中国汉族人群GAD1和GABRB3基因启动子区单核苷酸多态性与精神分裂症的关联研究

目的·探讨中国汉族人群谷氨酸脱羧酶1(glutamate decarboxylase 1,GAD1)基因和γ-氨基丁酸A受体β亚基[γ-aminobutyric acid (GABA)A receptorβ-3,GABRB3]基因启动子区单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与精神分裂症(schizophrenia,SZ)的相关性。方法·采用SNaPshot基因分型技术对545例SZ患者(病例组)及624例正常个体(对照组)的GAD1基因rs3791878和rs3749034位点、GABRB3基因rs4906902位点进行分型,结合SNPstats在线软件比较总体样本和性别分层后样本的病例组与对照组之间等位基因、不同遗传模式下基因型分布的差异。应用生存分析研究rs3791878位点风险基因型G/T与男性SZ患者发病年龄的相关性。结果·在超显性遗传模式下,在男性病例组与对照组之间rs3791878位点G/T基因型分布差异有统计学意义(P=0.000),且P值经Bonferroni校正后,差异仍有统计学意义(P=0.000);而在总体样本的病例组与对照组之间rs3749034和rs4906902位点的等位基因及不同遗传模式下基因型分布差异均无统计学意义(P>0.05),在性别分层后的病例组与对照组之间等位基因分布差异也无统计学意义(P>0.05)。Kaplan-Meier分析显示,男性SZ患者在rs3791878位点携带风险基因型G/T与不携带风险基因型G/T在发病年龄上差异无统计学意义(P=0.603)。结论·GAD1基因启动子区rs3791878位点与中国汉族男性SZ患者的发病显著相关。

小儿脑性瘫痪与GAD1基因相关性研究

目的小儿脑性瘫痪是严重威胁儿童健康的致残性疾病,其原因和发病机制至今尚不完全清楚。本研究运用分子生物学技术,对小儿脑瘫患儿GAD1基因部分外显子进行研究,探究小儿脑瘫人群易感性。方法收集脑瘫和对照患儿各109例,经患者家属同意对儿童采集外周血,用试剂盒提取DNA,设计引物,并运用PCR-SSCP方法对病例组与对照组血样GAD1基因第2、7、10外显子进行检测。结果对病例组和对照组共218例血样进行PCR-SSCP筛查,未检测出异常。结论 GAD1基因第2、7、10外显子未发现突变,小儿脑瘫与GAD1基因第2、7、10外显子可能无关联性,但不排除其他外显子与脑瘫相关。

CNR1、GAD1和BDNF基因多态性与云南傣族男性海洛因依赖的相关性分析

为了探讨大麻素受体1基因(Cannabinoid receptor 1,CNR1)3个SNP位点(rs6454674、rs1049353和rs806368)、谷氨酸脱羧酶1基因(Glutamate decarboxylase 1,GAD1)3个SNP位点(rs1978340、rs3791878和rs11542313)、脑源性神经营养因子基因(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)2个SNP位点(rs6265和rs13306221)与云南傣族男性海洛因依赖的相关性,文章采用病例对照关联分析,建立8-SNPs复合扩增体系,应用SNaPshot方法检测165例傣族男性海洛因依赖患者和170例健康傣族男性CNR1、GAD1和BDNF基因8个SNPs位点基因型,采用SPSS17.0、Haploview4.2、PHASE2.1和MDR软件进行统计学分析。结果显示,rs13306221基因型频率在海洛因依赖组和对照组中的差异具有统计学意义(P<0.025),海洛因依赖组rs6265 A等位基因显著高于对照组(P<0.05),由rs1978340-rs3791878-rs11542313构建的T-A-C、C-C-C、C-C-T和T-C-C单体型及rs6265-rs13306221构建的A-G单体型频率在海洛因依赖组及对照组中差异具有统计学意义(P<0.05),海洛因依赖组T-A-C、C-C-T和A-G单体型频率明显高于对照组,GAD1基因rs1978340与rs3791878之间可能存在强协同的交互作用。结果表明,CNR1基因rs1049353多态性、GAD1基因rs1978340和rs11542313多态性以及BDNF基因rs6265和rs13306221多态性与云南傣族男性海洛因依赖相关联,并且携带rs6265 A等位基因的个体可能更容易对海洛因产生依赖。

