肺癌患者GASP-1、LCN2和TPX2的表达水平及其与TNM分期和预后的相关性分析

目的探究肺癌患者血清G蛋白偶联受体相关分选蛋白1(GASP-1)、脂质运载蛋白-2(LCN2)、Xklp2靶蛋白(TPX2)表达水平及其与TNM分期和预后的相关性。方法选取2019年4月至2022年5月在南部战区总医院接受诊疗的92例肺癌患者作为观察组,同期选取92例健康体检者作为对照组。采集所有研究对象的外周静脉血样,检测血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平。将观察组按预后情况分为预后良好组和预后不佳组,比较2组患者血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平。分析肺癌患者血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平与TNM分期和预后的相关性。结果观察组血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平高于对照组(P<0.05);观察组TNM分期为Ⅲ、Ⅳ期的肺癌患者血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平高于TNM分期为Ⅰ、Ⅱ期的肺癌患者(P<0.05),TNM分期为Ⅳ期的患者血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平均高于TNM分期为Ⅲ期的患者(P<0.05)。预后良好组血清GASP-1、LCN2、TPX2水平均低于预后不佳组(P<0.05);观察组治疗前血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平均与TNM分期呈正相关(P<0.05),治疗后血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平均与预后呈负相关(P<0.05)。结论血清GASP-1、LCN2、TPX2表达水平与肺癌患者的TNM分期相关,在对症治疗后检测上述血清指标,可在一定程度上反映患者预后情况,为临床提供参考。

S期激酶相关蛋白2、CD147及穿膜蛋白1在骨肉瘤中的表达及与疾病恶性程度及与疾病恶性程度、预后的关系

目的 分析S期激酶相关蛋白2(SKP2)、CD147及穿膜蛋白1(DLK1)在骨肉瘤中的表达及与疾病恶性程度和预后的关系。方法 检测103例骨肉瘤患者骨肉瘤组织与癌旁组织中SKP2、CD147及DLK1的表达情况,并分析SKP2、CD147及DLK1表达与骨肉瘤患者临床特征和预后的关系。结果 骨肉瘤组织中SKP2、CD147、DLK1阳性表达率均明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。随着骨肉瘤患者临床分期逐渐增高,SKP2、CD147、DLK1阳性表达率均逐渐升高。血管扩张型骨肉瘤患者SKP2、CD147、DLK1阳性表达率均高于软骨母细胞型和骨母细胞型患者,软骨母细胞型骨肉瘤患者SKP2、CD147、DLK1阳性表达率均高于骨母细胞型患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。预后良好与预后不良骨肉瘤患者肿瘤转移、肿瘤分型及SKP2、CD147、DLK1表达情况比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。多元Logistic回归分析结果显示,SKP2、CD147、DLK1阳性表达及肿瘤转移均是骨肉瘤患者预后不良的独立危险因素(P﹤0.01)。结论 SKP2、CD147、DLK1在骨肉瘤中呈高表达,且对疾病恶性程度、预后有较大的评估价值,可进一步研究证实。

