襄五脂素对哮喘大鼠Th1/Th2失衡和GATA-3的影响

目的探讨襄五脂素对哮喘动物模型的治疗作用及其机制。方法将大鼠随机分为5组,每组12只:对照组、模型组、低、中、高剂量组。除对照组之外,其他组大鼠均使用卵白蛋白(OVA)诱导构建哮喘大鼠模型。低、中和高剂量组大鼠分别灌胃10,20,40 mg/kg襄五脂素,对照组和模型组大鼠灌胃等体积的0.1%二甲基亚砜(DMSO)溶剂,共给药7 d。采用苏木素伊红(HE)和过碘酸-雪夫(PAS)染色观察大鼠肺组织形态和杯状细胞化生。ELISA法检测大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-12、IL-4、IL-5、IL-13的水平。流式细胞术检测脾脏Th1/Th2细胞亚群。qRT-PCR检测大鼠肺组织中E-cadherin、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、N-cadherin和vimentin的mRNA表达水平。Western blot检测大鼠肺组织中E-cadherin、α-SMA、N-cadherin、vimentin、p-p38(Thr180+Tyr182)、p38、GATA-3和Histone H3(细胞核内参蛋白)蛋白表达水平。结果与模型组比较,低、中和高剂量组大鼠的肺组织形态好转,炎性细胞、杯状细胞和黏液分泌减少;肺组织中E-cadherin的mRNA和蛋白相对表达量升高(P<0.05),α-SMA、N-cadherin和vimentin的mRNA和蛋白相对表达量降低(P<0.05),p-p38(Thr180+Tyr182)/p38比值和GATA-3/Histone H比值降低(P<0.05);BALF中IFN-γ和IL-12水平以及IFN-γ/IL-4比值均升高(P<0.05),IL-4、IL-5和IL-13水平降低(P<0.05);脾脏中CD4^(+)IFN-γ^(+)(Th1)细胞数量和Th1/Th2比值升高(P<0.05),CD4^(+)IL-4(Th2)细胞数量降低(P<0.05)。结论襄五脂素对哮喘大鼠具有显著治疗作用,可纠正哮喘大鼠Th1/Th2失衡并下调肺组织中p38介导的GATA-3磷酸化。

哮喘患儿转录因子T-bet/GATA-3 mRNA比值及其与Th1/Th2平衡间的关系

【目的】研究转录因子T-bet/GATA-3在小儿哮喘发病以及Th1/Th2失衡中的作用。【方法】本实验拟通过半定量RT-PCR检测部分哮喘患儿外周血单个核细胞(PBMC)中T-bet、GATA-3 mRNA表达情况,同时采用三色荧光流式细胞仪检测哮喘患儿的Th1、Th2细胞数量,并对T-bet、GATA-3 mRNA表达水平与Th1、Th2细胞比率进行相关分析,了解T-bet/GATA-3对哮喘患儿的Th细胞分化的调节作用。【结果】哮喘患儿外周血淋巴细胞转录因子T-bet mRNA表达水平显著低于正常对照组,其中哮喘发作组显著低于缓解组(P<0.05);转录因子GATA-3 mRNA表达水平显著高于正常对照组,哮喘发作组又显著高于缓解组(P<0.05)。哮喘患儿外周血淋巴细胞亚群Th1百分率显著低于正常对照组,其中哮喘发作组又显著低于缓解组(P<0.05);Th2细胞百分率显著高于正常对照组,哮喘发作组又显著高于缓解组(P<0.05)。哮喘患儿T-bet mRNA表达量与Th1细胞比率呈正相关(r=0.731),与Th2细胞比率呈负相关(r=-0.685);GATA-3 mRNA表达量与Th1细胞比率呈负相关(r=-0.692),与Th2细胞比率呈正相关(r=0.717);T-bet/GATA-3 mRNA比值与Th1细胞比率呈正相关(r=0.793),与Th2细胞比率呈负相关(r=-0.639),与Th1/Th2比值呈正相关(r=0.801)。【结论】哮喘患儿T-bet/GATA-3 mRNA表达水平失调,与哮喘患儿Th1/Th2失衡密切相关,可作为衡量Th1/Th2平衡的新指标。

