冷冻联合5-氟尿嘧啶对G422胶质瘤细胞凋亡的影响

背景与目的:冷冻与5-氟尿嘧啶(5-FU)均能诱导胶质瘤细胞凋亡,二者联合应用能否产生协同效应尚未知。本实验旨在观察冷冻联合5-FU对胶质瘤细胞凋亡的影响,并对其内在的分子机制进行探讨。方法:(1)建立G422胶质瘤动物模型,随机分组,分别施以冷冻(-180℃,90s)、化疗(5-FU18mg/kg)、冻化疗;(2)TUNEL法观察不同时间点各组细胞凋亡的变化;(3)免疫组化方法检测冷冻后HSP90α及p53蛋白的表达。结果:冷冻与5-FU均能引起肿瘤细胞凋亡,二者联合应用后细胞凋亡率明显增加;联合组于冻化疗后6、12、24、48、72h细胞凋亡数(每0.0625mm2范围内的细胞个数)分别为30.6±11.7、86.4±21.5、128.1±4.1、237.0±30.1、72.8±23.0,均明显多于冷冻组和化疗组。冷冻中心区无HSP90α和p53的阳性表达,冷冻后周边区表达比对照组高,尤以冻后48h最为明显犤分别为(73.1±9.3)%vs(60.6±9.9)%、(35.6±6.6)%vs(13.7±6.5)%(P<0.01)犦。冻后HSP90α与p53的表达呈正相关(r=0.3610,P<0.01)。结论:冷冻联合5-FU能够明显提高G422胶质瘤的细胞凋亡率,其发生机制可能与冷冻后HSP90α与p53表达调节有关;冷冻与化疗的联合应用较单纯冷冻或化疗作用恶性胶质瘤效果更为明显。

冷冻治疗对G422胶质瘤细胞凋亡的影响

目的 研究局部冷冻对G422胶质瘤细胞凋亡及其调控机制的影响。方法 建立小鼠脑胶质瘤动物模型,于冷冻治疗后6、12、24、48、72 h留取标本,用光镜、末端标记法(TUNEL)、DNA凝胶电泳检测细胞凋亡,用免疫组化技术检测凋亡相关基因bcl-2、bax的表达产物。结果G422胶质瘤经冷冻治疗后,冷冻灶中心区呈坏死改变,冷冻周边区出现凋亡的形态学改变,DNA呈“梯状”降解,冷冻后各时间点凋亡细胞数目均明显多于对照组(P<0.01)。bax表达阳性细胞数也多于对照组(P<0.05),而冷冻对bcl-2表达无明显影响。结论 除坏死外,诱导细胞凋亡可能是冷冻杀伤胶质瘤细胞的另一重要机制;这种细胞凋亡可能是通过上调bax基因的表达来实现。

G422胶质瘤冷冻后出现凋亡及其意义

目的观察Ｇ４２２胶质瘤局部冷冻后出现细胞凋亡，并探讨细胞凋亡在冷冻杀伤机制中的可能作用及意义。方法建立胶质瘤动物模型，用ＴＵＮＥＬ法、ＤＮＡ电泳检测细胞凋亡。结果Ｇ４２２胶质瘤经冷冻治疗后，冷冻中心区显示坏死改变，冷冻周边区出现许多凋亡细胞，峰值在冷冻后２４～４８小时。结论冷冻治疗不仅可导致胶质瘤细胞坏死，而且可诱导其凋亡，这可能是冷冻杀伤胶质瘤细胞的机制之一。

人参皂苷对小鼠G_(422)胶质瘤免疫功能的影响

目的:探索人参皂苷对小鼠G422胶质瘤免疫功能的影响。方法:建立小鼠G422胶质瘤腋下肿瘤模型,将实验分为生理盐水(Saline)组、不同剂量人参皂苷组,观察肿瘤生长情况;通过荷瘤小鼠免疫器官指数测定、碳粒廓清法小鼠单核巨噬功能的测定初步评价人参皂苷对小鼠G422胶质瘤免疫功能的影响。结论:人参皂苷抑制小鼠G422胶质瘤可能与其刺激机体免疫器官,增加巨噬细胞吞噬功能有关。

