Hedgehog信号通路抑制剂GANT61对急性髓系白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨以Gli为靶点的hedgehog信号通路抑制剂GANT61对人急性早幼粒细胞白血病细胞HL-60增殖和凋亡的作用及机制。方法:采用CCK-8法观察不同浓度GANT61对HL-60细胞生长增殖的影响;Annexin V-FITC/PI双染检测GANT61对HL-60细胞凋亡的影响;RT-PCR检测48 h时HL-60细胞中gli1、bcl-2、bcl-xl mRNA表达;免疫荧光检测48 h时HL-60细胞中Gli1蛋白表达。结果:GANT61呈时间和浓度依赖性抑制HL-60细胞增殖;GANT61呈浓度和时间依赖性诱导HL-60细胞凋亡;GANT61呈浓度依赖性抑制gli1、bcl-2、bcl-xl mRNA表达;GANT61呈浓度依赖性抑制Gli1蛋白表达。结论:GANT61通过抑制Hedgehog-gli信号通路进而下调bcl-2和bcl-xl基因的表达,对人急性髓系白血病细胞HL-60起抑制增殖,并诱导其凋亡作用。

GANT61诱导食管鳞癌细胞凋亡的作用及其机制

目的研究Gli抑制剂GANT61诱导人食管鳞癌细胞OE21和KYSE-30凋亡的机制。方法应用不同浓度(0、10、15μmol/L)的GANT61处理OE21和KYSE-30细胞24 h后,Western blot观察GANT61作用于OE21和KYSE-30细胞后对Gli1、Gli2、Fas和Bcl-2蛋白表达的影响。流式细胞术观察细胞凋亡及Fas、Bcl-2蛋白的表达。结果 Western blot显示GANT61可以剂量依赖性显著下调OE21和KYSE-30细胞Gli1、Gli2和Bcl-2蛋白表达,增加Fas蛋白表达。流式细胞术检测显示不同浓度GANT61作用24 h后,OE21和KYSE-30细胞表现出不同程度的细胞凋亡并且呈药物剂量依赖性,与空白对照组相比差异均有统计学意义(P=0.000);与空白对照组相比,OE21和KYSE-30细胞中Bcl-2蛋白表达水平显著降低且呈药物剂量依赖性,差异均有统计学意义(P=0.000);Fas蛋白表达水平显著增加且呈药物剂量依赖性,差异均有统计学意义(P=0.000)。结论 GANT61明显诱导细胞凋亡,其作用机制可能与其通过特异性抑制OE21和KYSE-30细胞中Gli1、Gli2表达从而调节Fas和Bcl-2蛋白表达有关。

Gli抑制剂GANT61对肺癌细胞生长的抑制作用

目的研究GANT61对人肺癌细胞H1703和A549生长抑制作用,并探讨其作用机制。方法培养H1703和A549细胞,加入不同浓度GANT61 72 h后MTS法检测药物对细胞生长的抑制率;Western blot法观察GANT61作用于H1703和A549细胞后对Gli1和Gli2蛋白表达的影响。Transwell侵袭实验观察GANT61作用于H1703和A549细胞后对侵袭能力的影响。结果 MTS显示GANT61作用于H1703和A549的IC50值分别是8.6μmol/L和8.2μmol/L,GANT61对H1703和A549细胞有明显的生长抑制作用并且呈剂量依赖性。Western blot显示GANT61可显著下调H1703和A549细胞Gli1和Gli2蛋白的表达。Transwell侵袭实验显示GANT61处理组H1703和A549细胞的侵袭能力均明显下降。结论GANT61可以明显抑制H1703和A549的细胞活力和侵袭能力,这表明Hedgehog通路的Gli1和Gli2在肺癌的发生和发展中起着重要作用,Gli有望成为新的抗肿瘤靶点。