T-bet/GATA-3调控Th1／Th2分化失衡疾病的研究进展

T-bet和GATA-3是两个相互调节、相互抑制的决定Th1和Th2分化的重要转录因子。两者的表达比率可以作为评价机体Th1/Th2型细胞因子表达的精确指标。近年来,T-bet和GATA-3作为最受关注的转录因子,研究揭示两者表达异常可以影响免疫应答,导致免疫调控网络失衡,涉及很多炎症性疾病、过敏性疾病以及自体免疫性疾病的发生、发展、转归。本文就T-bet和GATA-3在一些免疫性疾病中的可能作用机制及临床研究进展做一综述。

环孢菌素A对慢性再生障碍性贫血患者T-bet、GATA-3、相关信号分子、细胞因子及Th1/Th2的影响

本研究探讨转录因子T-bet、GATA-3及相关信号通路在慢性再生障碍性贫血(CAA)免疫发病中的作用,从Th细胞失衡、转录因子及相关信号通路水平研究环孢菌素(CsA)治疗慢性AA的免疫调节机理。采用实时荧光定量PCR(real-time FQ-PCR)检测慢性AA患者治疗前和CsA治疗6月后外周血单个核细胞(PBMNC)T-bet、GATA-3及STAT4、STAT6mRNA表达;采用流式细胞术、酶联免疫吸附法(ELISA)检测慢性AA患者治疗前和CsA治疗6月后外周血Th1、Th2比例及PBMNC培养上清IFN-γ、IL-12、IL-4水平,并与正常人进行比较。结果表明:慢性AA患者PBMNC T-bet、STAT4mRNA表达、T-bet/GATA-3比值、Th1比例、Th1/Th2比值、PBMNC培养上清IFN-γ、IL-12表达均明显高于正常组(p<0.01),经CsA治疗6月后,患者T-bet、STAT4表达、T-bet/GATA-3比值、Th1比例、IFN-γ、IL-12表达均有所下降,但T-bet、STAT4、T-bet/GATA-3比值、Th1比例、IFN-γ表达仍未达到正常水平,GATA-3、STAT6mRNA表达、Th2比例、IL-4表达在治疗前后与正常人比较均无明显差异(p>0.05)。结论:IFN-γ/T-bet、IL-12/STAT4通路的异常活化及Th平衡向Th1型偏移在AA免疫异常的发病过程中起到关键的作用;CsA能通过下调IFN-γ/T-bet、IL-12/STAT4通路的异常活化及纠正Th1过度极化而减轻AA异常亢进的细胞免疫,解除造血抑制。

结核分枝杆菌耐热抗原激活的人γδT细胞Th2极性分化特征以及T-bet/GATA-3对分化的调控作用

目的研究结核杆菌耐热抗原(MTB-HAg)激活的人外周血γδT细胞Th2极性分化特点和表达于T细胞中的T盒(T-bet)和GATA结合蛋白3(GATA-3)转录因子的调控作用。方法用MTB-HAg刺激人外周血单个核细胞(PBMC)获得MTB-HAg激活的T细胞(MTBAT),分别在中性条件和Th2极化条件培养后,再经10 ng/m L佛波醇酯(PMA)、500 ng/m L离子霉素(ionomycin)和2.5μmol/L莫能菌素(monensin)刺激6 h,四色荧光抗体染色流式细胞术检测γδT细胞和αβT细胞内细胞因子γ干扰素(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的表达。流式细胞术分选28 d MTBAT中的γδT细胞和CD4+T细胞,反转录PCR(RT-PCR)检测T-bet和GATA-3 mRNA的表达。结果在中性条件和Th2极化条件下培养的MTBAT中,γδT细胞一直优势表达IFN-γ,而Th2极化条件下,随培养时间增加IFN-γ+αβT细胞百分率显著下降。与中性条件培养比较,Th2极化条件下MTBAT培养28 d,Th0型(IFN-γ+IL-4+)γδT细胞显著增加;而Th2型(IFN-γ-IL-4+)αβT细胞显著增加。RT-PCR结果显示,Th2极化的γδT细胞仍高表达T-bet mRNA,而在CD4+T细胞T-bet mRNA表达被显著下调;同时,GATA-3 mRNA在γδT细胞和CD4+T细胞的表达均显著上调。结论 Th2极化条件下,大部分γδT细胞仍为Th1型,仅部分极性分化为Th0型细胞;Th2极性分化的γδT细胞转录因子T-bet和GATA-3未表现出交互调节功能。

