拉米夫定耐药患者乙型肝炎病毒聚合酶基因G743C和G743A点突变的检测及分析

目的 探讨拉米夫定耐药患者乙型肝炎病毒聚合酶(HBV P)基因点突变。 方法 聚合酶链反应(PCR)扩增拉米夫定耐药患者的HBV P基因,产物经直接测序检测其YMDD变异;同时,用PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析测序后的17例YIDD变异样本,先用3对引物扩增HBV P基因,再分别用3个限制性内切酶Fok I、Ssp I、Alw441酶切扩增产物,酶切产物用8.0％聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。 结果 拉米夫定耐药患者HBV P基因PCR产物序列分析结果与GenBank的HBV标准株相比,发现16例存在HBV P基因G743C点突变和1例存在G743A点突变。其核苷酸序列由ATG变为ATC和ATA,YMDD基因序列发生变异,即由YMDD变异为YIDD;但是,PCR-RFLP不能确定这17例样本存在YIDD变异。 结论 拉米夫定耐药患者存在HBV P基因G743C和G743A的点突变,同样引起YIDD变异;而PCR-RFLP法不能准确地检测出G743C和G743A的点突变;该发现对HBV P基因YMDD变异检测和临床均有指导意义。