参榆洗液对痔术后大鼠痛觉敏化及cAMP/PKA信号通路和TRPV1蛋白表达的影响

目的探讨参榆洗液对痔术后大鼠痛觉敏化及环磷酸腺苷/蛋白激酶A(cAMP/PKA)信号通路、香草酸瞬时受体亚型1(TRPV1)蛋白表达的影响。方法取40只雄性SD大鼠,随机选择其中8只作为空白组,其余大鼠采用冰醋酸建立痔术后创面模型。将造模成功大鼠随机分为模型组及参榆洗液低、中、高剂量组,每组8只。自成功造模后的第1天开始,模型组给予高压灭菌水局部熏洗,参榆洗液低、中、高剂量组分别予以参榆洗液0.4 g生药/mL、0.8 g生药/mL、1.6 g生药/mL局部熏洗,均2次/d,每次15 min,2次治疗间隔12 h,连续7 d。记录大鼠第1,4,7天换药刺激后3 min内首次舔舐肛周创面潜伏时间、扭体反应次数以及舔舐肛周创面总时间,观察造模后和干预3,5,7 d后创面情况并记录创面愈合率,HE染色观察干预7 d后创面组织病理学形态,Western blot法检测干预7 d后创面组织中cAMP、PKA蛋白和背根神经节中TRPV1、p-PKA蛋白表达情况。结果与空白组比较,模型组大鼠首次舔舐肛周创面潜伏时间明显缩短(P<0.05),扭体反应次数明显增加(P<0.05),舔舐肛周创面总时间明显延长(P<0.05);创面组织中有大量中性粒细胞与淋巴细胞浸润,组织水肿明显;创面组织中cAMP、PKA蛋白相对表达量及背根神经节中TRPV1、p-PKA蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05)。与模型组比较,参榆洗液中、高剂量组大鼠首次舔舐肛周创面潜伏时间明显延长(P均<0.05),扭体反应次数明显减少(P均<0.05),舔舐肛周创面总时间明显缩短(P均<0.05);参榆洗液各组干预5,7 d后创面愈合率更高(P均<0.05);参榆洗液各组大鼠创面组织中中性粒细胞、淋巴细胞浸润减少,成纤维细胞、新生血管增多;参榆洗液各组创面组织中cAMP、PKA蛋白相对表达量及背根神经节中TRPV1、p-PKA蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),且呈剂量依赖性下降(P均<0.05)。结论参榆洗液可呈剂量依赖性改善痔术后大鼠痛觉敏化,促进创面愈合,机制可能与下调cAMP/PKA信号通路相关蛋白及TRPV1蛋白表达有关。

儿童脓毒症患儿血清可溶性髓样细胞触发受体-1、可溶性CD14亚型、前降钙素和超敏C反应蛋白水平的变化

目的探讨儿童脓毒症患儿血清可溶性髓样细胞触发受体-1(sTREM-1)、可溶性CD14亚型(sCD14-ST)、前降钙素(PCT)和超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平的变化。方法选取2015年1月~2018年8月儿科住院治疗儿童脓毒症患儿50例作为观察组,根据其病情程度分为严重脓毒症18例与非严重脓毒症32例。另选择同期在我院体检中心检查的正常健康儿童30例为对照组。比较对照组与观察组、严重脓毒症及非严重脓毒症血清sTREM-1、sCD14-ST、PCT和hs-CRP水平。结果观察组患儿血清sTREM-1、sCD14-ST、PCT和hs-CRP水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);严重脓毒症患儿sTREM-1、sCD14-ST、PCT和hs-CRP水平明显高于非严重脓毒症患儿,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论血清sTREM-1、sCD14-ST、PCT和hs-CRP水平不仅可用于儿童脓毒症早期诊断,而且可评估患儿病情严重程度。

α_1-肾上腺素受体亚型的分布及特点

近年来,运用分子生物学技术、放射配体结合技术、拮抗剂功能分析等手段,深入研究α1-肾上腺素受体亚型的分类、分布、受体蛋白结构等方面内容并取得很大进展。现将近几年研究状况综述如下。