AR、SKP2、SOX10、PD-L1及TIL表达在三阴性乳腺癌中的意义

目的:探索雄激素受体(androgen receptor,AR)、S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,SKP2)、性别决定区Y相关的HMG盒含因子10(sry-related HMG box-containing factor 10,SOX10)、程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)及肿瘤浸润性淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)表达与临床病理特征和预后的关系。方法:根据苏木精-伊红染色(hematoxylineosin, HE)染色切片评判109例TNBC瘤巢内TIL的比例,采用Leica Bond-Max全自动免疫组化仪检测TNBC组织中AR、SKP2、SOX10、PD-L1的表达。分析以上各生物指标与临床病理特征间的关系,并采用kaplan-Meier、Log-rank进行生存分析。结果:95例患者获得随访,中位随访时间为48个月,中位无病生存时间(disease-free survival, DFS)为42个月,中位总生存时间(overall survival, OS)48个月。在TNBC中,AR阳性表达与淋巴结转移阴性(P=0.009)、肿瘤最大径<2 cm(P=0.008)相关,TIL高表达与低级别TNBC相关(P=0.007),SKP2阳性表达与神经/脉管侵犯阳性(P=0.011)、高级别TNBC相关(P=0.002),SOX10阳性表达与淋巴结转移阳性(P=0.022)、高级别TNBC(P=0.005)相关,PD-L1阳性表达与淋巴结转移阳性(P=0.020)、神经/脉管侵犯阳性(P=0.006)、高级别TNBC(P=0.042)相关。生存分析显示,SKP2、SOX10阳性表达与更差的DFS(P=0.007、P<0.001)和OS(P=0.013、P<0.001)相关,TIL高表达与更好的DFS(P=0.016)及OS(P=0.004)相关。在生物表志物的联合表达中,AR+/SKP2-、AR+/SOX10-与更好的DFS(P=0.004、P<0.001)及OS(P=0.007、P=0.001)相关,SOX10+/低TIL、PD-L1+/低TIL与更差的DFS(P<0.001、P=0.008)及OS(P=0.001、P=0.002)相关,AR-/低TIL者具有更差的OS(P=0.014)。SKP2(HR=4.143,95%CI为1.578~10.875)、SOX10(HR=7.578,95%CI为2.067~27.782)的阳性表达是影响TNBC患者DFS的独立预后因子,SKP2(HR=3.758,95%CI为1.400~10.084)、SOX10(HR=5.131,95%CI为1.316~20.000)及TIL(HR=0.375,95%CI为0.154~0.917)的阳性表达是TNBC患者OS的独立预后因子(P均<0.05)。结论:在TNBC中,AR阳性、TIL高表达与具有更好预后的临床病理特征相关,SKP2、SOX10和PD-L1与具侵袭性的临床病理特征相关。SKP2、SOX10及TIL表达与TNBC预后相关,提示这些生物指标可能成为TNBC新的预后因子,同时它们也有可能成为潜在的治疗靶点。

skp2及p27Kip1蛋白与晚期胃癌患者临床预后的关系

目的探讨细胞S期激酶相关蛋白(skp)2及p27Kip1蛋白与晚期胃癌患者临床预后的关系。方法选取2013年5月至2015年1月开滦点医院林西医院收治130例晚期胃癌患者,免疫组化法检测skp2和p27Kip1蛋白表达水平,采用单因素和多因素Cox回归模型,探讨skp2和p27Kip1蛋白表达与晚期胃癌临床预后的关系。结果晚期胃癌组织skp2和p27Kip1阳性表达在不同卡氏功能状态(KPS)评分、肿瘤直径、手术、腹腔淋巴结转移、肝转移、临床分期及组织学分化患者中差异存在统计学意义(P<0.05),而性别、年龄、化疗、放疗及腹水等指标差异未见统计学意义(P>0.05)。年龄、KPS评分、肿瘤直径、手术、化疗、放疗、腹腔淋巴结转移、肝转移、腹水、临床分期、组织学分级、skp2蛋白表达和p27Kip1蛋白表达水平是晚期胃癌患者5年存活的影响因素。Cox回归分析结果显示,KPS评分(≤60分)、组织学分级(低分化)、腹腔淋巴结转移、skp2蛋白阳性表达和p27Kip1蛋白阴性表达是晚期胃癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论晚期胃癌组织中skp2蛋白阳性表达和p27Kip1蛋白阴性表达是晚期胃癌临床预后差的独立危险因素,可作为晚期胃癌治疗方案、预后评估等方面的有效指标。

GTSE1在肝癌中的表达及其对预后和免疫浸润的影响

目的研究G_(2)/S期应答相关蛋白1(G_(2) and S phase-expressed protein 1,GTSE1)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达、免疫学作用和预后分析,及其潜在作用机制。方法使用公共数据库癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)提供的数据,用Kaplan-Meier、肿瘤免疫评估资源(Tumor Immune Estimation Resource,TIMER)数据库和基因表达谱交互分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)数据库进行GTSE1基因表达、免疫学作用及预后分析,通过免疫组化实验验证GTSE1在临床样本中的表达,应用R软件对GTSE1相关差异基因进行基因本体(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析。结果GTSE1在人类癌组织中显著高表达,且与肝细胞癌预后不良显著相关(P<0.05);GTSE1基因表达与HCC中浸润性免疫细胞的丰度显著相关(P<0.001)。GTSE1相关的差异表达基因主要富集于核分裂、细胞器裂变、离子通道活性等基因模块;其参与的信号通路主要包括神经活性配体-受体的相互作用、细胞周期等。结论GTSE1在HCC中的表达显著上调并与患者预后不良显著相关,且在免疫细胞浸润中发挥重要作用,可作为HCC的预后标志物和免疫治疗靶点。

