Hedgehog信号通路介导白藜芦醇对人胆囊癌GBC-SD细胞株凋亡和侵袭的影响

目的 探讨白藜芦醇(RSV)对人胆囊癌GBC-SD细胞的凋亡、侵袭能力和上皮间充质转化(EMT)的影响及其发生机制。方法 体外培养GBC-SD细胞,随机分成空白组和RSV低、中、高剂量组(0,20,50,100μmol·L-1RSV)。通过Annexin V FITC/PI双染流式分析细胞凋亡情况,RT-PCR检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3 (Caspase 3)mRNA表达水平,Transwell侵袭实验检测GBC-SD细胞侵袭能力,Western blotting检测EMT标志物钙黏蛋白E(E-cadherin)、钙黏蛋白N(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的表达水平和Hedgehog信号通路成员神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白1(Gli1)、Gli2、音猬因子(Shh)的表达。再将GBC-SD细胞随机分为空质粒组、Gli1过表达质粒组、Gli1过表达质粒+RSV组,通过Western blotting检测Gli1蛋白过表达情况,Annexin V-FITC/PI双染流式和Transwell侵袭实验分别检测上述各组的凋亡水平和侵袭能力。结果 与空白组相比,RSV各剂量组细胞凋亡率、Bax和Caspase 3 mRNA表达显著升高(P <0.05或P <0.01),细胞侵袭能力显著降低(P <0.01);RSV中、高剂量组Bcl-2 mRNA表达显著降低(P <0.01)。与空白组相比,RSV高剂量组E-cadherin蛋白表达水平显著升高,N-cadherin、Vimentin、Gli1、Gli2和Shh蛋白表达水平显著降低(P <0.01)。与转染空质粒+RSV组相比,Gli1过表达质粒+RSV组细胞的凋亡率降低,侵袭能力增加(P<0.001)。结论 RSV促进GBC-SD细胞凋亡、抑制GBC-SD细胞侵袭及EMT,其作用机制可能与抑制Hedgehog信号相关。

茶多酚诱导人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞凋亡的机制

目的探讨茶多酚体外诱导人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞凋亡的机制。方法茶多酚作用GBC-SD细胞48 h后,光学显微镜观察细胞形态变化;Hoechst33258/PI双染色,激光扫描共聚焦显微镜观察茶多酚诱导人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞凋亡作用;DCFH-DA为细胞内活性氧探针,激光扫描共聚焦显微镜检测茶多酚对人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞活性氧(ROS)水平的影响,分光光度法测定茶多酚对人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞内caspase-3活性的影响。结果 50、100、200μg/ml茶多酚作用GBC-SD细胞48 h后,人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞呈现典型的凋亡特征;激光扫描共聚焦显微镜下观察茶多酚作用后GBC-SD细胞ROS明显上升,细胞内caspase-3活性增强(P<0.01)。结论茶多酚能显著诱导人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞发生凋亡作用,其机制可能是ROS过量积聚、激发caspase级联反应,从而诱导细胞凋亡。

冬凌草甲素通过线粒体途径诱导人胆囊癌GBC-SD细胞凋亡

目的研究冬凌草甲素诱导人胆囊癌GBC-SD细胞的凋亡作用及其机制。方法 MTS法检测冬凌草甲素对GBC-SD细胞的生长抑制作用;瑞氏染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡率、线粒体膜电位改变、caspase-3活性变化;Western blot检测caspase-9活化情况。结果冬凌草甲素能显著抑制GBC-SD细胞增殖,呈时间剂量依赖性(P<0.05)。细胞形态学观察可见冬凌草甲素可诱导细胞发生凋亡。流式细胞仪检测结果显示28μmol/L药物处理GBC-SD细胞24h后,细胞凋亡率为51.28%±2.65%。随着药物浓度增加,GBC-SD细胞线粒体膜电位逐渐下降而caspase-3活性逐渐增强,56μmol/L组caspase-3活性是对照组的11倍。Western blot分析结果显示caspase-9酶原被激活,且活化条带随药物浓度的增加而增强。结论 冬凌草甲素可能通过细胞线粒体膜电位下降激活caspase-3并最终诱导GBC-SD细胞凋亡。

