体外培养新生大鼠海马神经元GABA-A受体通道的电生理学特性

目的研究体外培养大鼠海马神经元在发育过程中,GABA-A受体离子通道的电生理学特性的变化规律。方法用膜片钳记录仪在体外培养的不同时期,记录大鼠海马神经元GABA-A受体离子通道全细胞通道电流、电导的变化。结果海马神经元GABA-A受体全细胞离子通道平均电流,在培养的第3天、第7天、第10天分别为12.04±3.12、18.21±3.68和20.15±4.03 pA,相对于第3天,第7天和第10天分别增加了50%和70%。平均电流从10%到90%的上升时间为2.93±0.23 ms,电流衰减呈现单指数衰减,衰减的时间常数为16.39±4.23ms。离子通道电导,在膜电位钳制于氯反转电位以下时为20.60±2.46 pS,反转电位以上时为50.83±8.51 pS。结论体外培养海马神经元的GABA-A受体全细胞离子通道平均电流随培养时间延长逐渐增加,到培养10时达最大,同时离子通道电导在不同钳制电位下显著不同。

海马内非NMDA及GABA-A受体在青霉素致痫及电针抗痫中的作用

研究６，７ｄｉｎｉｔｒｏｑｕｉｎｏｘａｌｉｎｅ２，３ｄｉｏｎｅ（ＤＮＱＸ）和荷包牡丹碱（Ｂｉｃ）在青霉素致痫及电针抗痫中的作用．方法：Ｗｉｓｔａｒ大鼠（ｎ＝５３）海马内微量注入青霉素１μＬ（０２４μｇ），以脑电记录及其功率谱分析作为癫痫发作的指标．结果：电针和ｎｏｎＮｍｅｔｈｙｌＤａｓｐａｒｔａｔｅ（非ＮＭＤＡ）受体竞争性拮抗剂ＤＮＱＸ能部分抑制癫痫发作，电针和ＤＮＱＸ１μｇ合用时能加强对癫痫的抑制；而Ｂｉｃ可使电针对癫痫的抑制减弱．结论：海马内ＧＡＢＡＡ受体拮抗剂能部分翻转电针的抗痫作用，而电针和非ＮＭＤＡ受体拮抗剂有协同抗痫作用．

异丙酚对大鼠海马CA1区锥体神经元GABA_A受体的作用

目的 :研究异丙酚对大鼠海马CA1区锥体神经元γ 氨基丁酸A型 (GABAA)受体的作用。方法 :采用膜片钳全细胞记录技术。结果 :临床血药浓度异丙酚 (3～ 12 μg ml)对海马脑片CA1区锥体神经元电压门控性钠、钾、钙离子通道的开放、失活、最大电流幅值没有影响。海马脑片CA1区锥体神经元自发抑制性突触后电位 (sIP SC)可被GABAA 受体特异性阻断剂荷包牡丹碱 (Bic)所阻断。异丙酚对海马脑片CA1区锥体神经元sIPSC具有增频作用 ,但对其幅度没有影响 ,且其增频作用可被Bic阻断。结论 :临床浓度的异丙酚对海马脑片CA1区锥体神经元的sIPSC具有增频作用 。

γ-氨基丁酸及其受体调控CD8^+T细胞活化

目的探讨γ-氨基丁酸(GABA)及受体对CD8^+T细胞增殖能力的影响。方法采用CD8^+T细胞磁珠分选试剂盒分选Balb/c小鼠脾脏的CD8^+T细胞;在CD3/CD28活化磁珠的作用下,以不同浓度的GABA刺激CD8^+T细胞,通过5-溴脱氧尿苷(Brd U)标记和流式细胞术检测CD8^+T细胞的增殖情况;通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)比较CD8^+T细胞活化前后GABA-A、GABA-B受体的表达。结果流式检测结果显示,GABA可抑制已活化的CD8^+T细胞的增殖,表现为CD152^+CD8^+T细胞明显减少;实时荧光定量PCR结果显示,仅在CD8^+T细胞活化时表达的GABA-A受体亚型为α2、α6和GABA-B受体亚型为1a;CD8^+T细胞活化后有明显增加的GABA-A受体亚型有α3、α5、β2、β3、γ1、γ2和θ,而GABA-B2R和GABA-B1b则在活化前和活化后均无表达。结论GABA可抑制已活化的CD8^+T细胞的增殖,其活化受GABA相关受体所调节,但其具体机制还有待于进一步探讨。