层粘连蛋白对晚G_1期人胃癌BGC-823细胞生长的促进作用

为研究层粘连蛋白(laminin,LN)促进肿瘤细胞生长作用,采用脉冲标记计数有丝分裂百分率(percentage labeling mitosis,PLM)法测得体外培养人胃癌(BGC-823)细胞周期时间为41h,其中G1期时间为24.5h.分裂细胞脱离法获取分裂期细胞,继续培养23h,在细胞运行进入G1晚期时,将其置于LN0、0.11、0.55、1.10μmol/L基质上孵育4h;细胞荧光光度计检测晚G1期细胞内Ca2+浓度、钙调蛋白、DNA含量.结果显示,LN与其膜上受体结合后引起细胞内Ca2+浓度、钙调蛋白、DNA含量增加,尤以在0.55μmol/LLN作用显著(P<0.001).蛋白质免疫印迹分析证明,cPKC-α呈现表达,提示LN与其受体结合可增强其细胞cPKC-α的活性;分析G1期细胞周期蛋白E(cyclinE)、细胞周期蛋白依赖性激酶CDK2表达水平,呈现逐渐增强的趋势;LN可诱导c-Myc蛋白呈现高表达,提示LN与其受体结合增强与细胞增殖密切相关的基因表达;在LN作用前后的BGC-823细胞均未检测到Bax蛋白表达.结果提示,在人胃癌(BGC-823)细胞G1/S期交界处,层粘连蛋白与其膜上受体结合引起细胞内Ca2+浓度升高,诱导钙调蛋白的释放,其含量增加,增强蛋白激酶C的活化,导致细胞内DNA含量增加、G1/S期细胞周期蛋白与CDK表达增强、诱导原癌基因c-Myc呈持续表达状态,而凋亡基因Bax不表达.

外周血单个核细胞GTSE1水平与上皮性卵巢癌预后的相关性

目的:探究外周血单个核细胞G_(2)/S期应答相关蛋白1(G_(2)and S phase-expressed-1,GTSE1)水平与上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)预后的关系。方法:GEPIA和Kaplan-Meier Plotter分析GTSE1在卵巢癌组织中的表达及其与预后的关系。选择2017年04月至2020年10月本院126例EOC患者(EOC组)和40例同期无EOC的健康体检者(对照组)作为研究对象。Ficoll密度梯度离心法分离外周血中单个核细胞,蛋白质免疫印迹法检测GTSE1水平。Spearman相关分析EOC组织和外周血单个核细胞中GTSE1水平的关系。随访了解EOC预后,用COX回归分析EOC预后的风险因素。结果:GEPIA和Kaplan-Meier Plotter分析结果显示,卵巢癌组织中GTSE1水平高于正常卵巢组织(P<0.05),GTSE1低水平卵巢癌患者的中位无进展生存时间高于GTSE1高水平卵巢癌患者(P<0.05)。随访期间复发98例(77.8%),其中铂类敏感型65例,铂类耐药型33例;死亡41例(32.5%)。EOC组的外周血单个核细胞中GTSE1 mRNA和GTSE1蛋白水平均高于对照组(P<0.001)。EOC患者癌组织和外周血单个核细胞中GTSE1水平呈正相关关系(r_(s)=0.225,P=0.011)。国际妇产科联盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics,FIGO)Ⅰ-Ⅱ期患者的GTSE1水平低于Ⅲ-Ⅳ期的患者(P<0.001);未复发患者的GTSE1水平低于铂类敏感型和铂类耐药型的患者(P<0.05);生存患者的GTSE1水平低于死亡患者(P<0.001)。GTSE1高水平患者的无复发生存时间和总生存时间均低于GTSE1低水平患者(P<0.001)。COX回归分析结果显示,FIGO分期高(HR=2.110,95%CI:1.465~3.038,P<0.001;HR=2.261,95%CI:1.212~4.216,P=0.011)、初次手术残存灶>1 cm(HR=1.724,95%CI:1.130~2.631,P=0.012;HR=2.465,95%CI:1.246~4.874,P=0.010)和GTSE1>1.29(HR=2.071,95%CI:1.304~3.291,P=0.002;HR=5.634,95%CI:2.410~13.169,P<0.001)是EOC预后(复发和生存)的独立危险因素,应用贝伐单抗(HR=0.293,95%CI:0.116~0.738,P=0.010;HR=0.141,95%CI:0.056~0.357,P<0.001)是EOC预后的独立保护因素。结论:EOC患者外周血单个核细胞中GTSE1水平高提示预后不良风险高。