魟鱼软骨多糖对小鼠G_(422)胶质瘤血管形成的影响

目的:观察魟鱼软骨多糖对小鼠G422胶质瘤血管形成及瘤组织VEGF mRNA和蛋白表达的影响。方法:建立小鼠G422胶质瘤腋下肿瘤模型,将实验分为生理盐水(Saline)组、不同剂量魟鱼软骨多糖(RCG)组、环磷酰胺(CTX)组,观察肿瘤生长情况,绘制肿瘤生长曲线,CD31免疫组织化学染色计数肿瘤组织微血管密度(M icrovessel density,MVD),采用RT-PCR和W estern b lot技术检测瘤组织血管内皮生长因子(Vascu lar endothelial growth factor,VEGF)mRNA和蛋白表达。结果:魟鱼软骨多糖各剂量组小鼠的肿瘤生长曲线平缓,MVD显著减少,VEGF mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论:魟鱼软骨多糖明显抑制小鼠G422胶质瘤的生长,抑制肿瘤的血管形成,可能与其下调肿瘤VEGF mRNA和蛋白表达有关。

冷冻对小鼠G_(422)胶质瘤血管生成及VEGF表达的实验研究

目的 :研究冷冻对G4 2 2 胶质瘤瘤周血管生成及血管内皮生长因子 (VEGF)蛋白表达的影响 ,以及VEGF蛋白表达与微血管计数 (MVC)之间的关系。方法 :建立小鼠G4 2 2 胶质瘤腋下肿瘤模型 ,随机分为对照组及冷冻组 ,实施冷冻手术后在不同时间段用免疫组化方法检测肿瘤周边的MVC及VEGF蛋白表达。结果 :冷冻组MVC及VEGF蛋白表达均出现下降 ,低峰值出现在 2、3d ,然后缓慢回升 ,对照组各时间段MVC及VEGF蛋白表达无明显变化 (P>0 .0 5 )。VEGF蛋白表达与MVC显著正相关 (r=0 .87P <0 .0 1)。结论 :冷冻可明显减低肿瘤周边新生毛细血管的密度和降低VEGF的表达水平 。

ALA联合HPD光动力学治疗对鼠G422胶质瘤影响的研究

目的:通过鼠G422胶质瘤研究确定ALA联合小剂量HPD激光光动力疗法促使肿瘤细胞凋亡及死亡的光敏药用药剂量及与两者单独使用的差别。方法:以不同剂量的HPD(1、2、3、4、5 mg/kg)、ALA(20、40、60、80、160 mg/kg)、两者联合口服与静脉注射鼠G422脑胶质瘤瘤模型,随后以630nm半导体激光200mW/cm^2照射肿瘤,照射20分钟,及与不用光敏剂单照激光、单用光敏剂不照光、不用光敏剂不照激光空白对照组比较。以流式细胞仪、电镜观察促使肿瘤细胞凋亡或死亡的差别,病理,肿瘤生长曲线观察治疗肿瘤,促使肿瘤细胞凋亡及死亡的最小合适剂量。结果:HPD1-2mg/kg联合ALA40-60 mg/kg给药,630半导体激光200mW/cm^2,照射20分钟组,从流式细胞仪测定细胞凋亡、死亡及电镜、病理及肿瘤生长曲线形态学观察,其是能达到较佳的细胞凋亡、死亡的最小、合适的光敏剂剂量。单纯ALA-PDT组中能达到鼠G422胶质瘤细胞明显凋亡的最小剂量是ALA(80-160mg/kg),单纯HPD-PDT组是HPD4-5mg/kg。结论:HPD1-2mg/kg配合ALA40-60mg/kg,630半导体激光200mW/cm^2,照射20分钟是能达到鼠G422胶质瘤细胞明显凋亡死亡,治疗肿瘤合适的最小光敏剂剂量。

重组腺病毒介导mIL-4基因转染的G422胶质母细胞瘤体外生物学特性及体内致瘤性的改变

以重组的复制缺陷性腺病毒为载体将鼠IL-4基因转染G422小鼠脑胶质母细胞瘤细胞,观察其体外生物学特性和体内致瘤性的变化。结果显示:基因转染的肿瘤细胞有目的基因mRNA的表达,分泌高水平的mIL-4,和野生型G422细胞相比,其体外的细胞增殖能力无显著差异,而接种皮下后肿瘤生长延缓、小鼠的存活期延长。

