miR-181a、GAL3在急性缺血性脑卒中病情及预后评估中的临床价值

目的研究miR-181a、半乳凝素-3(galectin-3,GAL3)在急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)病情及预后评估中的临床价值。方法选取2019年1月至2021年1月诊治的82例AIS患者(AIS组)和40例同期无缺血性脑卒中的颅脑血管疾病患者(对照组)为研究对象,比较两组患者的血清miR-181a、GAL3、美国国立卫生研究院卒中量表(National Institute of Health stroke scale,NIHSS)、改良Barthel指数评定量表(modified Barthel index,MBI)及Fugl-Meyer肢体运动功能(Fugl-Meyer assessment of gait,FMA)评分的差异。Pearson相关性分析miR-181a、GAL3与神经功能指标(NIHSS、MBI、FMA评分)的相关性。采用受试者操作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)分析miR-181a、GAL3预测AIS患者1年预后不良的效能。Logistic回归分析AIS患者1年死亡的危险因素。结果与对照组比较,AIS组患者的miR-181a、GAL3、NIHSS评分显著增高(P<0.05);MBI及FMA评分均显著降低(P<0.05)。AIS组患者的miR-181a、GAL3与NIHSS评分呈正相关(r>0,P<0.05);与MBI评分、FMA评分呈负相关(r<0,P<0.05)。miR-181a、GAL3预测AIS组患者1年预后不良的敏感度、特异性、曲线下面积(areaunder the curve,AUC)均高于NIHSS评分、MBI评分、FMA评分;miR-181a联合GAL3预测AIS组患者1年预后不良的敏感度、特异性、AUC均高于miR-181a、GAL3、NIHSS评分、MBI评分、FMA评分。miR-181a≥1.3、GAL3≥12.3ng/ml、NIHSS评分≥17.4分、MBI评分<67.6分、FMA评分<84.2分为AIS患者1年死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论AIS患者血清miR-181a及GAL3水平明显增高,在AIS病情及预后评估中具有一定的临床价值。

血清Lp(a)、GAL3、Vaspin与前循环急性缺血性脑卒中患者Trevo支架取栓术后转归的相关性

目的探究血清脂蛋白a[Lp(a)]、半乳糖凝集素3(GAL3)、内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)与前循环急性缺血性脑卒中患者Trevo支架取栓术后转归的相关性。方法选取2019年6月至2022年3月南阳市中心医院神经内科收治的前循环急性缺血性脑卒中112例患者为研究对象,均给予Trevo支架取栓。根据患者术后第14天的改良Rankin量表(mRS)评分将患者分为转归优良组(76例)及转归不良组(36例)。对比两组入院、术后即刻、术后3天、术后1周、术后2周的血清Lp(a)、GAL3、Vaspin水平,采用Spearmen分析血清Lp(a)、GAL3、Vaspin与前循环急性缺血性脑卒中患者Trevo支架取栓术后转归的相关性。结果术后3天、术后1周、术后2周,转归优良组的血清Lp(a)和GAL3均低于转归不良组(t=7.725、10.602、9.578,2.888、5.875、9.45,P均<0.05);Vaspin水平均高于转归不良组(t=23.416、14.754、8.428,P均<0.05);Spearmen相关性分析结果显示,前循环急性缺血性脑卒中患者Trevo支架取栓术后转归优良与血清Lp(a)、GAL3正相关,与Vaspin水平负相关。结论血清Lp(a)、GAL3、Vaspin与前循环急性缺血性脑卒中患者Trevo支架取栓术后转归情况具有相关性,可参考对患者血清Lp(a)、GAL3、Vaspin进行监测及时给予相应临床措施以改善患者取栓术后转归情况。

