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Hsp90 and reactive oxygen species regulate thermotolerance of rice seedlings via induction of heat shock factor A2 (OsHSFA2) and galactinol synthase 1 (OsGolS1) 被引量:1
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作者 Nong Thi Hue Huong Thi Tran +6 位作者 Thuy Phan Junya Nakamura Tomoe Iwata Keisuke Harano Yushi Ishibashi Takashi Yuasa Mari Iwaya-Inoue 《Agricultural Sciences》 2013年第3期154-164,共11页
Heat stress induces expression of a set of thermotolerance-related genes in plants. We focused on rice (Oryza sativa L.) homologs of the gene family that encodes galactinol synthase (OsGolS), which is closely related ... Heat stress induces expression of a set of thermotolerance-related genes in plants. We focused on rice (Oryza sativa L.) homologs of the gene family that encodes galactinol synthase (OsGolS), which is closely related to the Arabidopsis thaliana galactinol synthase (AtGolS) family whose expression is induced under various stresses. OsGolS1 was highly up-regulated compare to the level of OsGolS2 in re- sponse to heat stress. Interestingly, OsGolS1 was also up-regulated by treatment with the Hsp90 inhibitor, geldanamycin (GDA). Expression profiles of OsGolS1 were correlated to those of OsHsfA2 under the GDA treatments. Treatment with GDA increased expression of OsHsfA2, but marginally increased or did not change OsHsfA1 expression. Notably, gel shift assay indicated that OsHsfA2 binds directly to OsGolS1 promoter region and that OsHsfA1 also binds to the promoter regions of OsHsfA2. Both OsHsfA2 and OsGolS1 were dramatically induced in response to heat stress. Accordingly, galactinol and raffinose contents in rice seedlings increased significantly following the induction of OsGolS1. Pre-treatment of rice seedlings with raffinose or GDA improved their thermotolerance. These results suggest that OsGolS1 plays an important role in response to heat stress, possibly via the transcription cascade of OsHsfA1-OsHsfA2 that leads to galactinol and raffinose accumulation, and that the increased content of these carbohydrates is a key response factor for rice seedlings to enhance thermotolerance. 展开更多
关键词 galactinol SYNTHASE GELDANAMYCIN HEAT Shock Factor HEAT Shock Protein Oryza SATIVA
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Comparison of transcriptome and metabolome analysis revealed differences in cold resistant metabolic pathways in different apple cultivars under low temperature stress 被引量:6
