甘薯褪绿矮化病毒西非株系RT-RPA-LFD检测方法的建立与应用

【目的】利用逆转录酶重组酶聚合酶扩增(reverse transcriptase recombinase polymerase amplification,RT-RPA)结合侧向流层析(lateral flow dipstick,LFD)试纸条技术,建立甘薯褪绿矮化病毒(sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV)西非株系(west African strain,WA)的RT-RPA-LFD检测方法。【方法】根据SPCSV-WA外壳蛋白基因和热激蛋白基因的保守序列设计并筛选扩增效果好、特异性强的引物和探针。然后对引物和探针的浓度、扩增体系、温度、反应时间等条件进行优化,建立SPCSV-WA的RT-RPA-LFD检测方法。利用该方法对SPCSV-EA、甘薯羽状斑驳病毒(sweet potato feathery mottle virus,SPFMV)、甘薯潜隐病毒(sweet potato latent virus,SPLV)、甘薯G病毒(sweet potato virus G,SPVG)等常见的甘薯病毒进行检测,验证方法的特异性;将感染SPCSV-WA甘薯叶片样品总RNA进行10倍梯度稀释,分别采用RT-PCR和RT-RPA-LFD进行检测,比较RT-PCR和RT-RPA-LFD方法的灵敏度;对采自田间的甘薯样品和试管苗样品进行RT-RPA、RT-RPA-LFD和RT-PCR检测,验证该方法的实用性。【结果】建立了SPCSV-WA的RT-RPA-LFD检测方法,最适引物为CSV357F/R,探针CSV-CP-Probe(47 bp),引物和探针工作浓度分别为0.2和0.06μmol·L^(-1),温度为42℃,时间5 min。该方法可对SPCSV-WA进行特异性检测,与甘薯上其他常见病毒无交叉反应。RT-RPA-LFD最低可检测到总RNA稀释至10^(-4)溶液,而RT-PCR最低检测到总RNA稀释至10^(-3)溶液,RT-RPA-LFD灵敏度是RT-PCR的10倍。田间采集的22份甘薯样品经RT-PCR、RT-RPA和RT-RPA-LFD检测,均检出11份阳性样品,3种方法检测结果一致。28份试管苗样品的检测结果表明,RT-PCR和RT-RPA-LFD检测结果一致,均检出5份阳性样品。【结论】建立了SPCSV-WA的RT-RPA-LFD检测方法,该方法具有快速、简便、特异、灵敏、可视的特点,既可用于甘薯脱毒试管苗样品的病毒检测,也适用于基层单位田间甘薯病毒样品的现场快速检测。

鲇病原粘孢子虫米氏碘泡虫不同株系的比较

为研究米氏碘泡虫不同寄生部位和不同地理分布的株系差异和遗传分化情况,实验基于其形态特征、组织向性、地理分布、18S rDNA序列相似度、遗传距离、系统发育,对米氏碘泡虫各株系进行比较分析。结果显示,米氏碘泡虫各株系孢子形态特征基本一致;米氏碘泡虫重庆株系1(鲇鳃腔膜寄生)、重庆株系2(鲇肠寄生)和江西株系(鲇肠寄生)间相似度为98.6%~99.9%,遗传距离为0.000~0.013;系统发育分析显示,米氏碘泡虫重庆株系2先与江西株系聚支,其形成的进化支再与重庆株系1形成姐妹群关系。研究表明,米氏碘泡虫并没有形成地理种群特有的单系,而是依据寄生部位形成肠寄生支系和鳃腔膜寄生支系。宿主种类相同的条件下,较之于地理隔离,寄生部位差异对于米氏碘泡虫种群分化的影响更大。