Gli抑制剂GANT61对食管腺癌OE33细胞凋亡的诱导作用

目的观察Gli抑制剂GANT61对食管腺癌OE33细胞凋亡的诱导作用,并探讨其机制。方法培养人食管腺癌OE33,将细胞分为对照组、实验一组、实验二组,分别用0、10、20μmol/L浓度的GANT61处理24 h。采用流式细胞术测算各组细胞凋亡率,并采用Western blotting检测各组细胞Gli1、Gli2、Bcl-2、c-myc蛋白表达。结果实验一组、实验二组、对照组细胞凋亡率分别为16.12%±1.52%、25.62%±0.93%、2.74%±0.34%,两两相比P均<0.01。与对照组相比,实验一组、实验二组细胞Gli1、Gli2、c-myc、Bcl-2蛋白表达低,且实验二组较实验一组表达低(P均<0.05)。结论 Gli抑制剂GANT61对食管腺癌OE33细胞凋亡具有诱导作用;GANT61可能是通过特异性抑制Gli1、Gli2蛋白表达从而调节细胞中Bcl-2和c-myc蛋白表达进而促进肿瘤细胞凋亡。

Gli抑制剂GANT61对肺癌细胞上皮-间质转化作用的研究

目的研究GANT61对人肺癌细胞H1703和A549的上皮-间质转化(EMT)的影响,并初步探讨其作用机制。方法以二甲基亚砜(DMSO)作为对照(DMSO组),用GANT61处理H1703和A549细胞24h后,采用实时荧光定量PCR法检测Gli-1、Gli-2、E-cadherin和Vimentin基因变化;蛋白质印迹法(Western blotting)观察GANT61作用于H1703和A549细胞后对E-cadherin和Vimentin蛋白表达的影响,划痕愈合实验观察GANT61作用于H1703和A549细胞后对肿瘤细胞侵袭能力的影响。结果与DMSO组比较,实时荧光定量PCR结果显示GANT61可下调H1703和A549细胞Gli-1、Gli-2及Vimentin mRNA的表达,升高E-cadherin mRNA的表达(P<0.01);Western blotting显示,GANT61可以下调H1703和A549细胞Vimentin蛋白表达,升高E-cadherin蛋白表达(P<0.01);划痕愈合实验显示,GANT61处理组H1703和A549细胞的侵袭能力明显下降(P<0.01)。结论肺癌的EMT与Hedgehog信号转导通路中Gli-1和Gli-2的异常激活有关,GANT61通过下调Gli-1和Gli-2的表达影响肺癌细胞的EMT能力,Gli可能成为抑制肺癌细胞转移的新的分子靶点。

GANT61对食管鳞癌细胞上皮-间质转化作用的研究

目的研究GANT61对人食管鳞癌细胞OE21和KYSE-30的上皮-间质转化的影响,同时使用N-Shh蛋白刺激Hedgehog通路作为阳性对照,探讨GANT61抗肿瘤机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测GANT61和N-Shh蛋白作用于OE21和KYSE-30细胞后Gli1、Gli2、N-cadherin和β-catenin基因变化;Western blot观察药物GANT61和N-Shh蛋白作用于OE21和KYSE-30细胞后对Gli1、Gli2、N-cadherin和β-catenin蛋白表达的影响。划痕愈合试验观察GANT61和N-Shh蛋白作用于OE21和KYSE-30细胞后对细胞迁移侵袭能力的影响。结果实时荧光定量PCR结果显示,GANT61可以下调OE21和KYSE-30的Gli-1、Gli-2、N-cadherin和β-cateninm RNA表达;Western blot显示GANT61可以下调OE21和KYSE-30的Gli1、Gli2、Ncadherin和β-catenin蛋白表达。划痕愈合试验显示GANT61导致OE21和KYSE-30细胞的迁移能力明显下降。应用N-Shh蛋白可以上调OE21和KYSE-30的Gli1、Gli2表达,N-cadherin和β-catenin表达,同时促进OE21和KYSE-30的迁移能力。结论GANT61通过下调Hedgehog信号转导通路中Gli1和Gli2的表达来影响食管鳞癌细胞上皮-间质转化能力,Gli可成为抑制食管鳞癌细胞转移新的有效的分子靶点。