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作者 Gongxun Xu Lijie Li +3 位作者 Jia Zhou Deguo Lyu Deying Zhao Sijun Qin 《Horticultural Plant Journal》 SCIE CAS CSCD 2023年第2期183-198,共16页
Freezing injury in winter is an important abiotic stress that seriously affects plant growth and development.Deciduous fruit trees resist freezing injury by inducing dormancy.However,different cultivars of the same sp... Freezing injury in winter is an important abiotic stress that seriously affects plant growth and development.Deciduous fruit trees resist freezing injury by inducing dormancy.However,different cultivars of the same species have different cold resistance strategies.Little is known about the molecular mechanism of apple trees in response to freezing injury during winter dormancy.Therefore,in this study,1-year-old branches of the cold-resistant cultivar‘Hanfu’(HF)and the cold-sensitive cultivar‘Changfuji No.2’(CF)were used to explore their cold resistance through physiological,biochemical,transcriptomics,and metabolomics analyses.Combining physiological and biochemical data,we found that HF had a stronger osmotic regulation ability and antioxidant enzyme activity than CF,as well as stronger cold resistance.The functional enrichment analysis showed that both cultivars were significantly enriched in pathways related to signal transduction,hormone regulation,and sugar metabolism under freezing stress.In addition,the differentially expressed genes(DEGs)encoding galactinol synthase,raffinose synthase,and stachyose synthetase in raffinose family oligosaccharides(RFOs)metabolic pathways were upregulated in HF,and raffinose and stachyose were accumulated,while their contents in CF were lower.HF accumulated 4-aminobutyric acid,spermidine,and ascorbic acid to scavenge reactive oxygen species(ROS).While the contents of oxidized glutathione,vitamin C,glutathione,and spermidine in CF decreased under freezing stress,consequently,the ability to scavenge ROS was low.Furthermore,the transcription factors apetala 2/ethylene responsive factor(AP2/ERF)and WRKY were strongly induced under freezing stress.In summary,the difference in key metabolic components of HF and CF under freezing stress is the major factor affecting their difference in cold resistance.The obtained results deepen our understanding of the cold resistance mechanism in apple trees in response to freezing injury during dormancy. 展开更多