pAkt、Skp2和P27^(kip1)蛋白在肝细胞癌中的表达及意义

目的探讨人肝细胞癌组织中pAkt、Skp2和P27kip1蛋白的表达及其临床意义。方法应用免疫组织化学方法检测78例肝细胞癌及21例正常肝组织中pAkt、Skp2和P27kip1蛋白的表达,分析其与肝细胞癌临床病理特征及预后的关系。结果肝细胞癌组织中pAkt及Skp2蛋白的高表达率分别为43.6%和47.4%,显著高于正常肝组织(P<0.05),P27kip1蛋白的阳性表达率为34.6%,显著低于正常肝组织(P<0.05)。pAkt蛋白的表达与肿瘤直径、侵犯周围脏器或淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05);Skp2蛋白的表达与肿瘤直径、门静脉癌栓及TNM分期有关(P<0.05);P27kip1蛋白的表达与肿瘤直径、数目及TNM分期有关(P<0.05)。Skp2与pAkt蛋白表达呈正相关(r=0.356,P=0.001),与P27kip1蛋白表达呈负相关(r=-0.313,P=0.005)。pAkt、Skp2蛋白高表达患者术后生存率明显低于低表达患者(P=0.000),P27kip1蛋白的表达与患者术后生存率无关。Cox模型多因素分析结果显示,TNM分期、pAkt及Skp2蛋白的表达是影响肝细胞癌预后的独立因素。结论肝细胞癌组织中pAkt、Skp2及P27kip1蛋白的表达失调与肝细胞癌的恶性生物学行为密切相关,pAkt及Skp2可以作为评价患者预后的指标。

三氧化二砷对人肝癌细胞株SMMC-7721中p27^(kip1)及其相关分子Skp2表达的影响

目的通过检测三氧化二砷(As2O3)对肝癌SMMC-7721细胞周期素依赖性激酶抑制剂(CDKI)p27kip1及S期激酶相关蛋白2(Skp2)的影响,探讨其抗癌作用机制。方法体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,用2μmol/LAs2O3处理72h,流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡率,应用Westernblot方法检测p27kip1、Skp2及CDK2基因编码蛋白的表达。结果与对照组比较,As2O3使SMMC-7721细胞周期阻滞在G2/M期。经As2O3作用的人肝癌细胞p27kip1基因编码蛋白表达增加,而p27kip1相关分子Skp2及CDK2的表达减少。结论As2O3可干扰细胞周期的进程,抑制SMMC-7721细胞的增殖。其作用机制与上调p27kip1蛋白及下调Skp2、CDK2有关。

舌鳞状细胞癌组织中Cks1、Skp2和p27^(kip1)蛋白的表达及其临床意义

目的:检测舌鳞状细胞癌(舌癌)组织中Cks1、Skp2和p27kip1蛋白的表达,分析其与患者临床病理特征的关系,探讨其在舌癌的发生发展及预后中的作用。方法:采用免疫组织化学法检测45例舌癌组织、30例癌旁组织和10例正常舌黏膜组织中Cks1、Skp2和p27kip1蛋白的表达情况;比较不同类型舌组织中各蛋白表达阳性率的差异;分析Cks1、Skp2和p27kip1蛋白表达与舌癌临床病理学参数的关系。结果:在舌癌组织中,Cks1和Skp2蛋白呈强表达,阳性表达率为73.3%和62.2%,在癌旁组织和正常舌黏膜组织中其阳性表达率依次降低,阳性表达率分别为23.3%、10.0%和36.7%、10.0%;在舌癌组织中,p27kip1蛋白表达明显减少或缺失,阳性表达率为24.4%,在癌旁组织中和正常舌黏膜组织中其阳性表达水平依次升高,阳性表达率分别为30.0%和70.0%;在舌癌组织中Cks1和Skp2蛋白阳性表达率高于正常舌黏膜组织和癌旁组织(P<0.05),而p27kip1蛋白阳性表达率低于正常舌黏膜组织和癌旁组织(P<0.05)。舌癌组织中Cks1、Skp2和p27kip1蛋白阳性表达率与舌癌患者的年龄和性别无关联(P>0.05);与癌组织淋巴结转移、TNM分期、分化程度和临床分期有关联(P<0.05)。结论:舌癌组织中Cks1和Skp2蛋白阳性表达率升高、p27kip1蛋白阳性表达率降低,Cks1、Skp2和p27kip1蛋白阳性表达率的检测有助于判断舌癌的恶性程度和预后。

