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广藿香PcGA2ox1基因克隆、VIGS载体构建和表达分析
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作者 严雅玲 曾晴 +2 位作者 严寒静 何梦玲 张宏意 《山东农业科学》 北大核心 2024年第5期19-26,共8页
赤霉素2-氧化酶(gibberellin 2-oxidases,GA2ox)是赤霉素(GAs)代谢途径关键酶,调节活性GAs降解,在植物株型调控中发挥重要作用。为探寻GA2ox基因在广藿香中的功能,本研究对广藿香PcGA2ox1基因进行克隆,得到561 bp的CDS序列。生物信息学... 赤霉素2-氧化酶(gibberellin 2-oxidases,GA2ox)是赤霉素(GAs)代谢途径关键酶,调节活性GAs降解,在植物株型调控中发挥重要作用。为探寻GA2ox基因在广藿香中的功能,本研究对广藿香PcGA2ox1基因进行克隆,得到561 bp的CDS序列。生物信息学分析结果表明,PcGA2ox1蛋白编码186个氨基酸,为亲水性蛋白,分子量为20.98 kDa,等电点为5.81,不含信号肽,无跨膜结构域,具有GA2ox超基因家族的保守结构域,主要定位在细胞核。系统发育分析结果显示,PcGA2ox1基因与丹参GA2ox7的亲缘关系最为密切。qRT-PCR结果显示,PcGA2ox1基因在广藿香中的表达具有组织特异性,叶中表达量最高,根中表达量最低。用病毒诱导基因沉默(VIGS)技术侵染广藿香的结果显示,侵染两周后,PcGA2ox1基因表达量比阴性对照下降83%,比空白对照下降71%,沉默效果明显。本研究结果可为深入了解PcGA2ox1结构、功能和作用机理奠定基础,并为广藿香优良品种选育提供参考。 展开更多
关键词 广藿香 赤霉素2-氧化酶(ga2ox) 基因克隆 病毒诱导基因沉默(VIGS) 表达分析
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马铃薯GA2ox家族基因响应赤霉素(GA)和低温胁迫表达分析 被引量:2
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作者 刘计涛 王梦诗 +5 位作者 索海翠 王丽 单建伟 李成晨 安康 李小波 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第5期1110-1119,共10页
本研究基于结构域筛选马铃薯(Solanum tuberosum)基因组,获得13个StGA2ox基因家族成员。生物信息学分析结果显示,StGA2ox家族基因分为C19和C202个家族,其中C19又分为2个亚族,13个StGA2ox基因不均匀得分布于8条染色体上,其中有5对共线性... 本研究基于结构域筛选马铃薯(Solanum tuberosum)基因组,获得13个StGA2ox基因家族成员。生物信息学分析结果显示,StGA2ox家族基因分为C19和C202个家族,其中C19又分为2个亚族,13个StGA2ox基因不均匀得分布于8条染色体上,其中有5对共线性基因对,7号染色体上有3个基因形成1个串联重复基因簇。此外,StGA2ox启动子区域存在响应低温胁迫、植物激素等多种顺式作用元件。利用实时荧光定量PCR方法分析外源GA_(3)和低温胁迫处理条件下StGA2ox表达模式,所有StGA2ox基因均能够被外源GA_(3)诱导表达,其中StGA2ox2、StGA2ox4、StGA2ox8、StGA2ox9和StGA2ox10受低温胁迫诱导表达显著上调,暗示着这5个基因在调节马铃薯低温胁迫耐性中发挥重要功能,可以作为进一步开展马铃薯耐低温研究的候选基因。 展开更多
关键词 马铃薯 ga2ox基因 生物信息学分析 赤霉素(ga) 低温胁迫
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Genome-Wide Identification, Evolution and Expression Analyses of GA2ox Gene Family in Brassica napus L.
