GAS6-AS1调节miR-370-3p/SPATA2轴对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和EMT的影响

目的:探讨长链非编码RNA GAS6反义RNA1(long non-coding RNA GAS6 antisense RNA1, lncRNA GAS6-AS1)调节miR-370-3p/精子发生相关蛋白2 (spermatogenesis-associated protein 2, SPATA2)轴对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation, EMT)的影响。方法:qRT-PCR、Western blot分别检测癌旁组织、卵巢癌组织、人正常卵巢上皮细胞IOSE80及卵巢癌细胞系HO-8910、SKOV3、A2780中GAS6-AS1、miR-370-3p及SPATA2蛋白表达。将SKOV3细胞分为:对照组(NC组)、 si-NC组、si-GAS6-AS1组、mimic NC组、miR-370-3p mimic组、si-GAS6-AS1+inhibitor NC组、si-GAS6-AS1+miR-370-3p inhibitor组,qRT-PCR检测细胞中GAS6-AS1、miR-370-3p表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;划痕愈合实验检测细胞迁移;Transwell实验检测细胞侵袭;Western blot检测SPATA2、细胞周期素D1(CyclinD1)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X,Bax)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)表达;双荧光素酶报告基因实验检测GAS6-AS1与miR-370-3p、 miR-370-3p与SPATA2的关系。结果:在卵巢癌组织和细胞中GAS6-AS1、SPATA2蛋白高表达,miR-370-3p低表达,且在SKOV3细胞中GAS6-AS1、SPATA2蛋白表达量最高,miR-370-3p表达水平最低,因此,选择SKOV3细胞为后续研究对象。与NC组、si-NC组比较,si-GAS6-AS1组GAS6-AS1、OD450值(24 h、48 h、72 h)、划痕愈合率、侵袭细胞数、SPATA2、CyclinD1、Vimentin、N-cadherin蛋白表达降低,miR-370-3p表达、细胞凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);与NC组、mimic NC组比较,miR-370-3p mimic组OD450值(24 h、48 h、72 h)、划痕愈合率、侵袭细胞数、SPATA2、CyclinD1、Vimentin、N-cadherin蛋白表达降低,miR-370-3p表达、细胞凋亡率、Bax、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);miR-370-3p inhibitor减弱了沉默GAS6-AS1对SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT的抑制及对细胞凋亡的促进作用。GAS6-AS1与miR-370-3p、miR-370-3p与SPATA2存在靶向调控关系。结论:沉默GAS6-AS1通过上调miR-370-3p来抑制SPATA2表达,从而抑制SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及EMT,并促进细胞凋亡。

类风湿关节炎患者血清lncRNA GATA6-AS1和GATA6 mRNA水平与疾病活动度指标、免疫功能及疾病严重程度的关系

目的分析类风湿关节炎患者血清中长链非编码RNA GATA结合蛋白6反义RNA1(lncRNA GATA6-AS1)和GATA结合蛋白6(GATA6)信使RNA(mRNA)水平与疾病活动度指标、免疫功能及疾病严重程度的关系。方法选取2021年4月至2023年3月我院收治的74例类风湿关节炎缓解期患者作为缓解期组,81例类风湿关节炎活动期患者作为活动期组,另选取同期体检健康者80例为对照组。收集受试者一般资料和疾病活动度指标[类风湿因子(RF)、血细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、肿瘤坏死因子(TNF)-α、28处关节疾病活动度(DAS28)评分];荧光定量PCR法检测血清中lncRNA GATA6-AS1和GATA6 mRNA水平;并检测受试者免疫功能指标[免疫球蛋白(Ig)A、IgM、IgG、CD3^(+)T、CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞,计算CD4^(+)/CD8^(+)比值]。分析类风湿关节炎患者血清lncRNA GATA6-AS1、GATA6 mRNA、疾病活动度指标、免疫功能指标的相关性,影响类风湿关节炎患者活动期发生的危险因素,血清lncRNA GATA6-AS1、GATA6 mRNA对类风湿关节炎患者活动期发生的预测价值。结果对照组、缓解期组、活动期组RF、ESR、CRP、抗CCP抗体、TNF-α、DAS28评分、血清lncRNA GATA6-AS1、GATA6 mRNA、IgA、IgM、IgG、外周血CD3^(+)T、CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞比例、CD4^(+)/CD8^(+)比值水平依次升高(P<0.05);风湿关节炎患者血清lncRNA GATA6-AS1与GATA6 mRNA呈正相关(P<0.05);血清lncRNA GATA6-AS1和GATA6 mRNA水平均与RF、ESR、CRP、抗CCP抗体、TNF-α、DAS28评分、IgA、IgM、IgG、CD3^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞和CD4^(+)/CD8^(+)比值呈正相关(P<0.05);RF、ESR、CRP、抗CCP抗体、TNF-α、DAS28评分、lncRNA GATA6-AS1、GATA6 mRNA均是影响类风湿关节炎患者活动期发生的独立危险因素(P<0.05);血清lncRNA GATA6-AS1、GATA6 mRNA、二者联合预测类风湿关节炎患者活动期发生的曲线下面积(AUC)分别为0.843、0.861、0.928;二者联合预测的AUC高于血清lncRNA GATA6-AS1、GATA6 mRNA水平各自单独预测的AUC(P<0.05)。结论类风湿关节炎患者血清中lncRNA GATA6-AS1和GATA6 mRNA呈现高水平,且活动期患者二者水平更高,二者与疾病活动度指标、免疫功能以及疾病严重程度密切相关,可以很好地预测类风湿关节炎患者活动期的发生。