蛋白激酶Cγ亚型和N-甲基-天门冬氨酸受体1在硝酸甘油致偏头痛大鼠模型发病机制中的作用探讨

目的通过硝酸甘油致偏头痛大鼠模型,初步探讨蛋白激酶Cγ亚型(PKCγ)、N-甲基-天门冬氨酸受体1(NMDAR1)和磷酸化NMDAR1在偏头痛发病机制中的作用。方法将30只成年雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组、干预组,后两组再各自分为发作期组和间歇期组,每组6只。模型组及干预组按Tassorelli Cristina法复制偏头痛大鼠模型,对照组用生理盐水造模。干预组每天灌服氟桂利嗪2 ml(0.5 mg/kg),对照组每天灌服生理盐水2 ml。受试动物于第5次造模后2 h(发作期组)或第4天(对照组及间歇期组)分别断头处死取脑干组织。RT-PCR法检测PKCγ及NMDAR1 mRNA,Western-Blot检测PKCγ、NMDAR1、磷酸化NMDAR1蛋白的表达。结果与对照组相比,无论是偏头痛发作期组和间歇期组,还是模型组和干预组大鼠脑干组织中PKCγ、NMDAR1 mRNA及蛋白的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,模型组PKCγ依赖的磷酸化NMDAR1蛋白的表达明显上调(P<0.05);干预组也稍有上调,但差异无统计学意义(P>0.05)。模型组与干预组,以及发作期与间歇期相比,磷酸化NMDAR1蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论偏头痛的发生发展可能与PKCγ依赖的磷酸化NMDAR1蛋白表达的上调有关,可能与PKCγmRNA及蛋白、NMDAR1 mRNA及蛋白(非磷酸化)的表达量无关。氟桂利嗪预防偏头痛发作的机制之一可能是打断了PKCNMDAR这一正反馈环路的恶性循环。

雌激素受体α、雌激素受体β、激活蛋白1、血管内皮生长因子在大鼠子宫内膜异位症模型中的表达及意义

目的探讨雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)、激活蛋白1(AP-1)、血管内皮生长因子(VEGF)在大鼠子宫内膜异位症(EMs)模型中的表达及意义。方法采用皮下种植法建立大鼠EMs模型,选取建模成功的28只大鼠为模型组(n=28),观察大鼠EMs模型在位内膜及异位病灶的组织病理学改变,并通过免疫组织化学法检测对照组子宫内膜、模型组在位子宫内膜和异位病灶ERα、ERβ、AP-1、VEGF的表达情况。结果 1大鼠EMs模型在位内膜及异位病灶腺体、间质血管明显增加;2大鼠EMs模型的异位病灶与对照组子宫内膜间ERα阳性率比较,差异无统计学意义(P=0.107),而其在位内膜中的表达较对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。ERβ、AP-1(c-jun)蛋白、VEGF在模型组在位内膜及异位病灶中阳性率与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),但其在位内膜及异位病灶中的表达比较,差异无统计学意义。结论大鼠EMs模型在位内膜中ERα和ERβ均高表达,异位病灶中则仅表现为ERβ高表达,同时上调c-jun,VEGF的表达,ERβ可能在EMs的发生发展中起到较ERα更为重要的作用。

弓状核损毁模型大鼠海马组织中GABA_A受体、NMDAR_1受体、c-fos蛋白、NGF受体的表达

目的 :探讨谷氨酸钠造成的下丘脑弓状核损毁模型鼠海马组织中γ -氨基丁酸 (GABAA)受体、N -甲基-D -天冬氨酸受体 (NMDAR1 )、c -fos蛋白、神经生长因子 (NGF)受体的表达。方法 :皮下注射谷氨酸钠建立SD新生大鼠弓状核损毁模型。正常组注射等量生理盐水作对照。GABAA 受体、NMDAR1 受体、c -fos蛋白、NGF受体的表达以免疫组化染色显示。结果 :造模组大鼠海马组织中GABAA 受体、NMDAR1 受体的表达均明显低于正常组 ,P<0 .0 5 ,NGF受体的表达明显高于正常组 ,P <0 .0 5 ,c-fos蛋白表达略高于正常组 ,但差异无统计学意义 ,P >0 .1。结论 :谷氨酸钠损毁弓状核对大鼠海马组织中GABAA 受体、NMDAR1 受体、NGF受体的表达有明显影响。