无血清培养胆囊癌GBC-SD细胞形成肿瘤细胞球的鉴定

目的:分离扩增肿瘤干细胞,并鉴定其生物学性质.方法:用无血清培养基培养人胆囊癌GBC-SD细胞得到肿瘤细胞球.将肿瘤细胞球传代扩增,并用含血清培养基培养促使其分化;将肿瘤球和普通GBC-SD细胞分别种入96孔板,MTT检测增殖能力,并将肿瘤球和普通GBC-SD细胞分别植入裸鼠皮下,观察移植瘤的形成;流式细胞术检测CD15s和CD24在肿瘤球细胞和普通GBC-SD细胞中的表达,筛选细胞表面标志物.结果:在无血清培养基中,胆囊癌细胞可以形成少量的肿瘤细胞球,并显示很强的自我更新和增殖能力,含血清环境能够诱导其分化而贴壁生长;在动物实验中,肿瘤球细胞较普通GBC-SD细胞显示更强的致瘤能力(80.00%vs10.00%,P<0.05);标志物CD15s在肿瘤球的表达较普通GBC-SD细胞明显增高(2.56%±0.38%vs10.77%±0.93%,t=18.25,P<0.05).结论:人胆囊癌细胞GBC-SD的肿瘤干细胞可以通过无血清培养环境来分离和扩增,CD15s可能为其细胞表面标志物.

二十二碳六烯酸对人胆囊癌GBC-SD细胞系生长的抑制作用

目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)对体外培养的人胆囊癌GBC-SD细胞增殖的影响。方法采用体外细胞培养的方法,在处于指数生长期的GBC-SD细胞培养剂RPMI 1640中分别添加12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml的DHA,培养24～72小时后,采用噻唑蓝法(MTT法)检测GBC-SD细胞的增殖情况,光镜下观察细胞形态变化。采用DNA琼脂糖凝胶电泳、Annexin V-FITC/PI染色荧光显微镜检测GBC-SD细胞的凋亡情况。结果经12.5μg/ml的DHA作用24～72小时后GBC-SD细胞的A值与对照组比较差别无统计学意义(P>0.05),光镜下细胞形态无明显改变.经25μg/ml、50μg/ml的DHA作用24～72小时后GBC-SD细胞的A值与对照组比较差别有统计学意义(P<0.05),光镜下见细胞皱缩、核染色质凝聚、边集。细胞经25μg/ml、50μg/ml的DHA作用24小时后,DNA琼脂糖凝胶电泳显示DNA裂解片段出现阶梯状条带,经Annexin V-FITC/PI染色荧光显微镜下观察与对照组比较见较多绿色荧光。结论DHA可以抑制人胆囊癌GBC-SD细胞系的增殖并诱导其凋亡。

选择性Cox-2抑制剂Celebrex对人胆囊癌GBC-SD细胞系生长的抑制作用

目的探讨选择性环氧合酶-2(Cox-2)抑制剂Celebrex对体外培养的人胆囊癌GBC-SD细胞系增殖的影响。方法采用MTT比色法检测Celebrex对细胞系生长的影响;TUNEL染色法观察细胞凋亡指数,并用流式细胞仪定量分析;透射电镜和荧光显微镜检测细胞凋亡。结果Celebrex抑制GBC-SD细胞系的生长呈剂量依赖性;4 0,8 0,1 2 0,1 6 0μmol/L浓度的Celebrex对GBC-SD细胞的生长抑制率分别是1 8.7 7%,2 5.3 2%,4 6.5 8%和5 2.1 9%(P<0.0 1)。流式细胞仪定量分析在4 0,8 0,1 2 0,1 6 0μmol/L浓度下的细胞凋亡率分别为(8.5 1±1.4 4)%,(1 2.4 0±0.8 7)%,(2 6.3 7±1.7 2)%和(4 3.2 1±0.3 9)%,与对照组(4.8 7±0.5 5)%比较有显著的统计学差异;各组间两两比较差异亦有显著性(均P<0.0 1)。透射电镜和荧光显微镜下能观察到胞核浓缩、碎裂以及凋亡小体的形成。结论Celebrex可以有效地抑制人胆囊癌GBC-SD细胞系的增殖并诱导其凋亡。