哮喘小鼠肺组织GATA-3及Th2型细胞因子表达的意义

目的探讨Th2特异性转录因子GATA-3及Th2型细胞因子(IL-5、13)在支气管哮喘(哮喘)小鼠中的表达及意义。方法BALB/c小鼠16只随机分为对照组和模型组。卵清蛋白致敏制备哮喘模型。HE染色观察小鼠肺组织病理变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测小鼠肺组织GATA-3 mRNA表达,酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠肺组织IL-5、-13蛋白的表达。结果HE染色示模型组支气管周围见大量炎性细胞浸润,而对照组则不明显。与对照组相比,模型组GATA-3 mRNA和IL-13蛋白表达量明显增加(Pa<0.05)。结论哮喘小鼠肺部存在GATA-3高表达,GATA-3可直接调控IL-5、-13表达,参与哮喘呼吸道炎症的发生。

转录因子GATA-2在脊椎动物发育过程中的作用

GATA-2是对外胚层和中胚层发育至关重要的转录因子,它属于具有保守锌指结构的GATA转录因子家族。GATA家族包括6个成员:分别命名为GATA-1～GATA-6。最新研究表明,GATA-2不仅存在于胚胎器官,还对成体造血细胞系、神经系统、垂体和泌尿生殖系统中细胞的功能和维持都必不可少。本文旨在通过对GATA-2的功能研究进展进行综述,探讨GATA-2在生殖系统中的作用机制,以期更广泛地了解GATA-2基因在生物发育过程中的作用及对相关基因的调控机制,从而为攻克人类相关疾病提供理论依据。

高原红细胞增多症模型大鼠骨髓CD71^+细胞GATA-1和GATA-2表达的相关性

目的:探讨高原红细胞增多症(HAPC)模型大鼠骨髓CD71+细胞转录因子GATA-1和GATA-2表达的相关性。方法:雄性SD大鼠48只,随机分为对照组和HAPC模型组。在海拔4 300 m自然环境下复制HAPC模型并采用骨髓涂片、骨髓细胞分类计数和血液学参数检测进行验证。流式细胞术检测骨髓CD71^+细胞数量相对变化趋势;RT-q PCR和Western blot法检测GATA-1和GATA-2的mRNA和蛋白表达变化,低氧培养CD71^+细胞,筛选最佳干扰序列GATA-1 shRNA1后,转染96 h,RT-q PCR和Western blot法检测GATA-1和GATA-2的mRNA和蛋白表达水平。结果:骨髓细胞分类计数、涂片及血液学参数检测结果显示,HAPC大鼠模型复制成功。与对照组比较,HAPC模型组骨髓CD71^+细胞明显增多,骨髓CD71^+细胞GATA-1的mRNA和蛋白表达增高,GATA-2的mRNA和蛋白表达差异无统计学显著性。对照组GATA-1和GATA-2的mRNA和蛋白表达呈负相关,HAPC模型组GATA-1和GATA-2的mRNA和蛋白表达无显著相关性。GATA-1 shRNA1干扰96 h后,GATA-1的mRNA和蛋白表达低于对照组,但是GATA-2的mRNA和蛋白表达变化差异无统计学显著性。结论:HAPC大鼠骨髓CD71+细胞GATA-1和GATA-2表达异常,两者的负相关关系改变可能是导致HAPC发生的机制之一。

转录因子GATA-2在早期造血过程中的作用(英文)