TRPV1和TRPA1通道在心血管疾病中的作用

瞬时受体电位(TRP)通道为机体重要的非选择性阳离子通道,瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)属于TRP通道香草酸受体亚型家族成员,瞬时受体电位锚蛋白1(TRPA1)属于TRP通道超家族成员。TRPV1和TRPA1通道可调节血管内皮细胞和心肌细胞功能,其异常表达及功能改变与心血管疾病的发生发展关系密切。TRPV1通道参与心肌梗死后心脏保护和血压调节。TRPA1通道参与调节血流量、血管生成和心肌细胞凋亡。TRPV1和TRPA1通道有望成为心血管疾病的治疗靶点。

香草素能瞬变受体亚型-1表达细胞系的构建与鉴定

目的构建香草素能瞬变受体亚型-1(TRPV1)膜蛋白稳定表达的细胞系。用于咳嗽与TRPV1关系的研究,以及新型镇咳药物的开发。方法应用CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞,热激转化,将pCDNA3-TRPV1质粒转入到大肠杆菌感受态细胞中扩增,通过聚乙二醇沉淀法纯化质粒,纯化的pCDNA3-TRPV1质粒用磷酸钙转染法转入HEK293细胞。荧光显微镜观察黄绿色荧光蛋白表达;用5μmol/L的CAP处理转染细胞7h,台盼蓝双染色计算细胞病死率,作为细胞表达的证据。结果经转化并培养后质粒大量扩增,酶切后获得目的基因片段大小约2650bp,大小符合目的基因。转染TRPV1的HEK293细胞在荧光显微镜下可清晰观察到黄绿色荧光。使用5μmol/L的辣椒素处理转染后细胞系7h,发现细胞病死率显著上升。结论 TRPV1在HEK293细胞中稳定表达,可用于构建"咳嗽细胞模型"。

鞘氨醇-1-磷酸受体1在疼痛中的作用研究

鞘氨醇-1-磷酸受体1(sphingosine-1-phosphate receptor1,S1PR1)属于G蛋白偶联受体,其能调节多种下游信号分子和细胞功能。研究发现S1PR1在疼痛中发挥重要作用,但激活S1PR1产生致痛作用还是镇痛作用尚存在争议。该文讨论了S1P/S1PR1信号在疼痛研究中的最新观点与进展,以增进对其生物学功能及病理作用的了解。

雌激素受体β亚型对人乳腺癌细胞株生物学特性的影响（摘要）

目的探讨雌激素受体β亚型（ERβ）对人乳腺癌细胞株生物学特性的影响和作用机制。方法构建ERβ稳定高表达的MDA—MB-435细胞株。运用噻唑蓝（MTT）法、流式细胞术和Transwell等方法，观察不同雌激素浓度下ERβ对该细胞株增殖、侵袭和转移特性的影响。采用RT—PCR和（或）Westernblot、明胶酶谱技术检测相关基因的表达水平。结果ERB可显著提高MDA—MB-435细胞的增殖速度和侵袭迁徙能力，且呈非雌激素依赖性。与对照细胞相比，ERβ高表达的细胞s期比例显著增多（P=0．01）；β21 mRNA表达水平降低33．3％（P=0．03），蛋白表达水平降低47．4％（P=0．02）；基质金属蛋白酶（MMP）-9mRNA表达水平增高91．3％（P〈0．01），活性增高67．3％（P=0．02）；Ets-1 mRNA表达水平增高62．2％（P=0．01），蛋白表达水平增高51．0％（P=0．01）；cyclinA、cyclinE、cyclinD1、MMP—1、MMP-2、MMP-7、血管内皮生长因子（VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在mRNA水平未见明显差异。结论ERβ有促进乳腺癌细胞增殖、侵袭和转移的作用。降低β21的表达、增加Ets—1和MMP-9的表达并增强MMP-9的活性是其可能的作用机制之一。