长链非编码RNA OTUD6B-AS1对肺腺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的探讨lncRNA OTUD6B-AS1对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法体外培养肺腺癌A549细胞系,瞬时转染OTUD6B-AS1和空载质粒构建过表达和对照细胞模型,分为OTUD6B-AS1过表达组和空载质粒组(NC组)。通过qRT-PCR实验验证OTUD6B-AS1的转染效率;采用CCK-8实验检测OTUD6B-AS1对肺腺癌细胞增殖活性的影响,采用Transwell法检测OTUD6B-AS1对肺腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果qRT-PCR检测显示,与NC组相比,过表达组的OTUD6B-AS1表达量显著增高(P<0.05);CCK-8细胞活性检测结果显示,OTUD6B-AS1过表达组的肺腺癌A549细胞增殖活性较NC组显著降低(P<0.05);Transwell侵袭实验结果表明,OTUD6B-AS1过表达组细胞迁移和侵袭能力均显著低于NC组(P<0.05)。结论在肺腺癌细胞A549中lncRNA OTUD6B-AS1的过表达可以抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭的能力。

血清LncRNA Dlx6os1、LncRNA TUG1水平与老年糖尿病肾病患者肾脏损伤及预后的相关性

目的探讨血清长链非编码RNA(LncRNA)无远端同源框6反义RNA 1(Dlx6os1)、LncRNA牛磺酸上调基因1(TUG1)水平与老年糖尿病肾病(DN)患者肾脏损伤及预后的相关性。方法选取2019年1月—2021年1月西安交通大学第一附属医院榆林医院肾病学科收治的老年DN患者201例作为DN组,同期单纯T2DM患者112例作为单纯T2DM组,同期体检健康的老年人105例作为健康对照组,随访3年根据预后将老年DN患者分为不良预后亚组(61例)和良好预后亚组(140例)。检测血清LncRNA Dlx6os1、LncRNA TUG1和肾脏损伤指标[计算肾小球滤过率(eGFR)、尿白蛋白肌酐比(UACR)]水平;采用Spearman相关系数分析血清LncRNA Dlx6os1、LncRNA TUG1水平与老年DN患者肾损伤的相关性;以老年DN患者预后为因变量,建立多因素非条件Logistic回归模型分析其影响因素,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价血清LncRNA Dlx6os1、LncRNA TUG1水平对其的预测价值。结果健康对照组、单纯T2DM组、DN组血清LncRNA Dlx6os1和UACR水平依次升高,血清LncRNA TUG1和eGFR依次降低(F/P=870.484/<0.001、566.671/<0.001、271.117/<0.001、196.722/<0.001);Spearman相关性显示,老年DN患者血清LncRNA Dlx6os1水平与eGFR呈负相关、与UACR呈正相关(r/P=-0.816/<0.001、0.809/<0.001),血清LncRNA TUG1水平与eGFR呈正相关、与UACR呈负相关(r/P=0.832/<0.001、-0.806/<0.001);随访截至2024年1月,老年DN患者201例不良预后发生率为30.35%(61/201);多因素非条件Logistic回归显示,慢性肾脏病≥4期、UACR升高、LncRNA Dlx6os1升高为老年DN患者不良预后的独立危险因素[OR(95%CI)=5.758(1.480~22.401)、1.013(1.005~1.022)、1.426(1.201~1.693)],eGFR升高、LncRNA TUG1升高为保护因素[OR(95%CI)=0.958(0.939~0.978)、0.418(0.254~0.689)];ROC曲线显示,血清LncRNA Dlx6os1、LncRNA TUG1及二者联合预测老年DN患者不良预后的AUC分别为0.774、0.777、0.852,二者联合预测的AUC最大(Z/P=2.930/0.003、3.335/0.001)。结论老年DN患者血清LncRNA Dlx6os1水平升高、LncRNA TUG1水平降低,与肾脏损伤加重和不良预后风险增加有关,血清LncRNA Dlx6os1联合LncRNA TUG1水平预测老年DN患者不良预后的效能较高。

血清长链非编码RNA生长阻滞特异性基因6反义RNA1与冠状动脉粥样硬化病变程度及稳定性的相关性

目的检测冠状动脉粥样硬化(CAS)患者血清长链非编码RNA生长阻滞特异性基因6反义RNA1(lncRNAGAS6-AS1)的表达水平,分析其与CAS病变程度及稳定性的关系。方法选取2020年2月至2021年8月期间在武汉市汉口医院接收的124例CAS患者为CAS组,同期在我院体检的健康者124例为对照组;检测并比较各组血清中lncRNAGAS6-AS1和白介素-6(IL-6)的表达水平,分析CAS患者血清lncRNA GAS6-AS1与IL-6表达水平、Gensini积分的相关性。结果与对照组相比,CAS组血清lncRNA GAS6-AS1的表达水平降低,IL-6表达水平升高(t=43.614、23.404,P<0.05);稳定性、不稳定性心绞痛和急性心肌梗死患者中lncRNA GAS6-AS1表达水平依次降低,IL-6表达水平依次升高(F=6.821、7.495,P<0.05);单支、双支、多支病变患者血清lncRNAGAS6-AS1表达水平依次降低,IL-6表达水平依次升高(F=12.946、13.023,P<0.05);轻、中、重度病变组血清lncRNA GAS6-AS1表达水平依次降低,IL-6表达水平依次升高(F=15.900、6.224,P<0.05);CAS患者血清lncRNAGAS6-AS1与IL-6表达水平和Gensini积分呈负相关(r=-0.685、-0.699,P<0.05)。结论CAS患者血清lncRNA GAS6-AS1表达水平可能可以作为反映CAS病变严重程度和稳定性的潜在生物标志物。