Gli抑制剂GANT61对食管腺癌细胞生长和转移抑制作用的研究

目的研究Gli抑制剂GANT61对人食管腺癌细胞OE19和OE33的生长抑制作用及其可能作用机制。方法常规培养OE19和OE33细胞。MTS法检测不同浓度GANT61(30、20、13.333 3、8.888 8、5.925 9、3.950 6、2.633 7、1.755 8、1.170 5μmol/L)对OE19和OE33细胞活力的影响,以半数抑制浓度(IC50)表示。OE19和OE33细胞分别设治疗组(10μmol/L GANT61处理)和DMSO组(常规DMSO处理)。实时荧光定量PCR检测2组OE19和OE33细胞中Gli1和Gli2 m RNA的表达。Western blot法检测2组OE19和OE33细胞的Gli1、Gli2和Cyclin D1蛋白表达量的变化。Transwell侵袭实验观察2组OE19和OE33细胞24 h侵袭能力的变化。结果 GANT61作用于OE19和OE33细胞72 h的IC50值分别是8.08和9.65μmol/L。治疗组OE19和OE33细胞的Gli1、Gli2 m RNA和蛋白表达水平均低于DMSO组,Cyclin D1蛋白表达水平较DMSO组亦显著降低(P<0.05)。治疗组在OE19和OE33细胞中的穿膜细胞数较DMSO组明显减少(P<0.01)。结论 GANT61可以通过下调Gli1和Gli2 m RNA及蛋白水平的表达,抑制食管腺癌细胞的生长和侵袭;Hedgehog信号转导通路异常活化和食管腺癌的发生和发展有关。

Hedgehog通路阻滞剂GANT61对胰腺癌细胞株的抑制作用

目的:探讨Hedgehog信号通路特异性阻滞剂GANT61抑制本通路在胰腺癌细胞株中的表达,观察胰腺癌细胞株增殖、迁移等能力的改变,为胰腺癌的治疗提供基础实验数据。方法:采用多株胰腺癌细胞,半定量RT-PCR法从中检测出Hedgehog通路表达相对活跃的细胞株,采用不同浓度的GANT61处理细胞株后,MTT法检测细胞株增殖活力改变,细胞划痕实验检测细胞迁移能力改变。结果:采用GANT61处理后,随着浓度的增加,胰腺癌细胞株增殖活力下降,迁移能力降低。结论:GANT61可通过抑制Hedgehog信号通路的表达,有效抑制胰腺癌细胞株的增殖、迁移等,为GNAT61药物在临床治疗胰腺癌提供扎实的理论基础。

Gli抑制药GANT61对卵巢癌细胞生长和转移抑制作用的研究

目的探讨Gli抑制药GANT61对卵巢癌细胞生长和转移抑制作用的研究。方法选取40只雌性昆明大鼠,依据随机数表法按1∶1分为GANT61组、对照组,每组20只,所有大鼠均建立卵巢癌模型,对照组注射1∶4的无水乙醇:玉米油混合液,GANT61组皮下注射10 mg/ml的Gli抑制药GANT61,Western blot(WB)法检测Gli1、Gli2、Ki67、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达水平,克隆形成实验检测卵巢癌细胞增殖能力,Transwell侵袭实验检测卵巢癌细胞转移能力。结果 GANT61组肿瘤质量和第7、15天肿瘤体积显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.001);GANT61组Gli1、Gli2、Ki67、VEGF的WB值显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.001);GANT61组细胞存活克隆计数及穿膜细胞数显著低于对照组,GANT61组死亡细胞计数显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.001)。结论 Gli抑制药GANT61可能通过下调Gli1、Gli2、Ki67、VEGF蛋白表达而抑制卵巢癌细胞的生长和转移。

GANT61通过自噬性细胞死亡抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖

目的观察Hedgehog通路抑制剂GANT61对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用。方法 GANT61作用MCF-7细胞后,通过流式细胞术检测细胞死亡;提取处理细胞总RNA和蛋白。分别采用Real-time PCR和Western blot检测Hedgehog通路SHH、Gli1、Gli2及自噬标志物LC3-Ⅱ表达;处理细胞固定后通过电子显微镜观察GANT61诱导的自噬体形态;自噬抑制剂3-MA处理细胞或自噬相关基因atg5 siRNA转染细胞后再用GANT61作用,流式细胞术检测细胞死亡数量。结果 GANT61能明显诱导MCF-7死亡,降低Hedgehog通路SHH、Gli1、Gli2表达水平,提高LC3-Ⅱ蛋白表达,并可诱导MCF-7细胞产生自噬体。3-MA及atg5 siRNA可减弱GANT61诱导的细胞死亡。结论 GANT61通过诱导自噬性细胞死亡机制发挥抗乳腺癌细胞活性。

