重组腺病毒介导mIL-4基因转染的G422胶质母细胞瘤体外生物学特性及体内致瘤性的改变

以重组的复制缺陷性腺病毒为载体将鼠IL-4基因转染G422小鼠脑胶质母细胞瘤细胞,观察其体外生物学特性和体内致瘤性的变化。结果显示:基因转染的肿瘤细胞有目的基因mRNA的表达,分泌高水平的mIL-4,和野生型G422细胞相比,其体外的细胞增殖能力无显著差异,而接种皮下后肿瘤生长延缓、小鼠的存活期延长。

γ-干扰素基因转染G422胶质母细胞瘤细胞的生物学特性

目的 研究重组腺病毒介导的小鼠γ -干扰素 (mIFN -γ)基因转染G422胶质母细胞瘤细胞的体外和体内生物学特性。方法 按重复感染度 (MOI)=1∶100转染G422细胞 (G422/mIFN -γ细胞 ) ,检测转染后不同时间mIFN -γ的表达 ;MTT法检测基因转染细胞的体外增殖活性 ,设立转染LacZ基因的病毒对照细胞和野生G422对照细胞。观察基因转染细胞接种于小鼠皮下后的成瘤性和小鼠存活期 ,LDH法检测荷瘤小鼠脾自然杀伤细胞 (NK)、细胞毒T淋巴细胞 (CTL)及腹腔巨噬细胞 (MΦ)杀伤活性。结果 mIFN -γ基因转染后2h即可在培养上清中检测到mIFN -γ表达。腺病毒mIFN -γ基因转染对体外G422细胞增殖能力无影响,而接种体内后肿瘤生长缓慢 ,小鼠存活期延长。G422/mIFN -γ细胞接种组小鼠脾NK、CTL及腹腔MΦ杀伤活性显著增强 (P<0.05)。结论 重组腺病毒可介导IFN -γ基因转染G422细胞并高效表达。IFN -γ基因转染的G422细胞具有瘤苗的作用 ,能诱导抗肿瘤免疫反应。

去甲斑蝥素对G422脑胶质瘤抑制作用的体内研究

目的:研究去甲斑蝥素(NCTD)体内对脑胶质瘤G422细胞的抑制作用。方法:建立G422细胞小鼠移植瘤模型,将荷瘤小鼠随机分为模型组、CTX阳性对照组及NCTD高、中、低剂量组(100、50、25 mg.kg-1),每组10只,另设10只为正常对照组,正常对照组每日给生理盐水灌胃,CTX和NCTD组采用腹腔注射方式给药,10 d后双抗体夹心ABC-ELISA法测sIL-2R的含量;酶联免疫ELISA法测IFN-γ含量;剥瘤,计算抑瘤率;剥瘤的同时取脾脏,计算脾脏指数;MTT法检测NCTD对荷瘤小鼠脾脏T、B淋巴细胞增殖的影响。结果:NCTD可降低荷瘤小鼠血清sIL-2R含量,提高IFN-γ含量,抑制G422细胞小鼠移植瘤的生长;对脾脏指数影响较少,可促进荷瘤小鼠的T、B淋巴细胞增殖。结论:NCTD体内外可抑制G422细胞生长,并具有免疫调节作用。

秋水仙碱对胶质瘤细胞抑制作用的体外实验研究

目的研究秋水仙碱对G422胶质瘤细胞生长增殖的抑制作用.方法传代培养G422胶质瘤细胞,将其分为对照组、秋水仙碱处理组同时进行实验,秋水仙碱处理组的药物浓度分别为2、4、8、16μg/mL.分别在1、2、3d用MTT法测定肿瘤生存率.结果秋水仙碱能明显抑制G422胶质瘤细胞的生长,而且随着秋水仙碱的浓度增大及时间延长,肿瘤细胞的生存率也降低.秋水仙碱的浓度在64μg/mL,作用3d时,肿瘤细胞的生存率仅(16.97±1.32)%.结论秋水仙碱对G422胶质瘤细胞的生长增值有明显的抑制作用,并表现为浓度和时间依赖性.

