集落形成分析反义Gadd45转染HeLa、HCT116细胞在BRCA1诱导的细胞生长抑制过程所起的作用。结果:外源转染BRCA1可诱导Gadd45蛋白的表达;BRCA1激活Gadd45启动子的转录;反义Gadd45可显著阻遏BRCA1诱导细胞G2/M期阻滞;反义Gadd45转染可明显降低BRCA1对HeLa、HCT116细胞集落形成的抑制作用。结论:Gadd45作为BRCA1的下游调控基因,在BRCA1诱导的细胞G2/M期阻滞过程和生长抑制中起介导作用。

二烯丙基二硫化物诱导G2/M期阻滞对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨二烯丙基二硫化物(DADS)诱导G2/M期阻滞对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能的分子机制。方法将不同浓度的DADS分别处理卵巢癌SK-OV-3和OVCAR-3细胞,采用MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,裸鼠移植模型观察体内抑瘤效果。进而应用流式细胞术检测细胞周期分布的变化,Western blot检测细胞中G2/M检验点相关信号通路、增殖和凋亡相关蛋白的表达。结果 MTT法检测显示,不同浓度的DADS作用SK-OV-3 (F=247. 86,P=0. 000)和OVCAR-3细胞(F=302. 54,P=0. 000)后,随着DADS浓度增高,细胞增殖抑制率明显升高,呈浓度依赖性。DADS处理24 h时SK-OV-3 (F=335. 12,P=0. 000)和OVCAR-3细胞(F=347. 43,P=0. 000)的增殖抑制率明显高于处理12 h和48 h时的细胞抑制率,呈明显的时间依赖性。流式细胞术检测结果显示,不同浓度的DADS作用SK-OV-3、OVCAR-3细胞后,随着DADS浓度的增高,细胞凋亡率明显升高,呈明显的浓度依赖性(P <0. 05)。DADS处理24 h时SK-OV-3和OVCAR-3细胞的凋亡率明显高于处理12和48 h时,呈明显的时间依赖性(P <0. 05)。与空白处理组相比,腹腔注射DADS溶液可明显抑制卵巢癌细胞的裸鼠移植瘤体积(F=548. 23,P=0. 000; F=311. 84,P=0. 000)。将30 mg/L的DADS作用于SK-OV-3和OVCAR-3细胞24 h后,与空白处理细胞相比,DADS处理后的SK-OV-3和OVCAR-3细胞中处于G2期的细胞百分率明显增加(F=375. 11,P=0. 000; F=256. 48,P=0. 000)。将30 mg/L DADS分别作用于SK-OV-3和OVCAR-3细胞24 h后,p-Chk1 (ser345)(F=108. 89,P=0. 013; F=97. 58,P=0. 018)、p-CDC25C (ser216)(F=87. 25,P=0. 025; F=114. 25,P=0. 009)、p-P53 (ser15)(F=112. 41,P=0. 011; F=255. 87,P=0. 000)、P21WAF1 (F=246. 38,P=0. 001; F=141. 36,P=0. 005)和p-CDK1 (Thr14/Tyr15)蛋白(F=298. 12,P=0. 000; F=233. 15,P=0. 000)的表达明显增加,CDK1 (F=308. 24,P=0. 000; F=257. 55,P=0. 000)和Cyclin B1蛋白(F=223. 15,P=0. 001; F=241. 28,P=0. 000)的表达明显减少,增殖和凋亡相关蛋白PCNA (F=77. 36,P=0. 031; F=157. 28,P=0. 001)、Ki-67 (F=205. 64,P=0. 007; F=315. 22,P=0. 000)和Survivin蛋白(F=122. 13,P=0. 013; F=188. 24,P=0. 000)表达明显减少,Cleaved-caspase3蛋白表达明显增加(F=86. 46,P=0. 023; F=99. 11,P=0. 009)。结论 DADS可抑制卵巢癌细胞增殖,诱导其凋亡;其分子机制可能与G2/M检验点Chk1-CDC25C和P53-P21WAF1通路激活、CDK1活性降低、CDK1和CyclinB1蛋白表达减少,最终导致卵巢癌细胞G2/M期阻滞有关。