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作者 Yanhua Li Hualei Huang +8 位作者 Youming Shi Shuqin Huang Tao Liu Changming Xiao Xiaoqing Tian Ping Zhao Xiaoyan Dai Taocui Huang Yan Zhou 《Phyton-International Journal of Experimental Botany》 SCIE 2023年第3期815-835,共21页
Gibberellin 2-oxidases(GA2ox)are important enzymes that maintain the balance of bioactive GAs in plants.GA2ox genes have been identified and characterized in many plants,but these genes were not investigated in Brassi... Gibberellin 2-oxidases(GA2ox)are important enzymes that maintain the balance of bioactive GAs in plants.GA2ox genes have been identified and characterized in many plants,but these genes were not investigated in Brassica napus.Here,we identified 31 GA2ox genes in B.napus and 15 of these BnaGA2ox genes were distributed in the A and C subgenomes.Subcellular localization predictions suggested that all BnaGA2ox proteins were localized in the cytoplasm,and gene structure analysis showed that the BnaGA2ox genes contained 2–4 exons.Phylogenetic analysis indicated that BnGA2ox family proteins in monocotyledons and dicotyledons can be divided into four groups,including two C_(19)-GA2ox and two C_(20)-GA2ox clades.Group 4 is a C_(20)-GA2ox Class discovered recently.Most BnaGA2ox genes had a syntenic relationship with AtGA2ox genes.BnaGA2ox genes in the C subgenome had experienced stronger selection pressure than genes in the A subgenome.BnaGA2ox genes were highly expressed in specific tissues such as those involved in growth and development,and most of them were mainly involved in abiotic responses,regulation of phytohormones and growth and development.Our study provided a valuable evolutionary analysis of GA2ox genes in monocotyledons and dicotyledons,as well as an insight into the biological functions of GA2ox family genes in B.napus. 展开更多
关键词 Brassica napus ga2ox gene family EVOLUTION expression patterns
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GA2ox1氧化酶基因的克隆及原核表达 被引量:6
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作者 常丽 赵小英 +3 位作者 郭明 林建中 李秀山 刘选明 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1099-1104,共6页