辣椒素激活TRPV1/钙蛋白酶-1通路改善血管再狭窄的研究

目的:探讨辣椒素在血管再狭窄中的作用及其机制。方法:将20只SPF雄性小鼠随机分为空白组和辣椒素组各10只,颈动脉结扎后分别用标准饲料和含0.01%辣椒素的饲料喂养14 d;另将20只SPF辣椒素预处理雄性小鼠随机分为标准组和抑制剂组两组各10只,分别给予生理盐水或瞬时受体电位香草素受体1(TRPV1)抑制剂5′-碘树脂毒素(iRTX)干预,采用苏木精-伊红染色测定并计算小鼠颈动脉内膜厚度/中膜厚度(I/M)值,蛋白质印迹法检测细胞钙蛋白酶亚型1(钙蛋白酶-1)的表达与活性,免疫组化法测定增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞数。分离培养小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs),将其分为空白对照组和使用血小板源性生长因子(PDGF-BB)预处理的生长因子组,再分组分别加入生理盐水或1 mmol·L^(-1)辣椒素培养,形成标准对照组、辣椒素对照组、生长因子组和生长因子辣椒素组,用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、细胞迁移法检测细胞增殖和迁移情况。结果:辣椒素组颈动脉的I/M值和PCNA阳性细胞数明显降低(P<0.01)。PDGF-BB可诱导VSMCs增殖和迁移,增加钙蛋白酶-1的表达和活性(P<0.01),而辣椒素可部分逆转上述效应(P<0.01)。TRPV1抑制剂iRTX与辣椒素同时干预的小鼠颈动脉I/M值和PCNA阳性细胞数均增加(P<0.01),同时组织中钙蛋白酶-1表达及活性也明显增加(P<0.01)。结论:辣椒素可改善血管再狭窄,该过程可能由TRPV1/钙蛋白酶-1通路介导实现。

激动α_(1B)-肾上腺素受体对DDT1 MF-2细胞生长的刺激作用及其途径

目的 研究激动α1B 肾上腺素受体 (α1B AR)对DDT1MF 2细胞生长的影响及其机制。方法 用3H-胸腺嘧啶参入法测定细胞的DNA合成速率 ;用流式细胞计测定细胞周期。结果 去甲肾上腺素 (NE ,0 1～ 1μmol·L-1)可刺激DDT1MF 2细胞DNA的合成。磷脂酶C抑制剂 (U7312 2 ,10 μmol·L-1)、Ca2 +/ATP酶抑制剂 (CPA ,10 μmol·L-1)、胞内Ca2 +络合剂 (BAPTA/AM ,10 μmol·L-1)、PKC抑制剂(RO 31 82 2 0 ,0 1μmol·L-1或calphostinC ,0 1μmol·L-1)、酪氨酸激酶抑制剂 (tyrphostinA2 5 ,10 μmol·L-1或genis tein ,10 μmol·L-1)、MEK1/ 2抑制剂 (PD 980 5 9,10 μmol·L-1)均可阻断NE刺激细胞DNA合成的作用。结论 激动α1B AR可刺激DDT1MF 2细胞增殖 ,其信号转导途径可能与PLC激活、Ca2 +释放、PKC。

基于瞬时受体电位香草酸亚型1通路探讨辛夷散治疗变应性鼻炎大鼠相关机制

目的:探讨辛夷散基于瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)通路治疗变应性鼻炎(AR)大鼠的疗效和作用机制。方法:将70只SD大鼠随机分为空白组,模型组,辛夷散低、中、高剂量组,激动剂组,阳性药组,每组10只。除空白组外,其余各组大鼠均采用卵清蛋白(OVA)致敏方法制作AR大鼠模型。造模成功后,除空白组外,其余各组采用相应药物治疗,且均OVA滴鼻维持致敏。治疗前后观察行为学评分,HE染色观察鼻黏膜组织形态学变化;ELISA检测血清白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-13、免疫球蛋白E(IgE)水平;ELISA检测鼻黏膜组织中TRPV1、P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)、神经生长因子(NGF)水平。结果:与空白组比较,模型组外周血IgE、IL-4、IL-5、IL-13表达显著增多(P<0.01),鼻黏膜TRPV1、SP、CGRP、NGF表达显著增多(P<0.01);与模型组比较,辛夷散各剂量组外周血IgE、IL-4、IL-5、IL-13表达显著降低(P<0.05,P<0.01),鼻黏膜TRPV1、SP、CGRP、NGF表达显著降低(P<0.01);与阳性药组和激动剂组比较,辛夷散中剂量组外周血IgE、IL-4、IL-5、IL-13表达显著升高(P<0.01),鼻黏膜TRPV1、SP、CGRP、NGF表达显著升高(P<0.01)。结论:辛夷散可能是通过调控TRPV1通路减少SP、CGRP、IL-4释放从而抑制Th2细胞过度活化,降低痒觉神经敏化,缓解鼻痒,从而治疗AR。