关键词 APPLE Freezing stress Cold resistance galactinol synthase TRANSCRIPTOME METABOLOME
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黄瓜肌醇半乳糖苷合成酶基因GolS2克隆与表达调控 被引量:3
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作者 袁晓 杨盼迪 +2 位作者 朱云娜 王玉昆 王斌 《山东农业科学》 北大核心 2023年第6期15-24,共10页
肌醇半乳糖苷合成酶(GolS)是合成棉子糖系列寡糖(RFOs)的关键酶,在植物抵抗非生物胁迫过程中发挥重要作用。为探究GolS2基因在黄瓜应答非生物胁迫中的作用,本研究采用RT-PCR法从黄瓜中克隆了GolS2基因,其开放阅读框长度为981 bp,编码32... 肌醇半乳糖苷合成酶(GolS)是合成棉子糖系列寡糖(RFOs)的关键酶,在植物抵抗非生物胁迫过程中发挥重要作用。为探究GolS2基因在黄瓜应答非生物胁迫中的作用,本研究采用RT-PCR法从黄瓜中克隆了GolS2基因,其开放阅读框长度为981 bp,编码326个氨基酸,植物GolS2蛋白氨基酸序列一致性很高。进化树中,黄瓜GolS2蛋白与拟南芥GolS2和GolS3蛋白聚在同一分支,亲缘关系最近。盐胁迫和低温胁迫处理显著诱导GolS2基因在黄瓜幼苗中的表达,但低温处理显著抑制GolS2基因在采后黄瓜果实中的表达。对其启动子顺式作用元件的分析结果显示,GolS2基因启动子中含有多个与逆境胁迫响应有关的顺式作用元件。在采后黄瓜果实中沉默HHO2和GRP3基因的表达,显著下调GolS2基因表达,表明这两个基因调控GolS2基因表达。本研究结果明确了GolS2基因在不同类型黄瓜组织中应答非生物胁迫的功能存在差异,这为进一步研究该基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 黄瓜 肌醇半乳糖苷合成酶基因GolS2 基因克隆 非生物胁迫 表达调控
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大豆GmGolS基因高温胁迫应答及启动子活性分析
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作者 张军 翟莹 +5 位作者 邱爽 尹珺伊 张艳 金振华 张勇 王丽坤 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期188-193,共6页
肌醇半乳糖苷合成酶(GolS)是棉子糖系列寡糖(RFOs)生物合成途径中的关键酶。为探究大豆GmGolS基因的高温胁迫调控机制,通过实时荧光定量PCR检测GmGolS在高温胁迫下的表达量,通过PCR从大豆基因组DNA中扩增GmGolS基因启动子序列,将其连接... 肌醇半乳糖苷合成酶(GolS)是棉子糖系列寡糖(RFOs)生物合成途径中的关键酶。为探究大豆GmGolS基因的高温胁迫调控机制,通过实时荧光定量PCR检测GmGolS在高温胁迫下的表达量,通过PCR从大豆基因组DNA中扩增GmGolS基因启动子序列,将其连接到植物表达载体pCAMBIA1301上并转化烟草,通过GUS组织化学染色和实时荧光定量PCR检测GmGolS启动子的高温诱导启动活性。结果表明:高温胁迫可以强烈诱导GmGolS的表达。1 739 bp的GmGolS启动子序列中含1个生长素响应元件、1个干旱诱导的MYB转录因子结合位点、2个厌氧诱导元件、1个防御和胁迫响应元件、1个脱落酸响应元件、1个茉莉酸响应元件和1个缺氧诱导元件。成功获得3棵GmGolSP转基因烟草植株。GmGolS启动子的活性可以被高温胁迫诱导。 展开更多
关键词 大豆 GmGolS 诱导型启动子 肌醇半乳糖苷合成酶 高温胁迫
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大豆GmGolS2-2启动子的克隆及活性分析
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作者 马婷婷 于海伟 +5 位作者 张军 陈炯辛 李珊珊 马天意 张勇 翟莹 《齐齐哈尔大学学报(自然科学版)》 2023年第5期86-90,共5页
从大豆基因组DNA中,通过PCR扩增获得Gm Gol S2-2启动子序列(Gm Gol S2-2P),长1 740 bp。预测分析结果显示,Gm Gol S2-2P中共含5种逆境相关顺式作用元件,包括2个水杨酸响应元件、1个茉莉酸甲酯响应元件、6个厌氧诱导元件、2个防御和胁迫... 从大豆基因组DNA中,通过PCR扩增获得Gm Gol S2-2启动子序列(Gm Gol S2-2P),长1 740 bp。预测分析结果显示,Gm Gol S2-2P中共含5种逆境相关顺式作用元件,包括2个水杨酸响应元件、1个茉莉酸甲酯响应元件、6个厌氧诱导元件、2个防御和胁迫响应元件和1个MYB转录因子结合位点。构建植物表达载体p CAMBIA1301-GmGolS2-2P,通过叶盘法转化烟草。通过烟草基因组DNA PCR鉴定获得2棵T0代Gm Gol S2-2P转基因烟草植株。GUS组织化学染色和实时荧光定量RT-PCR结果表明,Gm Gol S2-2P在转基因烟草中能够激活GUS报告基因的表达,并且在干旱胁迫下Gm Gol S2-2P的启动活性增强。 展开更多