Cx43基因修饰对人胆囊癌GBC-SD细胞增殖和迁移能力的影响

胆囊癌恶性程度较高,其早期症状无明显特异性,发病率又呈现逐年升高的趋势[1,2]。肿瘤的增殖、迁移均存在着基因水平的调控参与,从而提示了一种新的控制肿瘤的方法[3]。Cx43是一种重要的缝隙连接蛋白,表达与多种细胞中,Cx43具有功能多样化,在细胞间传递信息和能量,调控细胞的生长、增殖分化及内环境的稳定,因此推断如果阻断肿瘤细胞中Cx43的表达能有效抑制肿瘤[4]。

紫檀芪调控微小RNA-340-5p/髓细胞白血病-1轴对胆囊癌SD细胞生物学行为的影响实验研究

目的:探究紫檀芪(PTS)调控微小RNA-340-5p(miR-340-5p)/髓细胞白血病-1(MCL-1)轴对胆囊癌SD(GBC-SD)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响。方法:体外培养人GBC-SD细胞,使用不同浓度PTS(0、5、10、20、40、80μmol/L)处理GBC-SD细胞,然后检测细胞存活率。将GBC-SD细胞分为对照组(DMEM培养基常规培养GBC-SD细胞)、PTS组(加入80μmol/L的PTS培养GBC-SD细胞)、PTS+空载质粒组(加入80μmol/L的PTS培养GBC-SD细胞,并转染空载质粒)、PTS+miR-340-5p沉默组[加入80μmol/L的PTS培养GBC-SD细胞,并转染miR-340-5p小干扰RNA(siRNA)质粒]。分别检测各组GBC-SD细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-340-5p和MCL-1 mRNA表达。蛋白印迹法检测MCL-1及增殖凋亡相关蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验检测miR-340-5p与MCL-1的靶向关系。裸鼠移植瘤实验检测PTS对裸鼠肿瘤生长及miR-340-5p/MCL-1轴的影响。结果:随着PTS浓度的升高,GBC-SD细胞存活率逐渐降低(均P<0.05)。与对照组比较,PTS组细胞存活率、集落形成数、细胞迁移率、细胞侵袭数、MCL-1 mRNA和蛋白、Ki67、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达降低,细胞凋亡率、miR-340-5p、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Cleaved caspase-3)蛋白表达升高(均P<0.05)。沉默miR-340-5p可逆转PTS对GBC-SD细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及miR-340-5p/MCL-1轴的作用效果(均P<0.05)。miR-340-5p与MCL-1存在靶向调控关系。PTS能抑制裸鼠肿瘤生长和MCL-1 mRNA和蛋白表达,促进miR-340-5p表达(均P<0.05)。结论:PTS可通过上调miR-340-5p表达下调MCL-1表达,抑制GBC-SD细胞增殖、迁移和侵袭,促进GBC-SD细胞凋亡。

去甲斑蝥素对人胆囊癌GBC-SD细胞系增殖及侵袭的影响

目的 探讨去甲斑蝥素 (NCTD)对人胆囊癌GBC SD细胞系增殖、侵袭的影响及其机制。方法 应用细胞培养技术培养GBC SD细胞 ;以MTT法检测NCTD对GBC SD细胞的杀伤抑制率 ;以Matrigel侵袭实验、过河实验和SABC法检测NCTD对GBC SD细胞的侵袭力和对PCNA、Ki 6 7、MMP2 、TIMP2 蛋白表达的影响。结果 NCTD可明显抑制GBC SD细胞的增殖和生长 ,且随浓度提高或时间延长作用增强 ,呈剂量 时间效应关系 ;IC50 为 5 6 .18μg/ml,最强抑制作用时间为第 4 8小时。Matrigel侵袭、过河实验显示 ,NCTD在 5 μg/ml时 ,即能抑制GBC SD细胞的体外侵袭和运动能力 ,随浓度提高 ,过膜细胞减少 ,过膜死亡细胞增多 ,过河时间延长 (P <0 .0 1)。免疫组化测定显示 ,NCTD(IC50 )作用 4 8h后 ,GBC SD细胞PCNA、Ki 6 7、MMP2 表达下降 ,TIMP2 表达上升 ,MMP2 /TIMP2 比值下降 (P <0 .0 5 )。结论 NCTD可抑制人胆囊癌GBC SD细胞的生长 ,低浓度下也能抑制其体外侵袭能力 ;其机制可能与直接抑制GBC SD细胞迁移运动 ,干扰GBC SD细胞增殖相关基因蛋白PCNA、Ki 6 7和细胞基质溶解相关基因蛋白MMP2 、TIMP2 的表达有关。