新生大鼠反复惊厥对脑内γ-氨基丁酸A受体α1和γ2亚单位表达的长期影响

目的：研究新生期反复惊厥对大鼠脑内γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid，GABA）A受体α1和γ2亚单位表达的长期影响，及成年期记忆功能和惊厥阈的长期改变。方法：将生后7天（postnatal 7d，P7）的SD大鼠随机分成两组，每组16只，惊厥组每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作1次，每次持续30min，连续6d；对照组同样操作但不吸入三氟乙醚。两组大鼠于出生后第61～65天（P61～P65）行Morris水迷宫实验，于P75时给予大鼠腹腔注射戊四唑测定大鼠的惊厥阈。随即处死大鼠，分别采用免疫组化方法和RT-PCR方法观察大鼠大脑皮层及海马GABAA受体（GABAAR）α1和γ2亚单位表达的变化。结果：惊厥组大鼠在P64的寻找水下平台时间[（82424±35622）ms]较对照组[（40712±29467）ms]明显延长（P=0．001）。在P65，惊厥组大鼠120s内穿越原平台位置次数[（1．2±0．9）次]较对照组[（3．1±1．3）次]明显减少（P〈0．001）。惊厥组大鼠注射戊四唑后发生惊厥的潜伏期[（1487±662）s]与对照组[（1841±648）s]比较差异无统计学意义（P=0．137）。惊厥组大鼠GABAARα1亚单位免疫化学累积光密度在顶叶及海马CA1、CA2和CA4区较对照组明显降低（P〈0．05）；惊厥组大鼠GABA。R12亚单位免疫化学累积光密度在额叶和海马CA4区较对照组明显降低（P〈0．05）。惊厥组大鼠大脑皮层GABAARγ2亚单位和海马区α1亚单位mRNA的表达较对照组明显减少（P〈0．05）。结论：新生大鼠反复惊厥可造成脑内GABA。Rα1和γ2亚单位表达的长期改变，这种改变可能与新生期反复惊厥导致的成年期记忆障碍相关。

X线照射对实验性癫痫大鼠脑皮层GABA和GABA_A受体的影响

目的探讨癫痫大鼠放射治疗中γ-氨基丁酸(GABA)及其受体的作用机制并选择合理放射剂量。方法利用慢性点燃癫痫大鼠对照组、放射1组、放射3组进行0、24、6Gy的X线放射,对放射2组、放射4组和放射5组行12Gy的X线放射,每组10只,对照组和放射1组、放射3组于放射后1h断头取脑,放射4组于放射后1天、放射5组于放射后1周进行断头取脑,并观察放射5组其放射后癫痫发作情况,用氨基酸分析仪测定各组癫痫大鼠额叶皮层内的GABA含量变化,利用免疫组织化学方法观察抗GABAA受体阳性率。结果放射5组于照射后1周内癫痫在鼠未出现诱发癫痫发作。放射1组的GABA含量为(254.16±44.68)ng,GABAA受体阳性率为(39.56±7.22)%,均明显高于对照组,12Gy照射后1h、24h、1周后均较对照组间GABA含量高,其中以24h最为明显,分别为(252.09±33.89)ng,(348.73±56.00)ng和(258.02±62.95)ng。抗GABAA受体阳性率在照射后1周内基本稳定于较高水平。结论放射治疗癫痫主要是通过发生快速而持续的GABA与GABAA受体变化发生作用,癫痫大鼠接受12Gy的放射治疗较为合理。

七氟烷和异氟烷急性暴露对SD幼大鼠学习记忆及海马脑源性神经营养因子表达的影响

目的探讨挥发性麻醉药七氟烷和异氟烷急性暴露对SD大鼠幼年期学习记忆及海马脑源性神经营养因子(BDNF)表达的影响及其机制。方法 7日龄大鼠提前0.5 h ip给予荷包牡丹碱8 mg.kg-1或蝇蕈醇1 mg.kg-1,然后暴露于含3.6%七氟烷或2.3%异氟烷的空氧混合气中,连续6 h。出生后第21天时行Morris水迷宫实验记录潜伏期;取海马,免疫组化及Western印迹法检测γ氨基丁酸-A(GABA-A)受体α1亚基和BDNF表达,逆转录-PCR方法检测mRNA表达。结果 氟烷组的连续5 d总潜伏期均显著延长(P<0.05);与七氟烷和异氟烷组比,提前给予荷包牡丹碱或蝇蕈醇对潜伏期无显著改善作用。免疫组化、Western印迹法和逆转录-PCR结果显示,与正常对照组相比,七氟烷、异氟烷和提前给予荷包牡丹碱或蝇蕈醇组幼鼠海马GABA-A受体α1亚基蛋白与mRNA表达无明显差异;七氟烷和异氟烷组BDNF的蛋白和mRNA表达量显著降低,分别降低了13%,25%和23%,21%(P<0.05)。与七氟烷和异氟烷组相比,提前给予荷包牡丹碱或蝇蕈醇组BDNF的蛋白和mRNA表达量无显著差异。结论 七氟烷和异氟烷急性暴露能够影响SD大鼠幼年期学习记忆功能,可能与BDNF的表达改变有关,GABA-A受体不参与神经发育毒性的介导。