ALA联合HPD光动力学治疗鼠G422胶质瘤肿瘤细胞内钙离子变化的研究

目的:研究ALA、HPD及ALA联合HPD光动力学治疗鼠G422胶质瘤肿瘤细胞内钙离子变化。方法:以不同剂量ALA(20、40、60、80、160mg/kg、)、HPD(1、2、3、4、5mg/kg)及不同剂量组合ALA联合HPD光动力学治疗鼠G422胶质瘤肿瘤,应用Fluo-3AM为细胞内钙离子荧光指示剂,以激光共聚焦显微镜测定对照组及光动力学组照光后立即、一天、三天肿瘤活细胞细胞内钙离子含量,并同时测定单激光、单用光敏剂、及空白对照组鼠肿瘤细胞内钙离子表达。结果:空白对照组、单激光、单加光敏剂组鼠G422胶质瘤肿瘤显示3天内钙离子荧光值维持在较恒定值,光动力组在治疗后立即组可见钙离子值明显高于未作光动力学治疗的对照组,且与光敏剂剂量增加有关,光动力学治疗后一天及三天组肿瘤细胞内钙离子值明显低于立即组及未作光动力学治疗组,且与光敏剂剂量增加有关。ALA-PDT组较HPD-PDT组更明显。联合治疗组HPD1-2mg/kg联合LA40-60mg/kg光动力学治疗组肿瘤细胞内钙离子值接近HPD 5mg/kg光动力学治疗组。结论:通过本实验可推测光动力学作用后细胞内钙离子超载可能在细胞凋亡及死亡中发挥重要作用。二光敏剂联合可提高疗效,降低HPD光敏剂用量,减少皮肤光毒副反应,HPD1-2 mg/kg联合ALA40-60 mg/kg是较合适的剂量。

γ-干扰素基因转染G422胶质母细胞瘤细胞的生物学特性

目的 研究重组腺病毒介导的小鼠γ -干扰素 (mIFN -γ)基因转染G422胶质母细胞瘤细胞的体外和体内生物学特性。方法 按重复感染度 (MOI)=1∶100转染G422细胞 (G422/mIFN -γ细胞 ) ,检测转染后不同时间mIFN -γ的表达 ;MTT法检测基因转染细胞的体外增殖活性 ,设立转染LacZ基因的病毒对照细胞和野生G422对照细胞。观察基因转染细胞接种于小鼠皮下后的成瘤性和小鼠存活期 ,LDH法检测荷瘤小鼠脾自然杀伤细胞 (NK)、细胞毒T淋巴细胞 (CTL)及腹腔巨噬细胞 (MΦ)杀伤活性。结果 mIFN -γ基因转染后2h即可在培养上清中检测到mIFN -γ表达。腺病毒mIFN -γ基因转染对体外G422细胞增殖能力无影响,而接种体内后肿瘤生长缓慢 ,小鼠存活期延长。G422/mIFN -γ细胞接种组小鼠脾NK、CTL及腹腔MΦ杀伤活性显著增强 (P<0.05)。结论 重组腺病毒可介导IFN -γ基因转染G422细胞并高效表达。IFN -γ基因转染的G422细胞具有瘤苗的作用 ,能诱导抗肿瘤免疫反应。

脑瘤散对G422脑胶质瘤小鼠的抗肿瘤作用

目的:观察脑瘤散对G422脑胶质瘤小鼠的抗肿瘤作用。方法:将70只小鼠接种G422脑胶质瘤瘤株,次日按体重分层随机分配法分为七组,分别为:模型组、脑瘤散高剂量组、脑瘤散中剂量组、脑瘤散低剂量组、阳性药对照组(CTX组)、脑瘤散低剂量+CTX组和脑瘤散高剂量+CTX组,每组10只。CTX只于第1日给药1次,模型组每日每只给予0.1 m l的生理盐水,脑瘤散连续给药11 d。各组小鼠停药后次日处死,取其肿瘤称重,计算抑瘤率,并对瘤组织进行病理学检查,实验共重复3次。结果:脑瘤散中、高剂量组小鼠瘤重均明显低于模型组(P<0.05)。脑瘤散与CTX联合用药的两组抑瘤率均高达90%以上,并高于CTX组。结论脑瘤散对小鼠G422脑胶质瘤的生长、浸润具有明显抑制作用,且可增加化疗药物的疗效。