人胆囊癌细胞系GBC-SD p53基因突变的研究

目的:从蛋白质和分子水平研究人胆囊癌细胞系GBC-SDp53基因状况。方法:对体外培养的GBC-SD细胞,应用免疫细胞化学SP法定性了解其P53蛋白的表达情况;用PCR技术扩增GBC-SD细胞p53基因4～9外显子,对所得产物进行直接测序分析。结果:GBC-SD细胞P53蛋白过表达;PCR产物第5外显子126位密码子有TAC→AAC的碱基颠换,因而使其编码的氨基酸从酪氨酸→天冬酰胺,产生错义突变。结论:人胆囊癌细胞系GBC-SD表达突变型P53蛋白,点突变是其p53基因功能失活的主要原因。

Celecoxib对胆囊癌细胞GBC-SD增殖的抑制作用

目的 研究Celecoxib对人胆囊癌细胞GBC SD生长和凋亡的影响及其作用机制。方法 采用免疫细胞化学SABC法检测GBC SD环氧合酶 2 (Cox 2 )蛋白表达 ,采用四唑氮蓝 (MTT)比色法检测细胞增殖 ,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡 ,酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测前列腺素E2 (PGE2 )含量。结果 Celecoxib可下调GBC SD细胞Cox 2蛋白表达。Celecoxib抑制GBC SD细胞增殖作用呈时间依赖性 ,作用 2天后就有轻度抑制 ,第 3、第 4和第 5天抑制作用已相当明显 (P <0 .0 5 ,与对照组相比 ) ,并且这种增殖抑制作用能被 2 0 0 pg/mlPGE2 拮抗。Celecoxib诱导GBC SD细胞G1 S期阻滞 ,4 0 μmol/L(P <0 .0 5 )和2 0 μmol/L(P <0 .0 5 )Celecoxib组G0 G1期细胞含量比对照组 ( 0 μmol/L)明显增高 ,而S期和G2 /M期细胞含量比对照组明显降低 (P <0 .0 5 )。 4 0 μmol/L(P <0 .0 5 )和 2 0 μmol/L(P <0 .0 5 )Celecoxib处理 4 8h后GBC SD细胞凋亡率明显上升。 结论 Celecoxib通过Cox 2和PGE2 途径抑制GBC SD细胞生长和诱导凋亡。

阿司匹林联合吉西他滨对胆囊癌GBC-SD细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察应用不同剂量阿司匹林、吉西他滨处理后胆囊癌GBC-SD细胞增殖与凋亡情况,探讨阿司匹林对GBC-SD细胞吉西他滨化疗敏感性的影响及可能机制。方法 取对数生长期GBC-SD细胞,分别应用浓度为0、0.2、1.0、5.0、10.0μmol/L吉西他滨处理24、48、72 h,应用0、0.5、1.0、4.0 mmol/L阿司匹林处理24、48 h,采用CCK-8法检测细胞生长抑制率。结合前期预实验结果,采用1.0μmol/L吉西他滨、0.5 mmol/L阿司匹林进行后续实验。取对数生长期GBC-SD细胞分为阴性对照组、吉西他滨组、阿司匹林组、联合组。待细胞贴壁后,阴性对照组加入DMSO溶液1μL;阿司匹林组加入0.5 mmol/L阿司匹林1μL;吉西他滨组加入1.0μmol/L吉西他滨0.4μL;联合组先加入0.5 mmol/L阿司匹林1μL,1 h后加入1.0μmol/L吉西他滨0.4μL。药物处理48 h, 4组采用CCK-8法检测细胞生长抑制率,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Western blot法检测p-PI3K、PI3K蛋白相对表达量。结果 吉西他滨处理24、48、72 h, 0.2、1.0、5.0、10.0μmol/L浓度的细胞生长抑制率依次增高(P<0.05);阿司匹林处理24、48 h, 0.5、1.0、4.0 mmol/L浓度的细胞生长抑制率依次增高(P<0.05)。药物处理48 h,吉西他滨组、阿司匹林组、联合组细胞生长抑制率[(29.7±2.9)%、(26.9±2.5)%、(59.3±5.4)%]、细胞凋亡率[(15.3±2.1)%、(12.9±3.1)%、(36.1±8.6)%]均高于阴性对照组[0、(4.5±1.1)%](P<0.05),联合组均高于吉西他滨组和阿司匹林组(P<0.05)。药物处理48 h,吉西他滨组p-PI3K蛋白相对表达量(3.49±0.14)高于阴性对照组(2.83±0.17)和联合组(2.69±0.11)(P<0.05),阿司匹林组p-PI3K蛋白相对表达量(1.97±0.13)低于阴性对照组和联合组(P<0.05),联合组p-PI3K蛋白相对表达量与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);4组PI3K蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 吉西他滨、阿司匹林均可抑制胆囊癌GBC-SD细胞生长、促进GBC-SD细胞凋亡,二者联合具有协同效应,其机制可能与阿司匹林抑制PI3K通路相关。

