低聚壳聚糖与银杏叶聚戊烯醇配伍对辐射损伤小鼠微核率及p53、Gadd45蛋白表达的影响

以低聚壳聚糖与不同浓度的银杏叶聚戊烯醇配伍,研究了其对受照小鼠30天存活率、存活时间、骨髓微核及脾脏p53、Gadd45蛋白的影响。结果表明,300 mg/kg低聚壳聚糖与5 mg/mg银杏叶聚戊烯醇配伍后能有效提高辐射损伤动物存活率和存活时间,降低损伤动物的微核率以及p53、Gadd45蛋白表达。说明低聚壳聚糖与银杏叶聚戊烯醇配伍具有一定的辐射损伤保护作用。

Gadd45蛋白家族在肿瘤发生发展中的作用

Gadd45蛋白是一种响应环境的应激蛋白,在DNA修复、细胞周期调控及衰老、基因毒性应激反应等多种细胞功能中起着重要的调节作用,该类蛋白包括α,β和γ三种亚型。大量研究结果显示,它们在肿瘤细胞中参与了多种信号通路的调控,与肿瘤的发生及发展关系密切,其表达改变与肿瘤预后息息相关。本文就近年来Gadd45蛋白家族与肿瘤发生发展的研究进展进行简要介绍与阐述。

Gadd45蛋白诱导细胞周期停留

Gadd45蛋白定位于细胞核。Gadd45蛋白家族包含3个亚型,分别是Gadd45α、Gadd45β和Gadd45γ。研究发现Gadd45蛋白能够诱导细胞停留在G2/M期,从而抑制细胞生长。另外,研究表明Gadd45蛋白主要通过与MAPK、p53等信号通路相互作用,诱导细胞周期停留。因此,Gadd45蛋白在恶性肿瘤的研究和治疗中,受到越来越多的关注。

GADD45蛋白在肿瘤中的作用

GADD45蛋白是参与DNA损伤修复的重要基因之一,在响应毒性和非毒性应激过程中可快速上调,并在细胞周期调控、DNA损伤修复及细胞信号转导过程中发挥重要作用。研究显示,GADD45蛋白在组织及细胞中广泛表达,其表达异常与肿瘤发展息息相关,在肿瘤进展过程中,GADD45蛋白连接多种细胞信号模块,参与调节包括细胞增殖、侵袭与迁移以及血管生成等在内的肿瘤生长;影响肿瘤的放疗抵抗及化疗耐药;同时也影响肿瘤患者的总体生存率。本文就近年来GADD45蛋白在肿瘤中的作用进行了总结。

18F-FDG对小鼠Lewis肺癌移植瘤P53、XIAP与GADD45蛋白表达的影响

目的 观察18F-氟代脱氧葡萄糖（18F-FDG）内照射对Lewis肺癌移植瘤P53、XIAP与GADD45蛋白表达的影响,探讨其作为内照射治疗药的可行性.方法 建立Lewis肺癌C57BL/6小鼠皮下移植瘤模型48只,随机数字表法分为高剂量组、低剂量组和对照组,每组16只.接种后第7天,3组小鼠分别腹腔注射0.2 ml 18F-FDG及等体积生理盐水,使高、低剂量组18F-FDG注射量分别为18.5×107和9.25×107 Bq.第22天处死小鼠,SP免疫组织化学法检测移植瘤组织P53、XIAP与GADD45蛋白表达.结果 每种蛋白3组小鼠间表达差异有统计学意义（x2=8.30、16.02、7.68,P ＜0.05）.3组小鼠Lewis肺癌P53蛋白表达的平均积分光密度分别从对照组的（0.089±0.033）随照射剂量增大为高剂量组的（0.315±0.028）;XIAP蛋白表达的平均积分光密度从（0.422±0.034）逐步减小为（0.149±0.055）;GADD45蛋白表达的平均积分光密度从（0.126±0.023）逐步上升为（0.383±0.035）.3组间蛋白表达量差异有统计学意义（P53：F =5.26,P＜0.05;XIAP：F=4.29,P＜0.05;GADD45：F=5.98,P＜0.05）.结论 18F-FDG能够上调P53和GADD45蛋白表达,下调XIAP蛋白表达,促使小鼠Lewis肺癌组织细胞以P53依赖的方式凋亡,抑制Lewis肺癌移植瘤生长.

Gadd45β蛋白在肝细胞性肝癌中的表达及意义

目的检测Gadd45β蛋白在肝癌组织中的表达,探讨其与肝癌临床病理特征的关系。方法用免疫组化检测Gadd45β蛋白在50例肝细胞性肝癌及癌旁组织中的表达情况。结果Gadd45β蛋白在肝癌组织中的阳性表达率为26.0%(13/50),而在癌旁组织中的阳性表达率为82.0%(41/50),两者有显著性差异(P<0.01)。Gadd45β蛋白的表达与肝癌分化程度密切相关(P<0.05),其在高分化癌中阳性率(47.3%)显著高于在低分化癌中的阳性率(5.9%)。而Gadd45β蛋白的表达与性别、年龄以及有无淋巴结转移均无明显关系(P>0.05)。结论Gadd45β蛋白在肝细胞性肝癌组织中呈低表达,可能与肝癌的发生有关,并对肝癌恶性程度及预后判断可能有意义。