GANT61阻断Hedgehog信号通道调控肺腺癌A549/DDP细胞耐药的机制研究

目的:探讨GANT61阻断Hedgehog信号通道调控肺腺癌A549/DDP细胞增殖、细胞周期及耐药的机制研究。方法:应用CCK8法检测顺铂(DDP)对肺腺癌细胞株A549和A549/DDP的半数抑制浓度(IC50),从而计算A549/DDP细胞的耐药指数;同时采用Western blot检测A549、A549/DDP细胞中Gli1、Ptch1、Shh、XRCC1蛋白的表达水平。用不同浓度的GANT61干预A549/DDP细胞后,CCK8法检测增殖活力。流式细胞术检测GANT61对A549/DDP细胞凋亡率和细胞周期的影响。Western blot检测GANT61对A549/DDP细胞周期和凋亡相关蛋白表达的影响。采用20μmol/L GANT61联合不同浓度的顺铂干预A549/DDP细胞,CCK8法检测各组细胞增殖抑制率变化及Western blot检测各组细胞中XRCC1蛋白的表达水平。结果:A549/DDP细胞的耐药指数为5. 34。A549/DDP细胞与A549细胞相比,Gli1、Ptch1、Shh、XRCC1在蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P <0. 01或P <0. 05)。使用GANT61处理A549/DDP细胞,当其浓度分别≥20μmol/L、≥10μmol/L时,分别培养24 h和72 h,与对照组相比肿瘤细胞增殖活性下降(P<0. 01),且呈现剂量依赖性。GANT61可通过下调c-myc、cyclin D1表达(P<0. 01),阻滞细胞周期于G1期(P<0. 01)。GANT61能够明显诱导A549/DDP细胞发生凋亡(P<0. 05),其分子机制可能与促进caspase-3的剪切活化相关(P<0. 05)。GANT61联合顺铂用药后使A549/DDP细胞抑制率显著增加,呈协同效应,且伴随XRCC1蛋白表达下降(P<0. 01)。结论:Gli1在人肺腺癌耐药细胞A549/DDP中的表达明显高于顺铂敏感株A549,提示Gli1可能与肺腺癌顺铂耐药相关,且XRCC1蛋白在A549/DDP细胞高表达。故采用Gli1抑制剂GANT61能够明显抑制A549/DDP细胞增殖,阻滞细胞周期,并诱导细胞凋亡。体外试验中,GANT61与顺铂联合用药可以协同抑制增殖作用,其机制可能与下调XRCC1蛋白表达有关。

Gli1抑制剂GANT61对髓母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨Gli1抑制剂GANT61对髓母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法 取髓母细胞瘤Daoy细胞,随机分为对照组和10、50、100μmol/LGANT61组,对照组加入0.1%DMSO,10、50、100μmol/LGANT61组分别加入10、50、100μmol/LGANT61和0.1%DMSO。采用MTT法测算细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡指数和细胞周期,qRT-PCR法检测细胞中Gli1、Bcl-2mRNA表达,Westernblotting法检测细胞中Gli1、Bcl-2蛋白表达。结果 各浓度GANT61组细胞增殖抑制率、细胞凋亡指数均高于对照组,且50、100μmol/LGANT61组高于10μmol/LGANT61组,100μmol/LGANT61组高于50μmol/LGANT61组(P均<0.05)。各浓度GANT61组G1期细胞比例均高于对照组、S期细胞比例均低于对照组,且50、100μmol/LGANT61组G1期细胞比例高于10μmol/LGANT61组、S期细胞比例低于10μmol/LGANT61组,100μmol/LGANT61组G1期细胞比例高于50μmol/LGANT61组、S期细胞比例低于50μmol/LGANT61组(P均<0.05)。各浓度GANT61组Gli1、Bcl-2mRNA和蛋白相对表达量均低于对照组,且50、100μmol/LGANT61组低于10μmol/LGANT61组,100μmol/LGANT61组低于50μmol/LGANT61组(P均<0.05)。结论 GANT61能够抑制髓母细胞瘤细胞的Gli1、Bcl-2mRNA及蛋白表达,从而抑制细胞增殖,增加G1期细胞比例,促进细胞凋亡。