咪达唑仑对四亚甲基二酰四胺诱发大鼠癫痫持续状态的抑制作用观察

目的观察静脉麻醉药咪达唑仑(MID)对四亚甲基二酰四胺(毒鼠强,TETs)诱发癫痫持续状态(SE)的抑制作用及其对皮质和海马GABAA受体α1亚单位表达的影响。方法60只SD大鼠随机分为为正常对照组、阳性对照组、癫痫发作组及咪达唑仑10、20、30mg/kg组,每组10只。建立TETs诱发大鼠癫痫持续状态模型,以脑电图上典型癫痫波的变化及动物24h存活数为观察指标,比较腹腔注射不同剂量咪达唑仑(10、20、30mg/kg)的抗惊疗效,以地西泮(安定)作为阳性对照药。同时以蛋白印迹法(Westernblotting)观察20mg/kg咪达唑仑对SE大鼠发作24h后皮质和海马GABAA受体α1亚单位表达的影响。结果1.2mg/kgTETs能诱发大鼠明显的SE发作,EEG显示持续的高幅高频惊厥波,20及30mg/kg咪达唑仑均可有效控制惊厥发生,给药10min后EEG上的高幅惊厥棘波幅度及频率均明显降低,1h后高幅惊厥棘波完全消失,持续观察5h未见高幅惊厥棘波出现。咪达唑仑20及30mg/kg组动物24h存活数明显高于癫痫发作组(P<0.01)。咪达唑仑10mg/kg组在EEG上仍可见高幅惊厥棘波出现,且动物24h存活数与阳性对照组比较无显著差异。Western blotting结果显示,SE发作后24h大鼠皮质和海马GABAA受体α1亚单位表达与阳性对照组比较显著降低(P<0.01),而咪达唑仑20mg/kg组其表达明显增加,与正常对照组及SE组比较均显著升高(P<0.01)。结论咪达唑仑对TETs诱发的SE具有确切治疗作用,可用作临床的一线或二线用药,其抗惊厥作用可能与GABAA受体α1亚单位表达增加有关。

苯二氮类与学习记忆

临床上用于抗焦虑的苯二氮类可导致严重的学习记忆障碍，中枢神经系统内，其主要通过ＧＡＢＡ－Ａ／ＢＺ受体复合物易化ＧＡＢＡ能传递，影响多种记忆过程。已发现的内源苯二氮类具有类似的作用。学习记忆过程会导致脑内源苯二氮类释放，转而调节记忆过程。杏仁，隔区，海马是其参与记忆的关键位点，分别以不同的方式影响一定类型的记忆过程。

腹外侧眶皮层内吗啡诱发的抗伤害效应的机制

目的:明确腹外侧眶皮层(VLO)内微量注射吗啡产生抗伤害效应的机制是否通过GABA能调制介导的.方法:以辐射热诱发的大鼠甩尾反射潜伏期的变化作为伤害性反应的指标.结果:VLO内微量注射选择性GABAA受体拮抗剂荷包牡丹碱(100,200,500ng)可剂量依赖性抑制辐射热诱发的大鼠尾反射潜伏期.VLO内微量注射吗啡(5.0μg)10min后,同一部位注射荷包牡丹碱(100ng)可增加吗啡诱发的抗伤害效应,而VLO内微量注射吗啡(5.0μg)10min后,同一部位注射GABAA受体激动剂muscimol(250ng)可减弱吗啡诱发的抗伤害效应.结论:VLO内GABAA受体参与吗啡诱发的抗伤害效应,吗啡可能直接抑制了GABA能中间神经元,使VLO至PAG的投射神经元去抑制,间接激活了脑干下行抑制,在脊髓水平抑制了伤害性信息的输入而实现的.