ALA-PDT对皮肤鳞状细胞癌A431细胞甲基化及Gadd45a表达的影响

目的探究5-氨基酮戊酸光动力疗法(ALA-PDT)对皮肤鳞状细胞癌(简称皮肤鳞癌)A431细胞甲基化及Gadd45a表达的影响。方法培养皮肤鳞癌A431细胞,将细胞分为对照组以及不同剂量的ALA-PDT处理组(ALA浓度分别为:0.1、0.5、2mmol/L),MTT检测各组细胞增殖活力。分别采用q PCR和Western blot方法检测ALA-PDT处理后A431细胞Gadd45a mRNA及Gadd45a蛋白表达。流式细胞术检测ALA-PDT处理后各组细胞凋亡率,并进一步观察经ALA-PDT处理后对A431细胞DNA总体甲基化水平的影响。结果不同ALA浓度(0.1、0.5、2mmol/L)ALA-PDT处理后,随ALA浓度上升A431细胞增殖抑制率及细胞凋亡率均呈逐渐升高的趋势(P均<0.05);经不同ALA浓度(0.1、0.5、2mmol/L)ALAPDT处理后A431细胞Gadd45a蛋白表达水平随ALA浓度上升而上升,而ALAPDT组DNA总体甲基化显著下降,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ALA-PDT治疗通过促进Gadd45a蛋白表达抑制皮肤鳞癌A431细胞增殖并促进凋亡,过表达的Gadd45a蛋白可抑制A431细胞DNA甲基化。

野生型p53对白血病K562细胞中心体过度复制的抑制作用

背景与目的:肿瘤组织细胞中p53基因突变或缺失是导致非整倍体的发生和基因组不稳定的主要原因之一;最近研究发现慢性粒细胞白血病(chronicmyelogenous leukemia,CML)各期患者均有中心体异常,且异常的程度与临床分期有关,急变期显示更为严重的中心体异常。本研究建立携野生型p53基因的CML急变K562细胞株,以研究该细胞内野生型p53基因表达后p53信号转导通路对K562细胞中心体的影响。方法:用HEK293细胞扩增重组p53野生型、突变型及空载腺病毒载体,联合polybrene分别感染K562细胞;未接受感染的细胞作为空白对照。流式细胞术检测重组腺病毒载体感染效率,Western blot检测P53蛋白表达。间接免疫荧光染色后用激光共聚焦计数K562细胞中心体的变化。Western blot检测p53信号转导通路下游效应分子生长阻滞和DNA损伤应答基因Gadd45a(growth arrest and DNAdamage)、BubR1(Bub1related)、Aurora A的表达。结果:成功建立携野生型p53基因的K562细胞株,腺病毒载体感染效率达60%以上,野生型p53可在K562细胞中持续表达。感染72h后,携野生型p53基因的K562细胞中中心体数量异常(n>2)的细胞比例降至(0.38±0.02)%,与空白对照组(0.71±0.14)%比较其差异有统计学意义(P<0.05);Westernblot结果发现p53信号转导通路下游效应分子Gadd45a、BubR1表达分别上调93%、88%,而Aurora A的表达下降56%(P值均<0.05)。结论:重组腺病毒介导的野生型p53基因能够在白血病K562细胞中持续表达;野生型P53蛋白可能通过转录激活-依赖途径上调Gadd45a、BubR1表达以及转录激活-非依赖途径使Aurora A的表达下降,从而抑制K562细胞中心体的过度复制。

胃癌中P53蛋白转录调控活性的分析及其临床意义

目的探讨P53蛋白转录调控活性在胃癌发生发展中的作用。方法应用双荧光素酶报告基因测试（dual—luciferase reporter assay）检测人类胃癌细胞和正常细胞中p53转录调控活性，并通过逆转录-PCR对细胞中p58全长进行扩增，构建pMD18-T—p53重组质粒测序，检测p53突变对其活性的影响。应用免疫组织化学的方法联合检测P21^WAP1/Cip1，Gadd45α，Mdm2三种蛋白在76例胃癌及癌旁组织中表达水平，通过分析它们与肿瘤的临床病理特征及各个分子之间的相关性来间接反应P53在组织中的转录调控活性。结果双荧光素酶报告基因显示p53转录调控活性在正常细胞中明显高于肿瘤细胞，在p53基因发生突变的细胞系MKN28中P53蛋白转录活性最低。免疫组化结果显示P21^WAP1/Cip1，Gadd45α，Mdm2在癌旁组织中的表达明显高于肿瘤组织（P〈0．05），且随着肿瘤TNM分期的增高有表达降低的趋势（P〈0．05）。P21^WAP1/Cip1，Gadd45α，Mdm2之间的相关性分析结果显示3个分子在胃癌组织和癌旁组织中的表达呈正相关（P〈0．05）。结论P53蛋白转录调控活性的变化在胃癌的发生发展中起着重要的作用，p53突变可以影响其转录调控活性。P21^WAP1/Cip1，Gadd45α，Mdm2联合检测可以作为间接反映P53蛋白转录调控活性的效应分子。