GABRG2基因多态性在GEFS^+中分布的研究

目的 探讨GABRG2基因的突变及多态性与全身性癫痫发作伴高热惊厥叠加综合征(GEFS+ )之间的关系。方法 应用PCR -RFLP法对 2 7名GEFS+ 患者 ,10 7名其他癫痫对照组及 6 0名正常对照组进行GABRG2基因突变及多态性的检测。分别检测其外显子 8上的K2 89M突变 ,外显子 5上的C5 4 0T、C5 88T基因多态性。结果 在 194例病例及对照中均未发现K2 89M及C5 4 0T的突变 ,而多态位点C5 88T等位基因频率C %为 5 9.2 6 % ,T %为 4 0 .74 % ,与正常对照组比较有明显差异(P <0 .0 5 ) ,突变前后其二级结构发生了明显变化。结论 外显子 8的K2 89M基因突变及外显子 5的单核苷酸多态性 (SNP)C5 4 0T在研究人群中突变率比较低。外显子 5的SNPC5 88T在GEFS+ 病例组与正常对照之间有明显差异 ,可能与mRNA二级结构变化影响其稳定性导致功能的异常有关。

全面性癫痫伴热性惊厥附加症GABRG2基因突变的筛查

目的:筛查全面性癫痫伴热性惊厥附加症(GEFS+)患者的GABRG2基因,并探讨GEFS+与GABRG2基因的关系。方法:收集49例患者及110例正常对照组血样,应用变性高效液相色谱技术对GABRG2基因的10个编码外显子及与mRNA剪接有关的内含子进行筛查,对发现异常洗脱峰者进行测序。结果:未发现GABRG2基因突变,但发现1个单核苷酸多态性(SNP)位点:Exon2-89T>A(rs2284782)。这个SNP位点在两组中基因型和等位基因频率的分布差异无统计学意义(P>0.05)。结论:GABRG2基因突变可能不是GEFS+患者主要的致病原因,SNP(rs2284782)在患者与正常对照者中分布无明显差异。

2例复杂热性惊厥儿童GABRG2基因突变分析

目的研究2例复杂热性惊厥(CFS)儿童的临床特点及A型GABA受体γ2亚基(GABRG2)基因的突变及其特点。方法研究对象为2例CFS儿童。分别取其外周血5mL,高盐法提取白细胞基因组DNA,应用聚合酶链式反应(PCR)扩增GABRG2基因全部9个外显子及其周围部分内含子,应用正反向引物对PCR产物进行直接DNA序列测定。结果在2例CFS儿童中检测出GABRG2基因1个致病杂合突变,即1287G>A(W390X)。结论 GABRG2基因突变是CFS儿童的主要致病原因。

内侧颞叶癫病人脑组织GABRG2基因变异研究

目的探讨GABRG2基因变异与内侧颞叶癫间疒的关系。方法运用RT-PCR方法测定内侧颞叶癫间疒致间疒灶和其他类型癫间疒病人手术切除脑组织内的GABRG2基因mRNA序列。结果全组共发现3处单核苷酸多态性,其中内侧颞叶癫间疒组245 G→A出现频率与对照组存在统计学差异。结论GABRG2基因突变极有可能在内侧颞叶癫间疒的发病中起重要作用。

GABRG2基因突变与特发性癫痫的相关性筛查分析

目的:探讨GABRG2基因突变与特发性癫痫病的相关性。方法:运用PCR-RFLP对65名健康正常人和60名不同类型的特发性癫痫患者进行GABRG2基因突变及多态性研究,分别检测其外显子8(K289M)位点和外显子5(C588T)位点基因多态性。结果:在GEFS+和CAE这两组病例中发现了9例外显子8和外显子5发生突变,其余病例和正常对照组未发现有上述突变。结论:外显子8的K289M基因突变及外显子5的单核苷酸多态性(SNP)C588T对GEFS+和CAE的临床诊断有重要的参考价值。

GluR-6和GABRG2基因多态性与精神分裂症患者精神症状的关系

目的探讨谷氨酸受体6基因(GluR6)和γ-氨基丁酸γ2受体基因(GABRG2)基因多态性与精神分裂症患者精神症状的关系。方法以聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对600名研究对象的GluR6基因rs2227283(G/A碱基改变)和GABRG2基因rs211014(T/G碱基改变)单核苷酸多态性(SNP)进行检测。同时采用阳性与阴性症状量表(PANSS)、修订版外显攻击量表(MOAS)以及自制的一般情况调查表对研究组和对照组1的研究对象进行测查。使用SPSS13.0对数据进行统计分析。结果(1)GluR6基因的rs2227283位点等位基因分布与精神分裂症的阳性症状被害妄想相关(F=4.641,P=0.032);(2)rs2227283等位基因A与兴奋、情绪退缩、关注身体健康以及不合作等阴性症状相关联(P<0.05),rs211014等位基因G与幻觉行为、兴奋、自罪感、动作迟缓以及不寻常思维内容等阳性症状相关(P<0.05)。结论GluR6基因rs2227283位点多态性可能与攻击行为及阴性症状有关联,GABRG2基因rs211014位点多态性可能与攻击行为及阳性症状有关联。