小儿脑性瘫痪与GAD1基因相关性研究分析

目的:分析研究小儿GAD1基因中第2、7、10号外显子突变与小儿脑性瘫痪之间的相关性。方法:对94例脑性瘫痪患儿(研究组)以及同期收治的非神经系统疾病和非脑瘫患儿94例(对照组)进行分子生物学研究,经患儿家长同意后收集所有儿童的外周血,利用试剂盒提取其DNA,并设计引物,采用PCR-SSCP对脑性瘫痪患儿和对照组儿童GAD1基因部分外显子检测。结果:研究组和对照组中所有儿童进行PCR-SSCP检查之后发现,所有儿童GAD1基因中第2、7、10号外显子均未有异常突变,两组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:GAD1基因中第2、7、10号外显子在小儿脑性瘫痪患者中均不存在突变现象,说明小儿脑性瘫痪与其GAD1中第2、7、10号外显子之间可能无相关性,但是并不排除与其他外显子之间存在相关性。

自杀行为中5-HT基因和GAD1基因的交互作用

目的初步探讨5-羟色胺受体2C(5-HTR2C)基因、单胺氧化酶A(MAOA)基因和谷氨酸脱羧酶(GAD1)基因多态性与自杀行为的关系,并分析基因-基因之间的交互作用。方法对中国人群中21例有自杀行为史病例样本和50例健康对照者进行基因型分型;采用多因子降维法进行交互作用分析。结果对照组符合哈温平衡(HWE)检验,病例组中5-HTR2C位点不符合HWE检验(P<0.05),经过性别矫正检验显示与自杀行为正相关;两组的5-HTR2C基因型频率差别有统计学意义(χ~2=6.18,P=0.04);病例组和对照组MAOA、GAD1基因型频数差异均无显著统计学意义(P>0.05)。在MDR模型分析得到最优模型组合为rs5953210-rs769391位点构建的交互模型OR=20.19,95%CI4.19~97.38,P<0.01,交互作用显著。结论 5-HTR2C基因rs3813928、rs518147位点多态性可能与自杀行为存在关联,与GAD1基因rs3749034、rs769391位点和MAOA基因rs5953210、rs979605位点无关联。在MDR模型中,5-HTR2C基因与MAOA基因在自杀行为发病中具有显著交互效应,可增加自杀行为的发病风险。