关键词 大豆 肌醇半乳糖苷合成酶 启动子 干旱胁迫 转基因烟草
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植物中棉子糖系列寡糖代谢及其调控关键酶研究进展 被引量:23
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作者 李芳 汪晓峰 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期852-859,共8页
棉子糖系列寡糖代谢与植物生长发育、逆境胁迫、种子耐贮性及脱水耐性等关系密切.棉子糖系列寡糖的合成从棉子糖的合成开始,由半乳糖苷肌醇上的半乳糖基的转移依次生成棉子糖、水苏糖、毛蕊花糖等.寡糖代谢是一个复杂的调控体系,其中肌... 棉子糖系列寡糖代谢与植物生长发育、逆境胁迫、种子耐贮性及脱水耐性等关系密切.棉子糖系列寡糖的合成从棉子糖的合成开始,由半乳糖苷肌醇上的半乳糖基的转移依次生成棉子糖、水苏糖、毛蕊花糖等.寡糖代谢是一个复杂的调控体系,其中肌醇-1-磷酸合成酶、肌醇半乳糖苷合成酶、蔗糖合成酶、棉子糖合成酶、水苏糖合成酶和毛蕊花糖合成酶等参与了棉子糖系列寡糖的生物合成过程.本文对植物中棉子糖系列寡糖的代谢及其重要调控酶的特性、功能及分子生物学研究进展进行综述. 展开更多
关键词 肌醇半乳糖苷合成酶 肌醇-1-磷酸合成酶 棉子糖半系列寡糖 棉子糖合成酶 水苏糖合成酶
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葡萄肌醇半乳糖苷合成酶基因VvGolS2-4的克隆及表达特性分析 被引量:4
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作者 冯睿杰 侯丽霞 +2 位作者 郭扬 马倩 刘新 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第2期87-95,共9页
为了研究葡萄肌醇半乳糖苷合成酶基因家族的特性,以抗低温品种左优红组培苗为材料,通过同源克隆技术,获得VvGolS2、VvGolS3和VvGolS4全长CDS,对其序列进行了生物信息学分析,同时利用实时定量PCR技术探究了3个基因的组织表达特性和响应... 为了研究葡萄肌醇半乳糖苷合成酶基因家族的特性,以抗低温品种左优红组培苗为材料,通过同源克隆技术,获得VvGolS2、VvGolS3和VvGolS4全长CDS,对其序列进行了生物信息学分析,同时利用实时定量PCR技术探究了3个基因的组织表达特性和响应逆境因子及相关信号分子的特性。结果显示:3个基因c DNA大小分别为954,978,1 011 bp,分别编码317,325,336个氨基酸序列;3个蛋白分子量分别为36.65,36.97,38.12 k Da;等电点分别为5.12,5.33和5.16,且均在C端含有一个疏水的五肽APXAA;实时荧光定量PCR证明,3个GolSs在葡萄不同组织中表达情况不同,VvGolS2和VvGolS4在叶片中表达量最高,而VvGolS3则在花和卷须中表达量最高;不同逆境因子及逆境信号分子均会影响VvGolS2、VvGolS3和VvGolS4基因的表达量,其中VvGolS2和VvGolS4基因的表达受盐诱导最明显,VvGolS3基因的表达受低温诱导最明显;另外,胁迫信号分子乙烯、过氧化氢和脱落酸均可诱导VvGolS2基因表达量上升,而VvGolS3基因的表达受脱落酸和乙烯的诱导,乙烯、过氧化氢和硫化氢则均可诱导VvGolS4基因表达量上升。综上推测,3个Vv GolSs均与葡萄抵御逆境胁迫相关,但各自功能可能有所不同。 展开更多
关键词 葡萄 肌醇半乳糖苷合成酶基因 基因克隆 表达特性分析
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烟草肌醇半乳糖苷合成酶基因NtGolS1的克隆及序列分析 被引量:3
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作者 林世锋 王仁刚 +3 位作者 任学良 王东茂 张拓 黄亚娟 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期113-118,共6页
为从烟草中克隆到与植物抗逆相关的肌醇半乳糖苷合成酶基因GolS,以辣椒GolS基因为探针,通过电子克隆法从烟草栽培品种K326中分离出一条编码GolS基因的cDNA序列,暂被命名为NtGolS1。NtGolS1包含一个完整的开放读码框,编码343个氨基酸,具... 为从烟草中克隆到与植物抗逆相关的肌醇半乳糖苷合成酶基因GolS,以辣椒GolS基因为探针,通过电子克隆法从烟草栽培品种K326中分离出一条编码GolS基因的cDNA序列,暂被命名为NtGolS1。NtGolS1包含一个完整的开放读码框,编码343个氨基酸,具备糖基转移酶保守结构域;序列比对结果表明,NtGolS1蛋白与其他植物的GolS蛋白具有很高的相似性;系统进化树分析表明,NtGolS1与耐旱植物维柯萨的Gols亲缘关系最近。这些结果为进一步研究NtGolS1的性质和功能,并为植物抗逆基因工程研究提供理论基础。 展开更多
关键词 烟草 肌醇半乳糖苷合成酶(GolS) 克隆 序列分析
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小桐子肌醇半乳糖苷合成酶3的基因克隆及其生物信息学分析和功能初步验证 被引量:2