奥拉帕利联合GANT61对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨胶质瘤相关癌基因同源物(glioma-associated oncogene homolog 1,GLI1)抑制剂GANT61,聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly-ADP Ribose polymerase,PARP)抑制剂奥拉帕利(olaparib)以及olaparib联合GANT61对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响。方法通过Western印迹法检测正常卵巢上皮组织和上皮性卵巢癌组织中GLI1的表达情况以及正常卵巢上皮细胞(IOSE-80)和卵巢癌细胞系(SKOV3、ES2、HEY、A2780)中GLI1的表达水平。选取高表达GLI1的卵巢癌细胞系进行实验,设置实验分组:对照组、GANT61组、olaparib组和olaparib联合GANT61组。通过CCK8法、平板克隆实验、EDU实验检测各处理组细胞增殖情况。通过流式细胞术检测各处理组细胞中Annexin V+/7AAD+细胞比例。通过Western印迹法以及免疫荧光分别检测DNA损伤标志物γ-H2AX的表达水平和灶点形成情况。结果与正常上皮性卵巢组织相比,GLI1在上皮性卵巢癌组织中显著高表达(P<0.001);与IOSE-80正常卵巢上皮细胞相比,卵巢癌细胞中GLI1蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。CCK8、平板克隆实验、EdU实验以及流式细胞术结果表明,相较于对照组,GANT61组和olaparib组细胞抑制率和凋亡率均增高(P<0.05),且联合组较olaparib组细胞抑制率和凋亡率增高(P<0.05)。免疫荧光和Western印迹法的结果表明,相较于对照组,GANT61组和olaparib组细胞γ-H2AX的灶点数量与蛋白表达水平显著升高(P<0.05),且联合组较olaparib组细胞γ-H2AX的灶点数量与蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。结论olaparib联合GANT61能够显著诱导卵巢癌细胞DNA损伤、抑制细胞增殖以及诱导细胞凋亡。

Gli1抑制剂GANT61对小鼠牙胚体外发育的影响

目的:研究外源性Gli1抑制剂GANT61对小鼠磨牙胚体外发育的影响。方法:采用小鼠磨牙胚体外培养系统,运用体视镜、组织学HE染色方式观察小鼠磨牙胚被Gli1抑制剂GANT61影响后的发育情况,并对牙胚构成部分进行测量。结果:在Gli1抑制剂GANT61作用下,实验组相对于对照组出现下磨牙牙胚发育速度减慢,成釉器凹陷且形态不规则,内釉上皮细胞呈现不规则排列,成釉器大小在高浓度GANT61组明显变小。结论:Gli1抑制剂GANT61可能通过扰乱成釉器的发育阻碍胎鼠磨牙胚的发育过程。

GANT61通过减缓滑膜细胞增殖抑制Balb/c小鼠关节炎发展

目的探讨GANT61对小鼠关节炎的影响。方法 Balb/c小鼠随机分为3组:正常对照组、胶原诱导的关节炎(CIA)组和GANT61组。CIA组和GANT61组运用牛Ⅱ型胶原诱发小鼠关节炎模型,GANT61组于二次免疫后第0、3、6、9、12、15、18、21天尾静脉注射GANT61。同时观察四肢关节及脚掌情况,并进行临床评分。于初免后第39天,处死小鼠,收集外周血及血清,检测中性粒细胞及细胞因子变化,收集一侧关节,病理学检查,收集另一侧关节滑膜组织,培养滑膜成纤维细胞。流式细胞术及CCK-8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 GANT61能够减轻关节肿胀程度,降低关节临床评分,同时关节炎症细胞浸润程度降低。中性粒细胞数量降低,细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量也低于CIA组。滑膜细胞增殖程度降低,凋亡数量增加。结论 GANT61能够通过抑制滑膜细胞增殖,减轻Balb/c小鼠关节炎病理进程。