秋水仙碱对胶质瘤细胞抑制作用的体外实验研究

目的研究秋水仙碱对G422胶质瘤细胞生长增殖的抑制作用.方法传代培养G422胶质瘤细胞,将其分为对照组、秋水仙碱处理组同时进行实验,秋水仙碱处理组的药物浓度分别为2、4、8、16μg/mL.分别在1、2、3d用MTT法测定肿瘤生存率.结果秋水仙碱能明显抑制G422胶质瘤细胞的生长,而且随着秋水仙碱的浓度增大及时间延长,肿瘤细胞的生存率也降低.秋水仙碱的浓度在64μg/mL,作用3d时,肿瘤细胞的生存率仅(16.97±1.32)%.结论秋水仙碱对G422胶质瘤细胞的生长增值有明显的抑制作用,并表现为浓度和时间依赖性.

血管抑素抑制人脑胶质瘤生长及病理学研究

目的:观察人血管抑素(Angiostatin,AS)对小鼠脑胶质瘤皮下移植瘤生长的抑制作用。方法:用MTT法观察AS对血管内皮细胞系ECV-304和人脑胶质瘤细胞系TJ-905增殖的影响;建立荷G422脑胶质瘤小鼠皮下移植模型,皮下注射AS,计算瘤体比和抑瘤率。结果:(1)AS对ECV-304的抑制作用随着剂量的增加而增强,AS对TJ-905无影响;(2)动物实验显示,AS剂量为10mg·kg^(-1)·d^(-1)和50mg·kg^(-1)·d^(-1)时抑瘤率分别为21.8％和84.3％;(3)免疫组化Ⅷ因子染色表明实验组与对照组之间在血管发育及数量方面均有差别。结论:AS在体外对胶质瘤细胞无抑制作用,在体内能通过抑制血管内皮细胞增殖而抑制胶质瘤的生长。