转染过表达WWOX质粒的胆囊癌细胞株GBC-SD迁移、侵袭能力变化及其机制

目的观察转染过表达WW域的氧化还原酶(WWOX)质粒对胆囊癌细胞株GBC-SD迁移、侵袭能力的变化,并探讨其机制。方法胆囊癌细胞株GBC-SD分为实验组、NEG组、空白对照组,实验组转染WWOX过表达质粒,NEG组转染空载质粒,空白对照组不做处理。采用细胞划痕实验测算各组细胞迁移率,以细胞迁移率表示细胞迁移能力。采用Transwell实验测算各组穿膜细胞数,以穿膜细胞数表示细胞侵袭能力。采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中WWOX、P73、E-cadherin、Vimentin mRNA,采用Western blotting法检测各组细胞中WWOX、P73、Ecadherin、Vimentin蛋白。结果实验组、NEG组、空白对照组细胞迁移率分别为50.42%±3.47%、74.81%±1.04%、77.82%±2.71%,其中实验组细胞迁移率与NEG组、空白对照组相比,P均<0.05。实验组、NEG组、空白对照组穿膜细胞数分别为(77.33±8.65)、(173.33±6.18)、(187.33±6.94)个,其中实验组穿膜细胞数与NEG组、空白对照组相比,P均<0.05。实验组WWOX、P73、E-cadherin mRNA和蛋白相对表达量均高于NEG组和空白对照组(P均<0.05),实验组Vimentin mRNA和蛋白相对表达量均低于NEG组和空白对照组(P均<0.05)。结论转染过表达WWOX质粒的GBC-SD细胞株迁移、侵袭能力降低,其机制可能与P73表达上调进而抑制GBC-SD细胞的上皮-间充质转化过程有关。

丙酮酸激酶同工酶M2在胆囊癌组织中的表达及其对胆囊癌细胞生物学活性的影响

目的:探讨丙酮酸激酶同工酶M2(PKM2)在胆囊癌组织中的表达及其对胆囊癌细胞生物学活性的影响。方法:利用免疫组化法检测胆囊癌和癌旁正常组织中PKM2蛋白的表达。采用siRNA转染试剂将PKM2 siRNA和阴性对照SiRNA转染入胆囊癌GBC-SD细胞和NOZ细胞中,使用细胞免疫荧光和Western blot法检测两种胆囊癌细胞中PKM2蛋白的表达,应用MTT和Transwell实验检测细胞增殖、侵袭能力,使用葡萄糖、乳酸和ATP检测试剂盒检测细胞糖代谢能力。结果:PKM2蛋白在胆囊癌组织中的表达水平高于癌旁正常组织(P <0. 001)。PKM2蛋白主要分布于GBC-SD和NOZ细胞的细胞质区域。转染PKM2 siRNA后,胆囊癌GBC-SD和NOZ细胞中PKM2的表达水平降低,细胞增殖、侵袭能力均降低(P <0. 05),同时葡萄糖消耗量、细胞外乳酸生成量和ATP消耗量均明显减少(P <0. 05)。结论:PKM2在胆囊癌组织和细胞中高表达,其与胆囊癌细胞的增殖、侵袭能力关系密切,有望成为一个新的治疗胆囊癌的靶点。