人皮肤基底细胞癌和鳞状细胞癌组织中P27^(kip1)、Skp2蛋白的表达

目的:检测人皮肤基底细胞癌(BCC)和鳞状细胞癌(SCC)组织中P27kip1、Skp2的表达情况,并探讨其临床意义。方法:应用免疫组织化学SP染色法检测27例BCC(男15例,女12例;均无淋巴结转移)、23例SCC(男15例,女8例;高分化18例,中、低分化5例;均无淋巴结转移)和20例正常皮肤组织中P27kip1和Skp2蛋白的表达情况。结果:BCC和SCC组织中P27kip1的阳性表达率分别为63.0%和26.1%,低于正常皮肤组织的阳性表达率95.0%(P均<0.05)。BCC和SCC组织中Skp2的阳性表达率分别为40.7%和69.6%,高于正常皮肤组织的阳性表达率10.0%(P均<0.05)。BCC与SCC组织比较,2种蛋白阳性表达率差异均有统计学意义(P均<0.05)。BCC和SCC组织中,P27kip1与Skp2蛋白阳性表达率成负相关(P均<0.05)。结论:P27kip1低表达和Skp2高表达可能与BCC和SCC的发生、发展有关。

PI3K/Akt信号通路抑制剂对胃癌细胞SGC7901中Skp2和NAG-1表达的影响及其效应

目的研究PI3K/Akt信号转导通路靶向抑制剂LY294002对胃癌细胞SGC7901中S期激酶相关蛋白2(Skp2)和非甾体抗炎药诱导基因-1(NAG-1)表达的影响。方法将LY294002作用于胃癌细胞株SGC7901,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术AnnexinV2FITC/PI染色法检测细胞凋亡率,RT-PCR检测NAG-1、Skp2 mRNA的表达情况,Western blot检测p-Akt(Ser473)和总Akt(t-Akt)的表达情况。结果LY294002可明显抑制SGC7901的生长,呈时间-剂量依赖性,并出现典型的细胞形态学改变;10、30、50μmol/L的LY294002作用12h后细胞凋亡率分别为(12.7±0.42)%、(36.5±0.45)%和(64.1±0.79)%,显著高于空白对照组的(2.3±0.36)%,差异均有统计学意义(P<0.01);LY294002可下调p-Akt的蛋白表达,而t-Akt的表达未发生改变;LY294002可上调NAG-1 mRNA的表达,并下调Skp2 mRNA的表达。结论阻断PI3K/Akt信号转导通路可改变胃癌细胞株SGC7901中Skp2和NAG-1的表达,并能明显抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与其抑制Akt磷酸化及调控NAG-1、Skp2 mRNA表达水平有关。

维甲酸对A549细胞增殖和凋亡及Skp2、p27^(kip1)蛋白表达的影响

目的探讨维甲酸对A549细胞增殖和凋亡及相关基因表达的影响。方法MTT法观察ATRA对A549细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪、AO/EB荧光双染法检测细胞凋亡;免疫细胞化学检测ATRA处理前后A549细胞Skp2、p27kip1蛋白表达的情况。结果ATRA处理后①MTT法结果显示ATRA对A549细胞具有增殖抑制作用,在一定范围内呈时间-剂量依赖性。②AO/EB荧光双染色法观察到ATRA 25μmol/L作用A549细胞48h后,即可发现典型的凋亡形态学改变。③流式细胞仪结果出现凋亡峰,与对照组细胞相比,实验组细胞周期延长,主要表现为G0/G1期细胞比例增加,同时S期细胞比例减少。④免疫细胞化学结果显示,ATRA 25μmol/L处理细胞48h后,维甲酸处理组Skp2有明显下调,p27kip1则明显上调。结论ATRA具有抑制肺腺癌A549细胞增殖,诱导细胞凋亡的作用,其机制可能与下调Skp2,上调p27kip1蛋白的表达水平有关。