酿酒葡萄“赤霞珠”早熟株系的酚类物质差异研究

以欧亚种红色酿酒葡萄“赤霞珠”的4种不同成熟株系(提前9 d转色株系E1、提前7 d转色株系E2、提前5 d转色株系E3、正常转色株系CK)果实为材料,采用UPLC法测定果实中表儿茶素没食子酸酯、丁香酸、柚皮苷等22种单体酚含量,探索不同成熟株系间葡萄果实中单体酚积累的差异。结果表明:与正常成熟株系(CK)相比,提前5 d转色的成熟株系(E3)总单宁和总花色苷含量最高,分别为1.20和3.27 mg/g;9种酚酸类物质中2,5-二羟基苯甲酸含量在3个早熟株系中占比均为最高,且在E2和E3中占比均超过40%;6种黄烷醇类物质中表没食子儿茶素没食子酸酯含量在E1、E2、E3这3个早熟株系中的占比均为最高,分别占黄烷醇类物质总量的46%、57%、67%;7种黄酮醇类物质中杨梅素在早熟株系(E1、E2、E3)和正常成熟株系(CK)中的含量均为最高,分别占黄酮醇类物质总量的87%、93%、92%、89%;随着成熟时间的不断延后,3种酚类物质均呈现先上升后下降的趋势,在早熟株系中,黄酮醇类物质含量均高于酚酸类和黄烷醇类物质,黄烷醇类物质“赤霞珠”葡萄中积累量较低。

基于双力育种技术筛选铁皮石斛新株系

双力育种技术是利用叶片的电学行为,获取作物的胞内水代谢、物质代谢和能量代谢等植物生理动力学参数,表征作物生命力和生产力(双力)。以“双力”为评价指标在线快速评价作物的生长机能、发育机能、代谢能力和抗逆机能等,对常规育种中的表型和株系、杂交育种的后代以及分子育种的基因型实现在线快速筛选和评价。利用双力育种技术,对16份仿野生附树栽培铁皮石斛资源的叶片胞内水代谢、营养转运能力以及代谢活力进行综合评价,依据得分高低从中筛选出5份适应喀斯特林地附生干燥树皮的铁皮石斛优异株系。继续对得分最高的3份铁皮石斛资源进行筛选和评价,最终获得两次排名均为第一的适宜仿野生干旱逆境铁皮石斛品系LH1,表明双力育种技术能使优良株系筛选效率得到极大的提升。

福州地区雪柑种质资源调查与优良株系筛选

雪柑(Citrus sinensis‘Xuegan’)是福州传统名果,为了筛选出优良株系,多年在福州地区对雪柑种质资源进行了调查及选种研究。结果表明,福州雪柑资源可分为长圆果、圆形果、扁圆果、小叶早熟及晚熟等5个品系,其中,圆形果品系的产量高、品质好。在调查初步选出的4个株系中,闽选2号单果质量大,种子少,总糖含量高,酸含量低,可溶性固形物含量较高,固酸比最高,可食率较高,综合表现最优,可作为优良株系进行培育;闽选5号株系的晚熟性状突出,可作为储备的晚熟优系进一步观察。雪柑丰产性与有叶花序花比例密切相关。

豫北地区小麦中选株系的综合评价

为客观公正地评价豫北地区小麦田间中选株系,为优良品种的审定打下基础,进而提高育种效率,本文依据品种同异比较原理与方法,对2019-2020年安阳市农业科学院的29个小麦田间中选株系的室内考种结果进行了综合分析。结果表明,在29个田间中选株系中,株系4,9,14,13,10,3和30综合表现优良。这些株系不仅产量性状好,其他主要农艺性状也表现较好。其各性状与理想目标性状的综合同一度值分别为0.8810,0.8327,0.8308,0.8286,0.8264,0.8165和0.8102,联系势均为强同势,显著优于对照周麦18和其余株系,很有希望成为优良品种。