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作者 王海波 邹竹荣 龚明 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期91-100,共10页
旨在研究可溶性糖在小桐子抗冷性形成中的作用机制及其相关抗冷基因工程的应用。克隆了小桐子肌醇半乳糖苷合成酶家族成员3基因(Jc GS3)的全长c DNA,序列长1 053 bp,包含完整的开放阅读框1 008 bp,编码由335个氨基酸组成的酶蛋白(理论... 旨在研究可溶性糖在小桐子抗冷性形成中的作用机制及其相关抗冷基因工程的应用。克隆了小桐子肌醇半乳糖苷合成酶家族成员3基因(Jc GS3)的全长c DNA,序列长1 053 bp,包含完整的开放阅读框1 008 bp,编码由335个氨基酸组成的酶蛋白(理论分子量为38 k D、等电点为5.44,含有典型的Dx D基序)。对其相应基因组序列中启动子区域进行分析,鉴定到了TATA框、CAAT框、CRT/DRE低温响应元件以及ABA应答元件等。进一步将其在酵母中表达,发现该基因的表达能够显著提高其重组酵母菌的低温抵抗能力。 展开更多
关键词 小桐子 肌醇半乳糖苷合成酶3 CDNA克隆 生物信息学分析 酵母表达
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芝麻肌醇半乳糖苷合成酶基因SiGolS6的克隆及功能分析 被引量:7
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作者 刘爱丽 魏梦园 +3 位作者 黎冬华 周瑢 张秀荣 游均 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第17期3432-3442,共11页
【目的】SiGolS6是芝麻肌醇半乳糖苷合成酶家族成员,在植物抗旱过程中可能发挥重要作用。研究SiGolS6在植物干旱胁迫抗性中的功能,以期为芝麻抗旱遗传改良提供理论基础和基因资源。【方法】利用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-... 【目的】SiGolS6是芝麻肌醇半乳糖苷合成酶家族成员,在植物抗旱过程中可能发挥重要作用。研究SiGolS6在植物干旱胁迫抗性中的功能,以期为芝麻抗旱遗传改良提供理论基础和基因资源。【方法】利用反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)方法从芝麻中克隆获得肌醇半乳糖苷合成酶基因SiGolS6。使用InterProScan、ClustalX2和MEGA5.2等生物信息学软件对序列进行分析。通过对转SiGolS6拟南芥材料的表型分析和生理指标测定,研究SiGolS6在植物抗旱性中的功能及作用机理。【结果】克隆获得SiGolS6的全长CDS序列为921 bp,编码306个氨基酸,其蛋白质分子量为35.07 kD,等电点为4.75。序列分析显示SiGolS6蛋白含有糖基转移酶保守结构域(IPR002495),属于糖基转移酶超家族。与其他物种GolS蛋白构建的系统进化树中,SiGolS6与马铃薯中的同源基因相似度较高。利用潮霉素筛选和PCR鉴定,获得6个独立的转基因拟南芥株系;qRT-PCR分析筛选出表达量较高的3个转基因株系(OE-2、OE-3和OE-4)用于后续试验分析,检测发现这三个转基因株系的棉子糖含量显著高于野生型植株。干旱胁迫下,转基因株系萎蔫程度较野生型轻,干旱胁迫28 d和复水恢复生长5 d后,转基因株系的鲜重均显著高于野生型,而正常供水条件下无明显差异;干旱胁迫28 d后复水生长5 d,50%的转基因植株基本恢复,而野生型植株存活率不到10%。干旱胁迫21 d,转基因植株的相对电导率,活性氧积累和相对MDA含量均显著低于野生型,而相对SOD、POD活性则显著高于野生型。【结论】在拟南芥中超量表达芝麻SiGolS6,能够提高植物在干旱胁迫中的耐受性。 展开更多
关键词 芝麻 肌醇半乳糖苷合成酶 转基因拟南芥 耐旱性 功能分析
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植物肌醇半乳糖苷合酶的生理功能和调控机制 被引量:7
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作者 从青 程龙军 杨宁 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1193-1200,共8页
植物肌醇半乳糖苷合酶(galactinol synthase,GolS)是高等植物棉子糖类寡糖合成途径中的关键酶,为棉子糖系列寡糖提供活化的半乳糖基,调控植物体内棉子糖(raffinose,RFO)系列寡糖的生物合成与积累。编码该酶的基因属于糖基转移酶(glycosy... 植物肌醇半乳糖苷合酶(galactinol synthase,GolS)是高等植物棉子糖类寡糖合成途径中的关键酶,为棉子糖系列寡糖提供活化的半乳糖基,调控植物体内棉子糖(raffinose,RFO)系列寡糖的生物合成与积累。编码该酶的基因属于糖基转移酶(glycosyltransferases,GTs)GT8基因家族的亚家族。GolS参与合成的最终产物棉子糖家族低聚糖(raffinose family oligosaccharides,RFOs)是植物中重要的碳水化合物存在形式,在细胞内可溶性强,可作为脱水保护剂;还能发挥稳定膜结构的作用。