Skp2和p27^(kip1)蛋白在B细胞性非霍奇金淋巴瘤中的表达、定位及意义

目的探讨B细胞性非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)组织中Skp2和p27kip1蛋白的表达、定位及意义。方法用免疫组织化学方法检测72例B-NHL和14例反应性增生淋巴结组织Skp2、p27kip1蛋白及细胞增殖指标Ki-67的表达情况,结合病理资料进行统计分析;用免疫荧光双标记技术检测淋巴瘤Raji细胞株Skp2和p27kip1蛋白的定位情况。结果Skp2蛋白在B-NHL组织中的表达高于反应性增生的淋巴结(不含生发中心),在侵袭性B-NHL组织中的表达高于惰性组;p27kip1蛋白在B-NHL组织中的表达低于反应性增生淋巴结(不含生发中心),在侵袭性B-NHL组织中的表达低于惰性组;Skp2蛋白主要在Raji细胞的胞浆中表达,p27kip1蛋白主要表达于胞核。结论在B-NHL组织中,Skp2的高表达和p27kip1的低表达可能与其发生发展有关;Skp2和p27kip1在Raji细胞中的亚细胞定位与其生物学功能一致。

Skp2-siRNA对Eca-109食管癌细胞系p^(27kip1)蛋白表达的影响

目的观察通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)使Skp2基因沉默转染后对食管癌Eca-109细胞株中p27kip1表达的影响。方法以Eca-109食管癌细胞系作为实验对象,设计合成针对Skp2的siRNA并进行转染。实验分为转染组、空白对照组、转染对照组、阴性对照组。采用免疫组化方法(SP法)检测各组Eca-109食管癌细胞系p27kip1蛋白表达的情况,采用Imageproplus(IPP)测定累积光密度值(IOD)。每张切片选5个视野,求IOD均值。采用方差分析进行组间均数比较,以p<0.05表示差异有统计学意义。结果①RNAi-Mate转染Eca-109细胞6 h后用荧光显微镜检测,计数转染Eca-109细胞的效率>80%,本实验选此比例作为实验浓度。②经过转染后24 h的细胞开始变圆,生长比同时间正常培养的对照组细胞缓慢,48 h后细胞出现凋亡,有部分细胞脱落,72 h后细胞脱落变多。③免疫组化检测结果显示:转染24 h后p27kip1蛋白表达开始上升IOD值为7.295±0.277、48 h后上升最明显IOD值为9.075±0.880、72 h后p27kip1蛋白表达开始下降IOD值为3.506±0.160,与空白对照组相比较,差异有显著统计学意义(P<0.01,psiRNA=0.000),转染组24 h、48 h、72 h之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论将人Skp2-siRNA转染入Eca-109食管癌细胞系后,能有效通过下调Skp2的表达,而上调p27kip1蛋白的表达。说明Skp2在Eca-109食管癌细胞增殖调控中起到重要作用,RNAi技术有可能作为抑制肿瘤细胞生长的一种手段。

