鸡β-防御素3(Gal-3)基因的克隆、表达及抑菌活性研究

【目的】克隆和表达鸡β-防御素3(Gal-3)基因,并对其抑菌活性进行研究,为寻找替代抗生素的抗菌肽提供试验依据。【方法】利用RT-PCR方法,从鸡心脏中分离并克隆了鸡Gal-3基因,将其与分子伴侣基因SUMO相融合,再将该融合基因与原核表达载体pET-20b连接后转化至BL21(DE3)宿主细胞中,经IPTG诱导后,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析;最后,对Gal-3融合蛋白进行纯化,并对表达产物进行体外抑菌试验。【结果】通过RT-PCR扩增获得了约240bp的鸡Gal-3基因,经IPTG诱导获得约26ku的蛋白。IPTG在终浓度为0.6mmol/L,33℃诱导4h,诱导时菌体A600为0.6,蛋白表达量最高,且多数以可溶形式存在,33℃上清中的蛋白含量比37℃上清高。纯化的蛋白对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌均有明显的抑菌活性。【结论】成功克隆并表达了鸡Gal-3基因,其原核表达产物对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌具有一定的抑菌活性。

3种不同中医治法对大鼠肝脏癌细胞半乳糖凝集素表达的影响

目的观察3种不同中医治法对大鼠肝癌半乳糖凝集素(GAL-3)表达的调控差异以及GAL-3在人肝癌细胞增殖中的作用,以探讨肝癌治疗的新靶点。方法将72只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、喃氟啶组(喃氟啶8.33mg/100g)、清热解毒组(清热解毒方1.5g/100g)、活血化瘀组(活血化瘀方1.27g/100g)、健脾理气组(健脾理气方1.75g/100g),每组12只,除正常组外,其余各组大鼠采用二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌,各组均给药6周,检测各组大鼠肝癌组织(正常组取肝组织)GAL-3的表达。根据人GAL-3基因编码区设计2个siRNA靶点,并构建重组质粒转染SMMC-7721人肝癌细胞株,分为空白组、阴性组、GAL-3RNAi组,实时定量PCR检测各组GAL-3mRNA的表达,MTT法检测各组转染后24h、72h、144h细胞增殖。结果模型组GAL-3基因表达显著增加,健脾理气组能下调其表达;转染72h后GAL-3RNAi组GAL-3mRNA表达量明显降低;转染144h后,GAL-3RNAi组肝癌细胞的生长增殖得到了明显的抑制(P<0.01)。结论 GAL-3基因在肝癌组织中高表达,健脾理气方能显著下调该基因表达。