lncRNA GAS6-AS1在子宫内膜癌中的表达与临床病理特征和预后因素分析

目的分析子宫内膜癌组织中长链非编码RNA生长阻滞特异性基因6反义RNA1(lncRNA GAS6-AS1)表达水平,并探讨其与临床病理特征及预后的关系。方法回顾性分析2015年6月至2018年1月于河南大学第一附属医院行子宫切除的80例子宫内膜癌患者。收集患者子宫内膜癌组织以及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR法检测组织中lncRNA GAS6-AS1表达水平。Kaplan-Meier法分析组织lncRNA GAS6-AS1表达与子宫内膜癌患者预后的关系,多因素Cox回归分析影响子宫内膜癌预后的因素。结果与癌旁组织相比,子宫内膜癌组织中lncRNA GAS6-AS1表达水平较高(P<0.001)。lncRNA GAS6-AS1表达水平与浸润深度、盆腔淋巴结转移具有相关性(P<0.05)。lncRNA GAS6-AS1低表达组5年累积总生存率高于lncRNA GAS6-AS1高表达组(P<0.05)。浸润深度≥1/2肌层、组织lncRNA GAS6-AS1高表达是子宫内膜癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。结论子宫内膜癌组织中lncRNA GAS6-AS1呈高表达,与子宫内膜癌预后不良有关,可能成为评估预后的分子标志物。

长链非编码RNA SBF2-AS1通过miR-372-3p/CDK6轴调控肝癌细胞侵袭及增殖

目的探讨长链非编码RNA SET结合因子2反义RNA1(lnc RNA SBF2-AS1)调控mi R-372-3p/细胞分裂蛋白激酶6(CDK6)轴对肝癌细胞侵袭及增殖的影响。方法以Bel7402和SK-hep1细胞为研究对象,上调或下调SBF2-AS1、miR-372-3p及CDK6表达水平,实时荧光定量PCR及Western blot检测细胞中miR-372-3p及CDK6表达水平。双荧光素酶报告基因实验分别验证SBF2-AS1和miR-372-3p、miR-372-3p和CDK6靶向关系。CCK-8、集落形成实验、Transwell、细胞周期实验及流式细胞术分析细胞增殖、集落形成、迁移/侵袭能力、细胞周期活动及凋亡。结果SBF2-AS1在肝癌细胞中高表达(P<0.05)。敲降SBF2-AS1后,Bel7402和SK-hep1细胞侵袭、增殖能力降低(P<0.05)。敲降miR-372-3p后,Bel7402细胞侵袭、增殖能力升高,同时敲降SBF2-AS1后,可反转上述效应(P<0.05)。miR-372-3p靶向CDK6并抑制后者的表达,过表达SFB2-AS1,可反转上述效应(P<0.05)。过表达CDK6,可以逆转过表达miR-372-3p对Bel7402细胞侵袭及增殖的抑制。结论lncRNA SBF2-AS1通过miR-372-3p正向调控CDK6的表达,改变肝癌细胞的周期活动,影响肝癌细胞的增殖、侵袭能力。

敲减lncRNA BAIAP2-AS1对胶质瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制

目的探讨敲减长链非编码RNA(lncRNA)BAIAP2反义RNA 1(BAIAP2-AS1)对胶质瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制。方法体外传代培养胶质瘤细胞系A172、LN229、U251及正常人星形胶质细胞系NHA。取传3代、对数生长期细胞,采用RT-qPCR法检测各细胞中微小RNA-491-5p(miR-491-5p)、BAIAP2-AS1、O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)mRNA表达,选择lncRNA BAIAP2-AS1、miR-491-5p、MGMT mRNA相对表达量变化较显著的胶质瘤细胞进行后续实验。取上述胶质瘤细胞,随机分为空白对照组、BAIAP2-AS1 shRNA组、NC shRNA组、BAIAP2-AS1 shRNA+miR-491-5p inhibitor组、BAIAP2-AS1 shRNA+NC inhibitor组,BAIAP2-AS1 shRNA组、NC shRNA组分别转染BAIAP2-AS1 shRNA、NC shRNA,BAIAP2-AS1 shRNA+miR-491-5p inhibitor组、BAIAP2-AS1shRNA+NC inhibitor组分别转染BAIAP2-AS1 shRNA与miR-491-5p inhibitor、BAIAP2-AS1 shRNA与NC inhibitor,空白对照组不予转染。转染48 h,收集细胞,采用MTT法检测细胞活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用细胞划痕实验检测细胞迁移率,采用RT-qPCR法检测BAIAP2-AS1、miR-491-5p、MGMT mRNA表达。采用StarBase在线数据库预测miR-491-5p与BAIAP2-AS1、MGMT的互补位点,并采用双荧光素酶报告基因实验验证其靶向调控关系。结果与NHA细胞比较,A172、LN229、U251细胞lncRNA BAIAP2-AS1、MGMT mRNA相对表达量较高,miR-491-5p相对表达量较低(P均<0.05)。以U251细胞lncRNA BAIAP2-AS1、MGMT mRNA相对表达量较高,miR-491-5p相对表达量较低,故以U251细胞进行后续实验。与空白组、NC shRNA组比较,BAIAP2-AS1 shRNA组细胞活性、细胞迁移率、BAIAP2-AS1、MGMT表达显著降低(P均<0.05),细胞凋亡率及miR-491-5p表达显著升高(P均<0.05);与BAIAP2-AS1 shRNA组、BAIAP2-AS1 shRNA+inhibitor NC组比较,BAIAP2-AS1 shRNA+miR-491-5p inhibitor组细胞活性、细胞迁移率、MGMT表达显著增加(P均<0.05),细胞凋亡率及miR-491-5p表达显著降低(P均<0.05)。经StarBase在线数据库预测和双荧光素酶报告基因实验验证,BAIAP2-AS1可靶向调控miR-491-5p表达、miR-491-5p可靶向调控MGMT表达。结论敲减BAIAP2-AS1可通过调节miR-491-5p/MGMT轴抑制胶质瘤细胞增殖、迁移并促进其凋亡。