采用RT-PCR从拟南芥基因组中克隆到GA2ox1基因,通过Gateway克隆技术构建原核重组表达载体pD-EST17-GA2ox1,并转化大肠杆菌BL(21)star,对蛋白原核表达条件进行优化。结果表明,最佳表达条件为温度30℃、IPTG浓度0.2 mmol/L、诱导6 h。蛋... 采用RT-PCR从拟南芥基因组中克隆到GA2ox1基因,通过Gateway克隆技术构建原核重组表达载体pD-EST17-GA2ox1,并转化大肠杆菌BL(21)star,对蛋白原核表达条件进行优化。结果表明,最佳表达条件为温度30℃、IPTG浓度0.2 mmol/L、诱导6 h。蛋白表达形式为包涵体,与Biotech对GA2ox1基因在大肠杆菌中的表达情况推测的结论一致。重组蛋白分子质量约为40 kD,经Ni Sepharose亲和层析柱纯化和Western blot鉴定得纯度90%以上的GA2ox1重组蛋白。研究结果为GA2ox1抗体制备及蛋白功能的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 ga2ox1基因 gateway克隆 原核表达 纯化 WESTERN BLOT
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苹果茎尖组织中GA2ox基因的结构特征及蛋白序列的生物信息学分析 被引量:5
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作者 白牡丹 王彩虹 +2 位作者 田义轲 陈宝印 刘云龙 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第5期55-59,共5页
GA2ox是赤霉素合成代谢的关键酶,以苹果品种富士茎尖为供试材料,应用同源克隆技术克隆GA2ox基因,获得长度为1 656 bp的DNA序列和1 014 bp cDNA序列。对比分析表明,DNA序列存在3个外显子和2个内含子。GA2ox的开放性阅读框编码337个氨基... GA2ox是赤霉素合成代谢的关键酶,以苹果品种富士茎尖为供试材料,应用同源克隆技术克隆GA2ox基因,获得长度为1 656 bp的DNA序列和1 014 bp cDNA序列。对比分析表明,DNA序列存在3个外显子和2个内含子。GA2ox的开放性阅读框编码337个氨基酸残基,推断其相对分子量为37.679 8 kDa,等电点为6.41。蛋白质结构域检索表明,GA2ox属于依赖于2-酮戊二酸的双加氧酶家族成员;氨基酸同源性分析表明,GA2ox与已报道的其他植物的GA2ox氨基酸序列同源性为51%~97%;氨基酸聚类分析表明,苹果和梨首先聚类,其次是毛果杨。 展开更多
关键词 苹果 ga2ox 保守结构域 氨基酸同源性分析 氨基酸聚类分析
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柱型与普通型苹果茎尖组织中GA2ox基因的序列比较及表达量分析 被引量:3
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作者 白牡丹 王彩虹 +2 位作者 田义轲 刘云龙 陈宝印 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期124-127,共4页
以柱型苹果舞姿和普通型苹果富士茎尖为试材,克隆赤霉素合成代谢途径中的关键酶基因GA2ox,并对二者茎尖组织中GA2ox基因进行序列比较和表达分析。结果表明,两品种中GA2ox基因cDNA序列长度均为1 014bp,编码337个氨基酸。cDNA序列中存在2... 以柱型苹果舞姿和普通型苹果富士茎尖为试材,克隆赤霉素合成代谢途径中的关键酶基因GA2ox,并对二者茎尖组织中GA2ox基因进行序列比较和表达分析。结果表明,两品种中GA2ox基因cDNA序列长度均为1 014bp,编码337个氨基酸。cDNA序列中存在2处单核苷酸差异,其中1处差异会引起编码氨基酸的改变。与已发表的苹果基因组中同源序列的比较分析表明,舞姿和富士cDNA序列上的差异不是造成柱型性状的原因。同时,利用实时荧光定量PCR方法,对两品种及其杂交F1代杂种的检测表明,柱型苹果茎尖中GA2ox基因的表达量明显低于普通型苹果。 展开更多
关键词 苹果 ga2ox基因 CDNA序列 定量表达分析
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核桃JrGA2ox基因的克隆、亚细胞定位及功能验证 被引量:9
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作者 张佳琦 胡恒康 +8 位作者 徐川梅 胡渊渊 黄有军 夏国华 黄坚钦 常英英 叶磊 娄和强 张启香 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第2期50-60,共11页
【目的】GA2-oxidase(GA2ox)是赤霉素合成过程中起负调控作用的一种关键酶,能够催化有活性的赤霉素为无活性的赤霉素,从而对植物生长起到一定的抑制作用。本研究主要对核桃中赤霉素氧化酶基因JrGA2ox进行克隆及功能验证,有利于进一步探... 【目的】GA2-oxidase(GA2ox)是赤霉素合成过程中起负调控作用的一种关键酶,能够催化有活性的赤霉素为无活性的赤霉素,从而对植物生长起到一定的抑制作用。本研究主要对核桃中赤霉素氧化酶基因JrGA2ox进行克隆及功能验证,有利于进一步探究核桃JrGA2ox基因在植物生长和发育过程中,尤其是在植物株高调控中的作用,从而助力于挖掘与利用核桃中更多的优质基因,培育出更多优良的核桃品种。【方法】采用PCR扩增技术,克隆获得核桃JrGA2ox基因的全长编码序列,进一步通过In-Fusion克隆技术构建具有强启动子的35S∷JrGA2ox∷GFP过表达载体;利用BLAST网络在线工具得到其他植物中的JrGA2ox同源氨基酸序列,并对其进行氨基酸同源序列比对和系统进化分析;其后,通过亚细胞定位揭示其发挥功能的场所,进一步利用农杆菌介导法将构建好的过表达载体转化到核桃体细胞胚中,获得JrGA2ox超表达的阳性转化植株,深入分析JrGA2ox基因的生物学特性。