青岛烟区马铃薯Y病毒株系鉴定及系统传导特性

为明确引起青岛试验田烟草脉坏死及花叶的PVY的发生规律、分子进化和系统传导特性,通过病毒病害表型,发病率和病情指数明确青岛试验田病毒病害流行规律;利用MEGA7构建系统发育树鉴定PVY青岛分离物的株系;通过q RT-PCR,western blotting和PVY-GFP荧光明确PVY侵染烟株的传导路径;通过不同叶位、不同症状病叶取样,利用q RT-PCR检测PVYCPm RNA相对含量,明确显症和隐症叶片的病毒含量差异,以及TMV、CMV、PVY单独、两者混合、三者混合侵染时的干扰或协生作用。结果显示:烟株成熟期,PVY与TMV和CMV混合发生严重,PVY分离物为N:O株系,未突破va基因抗性。在侵染早期,病毒从接种叶沿叶脉进入茎,开始双向运输时,先向根部移动,进而到达苗端;再扩散至上部叶,较慢移动至下部叶;最后伴随烟株生长持续向两端新生部位运输。侵染中期病株上部叶隐症现象显著,病叶症状与病毒浓度呈正相关。烟田中后期,PVY与TMV和CMV混合侵染,病毒间的干扰和协生作用导致症状复杂多变。研究结果有助于提高品种抗性鉴定试验的准确性和药效试验的靶标性。

青岛及周边地区马铃薯Y病毒株系类型分析

马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)是目前马铃薯生产中的重要病毒,PVY侵染马铃薯会造成产量、质量的严重下降。为了探明青岛及周边地区PVY株系类型,本次共采集青岛及周边地区485份马铃薯疑似PVY样本,共检测出298份PVY阳性样本。对PVY样本进行RT-PCR扩增,结果显示:本地区的主要株系为PVY^(NTN-NW)(SYR-Ⅱ型),占比为62.4%;PVY^(N-Wi)株系占比为31.6%;复合侵染株系占比为6.0%。对复合侵染株系的单株块茎(编号ShouGuang)进行测序、BLSAT比对及Simplot和RDP软件分析,显示PVY复合侵染的马铃薯植株体内存在两种重组类型(ShouGuang-Y1和ShouGuang-Y2);发生重组的位点主要集中在P1-1、HC-Pro/P3、6K2/VPg 3个区域。通过对PVY的不同变异株系分析,可为PVY株系的遗传多样性提供理论基础,为青岛及周边地区PVY防控提供理论依据。

黄淮中北部大豆花叶病毒株系的鉴定与分布

2002-2003年采集了黄淮中北部地区为主的32个县市的大豆SMV病样981份,经初步繁殖鉴定、生物纯化及DAS-ELISA血清学检测,得到95个SMV分离物,根据95个分离物在27个鉴别寄主上的症状反应,最终确定南农1138-2、诱变30、8101、铁丰25、Davis、Bullfalo、早熟18、Kwanggyo、齐黄1号和科丰1号10个品种作为该地区SMV株系的鉴别寄主.利用它们可将95个SMV分离物划分成10个株系群,其中5个与以往鉴定株系群相同,另5个为新发现的株系群,分别将5个新株系群定名为SC-11～SC-15.研究还发现,SC-11株系群所占比例最大,是本地区优势株系;其次为SC-8株系群;SC-11和SC-13株系群分布最广,在黄淮北部各省均有分布.

黄淮区大豆花叶病毒株系组成与分布

用８ 个大豆品种作为一组株系鉴别寄主，将黄淮豆区８ 省市２０２ 个毒株划分为７ 个株系（ｙ１ ～ｙ７） 。ｙ１ 及ｙ２ 为弱毒株系，仅侵染感病品种（１１３８２ 、文丰５ 号） ；ｙ３ 、ｙ４ 、ｙ５ 为中毒株系，分别侵染感病和中抗品种（ 齐黄１０ 号、徐豆１ 号、诱变３０ 、鲁豆４ 号） ；ｙ６ 及ｙ７ 为强毒株系，除侵染以上品种外，还侵染高抗品种（ 齐黄２２ 、密荚１ 号） 。全区弱毒株系占５５ ．９ ％ ，中毒株系占２８ ．７ ％ ，强毒株系占１５ ．３ ％ 。江苏、山东、河南、河北、安徽和北京市以弱毒株系为主（４３ ．５ ％ ～８８ ．９ ％ ） ，山西省以中毒株系为主（５０ ．０ ％ ） ，陕西省弱毒株系、中毒株系各占５０ ．０ ％ ，山东、河南、河北３ 省强毒株系所占比例较高（２２ ．４ ％ ～３３ ．３ ％ ） 。