氯化两面针碱体外诱导人口腔鳞癌KB细胞G_2/M期阻滞及凋亡的研究

目的探讨氯化两面针碱对人口腔鳞癌KB细胞周期和凋亡的影响及相互关系。方法应用MTT比色法测定氯化两面针碱对细胞增殖的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测氯化两面针碱对细胞周期的影响;Hoechst33258检测细胞凋亡;透射电镜观察细胞超微结构。结果氯化两面针碱在体外呈浓度依赖性显著抑制KB细胞的生长,48hIC_(50)为(2.36±0.22)μg/ml;与空白组相比,经3μg/ml氯化两面针碱作用,G_2/M期细胞比例显著增多;6μg/ml时凋亡细胞比例最高,可见典型的核染色质凝集、碎裂;9μg/ml时,细胞凋亡率明显下降,同时镜下可见大量坏死细胞。结论氯化两面针碱抗KB细胞的方式与其剂量密切相关,低浓度时以G_2/M期阻滞为主,中浓度时诱导凋亡,高浓度时则致其坏死。

DADS通过Chk1/Cdc25C/CyclinB1/CDK1通路诱导白血病HL-60细胞G2/M期阻滞

目的研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)诱导人白血病HL-60细胞周期阻滞及其分子机制。方法采用细胞计数、软琼脂克隆形成实验及流式细胞术观察DADS对HL-60细胞生长抑制与周期阻滞效应。Western blot检测DADS对HL-60细胞Chk1/2以及下游分子的影响。结果细胞计数显示,60、120μmol·L-1DADS处理后,其群体倍增时间从19.14 h增加到35.03、71.82 h(P<0.05)。软琼脂克隆形成实验表明,30、60、90、120μmol·L-1DADS对HL-60细胞克隆形成率的抑制率分别为35.06%、62.10%、93.79%、99.35%(P<0.05)。流式细胞术检测显示,60和120μmol·L-1DADS分别作用HL-60细胞24 h后,DADS可呈时间与浓度依赖性诱导HL-60细胞G2/M期阻滞(P<0.05)。60μmol·L-1DADS处理HL-60细胞后,p-Chk1可呈时间依赖性上调(P<0.05),而Chk1与Chk2总蛋白和pChk2无改变(P>0.05)。并且,Cdc25C、CyclinB 1和CDK1分别呈时间依赖性下调(P<0.05),但14-3-3蛋白表达没有改变(P>0.05)。结论 DADS能够抑制HL-60细胞增殖,并通过Chk1/Cdc25C/CyclinB 1/CDK1通路阻滞HL-60细胞于G2/M期。

金雀异黄素抑制人胃癌细胞增殖与G_2/M期阻滞作用的体外研究

目的 : 研究金雀异黄素 (genistein,Gen)对人胃癌 SGC-790 1细胞增殖抑制作用及对细胞周期的影响。方法 : 采用3H-Td R掺入液闪计数法观察 Gen对人胃癌细胞增殖影响 ,流式细胞仪分析细胞周期分布 ,免疫组化和 Western Blotting分别检测 cyclin B、P2 1 waf1 / cip1 蛋白表达情况。结果 : Gen对胃癌细胞生长有显著抑制作用 ,使细胞生长停滞于 G2 / M期 ,并使细胞cyclin B、P2 1 waf1 / cip1蛋白表达增加 ,且呈剂量 -效应关系。结论 : Gen在此剂量下抑制胃癌细胞增殖、诱导 G2 / M期阻滞与其稳定 cyclin B蛋白和上调 P2 1 waf1 / cip1

