食醋调吴茱萸穴位贴敷对氯苯丙氨酸失眠大鼠在体皮肤的渗透过程及作用机制研究

目的探讨食醋调吴茱萸穴位贴敷对对氯苯丙氨酸(PCPA)所致失眠大鼠在体皮肤渗透过程及作用机制。方法SPF级7周龄SD雄性健康大鼠162只分成正常组,模型组,阳性对照组(地西泮1 mg/kg,10 ml/kg),食醋调吴茱萸小、中、大剂量组(剂量为2、4、8 g/kg;每组分为涌泉穴组和神阙穴组)。正常组、模型组和阳性对照组(地西泮)每组10只,其余各组22只,其中10只用于观察脑组织神经递质γ-氨基丁酸(GABA)含量及GABAA1 mRNA表达,另外12只用于观察食醋调吴茱萸穴位贴敷对大鼠在体皮肤的渗透过程。除正常组外其余各组均使用PCPA法造模。给药组每天贴敷给药4 h,连续给药7 d后,获取大鼠脑组织标本,采用酶联免疫吸附试验法检测神经递质GABA含量,采用实时荧光定量PCR检测GABAA1 mRNA的表达水平。第7天给药结束后1 h(T_(1))、给药结束后4 h(T_(2))、给药结束后8 h(T_(3)),以及贴敷给药8 h清除药物后1 h(T_(4)),取大鼠涌泉穴、神阙穴部位皮肤制作冰冻切片,用激光共聚焦显微镜观察食醋调吴茱萸穴位贴敷的在体皮肤渗透过程。结果与模型组比较,食醋调吴茱萸穴位贴敷大、中、小剂量组大鼠下丘脑、脑干、海马GABA含量升高,差异有统计学意义(P<0.05);食醋调吴茱萸穴位贴敷中、高剂量组大鼠下丘脑、脑干、海马GABAA1 mRNA表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。两个穴位食醋调吴茱萸穴位贴敷大、中、小剂量组组内不同时间点平均荧光强度比较,差异有统计学意义(P<0.05);两个穴位食醋调吴茱萸穴位贴敷大、中、小剂量组T_(1)~T_(4)时平均荧光强度比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论食醋调吴茱萸穴位贴敷具有改善失眠的作用,其作用机制可能与上调脑组织GABA含量及GABAA1 mRNA的表达水平有关。食醋调吴茱萸穴位贴敷具有良好的经皮渗透性。

母子隔离应激增加幼鼠海马CA1区锥体神经元的兴奋性

目的初步探讨母子隔离应激对幼鼠海马CA1区锥体神经元自发性放电特征和海马GABAA受体α1亚单位表达的影响及其与癫痫易感性的关系。方法 54只新生的SD大鼠幼鼠用于实验,雌雄不拘,随机分成3组(n=18),正常组(正常喂养,每天不用隔离)、隔离15min组、隔离3h组。在生后16d,3组幼鼠分别行氯化锂-匹罗卡品诱导的惊厥实验,全细胞膜片钳检测海马CA1区锥体神经元自发性放电特征,灌注取脑免疫组化检测海马GABAA受体α1亚单位表达情况。结果隔离3h组体质量(24.60±1.89)g与正常组体质量(29.44±2.03)g比较明显减轻(P<0.05)、幼鼠诱发惊厥的潜伏期隔离3h组(11.50±2.10)min短于正常组(15.32±1.34)min(P<0.05)、海马CA1区锥体神经元自发性放电频率隔离3h组(3.64±2.84)Hz要明显快于正常组(1.15±0.69)Hz(P<0.01)、海马CA1区GABAA受体α1亚单位累计化学光密度,隔离3h组(161.10±5.70)少于正常组(175.40±7.20)(P<0.01)。隔离15min组幼鼠体质量(29.34±1.85)g、诱发惊厥的潜伏期(16.47±1.73)min、海马CA1锥体神经元自发性放电频率(1.36±0.83)Hz、海马CA1区GABAA受体α1亚单位累计化学光密度(171.50±6.80),在以上几方面隔离15min组和正常组比较均无统计学差异(P>0.05)。结论早期母子隔离3h的应激对幼鼠生长发育、癫痫易感性产生不良影响,海马CA1锥体神经元兴奋性增加、GABAA受体α1亚单位表达减少可能作为其潜在的病理机制之一。

大鼠下丘脑室旁核GABA_A Rα1阳性神经元参与内毒素诱导的免疫应激反应

为探讨下丘脑室旁核(PVN)内GABAA受体α1亚单位(GABAARα1)阳性神经元是否参与内毒素(LPS)诱导的免疫应激反应,本研究采用腹腔注射LPS建立免疫应激模型,对照组注射等量的生理盐水,应用免疫荧光双标记与激光共聚焦显微镜技术,观察两组大鼠下丘脑PVN内Fos和GABAARα1阳性神经元的形态、分布和数量的变化以及Fos和GABAARα1阳性神经元之间的关系。结果显示:LPS可使大鼠PVN内Fos阳性神经元数量显著增高,GABAARα1阳性神经元的染色增强,且其中的部分神经元同时表达Fos和GABAARα1;经计数Fos/GABAARα1双标阳性神经元的比例占Fos阳性神经元的27%,占GABAARα1阳性神经元的32%。本实验结果提示PVN内的部分GABAARα1阳性神经元参与了由LPS诱导的免疫应激反应,说明GABA可能通过GABAA受体在免疫应激反应中发挥作用。上述结果为阐明免疫应激反应时GABAAR在下丘脑-垂体-肾上腺轴中的作用提供了形态学基础。