HPPH光动力学治疗鼠G422脑胶质瘤的实验研究

目的:通过对鼠G422脑胶质瘤脑及腋部皮下移植瘤模型HPPH光动力学治疗,从肉眼、肿瘤生长曲线、病理、观察各剂量组疗效,并与对照组及HpD作对比,寻找HPPH-PDT治疗鼠G422脑胶质瘤合适的HPPH剂量。方法:建立鼠G422脑胶质瘤脑及腋部皮下移植瘤模型,设立空白对照组、单注射HPPH 0.45 mg/kg组、单注射HpD组、单665 nm激光照射组、单630 nm激光照射组、HPPH-PDT各组(0.15 mg/kg、0.3 mg/kg、0.45 mg/kg组)、HpD-PDT 5 mg/kg组。单注射HPPH组、HPPH-PDT组和单注射HpD组、HpD-PDT组自尾静脉推注入光敏剂,24小时后以波长665 nm的半导体激光照射HPPH-PDT组和单665 nm激光照射组肿瘤,功率密度200 mW/cm2,每光斑照射17 min,能量密度为204 J/cm2;功率密度100 mW/cm2,每光斑照射34min,能量密度为204 J/cm2;以波长630 nm的半导体激光照射HpD-PDT组及单630 nm激光照射组肿瘤,功率密度200 mW/cm2,每光斑照射20 min,能量密度为240 J/cm2。肉眼观察肿瘤外形变化,测量(治疗前、3、5、7、9 d)肿瘤体积,于PDT后9 d处死鼠,取肿瘤、肿瘤边缘、正常脑组织,作病理检查。结果:可见未经光动力治疗对照组肿瘤迅速生长,第9天体积平均长至治疗前的4.86～5.97倍,HPPH-PDT 0.3 mg/kg、0.45 mg/kg组与治疗前体积平均比是0.94及0.97倍,HPPH-PDT 0.15 mg/kg组是1.09倍、HpD-PDT组是1.6倍,光动力学组肿瘤的生长速度明显低于对照组,P值<0.05,有统计学差别,HPPH-PDT各组优于HpD-PDT组。HPPH-PDT 0.3 mg/kg、0.45 mg/kg组抑瘤效果优于HPPH-PDT 0.15 mg/kg组、HpD-PDT组(P值<0.05,有统计学差别)。HPPH-PDT 0.3 mg/kg、0.45 mg/kg组抑瘤效果相似。在同样能量密度时高功率密度组第9天疗效较低能量密度稍好,但无统计学差别。故由抑瘤效果层面分析HPPH-PDT对鼠G422脑胶质瘤有抑制作用,并与HPPH剂量相关,适宜的剂量为0.3 mg/kg;HPPH-PDT对鼠G422脑胶质瘤的抑瘤作用较HpD-PDT强。从病理观察鼠G422脑胶质瘤脑及皮下移植瘤各剂量HPPH-PDT组及HpD-PDT治疗组,治疗9 d后仅个别标本肿瘤组织及细胞已消失,大部分肿瘤组织明显变性坏死,但深部仍有带活性肿瘤细胞,与对照组成巢状生长大片活性肿瘤细胞有明显差别。且坏死程度,HPPH-PDT组明显优于HpD-PDT组,0.3 mg/kg、0.45 mg/kgHPPH-PDT组优于0.15 mg/kg HPPH-PDT组,0.3 mg/kg、0.45 mg/kg HPPH-PDT组两组程度相似,故0.3mg/kg是较合适的HPPH-PDT光敏剂剂量。结论:从抑瘤效果、病理分析,HPPH-PDT对鼠G422脑胶质瘤生长有抑制作用,抑瘤效果与HPPH剂量有关,适宜的剂量为0.3 mg/kg;HPPH-PDT对鼠G422脑胶质瘤抑瘤效果较HpD-PDT强。

肿瘤RNA冲击致敏树突状细胞治疗G422胶质母细胞瘤的实验研究

目的 研究G42 2肿瘤细胞RNA体外冲击致敏的树突状细胞 (DC)回输诱导体内产生保护性免疫反应及对颅内荷瘤小鼠的免疫治疗效应 ,探讨以DC为基础的疫苗对脑胶质瘤治疗的可行性。方法 提取G42 2胶质母细胞瘤RNA冲击致敏DC制成疫苗 ,分别进行免疫保护和免疫治疗的体内实验 ,以及细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)体外诱导及活性检测 ,并与PBS、未经致敏的DC、G42 2肿瘤细胞RNA组进行对照。结果 疫苗能诱导产生针对G42 2肿瘤抗原特异性CTL ,具有非常显著性差异 (P <0 0 1 ) ,接种疫苗后的小鼠能抵抗G42 2的再次攻击 (P <0 0 1 ) ,疫苗组生存期较对照组延长 (P<0 0 5)。结论 肿瘤RNA体外冲击致敏DC ,然后将之回输免疫接种至颅内荷瘤小鼠能显著地诱导机体产生抗原特异性CTL ,激活抗肿瘤T细胞 ,具有免疫保护和免疫治疗作用 。

一种G422胶质母细胞瘤瘤株标准化动物模型的建立

目的建立标准化小鼠G422胶质母细胞瘤动物模型。方法将接种G422胶质母细胞瘤昆明小鼠的皮下肿瘤,接种于国际标准化小鼠双侧上肢皮下,每侧分别注射0.1、0.2、0.3ml。接种后5、10、15、20d观察小鼠的生存状态及肿瘤的生长特性;用HE染色及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和S-100蛋白免疫组织化学分析。结果标准化小鼠G422胶质母细胞瘤模型生长稳定,成瘤率高,3个实验组均100%成瘤,无1例死亡(P<0.05);GFAP及S-100蛋白免疫组织化学表达有棕黄色颗粒呈强阳性,符合胶质源性肿瘤的特点。结论国际标准化小鼠G422胶质母细胞瘤模型,生长特征及病理表现与人脑胶质母细胞瘤相似,是一种较理想的动物模型。