肿瘤RNA冲击致敏树突状细胞治疗G422胶质母细胞瘤的实验研究

目的 研究G42 2肿瘤细胞RNA体外冲击致敏的树突状细胞 (DC)回输诱导体内产生保护性免疫反应及对颅内荷瘤小鼠的免疫治疗效应 ,探讨以DC为基础的疫苗对脑胶质瘤治疗的可行性。方法 提取G42 2胶质母细胞瘤RNA冲击致敏DC制成疫苗 ,分别进行免疫保护和免疫治疗的体内实验 ,以及细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)体外诱导及活性检测 ,并与PBS、未经致敏的DC、G42 2肿瘤细胞RNA组进行对照。结果 疫苗能诱导产生针对G42 2肿瘤抗原特异性CTL ,具有非常显著性差异 (P <0 0 1 ) ,接种疫苗后的小鼠能抵抗G42 2的再次攻击 (P <0 0 1 ) ,疫苗组生存期较对照组延长 (P<0 0 5)。结论 肿瘤RNA体外冲击致敏DC ,然后将之回输免疫接种至颅内荷瘤小鼠能显著地诱导机体产生抗原特异性CTL ,激活抗肿瘤T细胞 ,具有免疫保护和免疫治疗作用 。

一种G422胶质母细胞瘤瘤株标准化动物模型的建立

目的建立标准化小鼠G422胶质母细胞瘤动物模型。方法将接种G422胶质母细胞瘤昆明小鼠的皮下肿瘤,接种于国际标准化小鼠双侧上肢皮下,每侧分别注射0.1、0.2、0.3ml。接种后5、10、15、20d观察小鼠的生存状态及肿瘤的生长特性;用HE染色及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和S-100蛋白免疫组织化学分析。结果标准化小鼠G422胶质母细胞瘤模型生长稳定,成瘤率高,3个实验组均100%成瘤,无1例死亡(P<0.05);GFAP及S-100蛋白免疫组织化学表达有棕黄色颗粒呈强阳性,符合胶质源性肿瘤的特点。结论国际标准化小鼠G422胶质母细胞瘤模型,生长特征及病理表现与人脑胶质母细胞瘤相似,是一种较理想的动物模型。

ALA联合HPD光动力学治疗鼠G422胶质瘤肿瘤细胞内钙离子变化的研究

目的:研究ALA、HPD及ALA联合HPD光动力学治疗鼠G422胶质瘤肿瘤细胞内钙离子变化。方法:以不同剂量ALA(20、40、60、80、160mg/kg、)、HPD(1、2、3、4、5mg/kg)及不同剂量组合ALA联合HPD光动力学治疗鼠G422胶质瘤肿瘤,应用Fluo-3AM为细胞内钙离子荧光指示剂,以激光共聚焦显微镜测定对照组及光动力学组照光后立即、一天、三天肿瘤活细胞细胞内钙离子含量,并同时测定单激光、单用光敏剂、及空白对照组鼠肿瘤细胞内钙离子表达。结果:空白对照组、单激光、单加光敏剂组鼠G422胶质瘤肿瘤显示3天内钙离子荧光值维持在较恒定值,光动力组在治疗后立即组可见钙离子值明显高于未作光动力学治疗的对照组,且与光敏剂剂量增加有关,光动力学治疗后一天及三天组肿瘤细胞内钙离子值明显低于立即组及未作光动力学治疗组,且与光敏剂剂量增加有关。ALA-PDT组较HPD-PDT组更明显。联合治疗组HPD1-2mg/kg联合LA40-60mg/kg光动力学治疗组肿瘤细胞内钙离子值接近HPD 5mg/kg光动力学治疗组。结论:通过本实验可推测光动力学作用后细胞内钙离子超载可能在细胞凋亡及死亡中发挥重要作用。二光敏剂联合可提高疗效,降低HPD光敏剂用量,减少皮肤光毒副反应,HPD1-2 mg/kg联合ALA40-60 mg/kg是较合适的剂量。

腺病毒介导的TEM8抑制小鼠在体胶质瘤模型的血管生成作用

目的探讨基于TEM8的腺病毒(Ad-TEM8)对小鼠胶质瘤G422细胞系体内外模型的生长抑制及其抗血管的生成作用。方法连续皮下注射Ad-TEM8使其激活小鼠免疫系统并收集小鼠脾淋巴细胞,将该细胞与G422细胞体外共培养,检测G422细胞的生长抑制率,并应用ELISOT检测该免疫激活淋巴细胞在体外分泌IFN-γ的能力。另构建皮下荷G422昆明小鼠在体肿瘤模型,并连续皮下注射Ad-TEM8后检测肿瘤生长速度以及瘤内血管抑制效应。结果 Ad-TEM8能有效激发小鼠产生具有肿瘤生长抑制作用的毒性效应淋巴细胞,并分泌IFN-γ。Ad-TEM8皮下注射诱导的细胞毒性作用能有效抑制在体G422肿瘤生长,产生明显的血管生成抑制作用。结论 Ad-TEM8可诱导小鼠产生细胞毒性细胞、抑制在体和体外肿瘤细胞生长,其在体抑制肿瘤生长作用机制之一可能是抑制肿瘤内血管生成。TEM8可能成为抗胶质瘤血管生成治疗的新靶标。