大蒜素对人胃癌细胞SGC-7901及BGC-823G_2/M期的阻滞调节机制

目的:研究大蒜素对人胃癌细胞SGC-7901及BGC-823G2/M期阻滞作用及其调节机制.方法:应用MTT法测定大蒜素对人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823细胞增殖抑制率及72h的IC50.通过流式细胞仪检测IC50浓度的大蒜素对SGC-7901和BGC-823细胞周期的影响.应用免疫组化染色检测大蒜素作用前后SGC-7901和BGC-823细胞CDC2和CyclinB蛋白表达.结果:不同浓度的大蒜素可以抑制人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823的增殖,且随着大蒜素浓度的增大,抑制率逐渐增高.大蒜素抑制SGC-7901细胞增殖50%的药物浓度(IC50):72h为23mg/L;大蒜素抑制BGC-823细胞增殖50%的药物浓度(IC50):72h为35mg/L.大蒜素作用于两种细胞,其细胞周期均发生了明显的变化,主要表现为G0/G1期细胞减少,G2/M期细胞增多(SGC-7901细胞24,48hvs对照:26.47±2.54%,28.88±2.75%vs24.30±2.74%,P<0.01;BGC-823细胞24,48hvs对照:22.78±1.45%,24.87±1.61%vs20.32±1.34%,P<0.01),S期细胞无明显变化.未经大蒜素处理的两种细胞,CDC2和CyclinB蛋白表达均为阳性,大蒜素处理后,CDC2和CyclinB蛋白表达下降.SGC-7901细胞经23mg/L大蒜素处理后,CDC2蛋白相对阳性表达率为87.2%;CyclinB蛋白相对阳性表达率为59.3%.BGC-823细胞CDC2蛋白在35mg/L大蒜素作用后,相对阳性表达率为84.4%;CyclinB蛋白相对阳性表达率为62.8%,与对照组相比均有显著性差异(P<0.01).结论:大蒜素使人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823停滞于G2/M期,其机制是通过CDC2和CyclinB蛋白表达下降实现的.

刺五加多糖通过ERK信号转导途径诱导H446细胞G_2/M期阻滞

目的研究刺五加多糖(ASPS)对人小细胞肺癌H446细胞G2/M期阻滞的诱导作用及对ERK信号传导途径的影响。方法流式细胞技术(FCM)检测H446细胞周期;Western blot分析检测ASPS对ERK、p-ERK蛋白的影响。结果与对照组相比,各ASPS处理组G2/M期细胞所占的比例明显增高(P<0.01),G0/G1期细胞所占的比例没有差异;加入ERK抑制剂PD98059后,G2/M期和G0/G1期细胞所占的比例与对照组没有差异;p-ERK的量显著高于对照组(P<0.01),而对ERK蛋白表达没有明显影响。结论ASPS可能通过激活ERK信号转导途径诱导H446细胞发生G2/M期阻滞。

活化Chk1引起的G_2/M期阻滞在调节K562/A02细胞耐药中的机制探讨

本研究探讨活化的Chk1对白血病细胞周期及凋亡的影响,探究Chk1调控肿瘤细胞耐药的机制。以慢性粒细胞白血病细胞系K562及其耐药细胞系K562/A02(耐阿霉素)为研究对象,与阿霉素共孵育后,用流式细胞术检测细胞周期分布,RT-PCR检测Chk1mRNA表达水平,Westernblot检测转染前后Chk1磷酸化水平;靶向Chk1shRNA抑制细胞内Chk1的表达后,用流式细胞术检测阿霉素作用后细胞的凋亡情况。结果表明阿霉素致K562/A02细胞阻滞在G2/M期的细胞百分率为(54.12±0.57)%,显著高于K562细胞(36.99±1.28)%;Chk1mRNA表达水平在K562与K562/A02细胞间无显著差异;Chk1磷酸化水平在K562/A02细胞为0.79±0·56,在K562细胞为0.27±1·47,其差异有统计学意义。转染Chk1shRNA后,两株细胞的Chk1磷酸化水平显著下降。转染组K562、K562/A02细胞凋亡率分别是空载体转染组的1.30倍和3.84倍。结论Chk1的活化水平调控着K562/A02细胞对阿霉素的敏感性。

咖啡因对辐射诱导细胞凋亡和G_2/M期阻滞的影响

用形态学,DNA电泳和流式细胞仪等方法观察γ射线诱发BAF3细胞G_2/M期阻滞和凋亡的作用,以及咖啡因对其的影响。结果显示,5Gyγ射线照射后6小时引起细胞G_2/M期阻滞,G_2/M期比例为49.10％,12小时升至52.00％,无细胞凋亡发生。照前分别加入1mmol/L及5mmol/L咖啡因,照后12小时G_2/M阻滞程度降低,比例降至39.42％和15.49％,形态学检测细胞凋亡比例为8.33±1.53％和18.33±1.76％,流式细胞仪检测细胞凋亡比例为18.78％和43.81％,DNA电泳可见细胞凋亡特有的梯状图谱。结论提示,G_2/M期阻滞抑制能促进辐射诱导的细胞凋亡。

