人lncRNA-GACAT2过表达载体的构建及其对肺癌细胞增殖和干性的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)胃癌相关转录本2(GACAT2)基因对肺癌A549和H1299细胞增殖和干性的影响,阐明lncRNA GACAT2基因在肺癌发生发展中的作用。方法:实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法扩增lncRNAGACAT2基因的全长序列,克隆至pc3.1(+)真核表达载体,采用菌液PCR法和基因测序法检测GACAT2过表达载体的构建情况。将pc3.1-GACAT2过表达质粒和对照质粒pc3.1分别转入人肺癌A549和H1299细胞,采用G418筛选并建立稳定过表达GACAT2的A549和H1299细胞,分为空载体组(转染pc3.1空载体)和pc3.1-GACAT2组(转染pc3.1-GACAT2重组质粒)。采用RT-qPCR法检测2组A549和H1299细胞中GACAT2 mRNA表达水平,CCK-8法检测2组细胞增殖活性,细胞克隆形成实验检测各组细胞克隆形成数,干细胞成球实验观察2组细胞成球数。结果:成功构建GACAT2真核过表达载体。与空载体组比较,pc3.1-GACAT2组A549和H1299细胞中GACAT2 mRNA表达水平升高(P<0.05或P<0.01),细胞增殖活性降低(P<0.05或P<0.01),细胞克隆形成数明显降低(P<0.05或P<0.01),细胞成球数明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:过表达人lncRNA GACAT2基因能抑制肺癌A549和H1299细胞的增殖能力和细胞干性。