GANT61对髓母细胞瘤Daoy细胞增殖、凋亡的影响及作用机制

目的探讨GANT61对髓母细胞瘤(MB)Daoy细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法将人MB Daoy细胞正常培养24 h,然后分为4组:A组,培养液中加入0.1%二甲基亚砜(DMSO);B组,培养液中加入10μmol/L GANT61和0.1%DMSO;C组,培养液中加入20μmol/L GANT61和0.1%DMSO;D组,培养液中加入40μmol/L GANT61和0.1%DMSO。采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测GLI家族锌指蛋白1(GLI1)mRNA、GLI家族锌指蛋白2(GLI2)mRNA的相对表达量,采用蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、p21反胱天蛋白酶3(caspase 3)的表达水平,采用流式细胞术检测细胞周期。结果培养24 h后,C组和D组细胞的光密度(OD)值均低于A组,差异均有统计学意义(P<0.05);培养48 h后,C组和D组细胞的OD值均低于A组,D组细胞的OD值低于B组和C组,差异均有统计学意义(P<0.05)。C组和D组细胞中GLI1 mRNA和GLI2 mRNA的相对表达量均低于A组,D组细胞中GLI1 mRNA和GLI2 mRNA的相对表达量均低于B组,差异均有统计学意义(P<0.05)。C组和D组细胞中cyclin D1蛋白表达水平均低于A组和B组,p21、caspase 3蛋白表达水平均高于A组和B组,差异均有统计学意义(P<0.05)。B组、C组和D组中G0/G1,期细胞比例均高于A组,G2/M期细胞比例均低于A组,差异均有统计学意义(P<0.05);C组和D组中G0/G1,期细胞比例均高于B组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论GANT61对MB Daoy细胞具有抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用,可能是通过调节GLI1、GLI2的mRNA水平进而影响cyclin D1、p21及caspase 3蛋白表达来实现。

GANT61诱导结肠腺癌细胞凋亡的作用及其机制

目的探讨Gli抑制剂GANT61诱导人结肠腺癌细胞LOVO凋亡的机制。方法对Lovo细胞分别应用(0、10、20)μmol/L等不同浓度的GANT61处理24 h后,通过Western blot和流式细胞术观察处理结果,比较Gli1、Gli2、Fas和Bcl-2蛋白和细胞凋亡等相关蛋白的表达情况。结果GANT61可以显著下调LOVO细胞Gli1、Gli2和Bcl-2蛋白表达,增加Fas蛋白表达;Bcl-2蛋白表达显著低于DMSO组(P<0.01),Fas蛋白表达显著高于DMSO组(P<0.01);Caspase-3蛋白表达显著高于DMSO组(P<0.01)。结论GANT61诱导细胞凋亡,其作用机制可能与其通过特异性抑制LOVO细胞中Gli1、Gli2表达从而调节Fas、Bcl-2及Caspase-3蛋白表达有关。