转录因子GATA 2是GATA家族的一成员 ,以其锌指结构结合于 [(T/A(GATA)A/G]的共同DNA序列结构。近期 ,通过敲除小鼠GATA 2基因的实验证明了GATA 2在造血细胞发育中的重要地位。GATA 2基因断裂导致全部造血祖细胞的减少 ;相反 ,强制表达GATA 2则阻止正常造血。GATA 2的调节作用发挥于早期胚胎时期并与其它的GATA转录因子共同作用于粒系、红系、巨核系和肥大细胞系等的增殖和分化过程中。在人髓系白血病细胞株和大多数白血病病人中能检测到GATA 2的mRNA和蛋白。虽然有资料显示GATA 2能转化Cas Br E和 graffi逆转录病毒 ,后者可诱导小鼠发生白血病 ,但GATA 2在白血病发生中的作用仍不明确。

GATA-1和GATA-2基因在再障和正常骨髓基质细胞中的表达

目的 探讨转录因子GATA - 1和GATA - 2基因在再障和正常骨髓基质细胞中表达的情况 .方法 体外扩增培养骨髓基质细胞 ,运用RT -PCR -ELISA方法检测GATA - 1和GATA - 2基因的表达情况 ,并对其相对表达水平进行半定量比较 .结果 GATA - 1和GATA - 2基因在正常和再障的骨髓基质细胞中均有一定的表达 .再障的骨髓基质细胞中GATA - 1的表达水平较正常低 ;而GATA - 2的表达水平与正常相比无显著性差异 .正常和再障的骨髓基质细胞中均以GATA - 2的表达占优势 .结论 转录因子GATA - 1和GATA - 2基因可在正常和再障骨髓基质细胞中表达 ,并可能影响骨髓微环境的造血调控作用 。

人参皂苷Rh2通过GATA-1诱导K562细胞红系分化作用的研究

目的了解人参皂苷Rh2是否通过GATA-1蛋白诱导白血病细胞株K562的分化作用。方法利用凝胶集落生成实验检测不同浓度人参皂苷Rh2对白血病细胞株K562的增殖抑制作用;采用免疫细胞化学法和Western-blot法检测不同浓度人参皂苷Rh2处理前后K562细胞株中GATA-1蛋白表达情况。结果凝胶集落生成实验结果显示人参皂苷Rh2对K562细胞有明显的增殖抑制作用,且呈剂量依赖性;免疫细胞化学法和Western-blot法提示人参皂苷Rh2可诱导K562细胞内GATA-1表达,且呈剂量依赖性。结论人参皂苷Rh2可显著抑制白血病细胞株K562的生长,其作用呈浓度依赖性;人参皂苷Rh2在体外可通过上调GATA-1蛋白表达诱导K562向红系细胞方向分化。

SLE患者GATA-3、MBD2对IL-4表达水平的调控作用

目的分析SLE患者GATA-3、MBD2与IL-4表达的相关性,探讨GATA-3和MBD2对IL-v4表达的调控作用。方法应用实时定量PCR法检测35例SLE患者和20例正常人外周血单核细胞(PBMC)中IL-4、GATA-3、MBD2的mRNA表达水平,并分析它们之间的相关性。结果SLE患者外周血单核细胞中IL-4、GATA-3和MBD2的表达水平均明显高于正常对照组(t=3.37,3.55,9.68,P均<0.05);IL-4与GATA-3、IL-4与MBD2的表达水平均呈正相关(r=0.39,0.97,P均<0.05)。结论SLE患者中IL-4表达水平升高可能是由于MBD2对IL-4基因阻遏作用降低,及大量GATA-3对IL-4基因的过度激活共同作用所导致。