共干扰Hpa、EP-CAM对人胆囊癌细胞株裸鼠模型的实验研究

目的:研究miRNA转染乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)和上皮细胞黏附分子(epithelial cell adhesion molecule,EP-CAM)对胆囊癌裸鼠移植瘤的体内抑瘤作用。方法:通过脂质体转染法将含Hpa、EP-CAM的真核表达质粒分别及共同转染至人胆囊癌细胞株GBC-SD,MTT法检测体外细胞增殖情况,筛选出干扰稳定表达细胞株后,采用裸鼠腋外侧皮下注射方法进行裸鼠体内成瘤实验,连续40 d观察裸鼠体表胆囊癌移植瘤生长情况。结果:单独及共同干扰组细胞生长受到明显抑制,而共同干扰组作用尤为突出。裸鼠体内实验提示Hpa miRNA组、EP-CAM miRNA组、共干扰组抑瘤率分别为69.06%、64.94%、85.67%。Hpa、EP-CAM基因蛋白在干扰组表达均明显低于正常胆囊癌细胞接种组(P<0.01)。结论:采用RNAi法沉默Hpa和EP-CAM在胆囊癌细胞中的表达可有效抑制其在体内外的生长,并且以共同干扰效果尤为突出。

槲皮素逆转人胆囊癌细胞耐药性的作用机制探讨

目的 探讨槲皮素对先天性多药耐药胆囊癌细胞株GBC-SD多药耐药性（MDR）的逆转情况。方法 分别以10个浓度阿霉素（3.33～33.28μg/ml）及其与不同浓度槲皮素（0.1、0.05、0.025μmol/L）混合液培养GBC-SD,观察细胞生存率及半数抑癌浓度值（IC50）。结果 单用阿霉素培养时IC50为16.65μg/ml,细胞生存率分别为80.58%～26.18%。加用槲皮素培养后IC50分别为6.66、9.99和13.32μg/ml,两两比较,P均〈0.05,且均显著低于单用阿霉素者（P均〈0.05）;细胞生存率均显著低于单用阿霉素者,且逆转能力呈浓度依赖性。结论 槲皮素可逆转GBC-SD的MDR。

miR-7-5p通过靶向抑制成纤维生长因子受体4影响胆囊癌细胞的增殖和迁移

目的:探讨miR-7-5p对胆囊癌细胞增殖和迁移的影响及作用机制。方法:选取胆囊癌细胞GBC-SD,检测miR-7-5p和成纤维生长因子受体4(FGFR4)表达情况;通过TargetScan数据库检索调控FGFR4的miRNA,并用双重荧光素酶基因检测系统检测FGFR4与miR-7-5p结合情况;通过慢病毒将miR-7-5p转染GBC-SD细胞,检测FGFR4、miR-7-5p mRNA和FGFR4蛋白表达,MTT检测细胞活性,Transwell检测细胞侵袭。结果:在GBC-SD细胞中miR-7-5p低表达且FGFR4高表达(P<0.05);TargetScan预测FGFR4特异结合miR-7-5p,并在双重荧光素酶基因检测系统得到验证;GBCSD细胞慢病毒转染miR-7-5p后,FGFR4 mRNA和蛋白表达水平下调,细胞增殖率下降,穿膜细胞数减少,差异有统计学意义(P<0.05);沉默miR-7-5p后,FGFR4 mRNA和蛋白表达水平上升,细胞增殖率升高,穿膜细胞数增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-7-5p通过靶向抑制FGFR4而抑制胆囊癌细胞的增殖和迁移。