Skp2-P^27kip1通路及其相关凋亡基因在结肠癌组织中的表达及意义

目的:探讨Skp2和P27kip1蛋白在结肠癌中的表达及其相关性,阐明两者在结肠癌的发生和发展中的作用。方法:应用免疫组织化学SABC法检测50例结肠癌患者癌组织和20例正常结肠组织中Skp2、P27kip1、P53和Bcl-2蛋白的表达,比较不同组织中阳性细胞表达百分比,分析其与结肠癌临床病理参数的相关性。结果:与正常组织比较,结肠癌组织中Skp2蛋白阳性表达率增加(P<0.05),P27kip1蛋白阳性表达率降低(P<0.05)。Skp2蛋白阳性表达率在临床Duck’s分期C和D期结肠癌、低分化结肠癌及伴有淋巴结转移的结肠癌组织中增加(P<0.05),P27kip1蛋白阳性表达率在临床Duck’s分期A和B期结肠癌、高分化结肠癌及无淋巴结转移的结肠癌组织中增加(P<0.05)。P53和Bcl-2蛋白在低分化结肠癌组织中均高表达(P<0.05)。结肠癌中Skp2与P27kip1的表达率呈负相关关系(r=-0.282,P<0.05),与P53及Bcl-2蛋白阳性表达率分别呈正相关关系(r1=0.345,r2=0.231,P<0.01)。结论:Skp2和P27kip1蛋白的异常表达参与了结肠癌组织的分化、浸润和转移,相关凋亡基因P53及Bcl-2蛋白表达上调可能是其作用机制之一。

中华芦荟多糖对辐射后非瘤细胞周期改变及周期相关蛋白表达的影响

目的研究中华芦荟多糖(AP)对X射线照射后人非瘤细胞株C.Liver和293细胞周期进程及细胞周期相关蛋白表达的影响。方法流式细胞仪检测细胞周期,Westernblot检测细胞周期相关蛋白的表达。结果辐射后293和C.Liver细胞均出现明显的G2/M期阻滞,G0/G1期细胞比例显著下降,50μg/mlAP能显著改变上述趋势。AP预处理能显著下调辐射所致C.Liver细胞P53蛋白水平,显著升高P21、CyclinB1、pRb蛋白的表达,对P27、CDK4和CyclinD1蛋白表达水平无显著影响。结论AP对X射线辐射后非瘤细胞周期紊乱的改善作用与对周期相关蛋白表达的调节有关。

沉默G250基因对肾癌786-0细胞移植瘤Skp2表达的影响

目的探讨沉默G250基因对肾癌786-0细胞移植瘤S期激酶相关蛋白2(Skp2)表达的影响。方法构建靶向G250的siRNA表达质粒pshRNA-G250并转染肾癌786-0细胞,12只BALB/c裸鼠分为阴性对照组和干扰成瘤组,干扰成瘤组每只裸鼠皮下接种5×106个G250基因沉默后的肾癌786-0细胞(786-0/si-G250-b),以转染空质粒的细胞(786-0/si-G250-0)为对照。成瘤3 w后,处死裸鼠后切取瘤块,采用组织芯片技术及免疫组化SP法检测Skp2的表达。结果 5×106个细胞皮下接种BALB/c裸鼠3 w后均成瘤,Skp2在阴性对照组和干扰成瘤组裸鼠的肿瘤组织中表达率分别为83.33%(5/6)和16.67%(1/6),两者有显著性差异(P=0.04)。结论 G250基因表达沉默抑制了肾癌细胞移植瘤Skp2的表达。

SKP1、SKP2对肾癌预后的预测作用分析

目的分析S期激酶相关蛋白1(SKP1)和S期激酶相关蛋白2(SKP2)表达水平对肾透明细胞癌、肾嫌色细胞癌、肾乳头状细胞癌这3种肾癌患者预后的预测作用。方法使用TCGA数据库中肾透明细胞癌、肾嫌色细胞癌、肾乳头状细胞癌样本进行SKP1和SKP2表达水平及其甲基化与预后相关性分析、不同表达水平间基因突变情况分析。采用Metascape数据库分析SKP2在这3种肾癌中共表达基因功能富集情况及蛋白质相互作用情况。结果与正常组织比较,SKP1表达水平在这3种肾癌中均显著降低,SKP2在肾透明细胞癌和肾乳头状细胞癌中显著升高。在这3种肾癌中SKP2高表达者预后均较差,AUC值和一致性指数提示预测准确性稳定。肾癌中多个甲基化位点与SKP1或SKP2表达水平及预后显著相关。肾透明细胞癌中SKP1和SKP2突变占14%。KMT2C、HERC2、PRKDC、SETD2和HMCN1基因突变与SKP1或SKP2表达水平高低相关。肾癌中SKP2共表达基因富集部分与免疫应答调节相关。结论SKP2及其甲基化可以预测肾癌预后。肾癌中SKP1、SKP2表达高低与KMT2C、HERC2、PRKDC、SETD2和HMCN1等基因突变相关,并受多种甲基化位点影响。