转录因子GATA-2基因在ANLL、CML和MDS中的表达

目的 :了解 GATA- 2基因在急性非淋巴细胞白血病 (ANL L )、慢性粒细胞白血病 (CML )和骨髓增生异常综合征 (MDS)中的表达情况。方法 :利用 RT- PCR扩增 ANL L、CML和 MDS等 2 46例患者外周血单个核细胞中 GATA- 2基因。结果 :GATA- 2基因在 ANL L、CML 和 MDS中的表达率分别为 88.4%、81.6 %和 97% ,差异与正常人有高度显著性 (P <0 .0 1)。结论 :绝大多数髓系白血病和 MDS标本表达 GATA- 2基因 ,GATA- 2可能是白血病细胞的增殖过程中所需要的转录因子之一。

不同物种GATA-2基因编码区生物信息学分析

利用生物信息学方法分析了小家鼠(Mus musculus)、褐家鼠(Rattus norvegicus)、人(Homo sapiens)、黑猩猩(Pan troglodytes)、大猩猩(Gorilla)、倭黑猩猩(Pan paniscus)、猿(Nomascus leucogenys)、狨(Callithrix jacchus)、亚马逊松鼠猴(Saimiri boliviensis)、家马(Equus caballus)、小耳大婴猴(Otolemur garnettii)、家猫(Felis catus)、东非狒狒(Papio Anubis)、猕猴(Macaca mulatta)、犬(Cains lapus)、野猪(Sus scrofa)、大熊猫(Ailuropoda melanoleuca)等17个物种GATA-2基因编码序列(Coding sequence,CDS),并对该基因的遗传多样性、信号肽、导肽、跨膜结构域、疏水性/亲水性、蛋白质二级结构、氨基酸序列进行了分析和预测。结果表明,在17个物种52条基因序列中共检测到344个多态位点,有25种单倍型,GATA-2基因序列编码区的种内、种间存在丰富的遗传多样性。GATA-2蛋白N端无信号肽,不具有导肽,没有跨膜结构域,表现为亲水性,蛋白质二级结构主要结构元件是无规卷曲和α-螺旋,理论等电点为9.43,GATA-2蛋白呈碱性。

急性非淋巴细胞白血病中转录因子GATA-2基因插入突变

采用RT PCR ,单链构象多态性 (SSCP)和核苷序列分析检测 85例急性非淋巴细胞白血病 (ANLL)病人外周血单个核细胞中GATA 2基因的表达和突变情况。结果发现绝大多数ANLL都表达了GATA 2基因 (89.4 % ) ,并发现 1例M1病人的PCR产物较正常产物大 ,序列分析显示在GATA 2基因第二锌指区出现 18个核苷酸的插入突变 ,使其GATA 2因子的第二锌指增加 6个氨基酸 ,其中含有 1个能与锌离子结合的半胱氨酸。该插入突变可能引起GATA 2的功能改变 ,该结果为首次发现ANLL中的GATA

miRNA-330-3p/Ap2m1轴在过表达GATA-4骨髓间充质干细胞外泌体抗心肌细胞凋亡中的作用

目的探讨过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)分泌外泌体(BMSC^(GATA-4)exosome)通过miRNA-330-3p/Ap2m1轴减少心肌细胞凋亡,提高心肌梗死心功能。方法建立小鼠心梗模型,共分7组,分别经尾静脉注射BMSC^(miRNA-330-3p-mimic)-exosome、BMSC^(miRNA-330-3p-inhibitor)-exosome、BMSC^(空载体)-exosome、BMSCexosome 48 h,同时将心梗未处理组及正常小鼠作为对照组。采用心脏彩超检测各组心功能,RT-PCR检测心梗心肌细胞内miRNA-330-3p的表达,Tunel法检测各组心梗心肌细胞凋亡数量。miRNA-330-3p对应靶基因Ap2.m1、Cnot4蛋白采用Western blot法进行检测。结果BMSC^(miRNA-330-3p-mimic)-exosome组心梗心功能改善最为明显(P<0.05),其心肌细胞内miRNA-330-3p表达量最高(P<0.05)。BMSC^(miRNA-330-3p-mimic)-exosome组心肌细胞的凋亡率最低(P<0.05),BMSC^(miRNA-330-3p-mimic)-exosome组心梗心肌细胞内的Ap2.m1的表达最低(P<0.05)。结论过表达GATA-4小鼠骨髓间充质干细胞外泌体通过miRNA-330-3p/Ap2m1轴抗心肌细胞凋亡。