HPPH光动力治疗对鼠G422脑胶质瘤突变型p53蛋白和p16蛋白表达的影响

目的:探讨HPPH光动力治疗对鼠G422脑胶质瘤突变型p53蛋白和p16蛋白表达的影响并和HpD做比较。方法:建立鼠G422脑胶质瘤皮下移植瘤模型,设立空白对照组、单注射HPPH组(0.45mg/kg)、单665nm激光照射组、HPPH-PDT组(0.15mg/kg组、0.3mg/kg组、0.45mg/kg组)、HpD-PDT组(5mg/kg)。单注射HPPH组、HPPH-PDT组和HpD-PDT组自尾静脉推注入光敏剂,24h后以波长665nm的半导体激光照射HPPH-PDT组和单激光组肿瘤,功率密度200mW/cm^2,每光斑照射17min,能量密度为204J/cm^2;以波长630nm的半导体激光照射HpD-PDT组肿瘤,功率密度200mW/cm^2,每光斑照射20min,能量密度为240J/cm^2。于PDT后9d处死鼠行酶联免疫吸附法(ELISA)的双抗体夹心法检测HPPH-PDT和HpD-PDT后突变型p53蛋白(mutant type p53 protein,mtp53)和p16蛋白表达变化。结果:空白、单注药和单照光三组对照组之间mtp53蛋白和p16蛋白表达值两两比较,差异无统计学意义(P>0.05)。HPPH-PDT各剂量组与空白对照组比较,mtp53蛋白表达值明显降低,p16蛋白表达值明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。0.3mg/kg组和0.45mg/kg组与0.15mg/kg组相比,mtp53蛋白表达值降低,p16蛋白表达值升高,差异有统计学意义(P<0.05),0.45mg/kg组mtp53蛋白表达值稍低于0.3mg/kg组,p16蛋白表达值稍高于0.3mg/kg组,差异无统计学意义(P>0.05)。HPPH-PDT0.3mg/kg组和0.45mg/kg组的mtp53蛋白表达值低于HpD-PDT组,p16蛋白表达值高于HpD-PDT组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HPPH-PDT0.3mg/kg是适宜的HPPH剂量。HPPH-PDT诱导mtp53蛋白表达降低,p16蛋白表达升高。与HpD-PDT相比,HPPH-PDTmtp53蛋白表达更低,p16蛋白表达更高。