Gli抑制剂GANT61对食管鳞癌细胞生长抑制作用的研究

目的 Hedgehog信号通路的异常活化与多种肿瘤的发生、发展关系密切,Gli是该通路的重要组成部分。本研究分析Gli抑制剂GANT61对人食管鳞癌细胞OE21和KYSE-30生长抑制作用,并探讨其抗肿瘤作用机制。方法采用不同浓度GANT61处理OE21和KYSE-30细胞,MTS法检测细胞活力;实时荧光定量PCR检测GANT61作用于OE21和KYSE-30细胞后对Gli1和Gli2mRNA的影响;蛋白质印迹法观察GANT61作用于OE21和KYSE-30细胞后对Gli1、Gli2和Cyclin D1蛋白表达的影响。Transwell侵袭实验观察GANT61作用于OE21和KYSE-30细胞后对侵袭能力的影响。结果GANT61对OE21和KYSE-30细胞有明显的生长抑制作用并且呈剂量依赖性,MTS显示GANT61作用于OE21和KYSE-30细胞72h的IC50值分别为4.7和8.2μmol/L。GANT61可显著下调OE21细胞Gli1(z=-1.98,P=0.04)和Gli2(z=-1.99,P=0.04)mRNA以及Gli1、Gli2和Cyclin D1蛋白表达。GANT61可显著下调KYSE-30细胞Gli1(z=-3,58,P<0.001)和Gli2(z=-2.282,P=0.004)mRNA以及Gli1、Gli2和Cyclin D1蛋白表达。Transwell侵袭实验显示,OE21细胞GANT61组穿膜细胞数为53±6.78,较DMSO组的140±11.02减少,t=12.888,P<0.001;KYSE-30细胞GANT61组穿膜细胞数为58.2±7.59,较DMSO组的133.4±9.37减少,t=11.452,P<0.001。结论 GANT61可以通过下调Gli1和Gli2的表达显著抑制OE21和KYSE-30细胞的细胞生长和侵袭能力,Gli可能成为抑制食管鳞癌细胞增殖和转移的新的分子靶点。

GANT61对Hela细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响

目的:研究Gli抑制剂GANT61作用于Hela细胞后Gli1、FoxM1及Cyclin D1的表达变化及细胞的增殖活力与侵袭迁移能力的影响,并分析其相关分子机制,以期为宫颈癌的治疗提供新的靶点。方法:采用CCK-8法检测不同浓度GANT61对Hela细胞增殖活力的影响;流式细胞仪检测Hela细胞的细胞周期的分布变化;RTPCR、Western Blot分别检测Gli1、FoxM1、Cyclin D1相应的mRNA水平及蛋白表达水平;Transwell小室模型及Matrigel基质胶实验分别检测Hela细胞的迁移与侵袭能力。结果:（1）GANT61可剂量依赖性的降低Hela细胞的增殖活力,其抑制Hela细胞的IC50值约为36.337μmol/L,且细胞周期主要被阻滞在G2/M期（P<0.01）;（2）随着GANT61浓度的增加,Gli1、Cyclin D1、FoxM1相应mRNA的表达水平逐渐降低（P<0.01）,其相应蛋白的表达水平也降低;（3）Transwell实验显示,实验组Hela细胞穿膜数量明显低于对照组（P<0.01）。结论:（1）GANT61可抑制宫颈癌Hela细胞的增殖、侵袭及迁移能力,且该作用是通过抑制Gli1的表达,进而影响FoxM1的转录活性从而阻断细胞周期的进展来实现的;（2）FoxM1很可能是Gli1下游的直接作用靶点。

GANT61靶向抑制卵巢上皮癌血管生成减少肿瘤生长

目的探讨GANT61是否可以抑制卵巢上皮癌的血管生成,从而减少肿瘤的生长。方法饲养裸鼠,随机分为实验组和对照组,每组各10只,两组裸鼠体重,年龄无统计学差异(P>0.05)。将人卵巢癌组织块接种到裸鼠肩胛区皮下,实验组中每只裸鼠皮下注射GANT61(10 mg/ml),0.2 ml/只,对照组中每只裸鼠皮下注射溶剂,0.2 ml/只,(溶剂成分∶无水乙醇∶玉米油=1∶4),观察皮下移植瘤生长情况,比较两组肿瘤的生长曲线。适时剥出肿瘤,利用Western印迹检测,比较两组裸鼠皮下移植瘤组织中Gli1和Gli2蛋白表达水平及VEGF和CD31蛋白表达水平。结果实验组(GANT61组)比对照组(Solvent组)裸鼠肿瘤生长速度明显下降(P<0.01),实验组瘤体重量明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);4只对照组裸鼠皮下移植瘤中Gli1和Gli2蛋白表达水平明显高于4只实验组裸鼠(P<0.01);4只对照组裸鼠皮下移植瘤中VEGF和CD31蛋白表达水平明显高于4只实验组裸鼠(P<0.01)。结论 GANT61通过靶向抑制卵巢上皮癌血管生成,从而减少肿瘤生长。