大鼠丘脑前核神经元内γ-氨基丁酸及其受体的表达

目的:探讨大鼠丘脑前核内γ-氨基丁酸(GABA)及其GABAA受体(GABAARα1和β2subunits)的表达,从形态学角度为系统研究丘脑前核的功能提供依据。方法:分别采用包埋后胶体金免疫电镜技术和原位杂交检测丘脑前核内GABA及GABAARα1和β2mRNA的表达。结果:(1)在丘脑前核,GABAARα1和GABAARβ2阳性神经元分布较密集,细胞形态较一致。空白对照切片为阴性,未见GABAARα1和GABAARβ2mRNA表达阳性神经元。(2)GABA胶体金免疫反应切片上,GABA胶体金颗粒浓重标记GrayⅡ型轴突终末,而树突、神经元、胶质细胞及背景标记极少。GABA能阳性轴突终末与中小型树突形成对称性轴-树突触,也与神经元胞体形成对称性轴-体突触。结论:提示在丘脑前核能够合成GABAARα1和GABAARβ2,且GABA能轴突终末与神经元的树突或胞体形成对称性突触。

GABA_Aα_1受体在局灶性皮质发育障碍大鼠脑皮质中的表达

目的探讨液氮损伤诱导局灶性皮质发育障碍大鼠脑皮质中γ-氨基丁酸A亚型α1(GABAAα1)的表达。方法实验随机分为液氮损伤组、假手术组和正常对照组,先建立局灶性皮质发育障碍模型,采用常规HE和Nissl染色,免疫组织化学方法用SABC法,DAB显色。观察微脑回和周围组织的结构及其GABAAα1受体阳性细胞表达情况。结果在大鼠脑嘴尾方向形成了一小的脑回,小脑回及前额叶GABAAα1受体阳性着色神经元在损伤组中的表达减少(q检验P<0.05)。结论微脑回及周围结构里GABAAα1受体数量的下调可能是其导致癫痫发作的原因之一。

大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区GABAA_(α1)表达上调与甲醛致急性疼痛有关

目的探讨甲醛致急性疼痛大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区(vLPAG)γ-氨基丁酸A受体α1亚基(GABAA_(α1))的表达变化。方法将大鼠随机分为对照组(C组,n=12)和甲醛致痛组(F组,n=12):于右侧后足底注射0.9%氯化钠溶液和2%甲醛各50μL。记录大鼠建模后1 h内每5 min的缩足舔爪时间,分别统计两时相缩足舔爪时间之和,作为大鼠疼痛学评分;记录大鼠建模后1 h内每10 min各时间点的机械痛阈;1 h后处死大鼠,用免疫印迹法检测各组vLPAG处GABAA_(α1)相对表达量。结果 F组大鼠出现了明显的缩足舔爪的急性疼痛表现,且呈两相性,疼痛学评分均高于C组(P<0.05);机械痛阈各时点均低于C组(P<0.05);F组GABAA_(α1)蛋白表达含量较C组明显升高(P<0.05)。结论中脑导水管周围灰质腹外侧区GABAA_(α1)表达上调与大鼠急性疼痛痛阈降低有关。