HPPH光动力治疗对鼠G422脑胶质瘤缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响

目的:探讨HPPH光动力治疗对鼠G422脑胶质瘤脑部及腋部皮下移植瘤缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响并和HpD-PDT做比较。方法:建立鼠G422脑胶质瘤、腋部皮下移植瘤模型,设立空白对照组、单注射HPPH 0.45mg/kg组、单665nm激光照射组、单630nm激光照射组、HPPH-PDT组(0.15、0.3、0.45mg/kg组)、HpD-PDT 5mg/kg组。单注射HPPH组、HPPH-PDT组和HpD-PDT组自尾静脉推注入光敏剂,24h后以波长665nm的半导体激光照射HPPHPDT组和单激光组肿瘤,功率密度200mW/cm^2,每光斑照射17min,能量密度为204J/cm^2;以波长630nm的半导体激光照射HpD-PDT组肿瘤,功率密度200mW/cm^2,每光斑照射20min,能量密度为240J/cm^2。于PDT后9d处死鼠,取肿瘤、肿瘤边缘、正常脑组织及血液,行酶联免疫吸附法(ELISA)的双抗体夹心法检测HPPH-PDT和HpD-PDT后及对照组缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)。结果:鼠G422脑胶质瘤脑部及腋部皮下移植瘤,空白、单注药和单照光三组对照组之间缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达值两两比较,P>0.05,差别无统计学意义。不同剂量HPPH、HpD光敏剂PDT治疗鼠G422脑胶质瘤脑部移植瘤,HIF-1α、VEGF平均值,HPPH-PDT各组较HpD-PDT低,0.3mg/kg-PDT组、0.45mg/kg-PDT组低于0.15mg/kg-PDT组及HpD-PDT组,P<0.05,有显著差异。HPPH-PDT 0.3mg/kg-PDT组、0.45mg/kg-PDT二组值接近。HPPH-PDT 0.3mg/kg-PDW组、0.45mg/kg-PDT接近正常脑值,0.15mg/kg-PDT及HpD-PDT组稍高于正常脑值,但P>0.05,无显著差异,HPPH-PDT各组及HpD-PDT组值均明显低于对照组(空白组、单注HPPH、单注射HpD组、单665nm激光照射组、单630nm激光照射组),P值<0.05,有显著差异。各组肿瘤边缘的值稍高于肿瘤值,血液的值较肿瘤低,接近或稍高于正常脑值。不同剂量HPPH、HPD光敏剂PDT治疗鼠G422胶质瘤腋部皮下移植瘤HIF-1α、VEGF平均值,HPPH-PDT各组较HpD-PDT低,0.3mg/kg-PDT组、0.45mg/kg-PDT组低于0.15mg/kg-PDW组及HpD-PDT组,P<0.05,有显著差异,HPPH-PDT0.3mg/kg-PDT组、0.45mg/kg-PDT二组值接近。HPPH-PDT各组及HpD-PDT组值均明显低于对照组(空白组、单注HPPH、单注HpD对侧未治疗组、单665nm激光照射组、单630nm激光照射组),且P<0.05,有显著差异。各组肿瘤边缘的值稍高于肿瘤值,血液的值较肿瘤低,接近或稍高于正常脑值。结论:HPPH-PDT能诱导缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达降低,与HpD-PDT相比,表达更低。HPPH-PDT疗效优于HpD-PDT,本实验条件下HPPH-PDT 0.3mg/kg是较合适的光敏剂剂量。

HPPH光动力治疗对鼠G422脑胶质瘤各部位突变型p53蛋白和p16蛋白表达及与HpD-PDT对比

目的:探讨HPPH光动力治疗对鼠G422脑胶质瘤脑及腋部皮下移植瘤各部位mtp53蛋白和p16蛋白表达的影响并和HpD-PDT做比较。方法:建立鼠G422脑胶质瘤脑及腋部皮下移植瘤模型,设立空白对照组、单注射HPPH 0.45mg/kg组、单注射HPD 5 mg/kg组、单665 nm激光照射组、单630n m激光照射组、HPPH-PDT各组(0.15 mg/kg组、0.3 mg/kg组、0.45 mg/kg组)、HpD-PDT 5 mg/kg组。单注射HPPH组、HPPH-PDT组和单注射HPD组、HpD-PDT组自尾静脉注入光敏剂,24 h后以波长665 nm的半导体激光照射HPPH-PDT组和单665 nm激光组肿瘤,功率密度200 mW/cm^2,每光斑照射17 min,能量密度为204 J/cm^2;以波长630 nm的半导体激光照射HpD-PDT组及单630 nm激光组肿瘤,功率密度200 mW/cm^2,每光斑照射20 min,能量密度为240 J/cm^2。于PDT后9 d处死鼠行酶联免疫吸附法(ELISA)的双抗体夹心法检测HPPH-PDT和HpD-PDT后肿瘤及对照组各部位(肿瘤、肿瘤边缘、正常脑组织)、血液突变型p53蛋白(mutant type p53 protein,mtp53)和p16蛋白表达变化。结果:空白、单注药和单照光三组对照组之间mtp53蛋白和p16蛋白表达值两两比较,P>0.05,差别无统计学意义。HPPH-PDT各剂量组及HPD-PDT组与空白对照组比较,mtp53蛋白表达值明显降低,p16蛋白表达值明显升高,P<0.01,差别有统计学意义。且接近正常脑组织值,或p16蛋白表达稍低于正常脑值,mtp53蛋白值表达稍高于正常脑组织值。0.3mg/kg和0.45mg/kg HPPH-PDT组与0.15 mg/kg HPPH-PDT组及HPD-PDT相比,mtp53蛋白表达值降低,p16蛋白表达值升高,P<005,差别有统计学意义,0.45 mg/kgHPPH-PDT组mtp53蛋白表达值稍低于0.3 mg/kgHPPH-PDT组,p16蛋白表达值稍高于0.3 mg/kgHPPH-PDT组,P>0.05,差别无统计学意义。HPPH-PDT0.3 mg/kg组的mtp53蛋白表达值低于HpD-PDT5 mg/kg组,p16蛋白表达值高于HpD-PDT 5 mg/kg组,P<0.05,差别有统计学意义。肿瘤边缘mtp53蛋白值稍高于肿瘤值,血液低于肿瘤值;p16蛋白值肿瘤边缘稍低于肿瘤值,血液高于肿瘤值。结论:HPPH-PDT能诱导mtp53蛋白表达降低,p16蛋白表达升高。与HpD-PDT相比,HPPH-PDTmtp53蛋白表达更低,p16蛋白表达更高。本次实验条件下HPPH 0.3 mg/kg是适宜的HPPH-PDT剂量。