GAL3ST1对肝细胞癌肿瘤进展的影响及机制研究

目的探究半乳糖-3-O-磺酰基转移酶1(GAL3ST1)对肝细胞癌(HCC)进展的影响及机制。方法以高转移人肝癌细胞株(MHCC97H)为研究对象,分别转染MHCC97H-GAL3ST1 OE上调GAL3ST1表达(GAL3ST1 OE组)、MHCC97H-GAL3ST1 KD下调GAL3ST1表达(GAL3ST1 KD组),另设不作任何处理的Ctrl组。采用MTT法检测各组细胞的增殖情况;流式细胞术检测各组细胞周期和凋亡情况;Western blotting检测鞘脂代谢通路蛋白的表达;观察小鼠皮下移植瘤的生长情况;实时荧光定量PCR(qPCR)检测各组UGT8和GALC mRNA的表达。结果培养24、48和72 h后,GAL3ST1 OE组细胞存活率分别为(127.27±2.47)%、(152.45±2.41)%和(174.62±0.78)%,均高于Ctrl组的(100±0.0)%、(125.86±1.84)%和(148.17±1.94)%,差异有统计学意义(P<0.05)。GAL3ST1 OE组S期细胞比例为(14.95±0.95)%,低于Ctrl组的(30.27±0.24)%,差异有统计学意义(P<0.05)。GAL3ST1 OE组早期及晚期细胞凋亡率分别(0.66±0.06)%和(1.51±0.15)%,低于Ctrl组的(2.85±0.21)%和(2.05±0.05)%,差异有统计学意义(P<0.05)。与Ctrl组比较,GAL3ST1 OE组Bax降低和Bcl-2、GALC和UGT8蛋白表达增加(P<0.05);GAL3ST1表达上调促进体内肝癌生长,促进Ki-67、PCNA、UGT8和GALC mRNA表达。结论GAL3ST1可能通过参与鞘脂代谢通路调控HCC进展。

急性缺血性脑卒中患者血清GAL3、CXCL12水平与病情严重程度和预后的关系研究

目的:探讨急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清半乳糖凝集素3(GAL3)、血清趋化因子12(CXCL12)水平与病情严重程度和预后的关系。方法:选取成都市第五人民医院于2016年2月~2018年9月期间接收的AIS患者138例为观察组,另选取同期来该院行健康体检的志愿者60例为对照组。其中观察组根据美国国立卫生研究所中风量表(NIHSS)评分分为轻症组(n=42,<4分),中症组(n=61,4~15分),重症组(n=35,>15分),根据改良RABKIN量表(m RS)评分分为预后良好组(n=82)和预后不良组(n=56)。比较对照组、观察组的血清GAL3、CXCL12水平,分析不同NIHSS得分、不同预后的血清GAL3、CXCL12水平,采用Pearson相关性分析血清GAL3、CXCL12水平与NIHSS评分、m RS评分的相关性。结果:观察组血清GAL3、CXCL12水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。重症组、中症组AIS患者血清GAL3、CXCL12水平高于轻症组,且重症组高于中症组,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组的AIS患者血清GAL3、CXCL12水平均高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析结果可知,血清GAL3、CXCL12水平与NIHSS评分、m RS评分均呈正相关(P<0.05)。结论:AIS患者的血清GAL3、CXCL12水平均异常升高,且其升高程度与AIS患者病情严重程度及预后息息相关。