GABRG2基因敲除小鼠和HT22细胞通过激活PKA/NF-κB信号通路影响MMP3的表达

目的探究GABRG2基因敲除后小鼠海马和HT22细胞中基质金属蛋白酶(MMP)3的表达变化及潜在参与机制。方法动物实验:利用Cre/loxp重组酶系统所构建的GABAA受体γ2亚基(GABRG2)基因条件性敲除小鼠(GABRG2fl/wtCre+)模型为实验组,野生型小鼠作为对照组,用Western blot技术检测小鼠海马中GABRG2、PKA、p-PKA、NF-κB、MMP3蛋白的表达情况;免疫荧光技术观察海马中GABRG2、MMP3蛋白的表达情况;尼氏染色技术观察GABRG2基因缺失对小鼠海马神经元的影响。细胞实验:利用CRISPR/Cas9技术构建GABRG2基因敲除的HT22细胞为实验组,HT22细胞为对照组。Western blot技术检测各组细胞中GABRG2、PKA、pPKA、NF-κB、MMP3蛋白的表达情况;免疫荧光技术观察各组细胞中GABRG2、MMP3蛋白的表达情况。结果动物实验:Westernblot结果显示,与对照组小鼠相比,实验组小鼠海马组织中GABRG2蛋白表达降低(P<0.05),p-PKA、NF-κB、MMP3蛋白表达均升高(P均<0.05),PKA蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);免疫荧光结果显示,与对照组小鼠相比,实验组小鼠海马区GABRG2表达降低,MMP3表达升高,特别在海马CA3区表达明显升高。尼氏染色结果显示,与对照组小鼠相比,实验组小鼠海马神经元的结构松散,神经元离散程度提高。细胞实验:Western blot结果显示,与对照组细胞相比,实验组细胞GABRG2蛋白表达降低(P<0.05),pPKA、NF-κB、MMP3蛋白表达均升高(P均<0.05),PKA表达差异无统计学意义(P>0.05);细胞免疫荧光结果显示,与对照组细胞相比,实验组细胞GABRG2的表达降低,MMP3的表达升高。结论GABRG2基因缺失小鼠海马和HT22细胞均引起MMP3蛋白表达增高,其机制可能与上游PKA/NF-κB信号通路的调控有关。

5-HTR4和GABRG2基因多态性与精神分裂症关系

目的探讨5-羟色胺4受体基因(5-HTR4)和γ-氨基丁酸-γ2受体基因(GABRG2)基因多态性与精神分裂症的关系。方法在95个中国北方汉族精神分裂症患者和他们的健康父母组成的核心家系中,以聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对5-HTR4基因rs888957(C/T碱基改变)和GABRG2基因rs211014(T/G碱基改变)单核苷酸多态性(SNP)进行检测。应用基于家系的连锁不平衡方法分析基因型数据。结果(1)5-HTR4基因rs888957及GABRG2基因rs211014基因型频率的分布均符合Hardy-Weinberg平衡;(2)传递不平衡检验(TDT)结果提示,5-HTR4基因rs888957及GABRG2基因rs211014与精神分裂症无连锁及关联;(3)UNPHASED双位点单体型分析结果显示,rs888957-rs211014单体型系统与精神分裂症无关联(P>0.05);(4)5-HTR4基因的rs888957位点等位基因分布与精神分裂症的阳性症状钟情妄想相关联(P<0.01)。GABRG2基因的rs211014位点等位基因分布与精神分裂的阳性症状冲动伤人行为相关联(P<0.05)。结论5-HTR4基因rs888957位点及GABRG2基因rs211014位多点态性可能与精神分裂症无关,但不能排除5-HTR4基因及GABRG2基因其他SNPs与精神分裂症相关联。

全身性癫癎伴热性惊厥附加症2个家系致病基因GABRG2测序分析

目的对全身癫癎伴热性惊厥附加症(GEFS+)2个家系候选基因GABRG2进行测序研究。方法设计GABRG2外显子-内含子交界处全部9对内含子引物,采用Sanger双脱氧链终止法,对GABRG2PCR测序。结果2个家系未发现GABRG2基因突变,GABRG2基因测序显示外显子5的第13密码子有一C/T多态性。结论本研究结果所显示的单个碱基多态性对其他癫癎家系的连锁分析及其他癫癎综合征分子遗传机制的研究有重要意义。