m6A识别蛋白HuR调控lncRNA TRG-AS1抑制结直肠癌生长的机制研究

目的 探讨N6-甲基腺苷(m6A)识别蛋白人类抗原R(HuR)调控长链非编码RNA T细胞受体γ位点反义RNA 1(lncRNA TRG-AS1)对结直肠癌(CRC)生长的影响。方法 比色法检测CRC患者的癌组织、癌旁组织及正常结肠上皮细胞NCM460及CRC细胞HCT116、SW480、LOVO中m6A含量;实时荧光定量PCR(qPCR)检测TRG-AS1表达;Western blot检测HuR蛋白表达。将HCT116细胞分为Ct组、OE-NC组、OE-HuR组、si-NC组、si-HuR组、siHuR+pcDNA组、si-HuR+pcDNA-TRG-AS1组,CCK-8法检测细胞增殖;平板克隆实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡率;划痕愈合实验检测细胞迁移;Transwell检测细胞侵袭;裸鼠体内移植瘤实验观察肿瘤生长情况;采用甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP)检测TRG-AS1上是否存在m6A位点;RNA pull-down实验和RNA免疫共沉淀(RIP)检测TRG-AS1与HuR蛋白的相互作用。结果 在CRC组织和细胞中,HuR蛋白、TRG-AS1高表达,m6A含量降低,且在HCT116细胞中HuR蛋白、TRG-AS1表达最高,m6A含量最低(P<0.05),选择HCT116细胞为研究对象。与si-NC组比较,si-HuR组HuR蛋白、TRG-AS1表达降低,m6A含量升高(P<0.05);与OE-NC组比较,OE-HuR组HuR蛋白、TRG-AS1表达升高,m6A含量降低(P<0.05);与si-HuR组、si-HuR+pcDNA组比较,si-HuR+pcDNATRG-AS1组HuR蛋白、m6A含量变化差异无统计学意义,TRG-AS1表达升高(P<0.05);下调HuR可抑制HCT116细胞增殖、迁移、侵袭及体内移植瘤的生长,促进细胞凋亡,而上调HuR则呈相反趋势;过表达TRG-AS1减弱了沉默HuR对HCT116细胞增殖、划痕愈合率、侵袭、体内移植瘤生长的抑制作用以及对细胞凋亡的促进作用;TRG-AS1上存在m6A位点,且TRG-AS1能与HuR蛋白相互作用。结论 沉默m6A识别蛋白HuR可通过抑制TRG-AS1表达进而抑制HCT116细胞增殖、迁移与侵袭,促进细胞凋亡。

lncRNA OTUD6B-AS1在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及意义

目的探讨弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织中长链非编码RNA(lncRNA)人去泛素化酶含有卵巢肿瘤结构域的6B反义RNA 1(OTUD6B-AS1)的表达及临床意义。方法选取2016年2月至2017年2月就诊的110例DLBCL患者作为研究对象,取手术切除的DLBCL癌组织作为研究组,另选择111例淋巴结反应性增生(RLH)患者的淋巴组织为对照组;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测组织中lncRNA OTUD6B-AS1表达水平;采用Kaplan-Meier法分析lncRNA OTUD6B-AS1表达与DLBCL患者预后的关系;采用COX回归分析影响DLBCL患者预后不良的危险因素。结果研究组DLBCL组织中lncRNA OTUD6B-AS1表达水平明显低于对照组(P<0.05);DLBCL患者癌组织中lncRNA OTUD6B-AS1表达与美国东部肿瘤协作组评分(ECOG评分)、霍奇金淋巴瘤HL分期(Ann Arbor分期)、国际预后指数(IPI)评分密切相关(P<0.05);Kaplan-Meier分析结果显示,lncRNA OTUD6B-AS1低表达患者生存率低于lncRNA OTUD6B-AS1高表达患者(P<0.05);多因素COX分析表明,lncRNA OTUD6B-AS1低表达是影响DLBCL患者预后不良的危险因素(P<0.05)。结论lncRNA OTUD6B-AS1在DLBCL组织中低表达,其与DLBCL的发生及患者预后密切相关。