Galectin-3缺失对银屑病小鼠模型中肥大细胞活化及皮肤损伤的影响

目的:探讨皮肤中半乳糖凝集素-3(Gal3)对银屑病小鼠模型中皮损处肥大细胞激活及银屑病皮炎损伤的影响及其潜在机制。方法:每日分别对SPF级Gal3野生型(Gal3^(+/+))和Gal3基因敲除(Gal3^(−/−))小鼠背部裸露皮肤处涂抹相同剂量咪喹莫特乳膏,连续5 d以构建银屑病小鼠模型。观察小鼠背部大体病变,并根据银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)进行评分,利用实时荧光定量PCR测定小鼠皮损组织细胞因子il-1、il-17表达,比较Gal3^(+/+)小鼠和Gal3^(−/−)小鼠银屑病炎症的严重程度;HE染色观察比较皮损组织病理学变化;甲苯胺蓝染色观察小鼠皮损组织中肥大细胞的形态和分布差异;免疫组织化学和图像分析技术检测肥大细胞活化标志物如类胰蛋白酶和5-羟色胺(5-HT)的表达、分布等差异。结果:连续应用咪喹莫特乳膏后,Gal3^(−/−)小鼠背部出现鳞屑、浸润斑块和红斑等典型银屑病临床表型,而Gal3^(+/+)小鼠背部出现细小鳞屑与少量浸润,Gal3^(−/−)小鼠PASI评分较Gal3^(+/+)小鼠明显升高;Gal3^(+/+)小鼠与Gal3^(−/−)小鼠皮损处il-1、il-17表达升高,但后者炎症因子表达上调更显著。组织病理学观察发现Gal3^(+/+)小鼠表皮稍增厚,Gal3^(−/−)小鼠表皮明显增厚,且网脊向下延伸部分伴有炎症细胞聚集;甲苯胺蓝染色表明Gal3^(+/+)小鼠皮损组织肥大细胞分布稀疏且大部分结构完整,而Gal3^(−/−)小鼠肥大细胞数量增多并广泛分布于皮肤组织,且多数肥大细胞处于活化脱颗粒状态;免疫组织化学染色观察发现Gal3^(−/−)小鼠皮损组织类胰蛋白酶和5-HT较Gal3^(+/+)小鼠表达信号明显增强,且多集中在表皮损伤处。结论:Gal3的缺失引起银屑病小鼠模型皮损处肥大细胞过度活化,加重银屑病皮肤炎症损伤发生和疾病进展,Gal3在该模型中对皮损处肥大细胞活化与脱颗粒有抑制作用。

党参炔苷调节TIM3/Gal9信号通路对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响

目的研究党参炔苷调节T细胞免疫球蛋白及黏蛋白结构域分子3(TIM3)/半乳糖凝集素9(Gal9)信号通路对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和免疫逃逸的影响。方法以CCK-8法检测0、15、30、60、90、120、150mg/L的党参炔苷处理后的子宫内膜癌细胞HEC-1-A存活率,筛选出其最佳作用浓度。将体外培养的HEC-1-A细胞随机分为对照组、党参炔苷组、TIM3敲低组、空载组、党参炔苷+TIM3过表达组,分组处理后以实时荧光定量PCR和免疫印迹检测各组细胞TIM3/Gal9通路表达;以免疫荧光染色和CCK-8法检测各组细胞增殖;以流式细胞术检测各组细胞凋亡;以免疫荧光染色检测各组细胞凋亡相关蛋白表达,比较Bax/Bcl-2。将人外周血淋巴细胞与各组细胞以不同比例共培养后以CCK-8法检测其对各组细胞的杀伤率。结果与对照组比较,党参炔苷组、TIM3敲低组细胞TIM3、Gal9 mRNA及蛋白表达、Ki67阳性率、存活率降低(P<0.05),凋亡率、Bax/Bcl-2、杀伤率升高(P<0.05);空载组细胞各指标无明显变化(P>0.05)。与党参炔苷组比较,党参炔苷+TIM3过表达组细胞TIM3、Gal9 mRNA及蛋白表达、Ki67阳性率、存活率升高(P<0.05),凋亡率、Bax/Bcl-2、杀伤率降低(P<0.05)。结论党参炔苷可通过下调TIM3/Gal9信号通路表达来抑制子宫内膜癌细胞增殖并促进其凋亡,还可减弱其免疫逃逸,进而增强免疫细胞对其的杀伤力。