同时,GolS催化合成的直接产物肌醇半乳糖苷(galactinol)和RFOs都能作为羟基自由基捕获分子参与活性氧的清除。因此,GolS参与的代谢途径在植物碳同化物的贮存与运输、生物和非生物逆境响应、种子的脱水效应等生命过程中均发挥了重要作用。GolS基因结构差异与表达模式不同,导致不同GolS基因参与的生物学功能具有很大的差异。研究植物中不同GolS基因的结构特征,组织特异性表达特性及它们响应不同生长发育阶段、环境变化的表达特性,对了解GolS参与的生物学功能具有重要意义。同时,在分子生物学水平上,深入了解调控植物GolS基因的分子调控机制,为通过遗传工程或分子辅助育种等手段,利用GolS改良农林作物的经济性状提供理论支持。本文针对近年来植物中GolS基因的生理功能和调控机制的研究进行了综述。 展开更多
关键词 肌醇半乳糖苷 棉子糖 肌醇半乳糖苷合酶
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大豆GmGolS1的克隆及转基因烟草耐高温性鉴定 被引量:6
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作者 李铭杨 邱爽 +3 位作者 何佳琦 于海伟 张军 翟莹 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期575-582,共8页
棉子糖系列寡糖(RFOs,raffinose family oligosaccharides)是植物体内一种重要的渗透调节物质,肌醇半乳糖苷合成酶(GolS,galactinol synthase)是RFOs合成过程中的关键酶。本研究从大豆中克隆了GmGolS1基因。序列分析结果显示,GmGolS1基... 棉子糖系列寡糖(RFOs,raffinose family oligosaccharides)是植物体内一种重要的渗透调节物质,肌醇半乳糖苷合成酶(GolS,galactinol synthase)是RFOs合成过程中的关键酶。本研究从大豆中克隆了GmGolS1基因。序列分析结果显示,GmGolS1基因位于大豆3号染色体,基因序列内部有3个内含子,开放阅读框(ORF,open reading frame)全长1020 bp,编码的多肽含有339个氨基酸,分子量38.82 kDa,等电点5.47。GmGolS1氨基酸序列具有植物GolS蛋白的共同特征:一个保守的丝氨酸磷酸化位点、一个锰离子结合相关的DXD元件和一个羧基末端疏水性五肽。蛋白系统进化分析结果显示,GmGolS1与沙东青AmGolS和蒺藜苜蓿MtGolS的亲缘关系较近。实时荧光定量PCR结果显示GmGolS1在大豆幼苗中可以不同程度的应答高温、低温、干旱及高盐胁迫,且高温胁迫下GmGolS1的表达量升高最明显。构建GmGolS1植物表达载体并转化烟草,获得4个转基因烟草株系。GolS酶活性检测结果显示,转基因烟草中GmGolS1转录后的产物发挥了GolS的催化活性。高温胁迫下GmGolS1转基因烟草的植株表型及电解质渗透率、可溶性糖含量和丙二醛含量的检测结果表明,GmGolS1提高了转基因烟草的耐高温性。 展开更多
关键词 大豆 肌醇半乳糖苷合成酶 非生物胁迫 耐高温性
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大豆肌醇半乳糖苷合成酶基因GmGolS克隆及非生物胁迫表达分析 被引量:6
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作者 邱爽 张军 +3 位作者 何佳琦 周雨明 李铭杨 翟莹 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第5期945-949,共5页
【目的】本文探索了大豆肌醇半乳糖苷合成酶(GolS)基因与非生物胁迫的关系。【方法】通过RT-PCR从大豆叶片cDNA中扩增编码GolS的基因GmGolS。生物信息学分析预测该基因及编码蛋白的理化性质。构建系统进化树分析GolS蛋白的亲缘进化关系... 【目的】本文探索了大豆肌醇半乳糖苷合成酶(GolS)基因与非生物胁迫的关系。【方法】通过RT-PCR从大豆叶片cDNA中扩增编码GolS的基因GmGolS。生物信息学分析预测该基因及编码蛋白的理化性质。构建系统进化树分析GolS蛋白的亲缘进化关系。采用实时荧光定量PCR技术检测该基因在非生物胁迫下的表达模式。【结果】GmGolS基因ORF全长987 bp,编码328个氨基酸,分子量38.03 kDa,等电点5.79。GmGolS蛋白定位于细胞的叶绿体和/或细胞质中,并且与沙冬青AmGolS蛋白的亲缘关系最近。干旱、高盐和低温胁迫均可不同程度的诱导GmGolS基因的表达,且GmGolS对干旱胁迫的响应最为明显。【结论】以上结果表明GmGolS基因在大豆中可响应多种非生物胁迫,为GmGolS在大豆抗逆基因工程育种中的进一步应用提供理论依据。 展开更多
关键词 大豆 肌醇半乳糖苷合成酶 非生物胁迫 实时荧光定量PCR
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大豆GmGolS2-1基因高温胁迫诱导表达及转基因烟草鉴定 被引量:2
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作者 邱爽 张军 +6 位作者 何佳琦 李铭杨 周雨明 邬长乐 袁洪淼 刘嘉仪 翟莹 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第1期38-43,共6页
