真核生物启动子TATA-box·GC-box和CAAT-box的分析

下载了已经通过试验证实的2541条真核生物启动子序列，运用生物信息学方法分析了TAT—box、GC—box和CAAT—box的数量及其在启动子中的分布情况。结果表明，有23．85％真核生物启动子序列中至少有1个TAT—box，且TATA—box主要分布在转录起始位点前24～36bp的区域内；有47．30％真核生物启动子序列中至少有1个GC—box，且GC—box在转录起始位点前23～128bp的区域内分布比较集中；有42．35％真核生物启动子序列中至少有1个CAAT—box，且CAAT—box在转录起始位点前51～159bp的区域内分布比较集中。这说明TAT-box在真核生物启动子中的位置比较固定，对基因转录的正确起始可能起着重要的作用；而GC—box和CAAT-box分布区域较广，数量也明显多于TAT—box。

GC盒不是人胰岛素基因启动子中关键顺式作用元件

目的鉴定人胰岛素基因启动子中的GC盒(-348￣-338)是否是启动子中的关键顺式作用元件。方法用PCR克隆人胰岛素基因启动子,构建由人胰岛素基因启动子驱动的分泌型碱性磷酸酶(SEAP)报告质粒,并对报告质粒中人胰岛素基因启动子中的GC盒进行删除和突变。将报告质粒转染到!细胞系"TC3中,测定细胞培养液上清中SEAP的活性强度,进而判定GC盒与人胰岛素基因启动子转录活性的关系。结果删除和突变人胰岛素启动子中的GC盒不能显著改变胰岛素基因启动子在#细胞中的转录活性。结论人胰岛素基因启动子中GC盒不是一个关键顺式作用元件。

不同储存方式下烟叶致香成分的GC/MS研究

以箱储和传统柜储的烟叶为材料,采用同时蒸馏萃取法提取其中的致香成分,并用气相色谱/质谱法(GC/MS)对其进行分析,共得到76种致香成分,结果表明:箱储样品中有67种的含量高于柜储样品,其中,酯类物质的含量高10.1%,酸类物质的含量高28.4%,酮类物质的含量高9.1%,醛类物质的含量高12.5%,因此,箱储更有利于烟叶中重要致香成分的保留。同时对箱储时间进行了优化,确定4h为最优箱储时间。

太白贝母挥发油提取的工艺优化及其成分分析

为了明确太白贝母中挥发油的主要成分,该文以太白贝母挥发油得率为考察指标,以料液比、提取时间、提取温度为考察因素,采用单因素和Box-Behnken响应面设计实验,优化太白贝母挥发油最佳提取工艺;通过GC-MS结合NIST20.L标准谱库检索并对其化学成分进行鉴定,同时采用峰面积归一化法测定各成分的相对百分含量。结果表明,在料液比1∶12(g∶mL)、提取时间52 min、提取温度48℃的条件下,太白贝母挥发油得率可达0.365%。基于GC-MS技术共鉴定出十六酸、十八碳二烯酸、肉豆蔻酸等41个化合物,主要包括酸类(47.94%)、醇类(9.59%)、酯类(7.26%)。相对百分含量较高的有十六酸(11.17%)、十八碳二烯酸(8.64%)、顺-顺-9,12-十八碳二烯醇(5.68%)、十五烷酸(4.57%)等。优化后的提取工艺简便、快捷、稳定,可用于太白贝母中挥发油类成分的提取,该研究为太白贝母资源的综合开发利用提供了一定的理论依据。

Sp1和Sp3介导的转录调控

基本转录因子Sp1和Sp3对转录调控区GC盒有很强的亲和力,参与几乎所有细胞功能,包括细胞增殖、凋亡、分化和新生物的转化.但在同一细胞中Sp1和Sp3对不同基因的作用并不相同,二者对基因特异性的转录调控是Sp1和Sp3研究领域的重要问题.近年来发现,Sp1和Sp3自身表达水平、结合的靶序列、磷酸化、糖基化等翻译后修饰,其他蛋白质的结合以及染色质结构与修饰等方面均可影响Sp1和Sp3的转录活性.本文从Sp1和Sp3蛋白参与转录调节的机制以及影响其基因特异性转录活性的诸方面因素这两大侧面,介绍了近年来的最新进展.