黄淮地区大豆花叶病毒株系的鉴定与分布

【目的】鉴定黄淮地区大豆花叶病毒株系,明确该地区目前SMV株系的组成、分布和流行情况。【方法】2001～2002年采集了黄淮地区四省28个县市的大豆病样591份,经初步繁殖鉴定、生物纯化及组织印迹检测,得到了50个SMV毒株,采用王修强等筛选的10个鉴别寄主进行接种鉴定。【结果】检测到SC-3～SC-9等7个株系群,发现1个新的株系群SC-10。综合本单位1998～2002年的结果,黄淮地区(河南、山东、安徽北、江苏北)在SC-1～SC-10中,除SC-2未发现外,9个株系群中,以SC-3和SC-7为主,分别占29.21%和23.60%,SC-4和SC-8其次,占10.11%和8.99%。按省分布,河南省有7个株系群,SC-3、SC-4为主,SC-5、SC-7其次;山东省4个株系群,以SC-3为主,SC-8也占相当比重;皖北7个株系群,以SC-7和SC-9为主,其次SC-10;苏北8个株系群,以SC-3和SC-7为主,其次SC-8。按株系群,SC-3、SC-4各省均有;SC-5、SC-6、SC-7在河南、皖北、苏北3地;SC-1、SC-8在河南、山东、苏北3地;SC-9只在皖北发现;SC-10在皖北、苏北2地发现;SC-2在黄淮未发现。【结论】在黄淮地区检测到7个株系群SC-3～SC-9,发现了1个新株系群SC-10。各株系群在黄淮地区的分布不同,各省分中株系组成上也有较大差别。

黄淮和长江中下游地区大豆花叶病毒株系鉴定与分布

通过生物学测定和血清学方法检测了从黄淮和长江中下游地区采集的 135个病样 ,其中 81个表现为SMV阳性反应。证明大豆花叶病毒仍为该地区的优势病毒 ,根据这 81个SMV分离物在 2 5个鉴别寄主上的反应 ,结合分离物来源进行分析 ,结果表明 :⑴黄淮和长江中下游地区大豆花叶病毒可划为SC - 1～SC - 8八个株系群 ;⑵从多组鉴别寄主体系中挑选出的南农 1138- 2、齐黄10号、810 1、铁丰 2 5、Davis、Buffalo、早熟 18、Kwanggyo、齐黄 1号九个大豆品种可以作为一套综合的SMV株系鉴别寄主 ;⑶弱毒株系群SC - 1和SC - 3在黄淮和长江中下游地区分布较广 ,强毒株系群SC - 8仅在江苏南京发现。

水稻孕穗期茎注射野生稻DNA变异株系的RAPD分析

利用野生稻有利基因是培育超高产栽培稻 ( Oryza sativa L,2 n=2 4 AA染色体组型 )的主要技术路线之一。本研究通过穗茎注射法将小粒野生稻 O.minuta( 2 n =4 x=4 8,BBCC染色体组型 )总DNA导入杂交稻当家亲本 V2 0 B,获得了变异株的 3个高世代株系 ;用 RAPD方法对上述 3个株系、供、受体及对照品种明恢 63共 6个材料进行了多态性研究分析。所用 83个 Operon引物均在小粒野生稻与V2 0 B间扩增出多态性产物 ,二者相似系数仅为 2 6.7% ,而明恢 63与 V2 0 B二者的相似系数达 90 .5%。83个引物中有 15个引物在变异株第 7代株系 97C- 77与受体 V2 0 B间扩增出的产物存在差异 ,差异带共有 2 6条 ,占 83个引物在 V2 0 B中扩增出的带数 397的 6.6%。其中 OPB- 18、OPD- 0 3、OPE- 0 9、OPE- 18、OPG- 10及 OPG- 11等 6个引物在 97C- 77中各扩增出 1条只在供体中存在而在受体中不存在的特异带。 2 6条差异带中的 2 4条在共第 3代祖先的第 9代 2个株系 98C- 10 7、 98C- 165与 97C- 77间无差异。因此 ,绝大多数 DNA水平上的变异可能从第 3代起稳定遗传 ;研究结果从 DNA水平证明 ,变异株系中导入了野生稻 DNA,导入野生稻