肌醇半乳糖苷合成酶(GolS)是棉籽糖系列寡糖(RFO)生物合成途径中的关键酶,在植物应对非生物胁迫过程中发挥重要作用。实时荧光定量RT-PCR结果显示,高温胁迫可以诱导GmGolS2-1在大豆幼苗中的表达。将GmGolS2-1基因构建到植物表达载体pRI... 肌醇半乳糖苷合成酶(GolS)是棉籽糖系列寡糖(RFO)生物合成途径中的关键酶,在植物应对非生物胁迫过程中发挥重要作用。实时荧光定量RT-PCR结果显示,高温胁迫可以诱导GmGolS2-1在大豆幼苗中的表达。将GmGolS2-1基因构建到植物表达载体pRI101上并通过叶盘法转化烟草,经卡那霉素抗性筛选,PCR及qRT-PCR检测共获得6株阳性转基因烟草植株(OE1~OE6)。对野生型烟草植株和GmGolS2-1转基因烟草植株进行高温胁迫处理,结果显示野生型烟草的电解质渗透率和丙二醛含量均高于转基因烟草。由此推测GmGolS2-1可以提高转基因烟草的耐热性。 展开更多
关键词 大豆 肌醇半乳糖苷 GolS基因 高温胁迫 转基因烟草
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大豆GmGolS基因植物表达载体构建及烟草遗传转化 被引量:5
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作者 张军 邱爽 +7 位作者 何佳琦 周雨明 邬长乐 袁洪淼 刘嘉仪 尹珺伊 史同瑞 翟莹 《齐齐哈尔大学学报(自然科学版)》 2020年第6期22-25,共4页
肌醇半乳糖苷合成酶基因在植物应对非生物胁迫过程中发挥重要作用。本研究将大豆Gm GolS基因构建到植物表达载体p RI101上并转化根癌农杆菌EHA105。通过农杆菌介导叶盘法将Gm GolS转化烟草。经卡那霉素抗性筛选及PCR检测共获得3株阳性... 肌醇半乳糖苷合成酶基因在植物应对非生物胁迫过程中发挥重要作用。本研究将大豆Gm GolS基因构建到植物表达载体p RI101上并转化根癌农杆菌EHA105。通过农杆菌介导叶盘法将Gm GolS转化烟草。经卡那霉素抗性筛选及PCR检测共获得3株阳性转基因烟草植株。实时荧光定量RT-PCR检测结果显示OE1株系中Gm GolS基因的表达量最高。 展开更多
关键词 大豆 肌醇半乳糖苷合成酶 遗传转化 烟草
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两个大豆肌醇半乳糖苷合成酶基因的原核诱导表达
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作者 张军 史同瑞 +3 位作者 邱爽 何佳琦 李铭杨 翟莹 《黑龙江农业科学》 2020年第8期13-17,共5页
肌醇半乳糖苷合成酶(GolS)是棉子糖系列寡糖(RFOs)生物合成途径中的关键酶,在植物应对非生物胁迫过程中发挥重要作用。本研究通过RT-PCR从大豆叶片cDNA中扩增获得编码GolS的GmGolS2-1和GmGolS2-3基因。添加酶切位点EcoRⅠ和SalⅠ,将GmGo... 肌醇半乳糖苷合成酶(GolS)是棉子糖系列寡糖(RFOs)生物合成途径中的关键酶,在植物应对非生物胁迫过程中发挥重要作用。本研究通过RT-PCR从大豆叶片cDNA中扩增获得编码GolS的GmGolS2-1和GmGolS2-3基因。添加酶切位点EcoRⅠ和SalⅠ,将GmGolS2-1和GmGolS2-3分别连入原核表达载体pET28中,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳分析诱导浓度和诱导时间对蛋白表达的影响。结果表明:在诱导时间为3h,IPTG浓度为0.1mmol·L^-1时,可获得大量GmGolS2-1和GmGolS2-3的重组蛋白,分子量均大约为40kD。 展开更多
关键词 大豆 肌醇半乳糖苷合成酶 原核表达 载体构建
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大豆GmGolS2-2提高转基因烟草耐旱性
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作者 于海伟 邱爽 +6 位作者 张军 李珊珊 孙天国 马天意 赵艳 赵旭 翟莹 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期2762-2771,共10页
肌醇半乳糖苷合成酶(galactinol synthase,GolS)基因在植物应对非生物胁迫时发挥重要作用。本研究构建大豆GmGolS2-2基因植物表达载体并转化烟草,对转基因烟草的耐旱性进行鉴定。通过逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polym... 肌醇半乳糖苷合成酶(galactinol synthase,GolS)基因在植物应对非生物胁迫时发挥重要作用。本研究构建大豆GmGolS2-2基因植物表达载体并转化烟草,对转基因烟草的耐旱性进行鉴定。通过逆转录-聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)从大豆叶片中克隆了975 bp的GmGolS2-2基因编码序列。通过限制性内切酶位点Nde I和EcoR I将GmGolS2-2基因与植物表达载体pRI101相连,通过叶盘法转化烟草。基因组DNA PCR和实时荧光定量PCR结果显示,共获得3棵GmGolS2-2转基因烟草。干旱胁迫下GmGolS2-2转基因烟草的生长状态好于野生型烟草。干旱胁迫处理后,转基因烟草的电解质渗透率和丙二醛含量低于野生型烟草,脯氨酸含量和可溶性糖含量则高于野生型烟草。实时荧光定量PCR结果显示,GmGolS2-2的异源表达提高了转基因烟草中抗逆相关基因NtERD10C和NtAQP1的表达量。以上结果表明,GmGolS2-2提高了转基因烟草的耐旱性。 展开更多