基于NGF/TrKA/TRPV1通路探讨电针改善功能性消化不良大鼠胃高敏感性

目的探讨电针对功能性消化不良(FD)大鼠胃高敏感性的作用效果及机制。方法将30只大鼠随机平均分为空白组、模型组、电针组、抑制剂组、电针+抑制剂组。空白组不予以特殊处理,其余各组采用多因素刺激法进行造模。造模完成后,模型组常规饲养,电针组和电针+抑制剂组予以每天电针足三里,抑制剂和电针+抑制剂组予以每天腹腔注射神经生长因子(NGF)抑制剂。采用胃内球囊置入检测胃高敏感性和胃顺应性,采用甲胺蓝染色观察胃肥大细胞活化程度,采用免疫组化法检测胃瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)定位表达,采用免疫印迹检测胃NGF/原肌球蛋白受体激酶(TrkA)/TRPV1蛋白表达,采用酶联免疫吸附检测胃降钙素基因相关肽(CGRP)含量。结果相比于空白组,模型组大鼠体重增长缓慢,胃敏感性增高、顺应性降低,胃肥大细胞数和脱颗粒率显著增加,NGF、TrKA、TRPV1的蛋白表达和CGRP含量显著升高;与模型组比较,电针组、抑制剂组和电针+抑制剂组大鼠体重增加,胃高敏感性和顺应性显著改善,肥大细胞数目和活化程度显著降低,胃NGF/TrKA/TRPV1蛋白表达和CGRP含量显著降低;且相比于电针组和抑制剂组,电针+抑制剂组胃NGF/TrKA/TRPV1蛋白表达和CGRP含量进一步降低,差异有统计学意义。结论电针可能是通过调控肥大细胞介导的NGF/TrKA/TRPV1通路改善FD大鼠胃高敏感性。

cyclin D1与PD-L1在不同分子亚型浸润性乳腺癌中的表达及相关性分析

目的探讨细胞周期蛋白D1(cyclinD1)与程序性死亡受体配体1(PD-L1)在不同分子亚型浸润性乳腺癌中的表达及相关性。方法收集78例原发性浸润性乳腺癌患者的病历资料和乳腺组织标本。观察cyclinD1和PD-L1在不同分子亚型浸润性乳腺癌组织中的表达及与临床特征的关系,并分析二者相关性。结果不同分子亚型原发性浸润性乳腺癌中cyclinD1、PD-L1表达情况比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。三阴性乳腺癌中PD-L1阳性表达率高于LuminalA型乳腺癌,差异有统计学意义(P﹤0.05)。TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、ER阳性原发性浸润性乳腺癌患者乳腺癌组织中cyclinD1阳性表达率高于TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、ER阴性患者,PD-L1阳性表达率低于TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、ER阴性患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。在原发性浸润性乳腺癌中,cyclinD1与PD-L1表达呈负相关(r=-0.436,P=0.021)。结论在原发性浸润性乳腺癌中,cyclinD1水平与PD-L1水平呈负相关,且cyclinD1阳性表达与TNM分期低及ER阳性有关;PD-L1在三阴性乳腺癌中呈高表达,其在乳腺癌组织中的阳性表达与TNM分期高及ER阴性有关。