用人工神经网络方法确定真核基因启动子

本文运用神经网络方法，并结合分子生物学的有关理论与实验统计事实，对真核基因启动子区域进行了识别．文中选择了人类、牛、猪、猫、山羊、兔、绵羊、大鼠、小鼠、小马、仓鼠、鸡、鸭、大豆等共13种真核生物360个基因组，作为研究对象．学习组选择了300个基因组，预测组选择了60基因组．结果表明，将神经网络模型与基因理论相结合，能够运用计算方法，从大量的可能启动子组合中排列出唯一的启动子区域．

杜仲籽油混合脂肪酸制备工艺优化及脂肪酸组成分析

以杜仲籽油为原料,在常压下皂化水解并用正己烷萃取制备杜仲籽油混合脂肪酸。在单因素超碱量、KOH-乙醇溶液/油的比例、皂化温度、皂化时间和酸化pH研究的基础上,选取超碱量、皂化温度、皂化时间和酸化pH四个因素,应用响应面设计中的Box-Behnken设计对皂化工艺进行优化并得到回归模型,通过气质联用仪分析杜仲籽油脂肪酸的组成。结果表明,制备杜仲籽油混合脂肪酸的优化工艺条件为:超量碱52%,皂化温度77℃,皂化时间82min,酸化pH2.7,在此优化条件下,测得混合脂肪酸的酸值为159.19mg KOH/g。气质联用仪分析结果显示杜仲籽油混合脂肪酸中α-亚麻酸的相对含量可达60.14%,可以作为进一步分离提取杜仲籽油α-亚麻酸的原料。

响应面法优化固相微萃取-气质联用法检测鸭肉中挥发性风味物质

为优化鸭肉中挥发性风味物质的萃取条件,在单因素试验基础上,根据Box-Behnken试验设计原理,以鸭肉挥发性风味物质的色谱图总峰面积为响应值进行响应面分析。结果表明,最佳萃取条件为鸭肉萃取量为2.4g、萃取时间42min、萃取温度49℃。在此条件下检测到鸭肉中含有烯烃类、醛类、酮类、含氮含硫含氧类及杂环化合物等挥发性风味物质27种。

静息细胞降解叶黄素生产香味物质的条件优化

在单因素试验基础上,应用响应面设计对霍氏肠杆菌(Enterobacter hormaechei)A20的静息细胞降解叶黄素生产香味物质进行条件优化。确定最佳转化条件为:培养时间120 min,温度31.14℃,pH值为4.98,细胞浓度为17.64%,底物质量浓度为70 mg/L,此时叶黄素降解率为71.37%,与软件预测值71.54%相吻合,表明优化方案达到了预期效果,且具有良好的稳定性。对静息细胞降解叶黄素的发酵液中的主要成分进行气相色谱-质谱联用(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)分析,得到其主要产物为8-甲基-α-紫罗兰酮和3-氧化-α-紫罗兰酮。

一次性塑料餐盒中塑化剂含量测定及迁移研究

外卖食品在与塑料餐盒接触的过程中,餐盒中的塑化剂会随食品环境改变而迁移到食品中,从而进入人体,对人体健康造成威胁。实验选取一次性塑料餐盒为研究目标,采用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)检测一次性塑料餐盒中10种常见塑化剂的含量,并选择适当的模拟液,分别模拟其在不同食品环境中邻苯二甲酸酯类的迁移规律。在两种餐盒中均检出了DIBP、DBP和DEHP,在不同模拟液迁移实验中,这三种塑化剂均有迁出,且受模拟液种类影响显著。

HMGB1调控TLR4/MyD88/NF-κB通路对胃癌侵袭及转移的影响

目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)是否可通过激活TLR4/MyD88/NF-κB信号通路促进胃癌(GC)侵袭及转移。方法选取人胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901及人胃上皮细胞株GES-1,采用划痕、Transwell实验检测细胞的侵袭及转移,采用Real-time PCR及Western blot检测细胞中HMGB1、TLR4、Myd88、NF-κB p65、p-NF-κB p65的mRNA及蛋白表达水平;选取MGC-803细胞,采用HMGB1 siRNA进行转染,检测细胞恶性行为及TLR4/MyD88/NF-κB通路分子的表达变化。结果与GES-1细胞比较,MGC-803及SGC-7901细胞的迁移及侵袭能力更强(P<0.01),HMGB1、TLR4、Myd88、NF-κB p65 mRNA及蛋白表达水平均明显上调(P<0.01),p-NF-κB p65蛋白表达水平也明显上调(P<0.01);与SGC-7901细胞比较,MGC-803细胞侵袭能力明显增强(P<0.01),HMGB1、TLR4、Myd88、NF-κB p65 mRNA及蛋白的表达水平均明显上调(P<0.01),p-NF-κB p65蛋白表达水平也明显上调(P<0.01);与HMGB1 siRNA NC组比较,HMGB1 siRNA组细胞侵袭及迁移能力均明显下降(P<0.01),TLR 4、Myd 88 mRNA的表达水平均明显下调(P<0.01),p-NF-κB p65蛋白表达水平也明显下调(P<0.01)。结论抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的激活及干扰HMGB1的表达,可减轻胃癌细胞株侵袭及转移。

α突触核蛋白作用核苷酸序列的体外筛选研究

目的体外筛选α突触核蛋白可能作用的核苷酸序列。方法根据碱基组成特征合成一系列的核苷酸序列,与α突触核蛋白-绿色荧光蛋白(α-synuclein-green fluorescent protein,α-syn-GFP)融合蛋白混合,采用圆二色谱分析色谱峰的变化情况。结果α突触核蛋白-绿色荧光蛋白融合蛋白混合入GC-box样核苷酸序列后导致色谱峰发生较大变化。结论α突触核蛋白转位进入细胞核后,可能通过作用于GC box样核苷酸序列,参与细胞核内的基因表达调控,从而发挥其生理或病理作用。