瘦素对睡眠剥夺小鼠下丘脑GABA含量及其受体表达的影响

目的观察瘦素对睡眠剥夺小鼠下丘脑γ-氨基丁酸(GABA)含量及其受体表达的影响,并探讨可能的机制。方法采用随机数字表法将雄性C57BL/6小鼠分为对照组、睡眠剥夺组、瘦素补充组,每组8只。对照组设置水环境不剥夺睡眠;睡眠剥夺组利用改良多平台水环境法建立小鼠睡眠剥夺模型;瘦素补充组在剥夺同时予以每天两次瘦素1.3 mg/kg腹腔给药。睡眠剥夺7 d后,观察小鼠一般情况,测量体重并采集下丘脑组织和血浆标本,ELISA法检测各组小鼠血浆瘦素水平,下丘脑GABA、谷氨酸(Glu)含量。Western blotting检测下丘脑组织中GABA关键合成酶谷氨酸脱羧酶67(GAD67)及GABAA受体α1亚型蛋白(GABAARα1)的表达水平。结果与对照组相比,睡眠剥夺组小鼠体重明显减轻[(22.03±0.42)g vs.(17.75±0.75)g,P<0.01],而瘦素补充组小鼠体重[(15.10±0.38)g]较对照组和睡眠剥夺组均明显减轻(P<0.01)。与对照组比较,睡眠剥夺组小鼠皮毛失去光滑,对光线和声音特别敏感,表现为轻微躁狂,攻击性强,血浆瘦素水平明显降低[(483.81±21.72)ng/ml vs.(359.14±16.69)ng/ml,P<0.01],下丘脑GABA水平明显降低[(152.37±8.14)ng/g vs.(111.31±2.96)ng/g,P<0.05]。瘦素补充组小鼠下丘脑GABA水平[(132.19±3.38)ng/g]明显高于睡眠剥夺组[(111.31±2.96)ng/g,P<0.05],但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。睡眠剥夺组、瘦素补充组小鼠下丘脑Glu水平[分别为(686.56±10.01)ng/g、(668.64±9.93)ng/g]较对照组[(577.11±16.36)ng/g]明显升高(P<0.05),而瘦素补充组与睡眠剥夺组比较差异无统计学意义(P>0.05)。睡眠剥夺组小鼠下丘脑GAD67、GABAARα1蛋白表达[分别为0.68±0.06、0.69±0.07]较对照组(分别为1.09±0.13、0.99±0.07)明显降低(P<0.05),而瘦素补充组(分别为1.39±0.19、1.33±0.14)较睡眠剥夺组及对照组均明显升高(P<0.05)。结论瘦素可上调睡眠剥夺小鼠下丘脑内GABA关键合成酶GAD67的表达,升高下丘脑GABA含量,提高下丘脑GABAARα1蛋白表达,这可能是瘦素影响睡眠的重要机制。

精神分裂症患者β1 GABA_A受体亚基基因突变检测

在精神分裂症的发病机制中,y—氨基丁酸(GABA)递质系统可能存在异常。GABA产生于大脑皮层、海马及边缘系统的中间神经元。这些中间神经元与其它神经元系统,诸如多巴胺、去甲肾上腺素、谷氨酸神经元发生相互作用。

Fmr1基因敲除小鼠耳蜗的GABAα1受体的表达

目的对4周龄Fmr1基因敲除小鼠耳蜗的GABAα1受体表达进行观察,探讨耳蜗GABAα1受体的表达是否受FMRP的影响。方法使用PCR技术对Fmr1基因敲除小鼠鉴定后,对4周龄的Fmr1基因敲除小鼠和野生型小鼠进行耳蜗的GABAα1受体免疫组织化学的表达观察,数据采用多因素方差分析处理。结果耳蜗HE染色结果:4周龄组KO鼠较WT鼠形态学观察无差异。4周龄KO小鼠的耳蜗中GABAα1受体表达的平均阳性细胞数均低于WT小鼠,P<0.01,差异具有统计学意义。结论 GABAα1受体表达的降低可能与FMR1基因KO小鼠听源性惊厥发病有关。

长期注射水杨酸钠对大鼠下丘GAD67和GABAAα1、c-fos表达的影响

目的通过观察长期注射水杨酸钠对大鼠听性脑干反应(ABR)及下丘GAD67和GABAAα1、c-fos表达的影响,探讨大鼠下丘GAD67、GABAAα1、c-fos表达的改变在水杨酸钠耳毒性中的可能机制。方法将24只成年健康Wistar大鼠随机分为2组:水杨酸钠组(肌肉注射10%水杨酸钠175 mg/kg,2次/d,连续28 d)、对照组(每天相同时间注射等量生理盐水,连续28 d)。两组大鼠在处死前进行ABR检测并观察ABR反应阈及波Ⅲ潜伏期的变化,然后将大鼠断头处死并迅速剥离下丘,采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)、蛋白质印迹(Western blot)方法检测下丘GAD67、GABAAα1、c-fos mRNA及蛋白表达的变化。结果 1药物注射28 d后,水杨酸钠组较注射前以及对照组ABR反应阈明显升高,波Ⅲ潜伏期明显延长,差异有统计学意义(P<0.01);2水杨酸钠组GAD67、GABAAα1、c-fos mRNA及其蛋白表达水平较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论GAD67、GABAAα1、c-fos均不同程度参与了水杨酸钠耳毒性的发生发展过程,c-fos表达的上调则可能与水杨酸钠作用于机体后引起听觉中枢神经活动增强有关。

母子隔离应激对幼鼠癫癎易感性的影响

目的初步探讨母子隔离应激对幼鼠癫癎易感性影响及其潜在机制。方法 60只Sprague-Daw-ley幼鼠随机分成3组：对照组、生后第2~17天每天母子隔离15min组和隔离3h组。在生后18d分别行杏仁核刺激诱导惊厥实验,灌注取脑,免疫组化检测海马GABAAα1亚单位表达情况。结果与对照组比较,每天母子隔离3h组幼鼠的体重减轻,杏仁核点燃惊厥阈值降低,完全点燃所需刺激次数减少,惊厥发作程度加重,海马CA1区GABAAα1亚单位表达减少（P〈0.05）,而每天母子隔离15min组与对照组幼鼠在以上几个方面比较则差异无统计学意义（P〉0.05）。结论早期每天母子隔离3h的应激对幼鼠脑发育、癫癎易感性产生不良影响,海马GABAAα1亚单位表达减少可能作为一个重要的潜在机制。