新生大鼠反复惊厥对脑内γ-氨基丁酸A受体α1和β2亚单位表达的长期影响

目的研究新生期大鼠反复惊厥对脑内γ-氨基丁酸(GABA)A 受体(GABAAR)α1和β2亚单位表达的长期影响及成年期记忆功能和惊厥阈的长期改变。方法生后7 d 的 SD 大鼠随机分成两组,每组16只,惊厥组每日吸入三氟乙醚诱导惊厥发作1次,每次持续30 min,连续6 d;对照组同样操作但不吸入三氟乙醚。两组大鼠于生后61～65 d 行 Morris 水迷宫实验,于生后75 d 时通过腹腔注射戊四唑测定大鼠的惊厥阈。随即处死大鼠,分别采用免疫组化和逆转录 PCR 方法观察大鼠大脑皮层及海马 GABAAR α1和β2亚单位表达的变化。结果生后64 d 的寻找平台时间(82 424ms±35 622 ms)明显长于对照组(40 712 ms±29 467 ms,P=0.001)。在生后65 d,惊厥组大鼠120 s内穿越目标次数(1.2次±0.9次)明显少于对照组(3.1次±1.3次,P<0.01)。惊厥组大鼠注射PTZ 后发生惊厥的潜伏期(1487 s±662 s)与对照组(1841 s±648 s)差异无统计学意义(P=0.133)。惊厥组大鼠 GABAAR α1亚单位免疫化学累积吸光度在顶叶及海马 CA1、CA2和 CA4区明显低于对照组(均 P<0.05);惊厥组大鼠 GABAAR β2亚单位免疫化学累积光密度在丘脑区和海马 CA1～4区明显低于对照组(均 P<0.05)。惊厥组大鼠海马α1和β2亚单位 mRNA 的表达明显少于对照组(均P<0.05)。结论新生大鼠反复惊厥可造成脑内 GABAAR α1和β2亚单位表达的长期改变,这种改变可能与新生期反复惊厥导致的成年期记忆障碍相关。

神经病理性痛大鼠内侧额叶前皮质GABAAα1受体表达的变化

目的 评价神经病理性痛大鼠内侧额叶前皮质卜氨基丁酸Aa1亚型（GABAAal）受体表达的变化。方法成年雄性Wistar大鼠9只，体重200～210g，采用随机数字表法，将其随机分为3组（n=3）：对照组（C组）、假手术组（S组）和神经病理性痛组（P组）。P组采用坐骨神经慢性压迫法制备大鼠神经病理性痛模型；S组只暴露坐骨神经，而不结扎。于术前1d和术后1、4、7、10、14d时，测定机械痛阈和热痛阚。痛阈测定结束后，处死大鼠，取内侧额叶前皮质，采用Westernblot法检测GABA。受体的表达。结果与C组和S组比较，P组术后各时点机械痛阈和热痛阈降低，内侧额叶前皮质GABA。受体表达上调（P〈0．01）；C组和S组间机械痛阈、热痛阈和内侧额叶前皮质GABA。受体表达比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论内侧额叶前皮质GABA。受体表达上调可能参与了大鼠神经病理性痛的形成与维持。

γ-氨基丁酸A型受体基因变异与癫关系的研究进展

癫是由多种原因引起的脑功能障碍综合征。近年来利用PCR、免疫印迹法等多种方法研究发现,癫症候群与γ-氨基丁酸(GABA)-A型受体α1、γ2、δ、β3亚基基因变异密切相关,其变异通过改变苯二氮卓艹结合区域高度保守的氨基酸残基、缩减功能性GABA-A受体复合物的表面表达、导致抑制性配体门控通道功能的丧失、影响受体到细胞表面的运输等途径,最终导致癫的发生。该文就GABA-A型受体基因变异与癫关系的研究进展作一综述。

外周型苯二氮[艹卓]受体与脑缺血

脑缺血后，外周型苯二氮[艹卓]受体较正常时有明显增加，主要反应为小胶质细胞的活化、参与神经炎症反应以及线粒体功能调节等多途径病理学变化。应用放射性核素标记的特异性外周型苯二氮[艹卓]受体配体（如PK11195）进行体内成像，有助于对脑损伤进行定位和定量检测以及研究脑缺血后病理生理学改变。另外，该受体还有望成为神经保护治疗的新靶点。文章就外周型苯二氮[艹卓]受体与脑缺血的研究进展做一综述。

治疗CKLD5缺乏症相关癫痫发作药物:加奈索酮

加奈索酮(ganaxolone)是美国Marinas制药公司研发的一种口服γ-氨基丁酸A型(GABAA)受体正向变构调节剂,能特异性地调节中枢神经系统中的GABAA受体,加强时相性和紧张性抑制,以控制癫痫发作。2022年3月美国食品和药物管理局基于一项重要的Ⅲ期临床试验结果,批准其作为首个用于治疗细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶5缺乏症的药物。临床试验表明,加奈索酮耐受性良好,以该药为基础的治疗方案可有效控制患者癫痫发作频率,提高生活质量。

GABRG2基因突变与癫痫相关性研究进展

癫痫是一种常见的慢性脑部疾病,探讨其发生机制一直是脑科学研究的重要方向之一。γ-氨基丁酸A型受体(GABAAR)介导的γ-氨基丁酸(GABA)能抑制性通路在癫痫的发生发展中扮演了重要角色。GABRG2是GABAAR基因中最常见的癫痫致病基因,该基因突变主要通过影响受体在细胞膜上的表达及在突触后膜的聚集性,使得GABA能抑制性通路功能受损,进而导致多种临床表型不同的癫痫综合征。本文将重点综述GABRG2基因突变与癫痫相关性的研究进展,为癫痫患者的精准诊疗提供依据。