外周血Gal-3、NT-proBNP在慢性心力衰竭患者中表达意义的研究

目的探讨慢性心力衰竭(CHF)患者外周血半乳糖凝集素(Gal)-3、N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)表达水平的变化。方法选择89例CHF患者作为研究对象,采用酶联免疫吸附法、电化学发光法分别检测入选患者外周血Gal-3、NT-proBNP表达水平,分析其在不同类型心力衰竭[左心射血分数保留的心力衰竭(HFPEF)、左心射血分数降低的心力衰竭(HFREF)]、心功能分级患者中的变化,并进行相关性分析。结果 HFPEF、HFREF患者Gal-3、NT-proBNP表达水平比较,差异均有统计学意义(P=0.000);心功能Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级患者Gal-3、NT-proBNP表达水平比较,差异均有统计学意义(P=0.000);Gal-3与NT-proBNP呈正相关(r=0.230,P=0.030),与LVEF呈负相关(r=-0.533,P=0.000);NT-proBNP与LVEF呈负相关(r=-0.372,P=0.000)。结论外周血Gal-3、NT-proBNP可作为评判CHF患者病情危重程度的重要指标。

SPF鸡胚St3galⅠ基因的克隆及其在MDCK细胞中的表达

为了提高MDCK细胞表面禽流感病毒(AIV)受体的水平,以12日龄的SPF鸡胚为试材,通过反转录PCR扩增唾液酸转移酶Ⅰ基因(St3galⅠ),并将回收的片段插入到pMD18-T载体中。酶切pMD18-T-St3galⅠ和pCI-neo质粒,将目的片段进行连接,构建含有St3galⅠ基因的真核表达载体。利用脂质体介导法转染MDCK细胞,在G418的筛选下,获得具有抗性的转基因细胞系。通过细胞克隆化培养和PCR检测,筛选可稳定表达St3galⅠ基因的细胞株。结果表明,从鸡胚中克隆的St3galⅠ基因成功的插入到pCI-neo质粒,从而实现真核表达载体pCI-neo-St3galⅠ的构建。在G418选择压力下,初步获得了稳转目的基因的MDCK细胞系。将抗性细胞混合克隆进行稀释,经选择后挑选出30个单克隆抗性细胞株。分别以转染细胞基因组DNA和总RNA为模板,经PCR检测显示,目的基因已整合入MDCK细胞的基因组中并可稳定的进行表达。

siat7e基因和st3gal Ⅰ基因双表达载体的构建及其初步应用

应用聚合酶链式反应(PCR)技术,从人类基因组中扩增出全长为1011 bp的唾液酸转移酶(siat7e基因),并从鸡基因组中扩增出全长为1029 bp的β-半乳糖苷α-2,3-唾液酸转移酶Ⅰ(ST3GAL Ⅰ)基因。将它们分别克隆入pMD18-T载体中。对扩增的全长siat7e基因序列采用BamH Ⅰ和PstⅠ双酶切后连接入pReceiver真核表达载体,构建pRE-SⅠAT重组表达载体,进而,对扩增的全长st3gal Ⅰ基因采用Sac Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切,后连接入pRE-SIAT重组表达载体,构建pRE-SIAT-ST3重组真核表达载体。经限制性内切酶消化及DNA序列分析,证实构建的重组表达质粒是正确的。将构建的双基因表达载体转染MDCK细胞,利用荧光显微镜观察,可见细胞表达明显的绿色荧光,从而初步证实了外源基因在MDCK细胞中的正确表达。本研究为最终构建能够适应悬浮培养,并且对禽流感病毒更为易感的MDCK细胞系奠定了基础。

ST3Gal Ⅲ沉默通过FAK通路抑制乳腺癌细胞侵袭

目的探讨ST3Gal Ⅲ沉默抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭能力的分子机制。方法利用本室建立的稳定沉默ST3Gal Ⅲ基因的乳腺癌细胞(ST3Gal Ⅲ基因的2个靶向序列分别记作shRNA-2,shRNA-4)、人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞未转染组(M组),转染慢病毒对照组pGLV3-H1-GFP(P组),采用western blot检测侵袭相关分子整合素α3、基质金属蛋酶(matrix Mmetalloproteinase,MMP)-2、MMP-9黏着斑蛋白激酶(Focal Adhesion Kinase,FAK)蛋白的表达。结果与M组、P组相比,shRNA细胞侵袭相关分子整合素α3蛋白表达明显下调,MMP-2、MMP-9蛋白表达显著降低,p-FAK蛋白表达明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ST3Gal Ⅲ沉默可能通过FAK通路下调黏附侵袭相关分子整合素α3、基质金属蛋白MMP-2、-9表达从而抑制乳腺癌细胞侵袭。

