癌-睾丸抗原GAGE-1基因的重组、表达及纯化

目的为进一步研究临床应用癌-睾丸抗原GAGE-1诱导特异性抗肿瘤免疫反应,对GAGE-1基因进行克隆、体外原核重组表达及蛋白分离纯化。方法运用RT-PCR技术从人QGY-7701肝癌细胞株中扩增GAGE-1基因片段,插入原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组表达质粒pGEX-6p-1-GAGE-1,并导入大肠杆菌BL21,IPTG诱导目的蛋白表达;经包涵体透析复性及GST柱亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析鉴定。结果扩增得到GAGE-1基因5’端251 bp片段,与GeneBank公布的序列一致,构建的PGEX-6p-1-GAGE-1原核表达质粒经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达分子量约35.7 kD的GST-GAGE-1融合蛋白,纯化后蛋白纯度为90%以上。结论成功构建PGEX-6p-1-GAGE-1重组表达质粒,并成功表达纯化了GST-GAGE-1融合蛋白,为进一步深入研究GAGE蛋白奠定了基础。

QGY-7701肝癌细胞株中癌-睾丸抗原GAGE-1基因的表达

目的研究癌-睾丸抗原GAGE-1基因mRNA在QGY-7701肝癌细胞株中的表达情况。方法运用反转录聚合酶链反应技术检测肝癌细胞株QGY-7701中GAGE-1基因mRNA的表达,并与正常肝组织比较。结果肝癌细胞株QGY-7701中GAGE-1基因呈阳性表达,正常肝组织中GAGE-1基因呈阴性表达。结论 GAGE-1基因具有作为诊断肝癌的分子标记和免疫治疗肝癌的特异性靶位的潜在价值。

GAGE-1 DNA肿瘤疫苗的构建及其抗肿瘤治疗效果的试验研究

核酸疫苗的接种有多种途径,包括肌内、皮内、皮下注射途径、基因枪免疫、黏膜免疫途径等.不同免疫途径的免疫机制不同,所诱导的免疫保护力的强弱和维持的时间也不尽相同.GAGE基因通常表达于睾丸组织和部分恶性肿瘤组织中,被认为可能是理想的癌症诊断的标记和治疗的靶位.GAGE-1这个基因就属于这个家族.在本研究中,将C57 BL/6小鼠随机分为4组,分别接种实验组或对照组各三次.末次免疫后10d小鼠用于肿瘤细胞攻击试验:分别于左背部、右背部皮下种植B16肿瘤细胞、B16/GAGE-1肿瘤细胞.种植肿瘤细胞(荷瘤)后观察成瘤时间、肿瘤大小,并对小鼠脾细胞进行CTL细胞杀伤活性实验来观察DNA疫苗引起的免疫反应.

植入式三维应变丝传感测试技术

蜗杆传动的变形理论与实验研究，属于典型的复杂空间曲面的三维接触问题．作者首次使用植入式三维应变丝的传感测试技术，测试了蜗杆传动的接触应力．文中还介绍了测试装置、三维应变测试单元的制作和浇铸．