关键词 大豆 肌醇半乳糖苷合成酶 抗旱基因 遗传转化 烟草
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一个辣椒肌醇半乳糖苷合成酶同源基因全长cDNA的克隆与低温表达分析 被引量:5
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作者 缪旻珉 李娜 +3 位作者 任旭琴 张宗东 程皓 曹碚生 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1671-1675,共5页
采用RT-PCR结合RACE技术,从低温处理的辣椒(Capsicum annuum L.)品种‘苏长红’叶片中克隆得到一个肌醇半乳糖苷合成酶同源基因(GS)的cDNA序列(GenBank登录号:EF566470),全长1444bp,推断其编码336个氨基酸。序列分析表明该基因与其他高... 采用RT-PCR结合RACE技术,从低温处理的辣椒(Capsicum annuum L.)品种‘苏长红’叶片中克隆得到一个肌醇半乳糖苷合成酶同源基因(GS)的cDNA序列(GenBank登录号:EF566470),全长1444bp,推断其编码336个氨基酸。序列分析表明该基因与其他高等植物的GS基因具有较高的同源性。该基因常温下在辣椒各组织中均无表达,经4℃或10℃处理6h后在叶片中开始表达,而茎和根系中均不表达。Southern杂交结果表明辣椒基因组中还存在其他GS同源基因。 展开更多
关键词 辣椒 肌醇半乳糖苷合成酶 低温处理 克隆
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木薯中肌醇半乳糖苷合成酶基因在大肠杆菌中的表达 被引量:4
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作者 范洁 王雨晴 +6 位作者 李瑞梅 张帆 段瑞军 符少萍 刘姣 胡新文 郭建春 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期1027-1032,共6页
本研究利用从木薯中克隆到的肌醇半乳糖苷合成酶基因构建到高效表达载体pGEX-6p-1上,构建重组载体MeGolS5-p GEX,并对GST-MeGolS5融合表达的IPTG诱导浓度、诱导不同温度、不同菌液浓度和诱导时间等条件进行优化。研究结果表明:随诱导时... 本研究利用从木薯中克隆到的肌醇半乳糖苷合成酶基因构建到高效表达载体pGEX-6p-1上,构建重组载体MeGolS5-p GEX,并对GST-MeGolS5融合表达的IPTG诱导浓度、诱导不同温度、不同菌液浓度和诱导时间等条件进行优化。研究结果表明:随诱导时间增长GST-MeGolS5融合蛋白表达量提高,在37℃时,OD600为0.4左右,诱导4 h MeGolS5-GST融合蛋白的表达量达到最大,在0.2 mmol/L IPTG浓度下,可以有效诱导MeGolS5-GST融合蛋白的表达;MeGolS5重组菌株可以耐受5%的PEG6000模拟的干旱胁迫。本研究结果可为解析MeGolS5基因的功能以及在木薯抗旱过程中的作用机理提供参考。 展开更多
关键词 木薯 肌醇半乳糖苷合成酶 原核表达
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泡核桃肌醇半乳糖苷合成酶基因克隆及表达分析 被引量:4
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作者 王毅 肖良俊 +1 位作者 马婷 宁德鲁 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期2029-2033,共5页
肌醇半乳糖苷合成酶是植物中棉子糖系列寡糖合成中的关键酶,在植物抗性生理中扮演重要作用。本研究利用RT-PCR技术从泡核桃中成功克隆获得一个受冷害诱导的肌醇半乳糖苷合成酶基因(Js GS1),其含有1 026 bp的开放阅读框,编码341个氨基... 肌醇半乳糖苷合成酶是植物中棉子糖系列寡糖合成中的关键酶,在植物抗性生理中扮演重要作用。本研究利用RT-PCR技术从泡核桃中成功克隆获得一个受冷害诱导的肌醇半乳糖苷合成酶基因(Js GS1),其含有1 026 bp的开放阅读框,编码341个氨基酸,登录号为:KX657831。该基因推断的蛋白与核桃(Juglans regia)GS蛋白的相似性为89%;系统进化树分析显示其与核桃、麻疯树(Jatropha curcas)、蓖麻(Ricinus communis)形成一个分支。半定量PCR显示:低温4℃处理3 h后有微弱表达,6 h后大量表达。这说明Js GS1是典型的受冷害诱导的GS基因。本研究为揭示泡核桃抗寒机理以及肌醇半乳糖苷合成酶在冷害胁迫下的作用提供帮助,并为利用基因工程手段培育抗寒新品种提供理论依据。 展开更多
关键词 泡核桃 肌醇半乳糖苷合成酶 冷害 基因表达 基因克隆
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