应用唾液酸糖基转移酶基因芯片检测ST3GalⅤ在人肝癌细胞系中的表达

目的:通过唾液酸糖基转移酶基因芯片检测ST3GalⅤ在人正常肝细胞系L-02及肝癌细胞系Hep G-2和SMMC-7721中的表达差异。方法:制备唾液酸糖基转移酶基因芯片,应用基因芯片检测ST3GalⅤ在人正常肝细胞系L-02及肝癌细胞系Hep G-2和SMMC-7721中的表达,并通过蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达水平。结果:唾液酸糖基转移酶ST3GalⅤ在人肝癌细胞系中表达降低。结论:ST3GalⅤ在肝癌细胞系中表达水平的降低导致神经节苷脂GD1a的合成下降从而影响肝细胞的生长增殖。

缺血预适应在缺血性脑卒中患者神经功能中的保护作用

目的研究缺血预适应在缺血性脑卒中患者神经功能中的保护作用及疗效。方法选取2019年6月至2021年6月聊城市第三人民医院收治的110例缺血性脑卒中患者,进行前瞻性随机平行对照研究,采用随机数字表法将患者分为A组和B组,每组55例。A组男23例,女32例;年龄52~74(62.78±4.77)岁;B组男27例,女28例;年龄51~73(61.48±4.59)岁。B组采用常规药物治疗,A组在B组的基础上采用远隔缺血后适应治疗。比较两组临床疗效,治疗前、治疗3个月后美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)、日常生活能力Barthel指数(BI)评分及梗死灶体积、血清S100蛋白(S100β)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、新喋呤(Npt)、半乳糖凝集素3(GAL3)、血液流变学指标(血浆黏度、全血高切黏度、全血低切黏度、纤维蛋白原)水平。计数资料采用χ^(2)检验,计量资料采用t检验。结果治疗3个月后,A组临床总有效率为94.55%(52/55),高于B组的81.82%(45/55),两组比较,差异有统计学意义(χ^(2)=4.274,P=0.039);治疗3个月后,A组NIHSS评分为(9.74±1.83)分,低于B组的(12.25±2.82)分,BI评分为(75.26±5.38)分,高于B组的(62.47±6.02)分,两组比较,差异均有统计学意义(t=5.496、11.748,均P<0.001);治疗3个月后,A组梗死灶体积为(3.35±1.02)cm^(3),缩小幅度优于B组[(3.79±1.11)cm^(3)],差异有统计学意义(P<0.05);治疗3个月后,A组全血低切黏度为(5.08±0.79)mPa·s、全血高切黏度为(4.22±0.51)mPa·s、血浆黏度为(1.17±0.34)mPa·s、纤维蛋白原为(2.86±0.34)g/L,均低于B组的(6.63±1.02)mPa·s、(4.85±0.62)mPa·s、(1.36±0.40)mPa·s、(3.53±0.42)g/L,两组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);治疗3个月后,A组血清S100β为(1.37±0.38)μg/L、NSE为(15.28±3.37)μg/L、Npt为(6.95±1.78)nmol/L、GAL3为(9.68±2.27)g/L,均低于B组的(1.74±0.46)μg/L、(19.72±4.73)μg/L、(9.07±2.24)nmol/L、(11.94±3.04)g/L,两组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论缺血预适应辅助治疗缺血性脑卒中患者可进一步提升疗效,可有效改善患者日常生活能力及神经功能,缩小梗死灶体积,调节血液流变学状态,促进病情恢复。