VEGF反义寡核苷酸对胆囊癌细胞VEGF，Flt-1及KDR mRNA表达和VEGF蛋白分泌的影响

目的:体外研究Oligofectamine介导的VEGF反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)转染对人胆囊癌GBC-SD细胞VEGF,Flt-1及KDR mRNA表达和VEGF蛋白分泌的影响.方法:运用Oligofectamine介导的VEGF反义寡核苷酸(ASODN)和错义寡核苷酸(Scrambled Oligodeoxynucleotide,SODN)转染人胆囊癌细胞GBC-SD,半定量RT-PCR检测转染后各组细胞不同时间的VEGF,Flt-1及KDR mRNA表达变化,ELISA测定转染后各组细胞培养上清液VEGF蛋白浓度.结果:半定量RT-PCR发现ASODN组及ASODN+Oligofectamine组24,48,72,96 h VEGF(ASODN组VEGF165:0.686±0.033,0.569±0.049,0.489±0.036,0.716±0.017;ASODN组VEGF121:0.462±0.046,0.338±0.034,0.219±0.022,0.471±0.038;ASODN+Oligofectamine组VEGF165:0.601±0.021,0.465±0.042,0.416±0.023,0.662±0.035:ASODN+Oligofectamine组VEGF121:0.408±0.014,0.286±0.019,0.157±0.021,0.418±0.037)、Flt-1(ASODN组:0.694±0.019,0.562±0.045,0.435±0.042,0.724±0.026;ASODN+Oligofectamine组:0.609±0.018,0.442±0.049,0.314±0.015,0.614±0.029)及KDR(ASODN组:0.667±0.063,0.490±0.033,0.301±0.029,0.665±0.068;ASODN+Oligofectamine组:0.523±0.048,0.432±0.027,0.218±0.036,0.524±0.037) mRNA的表达显著低于Control组(P<0.05),且ASODN+Oligofectamine的抑制作用比ASODN强(P>0.05).ELISA测定结果显示ASODN组(281.26±18.62,526.44±34.95,791.13±20.99)及ASODN+Oligofectamine组(250.7±14.57,506.09±19.14,711.79±19.91)24,48,72 h VEGF蛋白的分泌浓度均显著低于Control组(394.23±16.26,711.6±26.21,933.85±28.65)(P<0.05),且ASODN+Oligofectamine的抑制作用比ASODN强(P>0.05).结论:Oligofectamine介导的VEGF ASODN能抑制GBC-SD细胞VEGF,Flt-1及KDR mRNA表达和VEGF蛋白分泌.

多西紫杉醇对人胆囊癌细胞的体外抑制作用

目的初步探索多西紫杉醇对人胆囊癌细胞的体外抑制作用。方法用不同浓度(1、2、4、8、16、32、64μg/mL)的多西紫杉醇处理人胆囊癌GBC-SD细胞24、48、72h,采用MTT方法检测多西紫杉醇对GBC-SD细胞增殖的影响。结果多西紫杉醇对胆囊癌细胞有明显的生长抑制作用,并且在一定范围内存在着剂量依赖关系和时间依赖关系。结论多西紫杉醇能够有效抑制胆囊癌细胞的生长。在对胆囊癌的化疗过程中,多西紫杉醇有着巨大的潜力。

阿司匹林通过抑制STAT3磷酸化下调MCL-1和VEGF mRNA和蛋白表达促进胆囊癌细胞凋亡、抑制增殖

目的探讨阿司匹林对人胆囊癌细胞株GBC-SD细胞凋亡及增殖的影响及其潜在机制。方法采用MTT法检测不同浓度梯度及作用时间下阿司匹林对GBC-SD细胞增殖的影响,流式细胞术检测阿司匹林对细胞凋亡的影响;Real-time PCR检测GBC-SD细胞中信号转导和转录激活因子3(STAT3)、髓细胞白血病因子-1(MCL-1)、血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA表达水平,Western blotting检测STAT3、磷酸化信号转导与转录激活因子3(pSTAT3)、MCL-1、VEGF的蛋白表达情况。结果阿司匹林对GBC-SD细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖及时间依赖,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。阿司匹林可促进GBC-SD细胞凋亡。阿司匹林可下调MCL-1和VEGF的mRNA表达水平,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),但对STAT3 mRNA表达水平无明显影响(P>0.05)。阿司匹林可下调pSTAT3、MCL-1、VEGF的蛋白表达水平(P<0.05),但对STAT3蛋白表达水平无明显影响(P>0.05);使用STAT3激动剂后,STAT3、pSTAT3、MCL-1、VEGF的蛋白表达水平高于未使用激动剂组(P<0.05),在激动剂组加入阿司匹林后,pSTAT3、MCL-1、VEGF的蛋白表达水平下调(P<0.05),但高于无激动剂组(P<0.05)。结论在GBC-SD细胞中,阿司匹林通过抑制STAT3磷酸化下调MCL-1、VEGF的mRNA及蛋白表达水平,从而促进胆囊癌细胞的凋亡,抑制增殖。