GA2ox1氧化酶基因的克隆及原核表达

采用RT-PCR从拟南芥基因组中克隆到GA2ox1基因,通过Gateway克隆技术构建原核重组表达载体pD-EST17-GA2ox1,并转化大肠杆菌BL(21)star,对蛋白原核表达条件进行优化。结果表明,最佳表达条件为温度30℃、IPTG浓度0.2 mmol/L、诱导6 h。蛋白表达形式为包涵体,与Biotech对GA2ox1基因在大肠杆菌中的表达情况推测的结论一致。重组蛋白分子质量约为40 kD,经Ni Sepharose亲和层析柱纯化和Western blot鉴定得纯度90%以上的GA2ox1重组蛋白。研究结果为GA2ox1抗体制备及蛋白功能的进一步研究奠定了基础。