TNF-α对人肝癌细胞系CD15和CD15s含量及细胞侵袭性的影响

目的检测TNF-α对人肝癌细胞系中CD15、CD15s和ST3GaL糖基转移酶含量及细胞侵袭能力的影响。方法应用Western blot方法检测TNF-α作用前后人原发性肝癌细胞系HepG-2和人高转移肝癌细胞系SMMC-7721中CD15,CD15s和ST3GaL糖基转移酶含量的变化,Transwell检测TNF-α作用前后HepG-2、SMMC-7721细胞侵袭力的变化情况。结果 TNF-α作用后,HepG-2细胞系CD15含量较对照组下降(P<0.05),CD15s含量较对照组明显上调(P<0.05),ST3GaL糖基转移酶家族蛋白(6种)中ST3GaL-Ⅱ和ST3GaL-Ⅳ表达较对照组明显上调(P<0.05),其他4种ST3Gal-Ⅰ、ST3Gal-Ⅲ、ST3Gal-Ⅴ和ST3Gal-Ⅵ的表达无明显变化(P>0.05),细胞侵袭力提高(P<0.05)。SMMC-7721细胞系CD15、CD15s含量较对照组无明显改变(P>0.05),细胞侵袭力无显著变化(P>0.05)。结论在人原发性肝癌细胞系HepG-2中,TNF-α可能通过影响CD15、CD15s、糖基转移酶ST3GaL-Ⅱ、ST3GaL-Ⅳ的含量促进细胞侵袭能力。

血清Galectin-3、PTX-3与扩张型心肌病心力衰竭临床指标的相关性

目的探讨半乳凝集素(Gal)-3、正五聚体蛋白(PTX)-3与扩张型心肌病(简称扩心病)心力衰竭(心衰)诊断、心功能分级、左心室功能超声参数及治疗之间的关系。方法2015年2~10月就诊于承德附属医院心内科的扩心病心衰患者45例作为心衰组,根据纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级分为Ⅱ级(10例)、Ⅲ级(15例)、Ⅳ级(20例),选择同期体检中心的健康人45例作为对照组,检测两组血清Gal-3、PTX-3、脑钠肽(BNP)浓度,采用超声心动图评估心脏功能和结构。结果缓解期心衰组及对照组PTX-3、Gal-3水平均显著低于急性期心衰组(P<0.01),且随心功能分级的增加呈进行性升高;相关性分析显示血清Gal-3、PTX-3水平与BNP、左心室舒张末期前后径(LVEDD)呈正相关(P<0.01),与左心室射血分数(LVEF)呈负相关(P<0.01);通过构建受试者工作特征(ROC)曲线证实Gal-3、PTX-3、BNP对扩心病心衰均具有较高的诊断价值(P<0.01),且联合检测Gal-3、PTX-3能提高诊断价值(P<0.01)。结论血清Gal-3、PTX-3水平与扩心病心衰密切相关,对扩心病心衰的早期诊断、危险分层及指导治疗具有一定的临床价值,可作为扩心病心衰新的生物标志物进行更加深入的研究。

羽扇豆醇增强对沉默ST3GalⅢ基因的MDA-MB-231细胞侵袭转移的抑制作用

目的探索羽扇豆醇(Lupeol)增强对沉默ST3GalⅢ基因的人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭转移的抑制作用。方法体外培养沉默ST3GalⅢ基因的MDA-MB-231细胞。采用细胞黏附实验,Transwell侵袭实验,细胞划痕实验检测羽扇豆醇对ST3GalⅢ沉默的MDA-MB-231细胞侵袭转移能力的作用。Western blotting检测各组细胞转移相关基质金属蛋白酶(MMP)-2、9和磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/核因子κB(PI3K/Akt/NF-κB)信号通路蛋白的表达情况。结果 ST3GalⅢ基因沉默及低浓度(5μmol/L)羽扇豆醇对MDA-MB-231细胞的增殖及凋亡无明显影响。羽扇豆醇对ST3GalⅢ沉默的MDA-MB-231细胞黏附、迁移和侵袭有明显的抑制作用,且相关蛋白MMP-2、-9和PI3K/Akt/NF-κB信号通路蛋白表达均下调。结论羽扇豆醇体外能增强对沉默ST3GalⅢ基因的人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭和转移的抑制作用,其机制可能与抑制MMP-2、-9的蛋白表达及影响了PI3K/Akt/NF-κB信号通路有关。