长链非编码RNA OTUD6B-AS1、微RNA-365a-3p在肝癌中表达与临床病理特征及预后的关系

目的探究血清及肝癌组织中长链非编码RNA(LncRNA)人去泛素化酶含有卵巢肿瘤结构域的6B反义RNA1(OTUD6B-AS1)、微RNA-365a-3p(miR-365a-3p)的表达水平与肝癌病人临床病理特征及预后的关系。方法纳入2015年3月至2017年3月海南医学院第一附属医院收治的肝癌病人86例(肝癌病人组),同时募集同期体检的健康志愿者86例(健康对照组),收集所有研究对象的临床资料。采用qRT-PCR法检测血清及肝癌组织中LncRNA OTUD6B-AS1、miR-365a-3p表达;Star⁃base数据库预测LncRNA OTUD6B-AS1与miR-365a-3p之间的关系;使用Pearson分析血清中LncRNA OTUD6B-AS1与miR-365a-3p表达的相关性;绘制Kaplan-Meier生存曲线分析血清中LncRNA OTUD6B-AS1、miR-365a-3p表达与病人5年生存率之间的关系;Cox回归分析肝癌病人预后的影响因素。结果与健康对照组比较,肝癌病人组血清中LncRNA OTUD6B-AS1高表达(1.59±0.41比1.02±0.32),miR-365a-3p低表达(0.42±0.15比1.05±0.26)(P<0.05)。肝癌组织中LncRNA OTUD6B-AS1表达水平高于癌旁组织(1.70±0.44比0.97±0.16),miR-365a-3p表达水平低于癌旁组织(0.53±0.17比1.01±0.14)(P<0.05)。血清中Ln⁃cRNA OTUD6B-AS1、miR-365a-3p表达与TNM期、淋巴结转移以及分化程度相关(P<0.05)。生物信息学预测显示LncRNA OTUD6B-AS1与miR-365a-3p之间存在靶向结合位点。Pearson分析显示,肝癌病人血清中LncRNA OTUD6B-AS1与miR-365a-3p表达存在负相关(r=−0.47,P<0.05)。LncRNA OTUD6B-AS1低表达组肝癌病人的5年生存率高于LncRNA OTUD6B-AS1高表达组(37.21%比13.95%,χ^(2)=6.11,P=0.013);miR-365a-3p高表达组肝癌病人的5年生存率高于miR-365a-3p低表达组(41.86%比9.30%,χ^(2)=8.03,P=0.005)。LncRNA OTUD6B-AS1高表达以及miR-365a-3p低表达是影响肝癌病人死亡的独立危险因素(P<0.05)。结论LncRNA OTUD6B-AS1、miR-365a-3p在肝癌病人血清及肝癌组织中分别呈高、低表达,二者均与TNM期、淋巴结转移、分化程度等临床病理特征以及预后有关。

LncRNA DLX6-AS1通过miR-181b/IL-6轴影响食管癌细胞的恶性生物学行为

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)同源盒转录因子6反义RNA1(homeobox transcription factor 6 antisense RNA1,DLX6-AS1)调控miR-181b/白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)轴对食管癌Eca-109细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法选取人食管上皮细胞株HEEC和人食管鳞状细胞癌细胞株Eca-109,采用qRT-PCR检测lncRNA DLX6-AS1、miR-181b及IL-6的表达水平。将si-DLX6-AS1、miR-181b mimics、pcDNA-IL-6、pcDNA-IL-6+miR-181b mimics及其相应阴性对照分别转染至Eca-109细胞,采用qRT-PCR检测转染效果,CCK-8法和EdU染色实验检测细胞的增殖能力,Transwell小室实验检测细胞的迁移与侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA DLX6-AS1与miR-181b、miR-181b与IL-6的靶向关系。结果与HEEC细胞相比,Eca-109细胞中lncRNA DLX6-AS1、IL-6 mRNA的表达水平升高(P=0.005,0.006),但miR-181b表达水平降低(P=0.004)。与相应阴性对照组比较,si-DLX6-AS1组和miR-181b mimics组的细胞增殖活性和EdU阳性细胞率均降低(均P<0.05),细胞迁移数目与侵袭数目均减少(均P<0.05),而pcDNA-IL-6组的细胞增殖活性和EdU阳性细胞率升高(均P<0.05),细胞迁移数目与侵袭数目增加(均P<0.05)。lncRNA DLX6-AS1与miR-181b存在靶向结合关系,miR-181b mimics和野生型DLX6-AS1载体共转染后,细胞内的荧光素酶活性明显降低(P=0.006);下调DLX6-AS1表达后Eca-109细胞中miR-181b表达水平升高(P=0.010)。miR-181b与IL-6存在靶向结合关系,miR-181b mimics和野生型IL-6载体共转染后,细胞内的荧光素酶活性明显降低(P<0.05);过表达miR-181b后Eca-109细胞中IL-6的表达水平降低(P<0.05)。与pcDNA-IL-6组比较,pcDNA-IL-6与miR-181b mimics共转染后,Eca-109细胞中IL-6 mRNA和蛋白表达水平下降,细胞增殖活性和EdU阳性细胞率降低,细胞迁移数目与侵袭数目也减少(均P<0.05)。结论LncRNA DLX6-AS1通过miR-181b靶向负调控IL-6表达而促进食管癌Eca-109细胞增殖、迁移及侵袭。