MuRF2、PPAR γ1和Ub重组质粒的构建及鉴定

目的 构建过氧化物酶体增殖物激活受体γ亚型1(peroxisome proliferator-activated receptor gamma isoform 1,PPAR γ1)、泛素连接酶肌肉环指状蛋白2(ubiquitin ligase muscle ring finger protein 2,MuRF2)和泛素(ubiquitin,Ub)的重组质粒并进行鉴定。方法 根据MuRF2、PPAR γ1和Ub的cDNA序列及GV146和GV417载体质粒上的多克隆位点设计目的基因克隆引物。XhoI/EcoRI内切酶分别双酶切PPAR γ1目的DNA与GV146载体;NheI/BamHI内切酶分别双酶切MuRF2和Ub目的 DNA与GV417载体。用连接酶连接双酶切后的目的 DNA和载体,导入大肠杆菌经筛选获得重组质粒。PCR鉴定重组克隆后进行DNA测序。转染HEK 293T细胞后,于荧光显微镜下观察转染效率;免疫共沉淀实验后用Western blot检测蛋白的表达及蛋白质相互作用。结果 以合成的PPAR γ1、Ub、MuRF2的引物分别对PPAR γ1、Ub和MuRF2的菌落进行PCR扩增,产物大小分别为943、451和1 154 bp,与预期结果一致。测序结果与目的基因序列进行比对分析,证实成功构建出PPAR γ1、Ub和MuRF2的重组质粒。在HEK 293T细胞中共转染His-MuRF2、HA-Ub、PPAR γ1重组质粒,荧光显微镜观察结果提示重组质粒成功转染。免疫共沉淀试验后用Western blot检测可见PPAR γ1、MuRF2和Ub蛋白的有效表达,且验证了MuRF2介导PPAR γ1发生泛素化修饰反应。结论成功构建PPAR γ1、MuRF2和Ub的重组质粒,且三种质粒在HEK 293T细胞中有效表达,验证了MuRF2介导PPAR γ1发生泛素化修饰反应。

脓毒症患儿血清FABP3、Presepsin、sTREM-1水平及相关性研究

目的探讨脓毒症患儿血清心脏型脂肪酸结合蛋白(FABP3)、可溶性白细胞分化抗原14亚型(Presepsin)、可溶性髓样细胞触发受体-1(sTREM-1)水平及3项指标之间的相关性。方法选取2021年3月至2022年3月于该院接受治疗的脓毒症患儿80例纳入脓毒症组,另选取同期于该院进行健康体检的健康儿童80例作为对照组。采用酶联免疫吸附试验检测两组血清FABP3、Presepsin及sTREM-1水平,分别对不同严重程度脓毒症患儿、是否出现休克脓毒症患儿、是否出现心肌损伤脓毒症患儿血清FABP3、Presepsin、sTREM-1水平进行比较。对3项指标的相关性进行分析。结果脓毒症组血清FABP3、Presepsin、sTREM-1水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。重度脓毒症患儿血清FABP3、Presepsin、sTREM-1水平高于轻度脓毒症患儿,差异有统计学意义(P<0.05)。发生休克脓毒症患儿血清FABP3、Presepsin、sTREM-1水平高于未发生休克脓毒症患儿,差异有统计学意义(P<0.05)。发生心肌损伤脓毒症患儿血清FABP3、Presepsin、sTREM-1水平高于未发生心肌损伤脓毒症患儿,差异有统计学意义(P<0.05)。脓毒症患儿血清FABP3水平与Presepsin、sTREM-1水平呈正相关(r=0.358、P<0.001,r=0.362、P<0.001);脓毒症患儿血清Presepsin水平与sTREM-1水平呈正相关(r=0.382,P<0.001)。结论脓毒症患儿血清FABP3、Presepsin、sTREM-1水平异常升高,并且与脓毒症患儿病情严重程度、是否发生休克、是否发生心肌损伤有关,脓毒症患儿血清FABP3水平与Presepsin、sTREM-1水平呈正相关。