血清Gal-3、GDF-15、CK-MB水平联合检测在急性心肌梗死并发恶性室性心律失常诊断和预后评估中的应用

目的探讨血清半乳糖凝集素(Gal)-3、生长分化因子(GDF)-15、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平联合检测在急性心肌梗死(AMI)并发恶性室性心律失常(MVA)诊断和预后评估中的应用价值。方法回顾性分析80例AMI患者的临床资料,根据心电监护结果将其分为AMI并发MVA组31例与AMI无MVA组49例,同时根据AMI并发MVA组入院72 h内预后情况将其分为死亡组9例与存活组22例。记录两组入院时基线资料及血清Gal-3、GDF-15、CK-MB水平并进行比较,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血清Gal-3、GDF-15、CK-MB单独或联合诊断AMI并发MVA及预后的诊断效果。结果AMI并发MVA组平均年龄明显大于AMI无MVA组、死亡率明显高于AMI无MVA组(均P<0.05);而两组性别比、体重指数(BMI)等其余基线资料之间比较均不具有统计学意义(均P>0.05)。AMI并发MVA组Gal-3、GDF-15、CK-MB水平均明显高于AMI无MVA组(均P<0.05)。Gal-3+GDF-15+CK-MB联合检测AMI并发MVA的曲线下面积(AUC)为0.961,敏感度为96.77%,特异度为97.96%。死亡组血清Gal-3、GDF-15、CK-MB水平均明显高于存活组(均P<0.05)。Gal-3+GDF-15+CK-MB联合检测AMI并发MVA预后的AUC为0.932,敏感度为88.89%,特异度为95.45%。结论Gal-3+GDF-15+CK-MB联合检测可显著提高AMI并发MVA的诊断和预后评估效果。

miR-26a抑制ST3GAL6基因介导mTOR信号通路对小鼠Lewis肺癌细胞增殖凋亡的作用机制

目的:探究miR-26a靶向调控ST3GAL6基因介导mT OR信号通路对小鼠Lewis肺癌细胞增殖凋亡的作用机制。方法:构建肺癌小鼠模型,将小鼠分为正常组和模型组;免疫组化检测ST3GAL6在肺组织中的表达情况,qRT-PCR法检测miR-26a在组织中的表达;细胞分为空白组、阴性对照组、miR-26a mimic组、miR-26a inhibitor组、si-ST3GAL6组、miR-26a inhibitor+si-ST3GAL6组和miR-26a mimic+RAD001(mT OR抑制剂)组;qRT-PCR法检测细胞中miR-26a和ST3GAL6 mRNA的表达情况;MTT法和流式细胞术分别检测各组细胞的增殖和凋亡情况;Western blot法测定各组细胞ST3GAL6、p-mT OR、Akt蛋白相对表达量。结果:miR-26a和ST3GAL6在肺癌小鼠肺癌组织中均高表达(均P <0. 05)。与空白组相比,miR-26a mimic组ST3GAL6 mRNA及蛋白表达上升,Akt、p-mT OR蛋白表达上升,细胞增殖率上升、凋亡率下降(均P <0. 05);而miR-26a inhibitor组、si-ST3GAL6组和miR-26a inhibitor+si-ST3GAL6组ST3GAL6mRNA及蛋白表达下调,Akt、p-mT OR蛋白表达下降,细胞增殖率下降、凋亡率上升(均P <0. 05)。同时,miR-26a表达在miR-26a mimic组和miR-26a mimic+RAD001组中上升,miR-26a inhibitor组和miR-26a inhibitor+si-ST3GAL6组中下降(均P <0. 05)。结论:miR-26a下调ST3GAL6基因,抑制mT OR信号通路活化,抑制肺癌细胞增殖及促进细胞的凋亡。

