恶性疟原虫GBP130基因5′近端侧翼序列调控功能的研究(英文)

目的 对GBP130的 5′近端侧翼序列进行分析 ,发现可能的强度和期特异性调控元件。 方法 构建含有不同长度GBP130启动子的质粒载体。用pGBPCATΔ 2、pGBPΔ2 /4 0 0和 pGBPΔ2 /80 0分别转染疟原虫 ,在转染后 48h收集虫体制备细胞抽提物 ,检测报告分子CAT活性 ,分析近端侧翼序列不同区域的强度调控功能。另将 pGBPΔ2 /4 0 0和pGBPΔ2 /80 0分别同时转染疟原虫 ,分别于转染后 5h、15h和 46h收集虫体 ,制备细胞抽提物 ,检测CAT活性 ,分析近端侧翼序列不同区域的期特异性调控功能。 结果 强度分析中 ,当从转录起始点下游删除较小的片段 ( pGBPΔ2 /80 0 ) ,CAT表达水平与pGBPCATΔ 2中CAT水平无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,当删除近端较大片段 ( pGBPΔ2 /4 0 0 )时 ,CAT表达水平明显下降 (P <0 .0 5 )。同时 pGBPΔ2 /4 0 0的转录活性与对照组也有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;期特异性分析 ,pGBPΔ2 /4 0 0与pGBPΔ2 /80 0相比 ,在 5h时前者转录活性高于后者 ,但在 15h和 46h时 ,后者转录活性高于前者 ,提示 2种质粒在疟原虫不同生活阶段具有期特异性调控。 结论 推测不同GBP130启动子活性强度的差异是因为 5′UTR长度的不同 ,较长的UTR可促进基因的转录表达 ,可能GBP130基因近端侧翼序列中 2个同聚

恶性疟原虫GBP130基因5′侧翼序列近端片段调控功能的初步研究

为分析血型糖蛋白结合蛋白１３０（ＧＢＰ１３０）基因５′侧翼序列近端片段的调控功能，以质粒ｐＧＢＰＣＡＴ△２为模板应用ＰＣＲ将５′侧翼序列近端片段删除，构建该片段缺失的质粒载体ｐＧＢＰ△２／６１５，将 ｐＧＢＰＣＡＴ△２和 ｐＧＢＰ△２／６１５分别转染Ｐ．ｆ环状体，比较两者中报告基因 ＣＡＴ的表达水平，从而推知该片段对基因表达强度的影响．结果表明，ｐＧＢＰ△２／６１５转染的疟原虫表达报告基因 ＣＡＴ的水平下降，与ｐＧＢＰＣＡＴ△２转染的疟原虫相比有显著性差异（Ｐ＜０．０５）．说明该片段在ＧＢＰ１３０基因的表达调控中具有非常重要的作用。