血清lncRNA DLX6-AS1和miR-335-3p与糖尿病视网膜病变患者微血管损伤的关系

目的:探讨血清长链非编码RNA(lncRNA)无远端同源框6反义1(DLX6-AS1)、微小RNA-335-3p(miR-335-3p)与糖尿病视网膜病变(DR)患者微血管损伤的关系。方法:前瞻性研究。选取2019-02/2021-12我院2型糖尿病(T2DM)患者160例,根据DR分期标准,分为无DR(NDR)组69例、非增殖型DR(NPDR)组48例、增殖型DR(PDR)组43例。比较三组患者血清lncRNA DLX6-AS1、miR-335-3p、血管内皮生长因子(VEGF)以及内皮细胞(ECs)、内皮祖细胞(EPCs)水平。Pearson法进行各指标相关性分析。Logistic回归模型分析影响T2DM患者发生DR的因素。结果:NDR组、NPDR组、PDR组患者血清miR-335-3p表达水平及EPCs比例逐次减少,lncRNA DLX6-AS1、VEGF表达水平及ECs比例逐次增加(均P<0.05)。DR患者血清lncRNA DLX6-AS1与miR-335-3p负相关(r=-0.668,P<0.01)。NPDR组、PDR组血清lncRNA DLX6-AS1与miR-335-3p表达水平均呈负相关性(r=-0.647、-0.675,均P<0.01),lncRNA DLX6-AS1与VEGF均呈正相关(r=0.619、0.630,均P<0.01),VEGF与miR-335-3p均呈负相关(r=-0.625、-0.649,均P<0.01);PDR组lncRNA DLX6-AS1与ECs呈正相关,与EPCs呈负相关(r=0.528、-0.594,均P<0.01),miR-335-3p与ECs呈负相关,与EPCs均呈正相关(r=-0.554、0.586,均P<0.01)。多因素回归分析显示,lncRNA DLX6-AS1(OR=2.484,95%CI:1.366~4.516)、miR-335-3p(OR=2.171,95%CI:1.218~3.871、VEGF(OR=1.603,95%CI:1.115~2.304)是T2DM患者发生DR的危险因素(均P<0.05)。结论:DR患者血清中lncRNA DLX6-AS1表达上调,miR-335-3p表达下调,lncRNA DLX6-AS1与miR-335-3p呈负相关,二者异常表达均与DR患者微血管损伤有关。

长链非编码RNA DLX6-AS1调控微小RNA-15b和磷脂酶D1影响口腔鳞状细胞癌侵袭转移的分子机制研究

目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)生长停滞特异性蛋白6-反义RNA1(growth arrest specific protein 6-antisense RNA1,DLX6-AS1)对口腔鳞状细胞癌(口腔鳞癌)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测口腔鳞癌组织及癌旁组织中DLX6-AS1、微小RNA-15b(microRNA-15b,miR-15b)和磷脂酶D1(phospholipase D1,PLD1)mRNA的表达水平。转染DLX6-AS1小干扰RNA至口腔鳞癌细胞HSC3,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)、Transwell小室和Western印迹法(Western blot)检测抑制DLX6-AS1表达对HSC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力,以及对p21、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和E-钙黏附素(E-cadherin)蛋白表达的影响。分别共转染miR-15b抑制剂或PLD1过表达载体与DLX6-AS1小干扰RNA至HSC3细胞,用上述相同方法观察抑制miR-15b或过表达PLD1对DLX6-AS1表达抑制的HSC3细胞增殖、迁移和侵袭能力,以及对p21、MMP-2和E-cadherin蛋白表达的影响。双荧光素酶报告基因实验验证DLX6-AS1与miR-15b及miR-15b与PLD1的调控关系。结果:与癌旁组织比较,口腔鳞癌组织中DLX6-AS1和PLD1 mRNA表达水平升高(P<0.001),miR-15b表达水平降低(P<0.001)。抑制DLX6-AS1表达可降低HSC3细胞存活率、迁移和侵袭,以及MMP-2的蛋白表达水平(P<0.001),提高p21和E-cadherin蛋白表达水平(P<0.001)。抑制miR-15b表达或过表达PLD1均可降低抑制DLX6-AS1表达对HSC3细胞的存活率、迁移和侵袭及P21、MMP-2和E-cadherin蛋白表达的影响。DLX6-AS1在HSC3细胞中靶向负调控miR-15b,miR-15b靶向负调控PLD1。结论:抑制DLX6-AS1表达可能通过靶向调控miR-15b和PLD1轴抑制口腔鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