虫草菌提取物对HL-60细胞的抑制作用及G_2／M期阻滞的诱导

对人工培养的虫草菌菌丝体提取物进行了体外抗肿瘤活性及其作用机理的研究．依次用石油醚、乙酸乙酯、乙醇和水提取人工培养的虫草菌菌丝体,分别得到石油醚、乙酸乙酯、乙醇和水提取物．采用MTT比色法检测发现乙酸乙酯提取物显著抑制类前骨髓白血病细胞HL-60的增殖活性,半数抑制质量浓度(IC50)约为25μg／mL．并采用流式细胞术和Western blotting等方法进一步研究虫草菌乙酸乙酯提取物抑制HL-60细胞生长的作用机理．用流式细胞仪检测HL-60细胞DNA含量发现,25μg／mL虫草菌乙酸乙酯提取物作用12～24 h后,S期细胞减少,而 G2／M期细胞增多,表明细胞周期中G2／M检验点被阻滞．Western blotting分析结果表明,在虫草菌乙酸乙酯提取物作用后,HL-60细胞中G2／M检验点相关周期蛋白p34cdc2表达量降低．

八氯腺苷诱导SH-SY5Y和SK-N-SH细胞G_2/M期阻滞的分子机制不同

为探索八氯腺苷的抗肿瘤作用机制,以神经母细胞瘤SH-SY5Y和SK-N-SH细胞为对象,采用四唑盐比色实验（MTT法）证明,八氯腺苷具有明显的抑制肿瘤细胞增殖的作用,这种抑制作用呈剂量-时间依赖性.流式细胞分析显示,10 μmol/L八氯腺苷作用48 h后可导致靶细胞生长停滞于G2/M期;SH-SY5Y细胞发生明显细胞凋亡,但SK-N-SH细胞却未见凋亡.Hoechst 33342染色显示,SK-N-SH细胞发生了核分裂异常.蛋白质免疫印迹分析证明,10μmol/L八氯腺苷处理SH-SY5Y 48～72 h后,G2检验点调节蛋白ATM、Chk1、Cdc25C和Cdc2磷酸化形式明显上调,同时伴有caspase-3的激活,提示SH-SY5Y细胞发生了G3检验点通路和细胞凋亡途径的激活.与SH-SY5Y细胞不同,在SK-N-SH细胞中,八氯腺苷处理24～96 h时,磷酸化ATM、磷酸化Chk1/Chk2、磷酸化Cdc25C以及磷酸化Cdc2的水平呈现逐渐降低的趋势.结果提示,SK-N-SH细胞在八氯腺苷处理后发生了G2检验点失败.蛋白质免疫印迹分析还显示,八氯腺苷可诱导p53在SH-SY5Y细胞的表达,但却不能影响SK-N-SH细胞的p53组成性表达水平.p21在SK-N-SH的组成性表达随八氯腺苷处理时间延长而逐渐减少,但在处理前后的SH-SY5Y细胞均未检测到p21蛋白的表达.上述实验结果提示,八氯腺苷抑制两种细胞增殖的机制不同：在SH-SY5Y细胞,八氯腺苷可激活ATM-Chk-Cdc25C-Cdc2/cyclin途径和凋亡通路,使细胞发生G2/M期阻滞和细胞凋亡;在SK-N-SH细胞,八氯腺苷诱导G2检验点失败,导致细胞阻滞在有丝分裂期,并发生有丝分裂异常.2种不同的细胞命运可能还与p53和p21表达不同有关.