IL-11对ITP患者Th1、Th2细胞及T-bet、GATA-3 mRNA的影响

目的:研究白细胞介素-11(IL-11)对免疫性血小板减少症(ITP)患者Th1、Th2细胞亚群及其调控因子T-bet mRNA和GATA-3 mRNA表达的影响。方法:从10例ITP患者静脉中抽取外周血提取单个核细胞,加入不同浓度IL-11(0、25、50、100、200 ng/mL)培养4 d后,应用流式细胞术和实时荧光定量反转录-多聚酶链反应法检测Th1、Th2细胞亚群比例及T-bet mRNA、GATA-3 mRNA表达水平。结果:当IL-11浓度为100 ng/mL时,与浓度为0的对照组差异最明显,表现为Th1比例及Th1/Th2比值下降,Th2比例升高,差异有统计学意义(P<0.01),同时T-bet mRNA表达下降,GATA-3 mRNA表达增加,T-bet/GATA-3比值显著下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:一定浓度的IL-11在体外培养中能促使ITP患者Th1细胞向Th2细胞转化,同时GATA-3 mRNA表达增加、T-bet mRNA表达下降。

转录因子GATA-2的研究进展

转录因子GATA - 2是具有锌指结构的GATA家族中的一员 ,它在造血系统中广泛表达 ,且与造血细胞的分化、发育关系密切 .GATA - 2主要调控造血干 /祖细胞的增殖和分化 ,亦可调控其他造血相关因子的表达 。

一例急性髓性白血病的GATA-2基因点突变

GATA是一类属于“锌指”结构家族的新发现的转录因子(G=鸟嘌呤脱氧核苷酸;A=腺嘌呤脱氧核苷酸;T=胸腺嘧啶脱氧核苷酸)。ATA-2在造血细胞的分化早期以及红系和髓系的发育中起一定的作用。为了了解GATA-2在急性髓性白血病(AML)中的作用,我们利用聚合酶链反应(PCR)方法检测86例AML病人GATA-2基因的表达情况。结果77例表达了该基因。

白血病骨髓基质细胞中GATA-1和GATA-2基因的表达特点

为了解转录因子GATA 1和GATA 2基因在白血病和正常骨髓基质细胞 (BMSC)中表达的情况 ,采集了4 2例白血病患者的骨髓标本及 34例正常骨髓标本并分离骨髓单个核细胞 ,在体外扩增培养后收集悬浮细胞 (骨髓细胞 )和扩增后的贴壁细胞 (BMSC) ,应用RT PCR ELISA方法分别检测GATA 1和GATA 2基因的表达情况 ,并对其相对表达水平进行半定量分析。结果发现 ,GATA 1和GATA 2基因在正常和白血病的BMSC和骨髓细胞中均有一定的表达。在BMSC中急性淋巴细胞白血病 (ALL)组的GATA 1基因表达率 (85 .7% )与正常组 (88.2 % )相近 ,而急性髓性白血病 (AML)和慢性粒细胞白血病 (CML)组的GATA 1表达率 (5 5 .6 %和 4 1.2 % )均比正常组低(P =0 .0 0 8,0 .0 0 0 ) ,且ALL的BMSC中GATA 1基因表达水平 >AML >正常 >CML(P均 <0 .0 5 ) ;而各白血病组BMSC中GATA 2的表达率和表达水平与正常组相比均无显著性差异 (P均 >0 .0 5 )。骨髓细胞中AML组的GATA 1基因表达水平 >正常 >ALL >CML ,AML组的GATA 2基因表达水平 >CML >ALL >正常 (P均 <0 .0 5 )。AML、CML和正常组的BMSC和骨髓细胞中均以GATA 2的表达占优势。可以推论 ,转录因子GATA 1和GATA 2基因在正常和白血病BMSC的表达可能影响骨髓微环境的造血调控作用。是否对白血病的发生?