长链非编码生长停滞特异性蛋白6反义RNA1靶向miRNA-374a-3p调控高糖诱导的人肾小管上皮细胞损伤及纤维化分子机制的研究

目的探讨长链非编码生长停滞特异性蛋白6反义RNA1(LncRNA DLX6-AS1)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞HK-2损伤及纤维化的影响及其可能作用机制。方法高糖诱导HK-2细胞建立细胞损伤模型,实验分为正常对照(Con)组、高糖组(HG)、LncRNA DLX6-AS1小分子干扰RNA阴性对照(si-NC)+HG组(si-NC+HG组)、LncRNA DLX6-AS1小分子干扰RNA(si-LncRNA DLX6-AS1)+HG组(si-LncRNA DLX6-AS1+HG组)、miR-374a-3p寡核苷酸模拟物阴性对照mimic NC序列(miR-NC)+HG组(miR-NC+HG组)、miR-374a-3p寡核苷酸模拟物(miR-374a-3p mimics)+HG组(miR-374a-3p+HG组)、miR-374a-3p特异性寡核苷酸抑制剂阴性对照(anti-miR-NC)+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组(anti-miR-NC+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组)、miR-374a-3p特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-374a-3p)+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组(anti-miR-374a-3p+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组)。qRT-PCR法检测LncRNA DLX6-AS1、miR-374a-3p表达,ELISA法检测TNF-α、IL-1β水平,双荧光素酶报告实验检测LncRNA DLX6-AS1和miR-374a-3p的靶向关系,Western blot法检测人平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(Fn)、I型胶原α1链(COL1a1)、COL3a1蛋白表达量。结果转染si-LncRNA DLX6-AS1或miR-374a-3p mimic可降低TNF-α、IL-1β水平和α-SMA、Fn、COL1a1、COL3a1蛋白水平(P<0.05)。LncRNA DLX6-AS1可靶向调节miR-374a-3p表达。共转染anti-miR-374a-3p与si-LncRNA DLX6-AS1可恢复转染si-LncRNA DLX6-AS1对HG诱导的HK-2细胞炎症及纤维化作用。结论干扰LncRNA DLX6-AS1表达可通过上调miR-374a-3p表达抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞炎症反应及纤维化。

乳腺癌组织的GATA6-AS1水平和临床意义

目的探讨长链非编码RNA GATA6反义RNA 1(GATA6-AS1)在乳腺癌组织的水平和临床意义。方法采用实时定量PCR(qPCR)检测本院2013年1月至2018年12月手术切除的97对乳腺癌组织和配对癌旁组织的GATA6-AS1水平,比较不同组织的GATA6-AS1水平差异,以乳腺癌组织GATA6-AS1水平的中位值为参考将97例乳腺癌组织分为低水平组和高水平组以进一步分析GATA6-AS1水平与乳腺癌临床病理特征(年龄、肿瘤大小、ER表达、PR表达、HER-2扩增、组织学分级、TNM分期、淋巴结转移和绝经状态)的关系,根据随访数据分析不同GATA6-AS1水平的预后情况并进行多因素分析。结果乳腺癌组织的GATA6-AS1水平为0.512±0.240,低于癌旁组织的1.761±0.739(t=13.054,P<0.001)。以组织GATA6-AS1水平的中位值(0.532)为参考分为低水平(≤0.532)组49例和高水平组(>0.532)组48例,单因素分析发现GATA6-AS1水平与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移和HER-2扩增有关(P<0.05),而与年龄、组织学分级、ER表达、PR表达和绝经状态无关(P>0.05)。全组97例患者随访11~60个月,中位随访40个月,中位无病生存期(DFS)为51.0个月,其中49例低水平者的中位DFS为45.0个月,短于48例高水平者的54.0个月,差异有统计学意义(P=0.002);进一步多因素分析发现组织GATA6-AS1水平降低是乳腺癌预后不良的独立因素(HR=3.126,95%CI:1.478~5.712,P=0.002)。结论乳腺癌组织的GATA6-AS1水平降低,且与较大肿瘤体积、分期晚、淋巴结转移和HER-2扩增有关,对乳腺癌的诊治指导和预后评价有一定价值。