瘦素对睡眠剥夺小鼠下丘脑GABA含量及其受体表达的影响

目的观察瘦素对睡眠剥夺小鼠下丘脑γ-氨基丁酸(GABA)含量及其受体表达的影响,并探讨可能的机制。方法采用随机数字表法将雄性C57BL/6小鼠分为对照组、睡眠剥夺组、瘦素补充组,每组8只。对照组设置水环境不剥夺睡眠;睡眠剥夺组利用改良多平台水环境法建立小鼠睡眠剥夺模型;瘦素补充组在剥夺同时予以每天两次瘦素1.3 mg/kg腹腔给药。睡眠剥夺7 d后,观察小鼠一般情况,测量体重并采集下丘脑组织和血浆标本,ELISA法检测各组小鼠血浆瘦素水平,下丘脑GABA、谷氨酸(Glu)含量。Western blotting检测下丘脑组织中GABA关键合成酶谷氨酸脱羧酶67(GAD67)及GABAA受体α1亚型蛋白(GABAARα1)的表达水平。结果与对照组相比,睡眠剥夺组小鼠体重明显减轻[(22.03±0.42)g vs.(17.75±0.75)g,P<0.01],而瘦素补充组小鼠体重[(15.10±0.38)g]较对照组和睡眠剥夺组均明显减轻(P<0.01)。与对照组比较,睡眠剥夺组小鼠皮毛失去光滑,对光线和声音特别敏感,表现为轻微躁狂,攻击性强,血浆瘦素水平明显降低[(483.81±21.72)ng/ml vs.(359.14±16.69)ng/ml,P<0.01],下丘脑GABA水平明显降低[(152.37±8.14)ng/g vs.(111.31±2.96)ng/g,P<0.05]。瘦素补充组小鼠下丘脑GABA水平[(132.19±3.38)ng/g]明显高于睡眠剥夺组[(111.31±2.96)ng/g,P<0.05],但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。睡眠剥夺组、瘦素补充组小鼠下丘脑Glu水平[分别为(686.56±10.01)ng/g、(668.64±9.93)ng/g]较对照组[(577.11±16.36)ng/g]明显升高(P<0.05),而瘦素补充组与睡眠剥夺组比较差异无统计学意义(P>0.05)。睡眠剥夺组小鼠下丘脑GAD67、GABAARα1蛋白表达[分别为0.68±0.06、0.69±0.07]较对照组(分别为1.09±0.13、0.99±0.07)明显降低(P<0.05),而瘦素补充组(分别为1.39±0.19、1.33±0.14)较睡眠剥夺组及对照组均明显升高(P<0.05)。结论瘦素可上调睡眠剥夺小鼠下丘脑内GABA关键合成酶GAD67的表达,升高下丘脑GABA含量,提高下丘脑GABAARα1蛋白表达,这可能是瘦素影响睡眠的重要机制。

炎性痛大鼠背根节及脊髓后角NMDAR1与BSI-B4免疫荧光双标记观察及针刺调节

目的 探讨在伤害性刺激条件下 ,初级感觉传入C纤维中枢突末梢上的NMDA受体NR1亚型蛋白(NMDAR1,NR1)的变化。 方法 对单侧佐剂性关节炎性痛模型 ,采用西非单叶豆同工凝集素 (BSI B4 )与NR1免疫荧光双标技术 ,观察致炎后不同时间段初级感觉传入突触前NR1的表达及其针刺后的变化。 结果 分别在各组大鼠的背根节和脊髓观察到BSI B4 NR1的双标产物。致炎后第 3d、7d各组大鼠致炎侧背根节中的双标神经元占各单标神经元的百分比关系为 :炎症组 (包括 3d、7d组 ) >电针组 (包括 3d、7d组 ) >生理盐水组 (包括 3d、7d组 ) (P <0 0 1) ;且炎症组和电针组大鼠均表现为 3d组 >7d组 (P <0 0 1)。 结论 提示脊髓后角突触前C纤维中枢突末梢上存在NR1,而且参与了单侧佐剂性关节炎大鼠痛觉过敏的形成 ;电针可能通过下调突触前的NR1抑制中枢敏化的形成 ,达到治疗的目的。

激活辣椒素受体是调控下颌下腺分泌的新途径

唾液对于维持摄食、消化、味觉、语言和保护口腔黏膜等口腔及消化道正常功能具有非常重要的作用。在静息状态下,下颌下腺的分泌量占全唾液量的60%~65%。全身性疾病如舍格伦综合征（Sjgren’s syndrome）或局部疾病,如慢性下颌下腺炎症和下颌下腺失神经损伤,以及某些治疗后的并发症如头颈部肿瘤行放射治疗等,可导致腺体的分泌功能受损,唾液的分泌量降低,影响进食和吞咽等功能，严重者继发猖獗龋和念珠菌感染等并发症，严重影响患者的生活质量，因此，寻找有效的干预下颌下腺分泌的靶点，对防治下颌下腺功能低下具有重要的理论意义和临床应用价值。