桑蚕蛹多糖超声提取优化及水溶性多糖组分分析

目的优化桑蚕蛹多糖的超声提取工艺,并采用气质联用(GC-MS)及红外光谱(IR)法对水溶性多糖(PSP1)进行组分分析。方法以多糖得率为指标,采用Box-Behnken设计和响应面法优化超声提取工艺。多糖透析后,树脂柱层析得到水溶性多糖(PSP1),GC-MS和IR法分析其组分。结果最佳条件为超声功率760 W,液料比11∶1,提取时间10 min,得率15.28%。PSP1的主要组分为葡萄糖、山梨糖、半乳糖、甘露糖,摩尔比为95.94∶1.59∶1.59∶0.88,而且具有典型的多糖特征吸收峰,并含有吡喃糖。结论该方法简便快速,多糖得率较高。

微波消解-固相萃取-气相色谱-质谱联用法测定泡沫快餐盒中的双酚A

目的建立一种泡沫餐盒中双酚A的微波消解-固相萃取-气相色谱-质谱联用分析法。方法取0.2 g泡沫餐盒,置入50 ml微波消解罐中,加入20 ml纯净水,进行微波消解,消解液经固相萃取小柱(C18,500 mg,6 ml)富集净化,氮气50℃吹干后加入900μl甲苯和100μl衍生化试剂BSTFA-TMCS(99∶1,V/V),于恒温干燥箱中85℃,衍生化反应30 min,经0.45μm滤膜过滤后上机。结果本方法的线性范围为0.305～3.05 mg/L,r2=0.991;方法的加标回收率范围为90%～101%,RSD为2.6%～5.0%。当取样量为0.2 g时,双酚A的最低检出限为15μg/kg。结论该方法前处理过程简便,定性、定量准确,完全能用于泡沫餐盒的双酚A检测。

北豆根脂肪油提取工艺优化及其抗氧化活性研究

目的采用Box-Behnken响应面法优化北豆根脂肪油的提取工艺,分析其成分组成,并研究北豆根脂肪油的体外抗氧化活性。方法以北豆根脂肪油提取率为指标,在单因素试验基础上,采用Box-Behnken响应面法考察提取温度、提取时间、料液比对提取工艺的影响;采用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)分析脂肪油的组成;运用清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基试验评价北豆根脂肪油的体外抗氧化活性。结果经响应面优化,确定最佳提取工艺为提取温度90℃,回流提取3次,每次2.3 h,料液比为1∶21。在上述条件下,提取率为1.820%;采用GC-MS从北豆根脂肪油中鉴定出32个成分;北豆根脂肪油总抗氧化活性随着浓度的增加而逐渐升高,在浓度达到0.833 mg·mL^(-1)后对DPPH自由基清除率的增幅变缓,当浓度为1.333 mg·mL^(-1)时,清除率为70.1%。结论优化的工艺方便、稳定、可行,可为后续研究提供参考,北豆根脂肪油中含有多种重要脂肪油成分,并具有一定的体外抗氧化能力。

生物酶辅助提取对薄荷挥发油成分及其体外抗氧化能力的影响

目的:优化生物酶辅助提取薄荷挥发油工艺,分析酶解前后薄荷挥发油化学成分及其体外抗氧化能力的变化。方法:在单因素实验的基础上,以纤维素酶添加量、酶解时间、酶解温度为考察因素,以挥发油收率为响应值,采用Box-Bhenken响应面法优选生物酶辅助提取薄荷挥发油最佳条件,并对最佳工艺条件下提取的薄荷挥发油成分进行气相色谱-质谱(GC-MS)分析,利用面积归一化法计算各成分相对含量,同时以DPPH和OH·自由基的清除率为指标比较加酶前后薄荷挥发油的抗氧化能力。结果:生物酶辅助提取薄荷挥发油最佳提取条件为:纤维素酶添加量3.18%、酶解时间2 h、酶解温度44℃,薄荷挥发油收率达0.74%,在同等药材的情况下加酶比不加酶挥发油提取率提高了7.25%;通过GC-MS分析共鉴定出21种成分,发现加酶提取后,薄荷酮、α-松油醇、乙酸薄荷酯、丁香酚、T-依兰油醇相对含量分别较不加酶提高了0.63%,0.14%,0.35%,0.19%,0.36%;2种方法所得薄荷挥发油均表现出良好的DPPH和OH·自由基清除能力,且抗氧化效果与挥发油浓度呈量效关系。结论:生物酶辅助提取工艺稳定可行,该工艺可以提高薄荷挥发油收率,最佳工艺条件下所得薄荷挥发油具有较好的体外抗氧化活性。