华南8号木薯及其四倍体诱导株系叶片蛋白质组及叶绿素荧光差异分析

【目的】通过对华南8号木薯及其四倍体诱导株系叶片差异蛋白质及叶绿素荧光参数的分析,在蛋白质水平上揭示两者叶片存在的差异以及其与光合效率间的关系。【方法】通过木薯嫩叶、根尖染色体压片及流式细胞观察对华南8号四倍体诱导株系进行鉴定,采用双向电泳技术分离叶片蛋白质,Delta 2D软件分析差异蛋白质并通过质谱技术鉴定,利用Western blot技术对部分差异蛋白质进行验证;采用95%乙醇直接提取法测定叶绿素含量,并用Imaging-Pam测定叶绿素荧光动力学参数。【结果】染色体压片及流式细胞结果均显示,诱导得到SC8多倍体株系为四倍体株系;得到的13个差异蛋白质点中上调表达12个,下调表达1个;经质谱技术成功鉴定到12个,其功能涉及碳代谢及能量代谢、光合作用、抗氧化、蛋白质代谢调控等;1个下调表达的蛋白质未得到成功匹配,其中参与光合作用的蛋白质占46.2%;四倍体株系叶片叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素均显著升高;叶绿素荧光参数,包括Fo、ΦPSII、qP、NPQ和ETR均显著升高;【结论】参与碳代谢及能量代谢、光合作用等途径相关蛋白质表达水平的上调;叶绿素含量及叶绿素荧光参数的升高;表明四倍体株系叶片PSII反应中心捕光能力强、光化学转化效率高,从而提高了叶片的光合速率。

烟草花叶病毒株系鉴定研究进展

烟草花叶病毒（ＴｏｂａｃｃｏＭｏｓａｉｃＶｉｒｕｓ，ＴＭＶ）具许多株系，国内外近十几年来主要在生物学、血清学、生物化学和分子生物学等方面进行株系鉴定的研究。文章就上述研究进展作一简要综述，并针对某些研究方面阐述了一些见解和评论。

鲁豫皖大豆产区大豆花叶病毒株系的鉴定及动态变化分析

大豆花叶病毒（soybean mosaic virus，SMV）病是一种世界性大豆病害，严重影响大豆产量和品质。对2010年采集的鲁豫皖等大豆产区14个县市的383份病毒病样进行生物纯化及血清学检测，得到64个SMV分离物及部分其他病毒分离物。利用一套统一的SMV株系鉴别寄主对64个SMV阳性分离物进行接种鉴定。根据其在10个鉴别寄主上的反应，将其归为13个株系。其中11个株系与以往在该地区鉴定的株系SC3-SC9、SC11、SC13-SC15相同，一个株系是以往在该地区没有发现而在其他地区存在的株系SC17，另外一个是以往从没有发现过的株系，它能侵染广谱抗源科丰1号，为中强毒株系，现定名为SC22。株系SC3、SC7、SC8和SC13目前仍然是鲁豫皖等地区的主要流行株系，其比率分别为23．4％、14．1％、15．6％和10．9％，是抗病育种和品种审定需要考虑的株系。本研究明确了鲁豫皖等地区SMV株系的变化趋势，可为确定当地大豆抗病育种的方向提供指导。