G6976转变8-氯-腺苷引起的G_2/M期阻滞为S期阻滞并促进K562细胞凋亡

8-氯-腺苷可抑制多种人类肿瘤细胞生长.8-氯-腺苷可引起细胞有丝分裂异常、G2/M期阻滞和晚期凋亡.为探索增强8-氯-腺苷的抗肿瘤作用,本研究以人慢性髓性白血病细胞株K562为靶细胞,联合使用Chk1抑制剂G6976与8-氯-腺苷,观察G6976处理后肿瘤细胞对8-氯-腺苷的增敏效果,探索其作用机制.流式细胞分析发现,G6976可消除8-氯-腺苷引起的K562细胞G2/M期阻滞,使转换为S期阻滞.蛋白质印迹及免疫共沉淀实验显示,G6976可灭活Chk1,激活Chk2,使Chk1-Cdc25C-CDK1级联反应转换为Chk2-Cdc25A-CDK2级联反应,从而引起细胞周期阻滞发生改变.蛋白质印迹实验证明,G6976可明显增强8-氯-腺苷作用引起的凋亡相关分子procasepase-3和PARP的激活;流式细胞分析显示,G6976促进8-氯腺苷引起的细胞凋亡.研究结果提示,G6976增强了靶细胞对8-氯-腺苷的敏感性,通过转换8-氯-腺苷引起的G2/M期阻滞为S期阻滞,促进细胞凋亡.

PM2.5降尘诱导A549细胞G2/M期阻滞的机制研究

PM_(2.5)降尘作用于A549细胞后,MTT法检测细胞存活率,扫描电镜观察细胞形态,流式细胞术检测细胞周期改变,RT-PCR检测周期阻滞相关基因p53、p21、CDK1、c-myc和lncRNA H19的表达水平,Western-blot检测周期蛋白cyclin B1表达。通过转染H19 siRNA干扰H19的表达,RT-PCR检测其对p53、c-myc及CDK1表达的影响,以探讨PM2.5降尘诱导A549细胞周期阻滞的作用机制。结果显示,PM2.5降尘暴露可降低A549细胞存活率,随作用浓度及时间增加呈递减趋势,并可观察到细胞形态破坏,细胞膜表面吸附聚集大量粉尘颗粒。PM2.5作用于细胞24 h后,A549细胞增殖阻滞在G2/M期,周期阻滞相关基因p53、p21及H19表达增加,CDK1及cyclin B1表达降低。此外,转染H19 siRNA后成功干扰H19的表达,并调控CDK1表达进一步降低。综合以上结果,PM2.5降尘处理A549细胞后可通过激活p53及p21活性,抑制CDK1和cyclin B1表达水平,诱导G2/M期阻滞从而抑制细胞增殖。短期暴露于PM2.5后,lncRNA H19在染毒细胞中可能发挥特异性癌基因的作用,通过与p53及c-myc结合参与调控细胞周期,干扰H19低表达使细胞G2/M期阻滞更加明显。

TAB182对电离辐射诱发细胞周期G_2/M阻滞的调节作用

TAB182是一个端锚聚合酶1(tankyrase 1)结合蛋白,它在体外能够被tankyrase 1发生二磷酸腺苷核糖基化(PAR)修饰,其生物学功能目前尚不明确.本研究发现,TAB182蛋白水平受电离辐射诱导表达,HeLa细胞经过4 Gy照射处理时,TAB182在2 h表达含量最高;经过不同剂量照射处理,2 h后2 Gy、4 Gy照射剂量组HeLa细胞中TAB182的表达有明显增加.通过shRNA沉默HeLa细胞中TAB182基因表达,导致其对4 Gy及以下剂量γ辐射的敏感性增加,但对8 Gy大剂量照射的敏感性没有明显变化.与对照组相比,4 Gy照射诱发TAB182基因沉默细胞的G2/M期阻滞时间显著延长.抑制TAB182表达导致细胞中DNA损伤反应蛋白DNA-PKcs、ATM、Chk2的表达水平显著降低.实验结果提示,TAB182蛋白参与放射DNA损伤信号反应和调控细胞周期G2/M进程.