【结果】通过基因克隆,得到1条JrGA2ox开放阅读框,其全长为1 056 bp,共编码351个氨基酸,分子量为39.25 kDa。通过比对发现,该基因编码的蛋白序列含有保守2OG-FeII-Oxy蛋白结构域,具有GA2-氧化酶蛋白家族共同的结构特点,表明JrGA2ox属于GA2-氧化酶基因家族。氨基酸进化树比对分析结果显示,核桃JrGA2ox与毛白杨PtGA2ox聚为一个分支。且JrGA2ox蛋白与木本植物川桑MnGA2ox1、西洋梨PcGA2ox、桃PpGA2ox1及苹果MdGA2ox1蛋白序列同源性较高。烟草叶片表皮细胞亚细胞定位分析表明,JrGA2ox是定位于细胞核与细胞膜中的蛋白。对核桃体细胞胚进行基因遗传转化后经荧光检测及PCR验证表明,35S∷JrGA2ox∷GFP过表达载体被成功转入核桃体细胞胚中。阳性再生植株株高与对照苗相比具显著性差异,其平均株高为对照植株的1/2;且其株高与JrGA2ox基因表达量呈负相关。【结论】核桃JrGA2ox蛋白亚细胞定位于细胞核与细胞膜中。JrGA2ox基因调控核桃株高,主要起到负调节作用。阳性基因转化再生植株中JrGA2ox基因的表达量升高,并表现出明显的矮化特征。本研究结果可为进一步分析该基因在核桃生长发育过程中的作用提供技术参考,且为优良的矮化核桃品种选育奠定一定的基础。 展开更多
关键词 核桃 ga2ox基因 过表达 亚细胞定位 同源转化
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巴西蕉和超级矮蕉中MaGA2ox1基因的克隆和表达模式分析
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作者 杨医境 程志号 +3 位作者 郭素霞 孙长君 王贤智 吴琼 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2024年第6期1834-1841,共8页
为了培育抗倒伏矮秆香蕉,本研究以常规栽培种巴西蕉(Musa spp. Baxi, BX)和超级矮蕉(super dwarf cavendish, SDC)为材料,对二者GA2ox基因进行克隆、荧光定量表达和烟草亚细胞定位分析发现,该基因cDNA全长990 bp,编码329个氨基酸,其编... 为了培育抗倒伏矮秆香蕉,本研究以常规栽培种巴西蕉(Musa spp. Baxi, BX)和超级矮蕉(super dwarf cavendish, SDC)为材料,对二者GA2ox基因进行克隆、荧光定量表达和烟草亚细胞定位分析发现,该基因cDNA全长990 bp,编码329个氨基酸,其编码蛋白的氨基酸序列在这两种材料中完全一致;蛋白分子量为36.4 k D,等电点为6.27,无跨膜区和信号肽;MaGA2ox1基因所合成的蛋白质序列与椰子、水稻、拟南芥的亲缘关系最为密切;该基因定位于在细胞膜和细胞核中;五叶一心期,巴西蕉的根、叶片、心叶等组织中MaGA2ox1基因表达均高于SDC;十叶一心期,巴西蕉的老叶和根组织中的MaGA2ox1基因表达量高于SDC,在嫩叶和心叶组织中MaGA2ox1基因表达量低于SDC,两时期MaGA2ox1基因的总组织表达量巴西蕉高于SDC。本研究为解析香蕉形态建成过程中GA2ox氧化酶的调控机制提供一定的参考。 展开更多
关键词 香蕉 ga2ox1 系统进化树 亚细胞定位 表达模式分析
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Rht16矮秆小麦中GA2ox-A9(Rht18)基因的克隆与表达分析 被引量:1
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作者 林珊 魏淑红 +3 位作者 杨在君 廖明莉 陈真勇 吴一超 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2023年第9期2796-2805,共10页
赤霉素2-氧化酶(GA2ox)是赤霉素降解途径的一种关键酶,在茎的伸长中起着关键作用。为探讨GA2ox-A9(Rht18)与Rht16矮秆小麦矮化之间的关系,本研究利用同源克隆方法从硬粒小麦株高近等基因系ANW16F(含矮秆基因Rht16)和高秆材料LD222中分... 赤霉素2-氧化酶(GA2ox)是赤霉素降解途径的一种关键酶,在茎的伸长中起着关键作用。为探讨GA2ox-A9(Rht18)与Rht16矮秆小麦矮化之间的关系,本研究利用同源克隆方法从硬粒小麦株高近等基因系ANW16F(含矮秆基因Rht16)和高秆材料LD222中分别分离得到GA2ox-A9-1和GA2ox-A9-2基因,并对其进行生物信息学分析和表达模式分析。结果表明,从矮秆ANW16F和高秆LD222克隆得到的GA2ox-A9-1和GA2ox-A9-2基因是位于A和B基因组的两个拷贝基因,均含有3个外显子和2个内含子,编码347个氨基酸。ANW16F和LD222的GA2ox-A9-1蛋白在第89位氨基酸残基存在差异,GA2ox-A9-2蛋白在第87位存在差异。ANW16F和LD222的GA2oxA9-1蛋白与GA2oxA9-2蛋白在第182、186、251、336位的4个氨基酸残基存在差异。GA2ox-A9为亲水性不稳定酸性蛋白,无跨膜结构,二级结构丰富,三级结构预测显示与拟南芥GA2ox 6ku3.1A蛋白的序列相似度高,GA2ox-A9-1蛋白结构完全相同,GA2ox-A9-2蛋白略有不同。系统进化分析显示,GA2ox-A9与野生二粒同源性最高。RT-qPCR结果显示,在拔节期GA2ox-A9在高秆LD222茎中的表达量显著高于ANW16F中的表达量,在孕穗期和抽穗期GA2ox-A9在矮秆ANW16F中的表达水平明显高于高秆LD222,推测GA2ox-A9(Rht18)基因参与了Rht16矮秆小麦的矮化。本研究为进一步探讨Rht16小麦的矮化机理和育种利用提供了理论依据。 展开更多