熟地黄上调木糖基转移酶Ⅰ信号途径促进阴虚大鼠脑内γ-氨基丁酸合成的机制研究

目的基于木糖基转移酶Ⅰ(xylt-1)信号途径探讨熟地黄及其活性成分地黄苷D、梓醇对脑内γ-氨基丁酸(GABA)的调控机制。方法(1)将SD大鼠随机分为正常组、模型组、治疗组(熟地黄组,30 g·kg^(-1)),每组8只,雌雄各半。采用辛温燥湿利湿中药复方(30 g·kg^(-1))灌胃诱导建立阴虚大鼠模型,早晚各1次,连续10 d。造模结束后,治疗组灌胃熟地黄水煎液,早晚各1次,连续10 d。测定记录大鼠体质量并通过旷场行为学实验检测其活跃度、穿格次数及总路程;采用ELISA法检测大鼠血清促性腺激素释放激素(GnRH)、促甲状腺素释放激素(TRH)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平;qPCR法及全自动毛细管蛋白印迹法检测大鼠脑组织中xylt-1、多配体蛋白聚糖1(SDC-1)、早期生长反应因子1(EGR1)、谷氨酸脱羧酶1(GAD67)mRNA及蛋白表达水平;HPLC法检测脑组织中GABA含量。(2)采用siRNA沉默大鼠高分化肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)的xylt-1基因,细胞分为正常组、阴性对照组、沉默组、沉默+地黄苷D(10μmol·L-1)组、沉默+梓醇(10μmol·L-1)组。采用qPCR法检测细胞中xylt-1、SDC-1、EGR1、GAD67 mRNA表达水平;HPLC法检测细胞内、外液GABA含量;免疫荧光法检测细胞中SDC-1表达水平。(3)采用慢病毒转染PC12细胞过表达xylt-1基因,细胞分为正常组、阴性对照组(空载组)、过表达组。然后采用qPCR法检测细胞中xylt-1、SDC-1、EGR1、GAD67 mRNA表达水平;HPLC法检测细胞内、外液GABA含量。结果(1)与正常组比较,模型组大鼠的体质量显著降低(P<0.01),活跃度显著升高(P<0.01),穿格次数及总路程显著增加(P<0.01);血清LH、FSH、GnRH、CRH、TRH水平均显著升高(P<0.01);海马及大脑皮层组织中的GABA含量明显降低(P<0.05,P<0.01);脑组织中的xylt-1、SDC-1、EGR1、GAD67 mRNA(海马、大脑皮层组织)及蛋白(下丘脑、大脑皮层组织)表达均显著下调(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,治疗组大鼠经熟地黄干预后的体质量明显升高(P<0.05),活跃度显著下降(P<0.01),总路程明显缩短(P<0.05);血清LH、FSH、GnRH、CRH、TRH水平均显著下降(P<0.01);海马及大脑皮层组织中的GABA含量明显升高(P<0.05,P<0.01);脑组织中的xylt-1、SDC-1、EGR1、GAD67 mRNA(海马、大脑皮层组织)及蛋白(下丘脑、大脑皮层组织)表达均显著上调(P<0.05,P<0.01)。(2)与阴性对照组比较,沉默组细胞的xylt-1、SDC-1、EGR1、GAD67 mRNA表达显著下调(P<0.01);细胞内、外液中的GABA含量明显降低(P<0.05,P<0.01);细胞中SDC-1表达显著下调(P<0.01)。与沉默组比较,沉默+地黄苷D组细胞的xylt-1mRNA表达上调,但差异无统计学意义(P>0.05),沉默+梓醇组细胞的xylt-1 mRNA表达明显上调(P<0.05);沉默+地黄苷D组、沉默+梓醇组细胞的SDC-1、EGR1、GAD67 mRNA表达显著上调(P<0.05,P<0.01),细胞内、外液中的GABA含量显著升高(P<0.01),细胞中SDC-1表达显著上调(P<0.05,P<0.01)。(3)与正常组及阴性对照组比较,过表达组细胞的xylt-1 mRNA表达显著上调(P<0.01)。与阴性对照组比较,过表达组细胞的SDC-1、EGR1、GAD67 mRNA表达显著上调(P<0.01),细胞内、外液中的GABA含量显著升高(P<0.01)。结论脑内可能存在调节GABA合成的xylt-1/SDC-1/EGR1/GAD67通路,熟地黄可能通过上调该通路提高脑内GABA水平。

陵水县小儿脑性瘫痪患病率、相关因素及GAD1基因相关性研究

目的了解三亚地区小儿脑性瘫痪(cerebral palsy,CP)的患病率、相关因素及对其GAD1基因部分外显子进行研究,进而为该地区临床防治本病提供有利参考,实现优生优育的目的。方法对2017年01月至2019年10月选择在海南省陵水县人民医院行健康体检的本地区8819名儿童及其中CP患儿、患儿GAD1基因部分外显子及其母亲的临床资料进行回顾性分析。结果①陵水县小儿CP的患病率约3.97‰(35/8819)。②所有CP患儿GAD1基因中第2、7、10号外显子均未有异常突变。③经多元因素Logistic回归分析,发现低出生体重、新生儿窒息、难产、呼吸窘迫综合征、早产、高胆红血症、妊娠高血压、宫内感染等是导致本地区小儿CP的高危独立因素(P<0.05)。结论①陵水县小儿CP的发病率较高,且危险因素颇多,相关部门应予高度重视及加强危险因素管理。②小儿CP与其GAD1基因中第2、7、10号外显子之间可能无相关性,但不排除与其他外显子存在相关性可能。

DNA甲基化与精神分裂症的研究进展

精神分裂症是一种以认知、思维、情感、行为等多方面显著异常为特征的精神疾病,是最常见的重性精神疾病之一,给个人、家庭以及社会带来严重困扰。近年来针对精神分裂症患者的表观遗传学研究,DNA甲基化是主要的研究方向之一。综述近年来DNA甲基化与精神分裂症的研究进展,以期为精神分裂症症的进一步研究提供新的思路及参考价值。

猪的GAD2基因的克隆及其系统发育的分析

通过RT-PCR克隆和测定了猪的谷氨酸脱羧酶-2(Glutamic acid decarboxylase 2,GAD2)基因的核苷酸序列并构建了该基因编码蛋白的三维结构分子模型。结果显示猪的谷氨酸脱羧酶-2基因的核苷酸长度由1758bp个碱基组成,编码产物为由585个氨基酸残基组成的多肽,编码产物中含有5-磷酸吡哆醛互作的结构域。构建包括共19物种的系统进化树,所得数据有利于我们了解谷氨酸脱羧酶趋同和趋异的进化途径。