G_2/M期阻滞因素及常用诱导方法

细胞周期检查点（checkpoint）是真核细胞为保证染色体数目的完整性及细胞周期正常运转而存在的重要控制机制。虽然正常细胞存在多个周期检查点，但肿瘤细胞普遍存在G1期检查点缺陷，并且肿瘤细胞在DNA损伤后，都有选择性地滞留于G2期的趋势。因此G2／M期检查点成为肿瘤治疗的一个诱人靶标［1］。

Mcl-1在二烯丙基二硫诱导人白血病HL-60细胞G_2/M阻滞中的作用

目的:探讨Mcl-1在二烯丙基二硫(DADS)诱导人白血病HL-60细胞周期阻滞过程中的作用。方法:CCK-8检测DADS抑制HL-60细胞的作用;流式细胞术观察DADS对HL-60细胞的周期阻滞效应;West-ern blotting分析DADS处理HL-60细胞后Mcl-1、PCNA(细胞核增殖抗原)、CDK1(周期依赖激酶1)表达情况;RNAi干扰Mcl-1观察Mcl-1对白血病细胞周期的影响;免疫共沉淀分析Mcl-1与PCNA、CDK1结合作用。结果:CCK-8比色结果显示,15、30、60、120、240μmol/L DADS处理HL-60细胞,细胞增殖抑制率分别为31.15%、55.88%、66.14%、75.29%、80.35%,呈浓度依赖性增加(P<0.05)。流式细胞术检测显示,60μmol/L和120μmol/L DADS作用HL-60细胞24 h和48 h后,呈时间和浓度依赖性诱导HL-60细胞G2/M期阻滞(P<0.05)。Western blotting分析发现60μmol/LDADS处理HL-60细胞后PCNA、Mcl-1、CDK1表达下调(P<0.05)。Mcl-1基因沉默24 h后G2/M期百分率增加到19.4%,与对照组比较有显著差异(P<0.05)。而Mcl-1基因沉默后加入60μmol/L DADS作用时,G2/M期百分率比60μmol/L DADS处理组增加6.0%(P<0.05)。免疫共沉淀发现,HL-60细胞中存在Mcl-1与PCNA、CDK1的相互结合,DADS处理HL-60细胞后Mcl-1与PCNA、CDK1的结合作用减弱。结论:DADS能诱导HL-60细胞增殖抑制和G2/M阻滞,其抑制增殖作用与PCNA表达下调有关。Mcl-1基因沉默可增强DADS对HL-60细胞G2/M期阻滞作用。

^(131)I-GMCSF诱导HL-60细胞凋亡与细胞周期阻滞的研究

目的 观察和探讨1 31 I-GMCSF诱导HL - 6 0细胞凋亡及其与细胞周期的关系。方法 采用体外放射免疫治疗模型,通过MTT比色法、TUNEL来研究1 31 I -GMCSF辐射后HL - 6 0细胞的存活率、凋亡率的改变;用流式细胞术及免疫细胞化学方法细胞周期的改变。结果 放射性浓度≥18.5×10 8Bq/L时HL - 6 0细胞存活率显著下降。1 31 I -GMCSF能致HL - 6 0细胞凋亡、细胞发生G2 /M期阻滞。结论 GMCSF作为载体携带1 31 I能诱导HL - 6 0细胞凋亡,凋亡与细胞发生G2 /M期阻滞有关。

二烯丙基二硫下调MCL-1诱导K562细胞G2/M阻滞及其机制

目的:研究二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)下调MCL-1诱导人白血病K562细胞周期阻滞及其机制。方法:采用CCK-8检测DADS对K562细胞增殖的作用;流式细胞术观察DADS与沉默MCL-1对K562细胞周期的影响;Western blot检测MCL-1、PCNA和CDK1表达;免疫共沉淀方法分析MCL-1与PCNA及CDK1结合作用。结果:15、30、60、120、240μmol/L DADS对K562细胞增殖抑制率分别为32.48%、59.34%、66.42%、77.06%和81.05%(P<0.05)。60和120μmol/L DADS分别作用K562细胞24和48 h后,G_2/M期细胞分别增加到18.6%与34.4%和17.5%与28.5%(P<0.05)。沉默MCL-1可阻滞K562细胞于G_2/M,沉默MCL-1加DADS(60μmol/L)较单独DADS和沉默MCL-1明显增强(P<0.05)。DADS可明显下调MCL-1、PCNA与CDK1表达(P<0.05)。DADS处理K562细胞8 h,MCL-1与结合的PCNA和CDK1较对照组显著下调(P<0.05)。结论:DADS可通过下调MCL-1继而降低PCNA与CDK1表达,抑制K562细胞增殖,细胞阻滞于G_2/M期,沉默MCL-1可增强DADS的作用。