作用于种属差异性表位的细菌α-半乳糖苷酶(EmGalase)的鉴定和研究

对脑膜炎败血伊丽莎白金菌进行糖苷酶功能基因组分析发现,该菌存在一个GH27家族α-半乳糖苷酶基因。克隆该基因并表达蛋白后,利用人工合成的pNP底物研究其酶学性质,发现该酶具有α连接的半乳糖(α-galactose,α-Gal)底物特异性,酶反应pH为3.0~8.0,反应温度为4~45 ℃。用不同寡糖底物进一步确定,该酶能够酶切直链末端α-1,3、1,4、1,6Gal。在猪红细胞上进行的酶切实验显示,该酶能够高效清除存在于猪红细胞表面的末端Gal α 1-3Gal表位。末端α-半乳糖基化修饰在免疫与感染中发挥着重要的生物学作用,作用于种属差异性表位的细菌α-半乳糖苷酶的发现将为该领域的研究提供一个新的工具,为缓解异种输血中的超急性免疫排斥反应提供一种可能。

神经节苷脂GM3在非酒精性脂肪肝炎小鼠肝脏中的表达变化

目的:探究高脂高糖饮食诱导的非酒精性脂肪肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)小鼠模型较对照组肝脏内单唾液酸神经节苷脂3(monosialodihexosylganglioside,GM3)等鞘糖脂的变化。方法:16只6周龄C57BL/6J小鼠随机分为对照组和模型组,每组8只,对照组喂普通饲料,正常饮水;模型组喂高脂饲料,含糖饮水(23.1 g/L蔗糖+18.9 g/L葡萄糖)。检测两组小鼠血清生化指标丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST),采用HE染色观察两组小鼠肝脏组织病理变化。使用Exion UPLC-QTRAP 6500 PLUS(Sciex)液质联用仪,以电喷雾电离(ESI)模式进行脂质组学分析。采用独立样本t检验、曼-惠特尼检验进行组间差异的统计学分析。结果:①高脂高糖饮食喂养7个月组小鼠较普通饲料喂养组ALT、AST水平显著升高(P<0.05)。②模型组较对照组显著降低的指标有肝脏内总GM3(P=0.016)及GM3 d18:1/20:0(P=0.005)、GM3 d18:1/22:0(P=0.004)、GM3 d18:1/24:0(P=0.004)和GM3 d18:1/26:0(P=0.042),总神经酰胺、总乳糖神经酰胺等显著升高(P<0.05)。结论:高脂高糖饮食喂养的NASH模型小鼠肝脏中经乳糖神经酰胺向GM3转化的合成通路受阻。

稳定表达鸡ST3GALⅠ基因BHK-21细胞株的建立

筛选稳定表达鸡ST3GalⅠ基因的BHK-21细胞株,为进一步研究禽流感病毒大规模细胞培养生产疫苗奠定基础。克隆鸡ST3GalⅠ基因并将其插入真核表达质粒pcDNA3.1-EGFP中构建重组质粒pcDNA3.1-EGFP-ST3GaⅠ,鉴定正确的真核表达载体转染BHK-21细胞后,ST3GalⅠ基因在细胞中稳定表达,经G418抗性和RT-PCR筛选鉴定表达阳性的单克隆细胞株。将H9亚型禽流感病毒和H5N1Re-5禽流感病毒按不同比例接种BHK-21-ST3GalⅠ细胞和空白BHK-21细胞,同时设普通胰酶和TPCK-胰酶对照组以检测BHK-21-ST3GalⅠ细胞对H9亚型禽流感病毒和H5N1Re-5禽流感病毒的增殖效果。接毒72h后收获细胞液,常规方法测定血凝素(HA)滴度。通过在BHK-21细胞中稳定表达ST3GalⅠ基因,提高BHK-21细胞表面SAα-2,3Gal受体丰度连续传6代后仍然能检测到其表达,荧光显微镜下能看到绿色荧光,RT-PCR可检出1 029bp的目的条带。结果显示,BHK-21-ST3GalⅠ细胞在接毒量为2%时HA滴度达到1∶256,显著高于空白BHK-21细胞组,表明其更适于流感病毒的增殖,具备生产流感病毒疫苗的潜力。