长链非编码RNA GATA6-AS1通过调控GATA6抑制胃癌5-氟尿嘧啶耐药细胞SGC7901/5-FU的增殖、凋亡及转移

目的:研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)GATA6反义RNA1(GATA6 antisense RNA 1,GATA6-AS1)调控GATA6表达对胃癌(gastric cancer,GC)5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)耐药细胞SGC7901/5-FU增殖、凋亡及转移的影响,并探讨可能的作用机制。方法:以亲本SGC7901细胞和SGC7901/5-FU细胞作为对照组,采用Lipofectamine 2000将空载体pcDNA3.1、重组载体pcDNA3.1-GATA6-AS1、shNC和shGATA6-AS1分别转入SGC7901/5-FU细胞,使GATA6-AS1过表达或沉默表达。采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中GATA6-AS1和GATA6 mRNA的表达情况。各组细胞经5-FU处理后,分别采用CCK-8法检测细胞增殖的能力,细胞划痕愈合实验检测细胞的迁移能力,Transwell实验检测细胞的侵袭能力,FCM法检测细胞的凋亡能力。随后采用蛋白质印迹法检测各组细胞中Bax、Bcl-2、Caspase 3和GATA6蛋白的表达水平,再用α-鹅膏菌素处理后的细胞用于检测GATA6 mRNA的稳定性;RNA pull-down实验检测GATA6-AS1与GATA6之间的相关性。最后用Balb/c裸鼠建立SGC7901细胞移植瘤模型,分组与体外实验分组相同;经5-FU治疗后,观察各组裸鼠的肿瘤生长情况并计算抑瘤率。HE染色后观察各组移植瘤组织病理学的变化情况,蛋白质印迹法检测各组裸鼠肿瘤组织中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白的表达情况。结果:经5-FU处理后,与亲本SGC7901细胞相比,SGC7901/5-FU细胞中GATA6-AS1和GATA6 mRNA的表达水平明显下调(P均<0.05);细胞的增殖能力、迁移能力和侵袭能力均明显提高,细胞的凋亡能力明显降低(P均<0.05);GATA6、Bax和Caspase 3蛋白的表达水平均明显下调而Bcl-2蛋白的表达水平明显升高(P均<0.05)。与SGC7901/5-FUpcDNA组相比,GATA6-AS1过表达的SGC7901/5-FU细胞中相关指标与上述变化相反。与SGC7901/5-FU-shNC组相比,沉默GATA6-AS1表达的SGC7901/5-FU细胞中GATA6-AS1和GATA6 mRNA的表达水平明显下调(P均<0.05);细胞的增殖能力、迁移能力和侵袭能力均明显提高,细胞的凋亡能力明显降低(P均<0.05);GATA6、Bax和Caspase 3蛋白的表达水平均明显下调而Bcl-2蛋白的表达水平明显升高(P均<0.05)。GATA6-AS1可增强GATA6 mRNA的稳定性,GATA6-AS1正向调控GATA6的表达。体内实验检测结果显示,经5-FU治疗后,与亲本SGC7901细胞组相比,耐药SGC7901/5-FU细胞组小鼠的肿瘤体积、肿瘤组织中PCNA蛋白的表达水平显著增加(P均<0.05);与SGC7901/5-FU-pcDNA组相比,SGC7901/5-FU-GATA6-AS1组小鼠的肿瘤体积、肿瘤组织中PCNA蛋白的表达水平显著降低(P<0.05),肿瘤组织病理学观察发现GC发展程度较轻;与SGC7901/5-FUshNC组相比,SGC7901/5-FU-shGATA6-AS1组小鼠的肿瘤体积、肿瘤组织中PCNA蛋白的表达水平显著升高(P<0.05),GC发展程度严重。结论:GATA6-AS1过表达后可促进GATA6的表达,抑制GC细胞的生长,从而逆转SGC7901/5-FU细胞对5-FU的耐药性。

RBM5-AS1在甲状腺癌细胞中表达变化及其对细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响

目的观察RNA结合基序蛋白5-反义链1(RBM5-AS1)在甲状腺癌(TC)细胞中的表达变化,及其对细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移能力的影响,并探讨可能机制。方法采用qRT-PCR法检测TC细胞C643、B-CPAP、TPC-1、BHT101、KMH-2、8305C和正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中的RBM5-AS1,选择表达水平最高的细胞进行后续实验。将TC细胞分别转染NC siRNA(对照组)和RBM5-AS1 siRNA(实验组),通过CCK-8实验检测细胞增殖能力,流式细胞术测算细胞凋亡率,Transwell实验分别检测细胞侵袭、迁移能力,Western blotting法检测雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)/真核翻译起始因子4E结合蛋白1(4E-BP1)信号通路蛋白表达水平。结果C643、B-CPAP、TPC-1、BHT101、KMH-2、8305C细胞中RBM5-AS1相对表达量均高于Nthy-ori 3-1细胞,其中8305C细胞RBM5-AS1表达量最高(P均<0.05)。与对照组相比,实验组细胞增殖能力减弱,细胞凋亡率升高,侵袭及迁移穿膜细胞数减少,p-mTOR、p70S6K、4E-BP1蛋白相对表达量降低(P均<0.05)。结论TC细胞中RBM5-AS1表达上调;干扰RBM5-AS1表达抑制了TC细胞的增殖、迁移、侵袭能力,并促进其凋亡,其机制可能与调控mTOR/p70S6K/4E-BP1信号通路有关。

下调LncRNA DLX6-AS1通过miR-144调控FBXW7表达影响食管癌Eca-109细胞的增殖、侵袭和EMT进程

目的:评估长非编码RNA远端少同源盒6反义1(lncRNA DLX6-AS1)在食管癌发生发展中的作用及其潜在的机制。方法:采用qRT-PCR检测lncRNA DLX6-AS1和miR-144、FBXW7在食管癌组织及癌旁正常组织中的mRNA表达。分别敲低lncRNA DLX6-AS1和miR-144、FBXW7在Eca-109细胞中的表达后,采用CCK-8法检测细胞生长活性,细胞克隆形成实验检测细胞增殖,Transwell法检测细胞侵袭,Western blot检测E-cadherin、Vimentin和GAPDH的表达。采用miRanda、TargetScan和双荧光素酶报告基因检测验证lncRNA DLX6-AS1和miR-144、miR-144和FBXW7之间的靶向关系。结果:食管癌组织中lncRNA DLX6-AS1和FBXW7表达显著高于癌旁正常组织,miR-144表达与癌旁组织对比明显下调。lncRNA DLX6-AS1、FBXW7表达下降后,Eca-109细胞增殖、侵袭与EMT能力也明显下调;LncRNA DLX6-AS1与miR-144、miR-144与FBXW7呈靶向负调控关系;miR-144表达下降后,Eca-109细胞增殖、侵袭与EMT能力显著上调;上调LncRNA DLX6-AS1靶向miR-144促进Eca-109细胞增殖、侵袭与EMT。结论:Lnc RNA DLX6-AS1在食管癌中表达上调且通过miR-144/FBXW7轴促进Eca-109细胞增殖、侵袭和EMT。