关键词 Rht16 ga2ox-A9基因 矮秆基因 生物信息学分析 实时荧光定量PCR
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荔枝GA2ox基因家族的鉴定及表达分析 被引量:1
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作者 陈哲 王祥和 +5 位作者 周文静 周瑞云 吴文碟 吴凤芝 范鸿雁 胡福初 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2021年第14期4626-4636,共11页
本研究基于荔枝转录组数据,对GA2ox(Gibberellin 2-oxidase)基因家族进行了鉴定和筛选,利用转录组数据及实时荧光定量PCR方法,分析不同品种和组织间的赤霉素合成途径关键酶LcGA2ox基因的表达情况。结果表明:转录组数据中共鉴定到9个荔枝... 本研究基于荔枝转录组数据,对GA2ox(Gibberellin 2-oxidase)基因家族进行了鉴定和筛选,利用转录组数据及实时荧光定量PCR方法,分析不同品种和组织间的赤霉素合成途径关键酶LcGA2ox基因的表达情况。结果表明:转录组数据中共鉴定到9个荔枝LcGA2ox基因,均具有2OG-Fell_Oxy结构域;通过基因克隆,得到3条LcGA2ox(LcGA2ox1,LcGA2ox2和LcGA2ox3),开放阅读框全长分别为999、1023和1023 bp。氨基酸进化树比对分析结果显示,除LcGA2ox6与水稻OsGA2oxs聚在一起外,其余LcGA2oxs与拟南芥AtGA2oxs关系最近。通过基因表达分析发现,LcGA2oxs基因在矮化品种‘紫娘喜’顶芽和叶片中的表达量更高,有5个LcGA2ox基因(LcGA2ox1,LcGA2ox2,LcGA2ox5,LcGA2ox6,LcGA2ox9)在‘紫娘喜’顶芽样品中上调表达,LcGA2ox3和LcGA2ox4基因在‘紫娘喜’叶片中显著上调表达,LcGA2oxs基因表达具有一定的表达特异性,且在株型差异显著的两个荔枝品种中表达差异显著,推测LcGA2ox基因通过负调控赤霉素的合成从而影响荔枝株型的形成。本研究结果将为进一步分析LcGA2ox调控荔枝生长发育作用机制及生物学功能、荔枝矮化性状的分子鉴定以及矮化资源创新利用深入研究提供参考依据。 展开更多
关键词 荔枝 ga2ox 基因家族 表达分析
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芹菜赤霉素氧化酶基因AgGA2ox的克隆及非生物逆境下表达分析 被引量:6
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作者 冯凯 王广龙 +3 位作者 黄莹 徐志胜 黄蔚 熊爱生 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期948-956,共9页
赤霉素(GAs)对植物生长发育有重要影响,赤霉素氧化酶基因(GA2ox)在GAs合成过程中起重要调控作用。本文从不同芹菜(Apium graveolens)品种‘六合黄心芹’和‘文图拉’中分别克隆得到编码赤霉素氧化酶的基因AgGA2ox,序列分析显示两个品种A... 赤霉素(GAs)对植物生长发育有重要影响,赤霉素氧化酶基因(GA2ox)在GAs合成过程中起重要调控作用。本文从不同芹菜(Apium graveolens)品种‘六合黄心芹’和‘文图拉’中分别克隆得到编码赤霉素氧化酶的基因AgGA2ox,序列分析显示两个品种AgGA2ox基因均包含一个全长996 bp的开放阅读框,编码331个氨基酸,在核苷酸水平上有8个碱基位点的差异,氨基酸水平上有2个位点的差异。AgGA2ox蛋白在‘六合黄心芹’和‘文图拉’两个品种中的相对分子质量分别为37 044.6和36984.5,理论等电点均为8.31。进化分析表明,芹菜Ag GA2ox在植物进化间具有高度保守性,与西洋参(Panax quinquefolius)进化关系最为接近。实时定量PCR显示,AgGA2ox基因表达具有组织特异性,在芹菜叶柄中表达量最高;另外,AgGA2ox基因在4种非生物逆境条件[4°C低温、38°C高温、20%聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)及0.2 mol·L^(-1)NaCl]下均有响应,低温处理下AgGA2ox基因表达为明显上调,高温、干旱和盐处理下AgGA2ox基因表达为下调。‘六合黄心芹’与‘文图拉’AgGA2ox基因在逆境下的表达差异可能与不同品种抗逆性有关。 展开更多
关键词 芹菜 赤霉素 ga2ox 非生物逆境 表达分析
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