siRNA沉默GC结合因子2表达对BEL-7404细胞增殖和凋亡的影响

目的 GC结合因子2(GC binding factor 2,GCF2)是一种转录抑制因子,能抑制富含GC序列启动子的基因转录。GCF2在BEL-7404等肝癌细胞株的高表达可能与肝癌的发生及发展有关。文中通过靶向GCF2的GCF2-siRNA序列沉默GCF2表达,观察GCF2对人肝癌细胞株BEL-7404增殖及凋亡的影响。方法将实验细胞分为GCF2 siRNA转染组(转染GCF2-siRNA)、阴性对照组(转染无关序列)、脂质体对照组(只加Lipofectamine 2000)、常规培养对照组(不加转染试剂和siRNA序列)共4组。使用Lipofectamine 2000将GCF2-siRNA转染BEL-7404细胞,Western blot检测转染后48 h GCF2蛋白表达水平,用细胞计数试剂盒(cell counting kit,CCK)-8和AnnexinV/PI-FITC双染流式细胞术检测细胞增殖和凋亡变化。结果 GCF2-siRNA可有效下调GCF2表达、抑制BEL-7404细胞的增殖,细胞凋亡率增加。与各对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 GCF2可促进肝癌细胞株BEL-7404的增殖,抑制该细胞凋亡,提示GCF2通过对肝癌细胞增殖和凋亡的影响参与肝癌的发生、发展。

肿瘤相关抗原GC结合因子2 shRNA表达载体的构建及鉴定

GC结合因子2（GC-binding factor 2, GCF2）是一种转录抑制因子, 因为能与表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR）基因启动子上富含GC的序列结合而得名。研究表明, GCF2可通过多种途径参与细胞增殖、 细胞周期调控及细胞凋亡等进程。GCF2广泛地高表达于肺癌A549细胞、 胃腺瘤AGS细胞及白血病K562细胞等人类多种肿瘤细胞, 并且发现GCF2在这些细胞中的高表达与肿瘤细胞增殖、 侵袭及肿瘤耐药等密切相关。RNA干扰（RNA interence, RNAi）可特异性地阻断靶基因表达, 是研究基因功能的有效技术。我们的前期研究表明, GCF2是一种肿瘤相关抗原, 在HepG2等肝癌细胞株中高表达[8]。本实验设计针对GCF2 mRNA的干扰序列, 并且与真核表达载体pGPU6/GFP/Neo重组而构建重组质粒pGPU6/GFP/Neo-GCF2, 经酶切和测序鉴定后, 将该重组质粒转染肝癌细胞株HepG2, 以实现对GCF2表达的抑制, 为进一步研究GCF2对肝癌细胞生物学行为的影响及可能的作用机制奠定基础。

RNA干扰GCF2基因沉默对人肝癌BEL-7404细胞周期的影响

目的 GC结合因子2(GCF2)是一种转录抑制因子,通过特异性结合富含GC序列的基因启动子而抑制该基因转录。文中通过靶向沉默GCF2基因表达观察GCF2对人肝癌细胞BEL-7404细胞周期的影响。方法将细胞分为空白对照组、阴性对照组及GCF2-siRNA组。空白对照组不转染任何序列,阴性对照组转染阴性对照序列,GCF2-siRNA组转染靶向GCF2基因的GCF2-siRNA序列以沉默GCF2在肝癌BEL-7404细胞中的表达。CCK-8法和流式细胞术分别检测沉默GCF2对细胞增殖和周期的影响,Western blot检测细胞周期蛋白cyclin D1及cyclin E、细胞周期蛋白依赖性激酶Cdk2及Cdk4蛋白表达。结果 GCF2下调后,GCF2-siRNA组细胞增殖在转染24、48、72和96 h受到不同程度抑制,抑制率分别为27.3%,43.6%,33.5%和29.7%,以转染48 h抑制率最高。与GCF2-siRNA组G1期百分比[(61.50±0.47)%]比较,空白对照组、阴性对照组[(45.50±0.75)%、(47.30±2.44)%]均下降(P<0.05);与GCF2-siRNA组S期百分比[(21.30±1.23)%]比较,空白对照组、阴性对照组[(37.00±1.80)%、(34.50±1.86)%]均升高(P<0.05)。转染48 h后,GCF2-siRNA组cyclin E和Cdk2蛋白相对表达量明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。结论下调GCF2表达引起BEL-7404细胞周期阻滞,提示GCF2对肝癌细胞周期影响可能是其参与肝癌发生发展的重要途径。