‘赞皇大枣’不同株系的染色体数及其核型分析

在‘赞皇大枣’原产分布区域内,结合地理分布和形态学特点随机选取42个株系进行细胞学研究,结果表明:供试赞皇大枣均为三倍体,2n=3x=36。对42个株系进行了染色体核型分析和比较,表明赞皇大枣存在核型多态性,主要归纳为3类代表核型:2n=3x=21m(1SAT)+15sm,2n=3x=15m+21sm,2n=3x=21m(2SAT)+15sm;核型对称性分别为2A、2B、2A类型。赞皇大枣可能是由二倍体品种未减数配子和同品种或不同二倍体品种正常配子天然杂交而来。

北京28号桃芽变株系的ISSR和SSR鉴定

品种鉴定是种质资源研究和新品种保护的基础,研究在形态学鉴定的基础上,通过ISSR和SSR标记,对3株北京28号疑似芽变材料及来自同一果园和不同果园对照未变异北京28号进行分子鉴定。结果发现,芽变株系在物候期及果实性状上存在不同程度的变异,50对SSR标记中只有CPPCT022和BPPCT023在对照C2和其他供试样品间存在不同等位基因位点;39条ISSR引物共扩增出314条DNA片段,其中36条具有多态性,多态性频率为11.46%;3株疑似芽变材料两两之间遗传相似系数达到0.99,大于来自同一果园的两对照C1和C2间的遗传相似系数(0.96),说明3株疑似芽变材料应为同一芽变枝嫁接而来。通过UPGMA聚类分析发现,当遗传相似系数为0.96时,3株疑似芽变材料与来自同一果园的两对照未变异北京28号聚为一类群,且与对照C2亲缘关系最为密切,结合表型分析,说明3株疑似芽变株系很可能是由对照C2芽变而来,而CPPCT022和BPPCT023有可能是其变异位点。

中国北方春大豆区大豆花叶病毒株系的鉴定与分布

从我国北方春大豆区的黑龙江、吉林、辽宁、内蒙、河北承德以及北京采集典型症状的大豆叶片病样,经Top-Crop离体叶单斑分离以及DAS-ELISA抗血清免疫鉴定,共获得112个SMV阳性反应分离物。根据112个分离物在合丰25、文丰5号、诱变30、8101、铁丰25、Davis、Buffalo、早熟18、广吉、科丰1号、齐黄22共11个鉴别寄主上的症状反应,将我国北方春大豆区的SMV分成8个株系群。各株系群所占比例分析表明,北方春大豆区以SC-11株系群为主,其次为SC-8,各占病样总数的比例分别为51.7%和17.9%,SC-11和SC-8分别在黑龙江和辽宁分布最广,占当地株系群的比例分别为67.8%和75.0%。与以往株系划分系统的初步比较表明,SC-11与东北原1号株系群,SC-12和SC-16与东北原2号株系群,SC-4、SC-7、SC-8、SC-13和SC-17与东北原3号株系群在鉴别寄主上的反应相似。SC-16和SC-17为2个新发现的株系群。

桑树变异株系基因组DNA扩增多态性(RAPD)研究

利用RAPD技术对新一之品系的二倍体 (新一之、薪一圆、凤尾一之 )、三倍体 (陕桑 30 5 )、四倍体(40 2 - 1、40 2 - 1A、40 2 - 9)和 70 7品系的二倍体 (70 7)、四倍体 (40 3- 2 )进行了基因组DNA多态性研究。在用 91个引物单独扩增和 5 7对引物混合扩增后 ,有 73个单引物、38对混合引物扩增出了条带。在新一之的二倍体和四倍体间没有条带的差异 ,在新一之相同倍数体的不同株系之间也没有发现条带的差异 ,新一之的三倍体陕桑30 5和二倍体、四倍体相比有 4条特异性条带。在 70 7的四倍体 40 3 - 2中 ,发现 1条不同于二倍体 70 7的条带。