儿童失神癫GABRG2基因突变筛查

目的对有热性惊厥(FS)和(或)癫家族史的儿童失神癫(CAE)患儿进行γ氨基丁酸A型(GABAA)受体γ2亚单位基因(GABRG2)进行突变筛查,探讨GABRG2基因是否是CAE的易感基因。方法收集30例有FS和(或)癫家族史的CAE患儿(男17例,女13例;发病年龄3岁～10岁6个月)的家系资料,采集患儿及患儿父母的外周血并抽提DNA,采用PCR和DNA直接测序法对其GABRG2基因进行突变筛查。结果30例有FS和(或)癫家族史的患儿家系中,共有71例受累者。其中仅表现为FS16例,CAE30例(其中6例有FS病史,12例有FS家族史,15例有癫家族史,3例同时有FS和癫家族史),失神发作7例(其中3例失神发作前有FS病史),分类不明的癫18例。30例CAE患儿均未发现GABRG2基因突变,但发现4个单核苷酸多态性(SNP),其中315T>C、208T>C和588C>T为已知的SNP,IVS+8C>A为新发现的SNP。结论有FS和(或)癫家族史的CAE患儿,GABRG2基因不是其主要易感基因。

全面性癫伴热性惊厥附加症2家系GABRG2基因突变分析

目的收集2个全面性癫伴热性惊厥附加症(GEFS+)家系,分析中国人GEFS+的遗传特点。并对2个GEFS+家系进行GABRG2基因突变检测,以期发现新的突变位点。方法对参与本研究的2个GEFS+家系成员在知情自愿的情况下参与调查、体检和血样本采集。另取20名健康体检儿童作为对照。对先证者及患者和健康对照组GABRG2基因全部9个外显子进行测序。将患者基因组各外显子片段测序结果与GenBank中的正常序列和健康对照组外显子片段测序结果通过互联网(BLAST)进行比对分析。结果 GEFS+2个家系成员共40份外周血中均未发现K289M、R43Q、Q351X、IVS6+2T→G、R139G、W390X等6种已知突变位点,仅在外显子5第40碱基处发现1个已知C/T多态性。结论 GABRG2基因很可能不是我国汉族人群GEFS+家系主要的致病基因,其与国外报道的GEFS+的主要致病基因存在种族及地域差异。

海马与新皮质组织特异性GABRG2基因敲除小鼠模型的构建及其在遗传性癫痫伴热性惊厥附加症中的初步研究

建立基于Cre/loxp重组酶系统调控的海马和新皮质特异性GABAA受体γ2亚基(GABRG2)基因条件基因敲除小鼠模型,为深入研究海马区和新皮质GABRG2在癫痫发生中的功能作用提供动物模型。将引进的GABRG2fl/wt转基因小鼠与海马和新皮质特异性表达Cre+/+重组酶工具鼠分别进行繁配和鉴定,然后再将2种小鼠进行杂交并对其子代小鼠的基因型进行鉴定,其子代基因型为GABRG2^fl/wtCre+的小鼠为构建的海马区和新皮质特异性GABRG2基因条件性敲除小鼠。利用PCR技术鉴定小鼠基因型,Real-Time PCR和Western blot技术检测GABRG2基因在小鼠海马和新皮质中的mRNA水平和蛋白质水平的表达情况。PCR结果显示子代小鼠基因型符合GABRG2fl/wtCre^+;海马与新皮质特异性GABRG2基因敲除小鼠海马和新皮质中GABRG2的mRNA水平和蛋白质水平显著低于对照组;热造模过程中,实验组小鼠癫痫发作更明显。利用Cre/Loxp技术成功构建了海马与新皮质GABRG2基因敲除小鼠,可为进一步研究GABRG2在癫痫发生中的作用机制奠定基础。

癫痫伴热性惊厥附加症患者GABRG2基因内含子突变的体外剪接分析

目的筛查癫痫伴热性惊厥附加症（EFS＋）患者的GABRG2基因，并对内含子突变进行体外剪接分析。方法收集EFS＋患者血样，应用PCR方法扩增GABRG2基因的9个编码外显子及与mRNA剪接有关的内含子，测序杂合峰的位点，并与110例正常人进行比对。将GABRG2基因第7、8和9外显子及两端部分内含子的PCR产物克隆到pTARGET真核表达载体，构建pTARGET-Exon-7-8-9迷你基因及其Exon8＋45C〉T突变体。野生型与Exon8＋45C〉T突变体分别转染到HEK293细胞，提取RNA进行RT-PCR检测。结果未发现GABRG2基因编码区突变，但在内含子发现1个突变：Exon8＋45C〉T。野生型与Exon8＋45C〉T突变体剪接后的RT-PCR产物大小都为522bp。结论GABRG2基因突变可能不是EFS＋患者主要的致病原因，Exon8＋45C〉T突变不影响GABRG2基因的剪接。

GABRG2基因突变与癫痫相关性研究进展

癫痫是一种常见的慢性脑部疾病,探讨其发生机制一直是脑科学研究的重要方向之一。γ-氨基丁酸A型受体(GABAAR)介导的γ-氨基丁酸(GABA)能抑制性通路在癫痫的发生发展中扮演了重要角色。GABRG2是GABAAR基因中最常见的癫痫致病基因,该基因突变主要通过影响受体在细胞膜上的表达及在突触后膜的聚集性,使得GABA能抑制性通路功能受损,进而导致多种临床表型不同的癫痫综合征。本文将重点综述GABRG2基因突变与癫痫相关性的研究进展,为癫痫患者的精准诊疗提供依据。