HPPH光动力学治疗鼠G422脑胶质瘤诱导肿瘤细胞凋亡的实验观察

目的:通过对鼠G422脑胶质瘤脑及腋部皮下移植瘤模型的HPPH光动力学治疗,从电镜、FCM测定细胞凋亡率,观察各剂量组疗效,并与对照组及HpD-PDT作对比,寻找HPPH-PDT治疗鼠G422脑胶质瘤合适的HPPH剂量。方法:建立鼠G422脑胶质瘤脑及腋部皮下移植瘤模型,设立空白对照组、单注射HPPH 0.45 mg/kg组、单注射HpD组、单665 nm激光照射组、单630 nm激光照射组、HPPH-PDT各组(0.15、0.3、0.45 mg/kg组)、HpD-PDT 5 mg/kg组。单注射HPPH组、HPPH-PDT组和单注射HpD组、HpD-PDT组自尾静脉注入光敏剂,24 h后以波长665 nm的半导体激光照射HPPH-PDT组和单665 nm激光组肿瘤,功率密度200 mW/cm^2,每光斑照射17 min,能量密度为204 J/cm^2;以波长630 nm的半导体激光照射HpD-PDT组及单630nm激光照射组肿瘤,功率密度200 mW/cm^2,每光斑照射20 min,能量密度为240 J/cm^2。于PDT后9 d处死鼠,取肿瘤、肿瘤边缘、正常脑组织,作电镜、FCM细胞凋亡检查。结果:以流式细胞仪及电镜观察肿瘤细胞凋亡,显示鼠G422脑胶质瘤脑及皮下移植瘤HPPH-PDT各剂量组、HpD-PDT组与空白、单注药和单照光三组对照组比较,肿瘤细胞凋亡率明显升高,P<0.01,差别有统计学意义。HPPH-PDT各组细胞凋亡率高于HpD-PDT组,0.3 mg/kg、0.45 mg/kgHPPH-PDT组的细胞凋亡率明显高于0.15 mg/kgHPPH-PDT组,HpD-PDT组,P<0.01,差别有统计学意义,0.45 mg/kg HPPH-PDT组细胞凋亡率稍高于0.3 mg/kgHPPH-PDT组,P>0.05,差别无统计学意义。故HPPH0.3 mg/kg是适宜的HPPH-PDT光敏剂剂量。HPPH-PDT0.3 mg/kg组和HpD-PDT组比较,肿瘤细胞凋亡率明显升高,P<0.01,差别有统计学意义。故由肿瘤细胞凋亡率和电镜分析,HPPH-PDT能诱导鼠G422脑胶质瘤细胞凋亡,凋亡率与HPPH剂量相关,适宜的剂量为0.3 mg/kg;HPPH-PDT诱导鼠G422脑胶质瘤细胞凋亡的作用较HpD-PDT强。结论:从电镜、FCM观察HPPH-PDT对鼠G422脑胶质瘤生长有抑制作用,能诱导肿瘤细胞凋亡及死亡。凋亡率与HPPH剂量有关,适宜的剂量为0.3 mg/kg;HPPH-PDT诱导鼠G422脑胶质瘤细胞凋亡的作用较HpD-PDT强。