棕榈酸诱导小鼠精原细胞株GC-1细胞凋亡的作用机制

目的从内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)角度探讨棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导小鼠精原细胞株GC-1细胞凋亡的机制。方法将GC-1细胞分为正常组(Control)、溶剂对照组(Vehicle)和不同浓度PA处理组(100、150、200、250μmol·L^(-1))。MTT法检测细胞增殖活力,流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况;Caspaes-3活性检测试剂盒检测凋亡蛋白caspase-3的活性;Western blot检测凋亡相关蛋白和ERS相关蛋白表达水平。结果PA处理GC-1细胞48 h后,细胞增殖活力显著下降,细胞凋亡率上升,凋亡蛋白caspase-3活性增高,结果均具有浓度依赖性;PA可明显增加GC-1细胞促凋亡蛋白cleaved-caspase-3的表达水平,明显降低抑凋亡蛋白BCL2的表达水平,同时上调ERS相关蛋白GRP78、CHOP、p-IRE1、XBP1的表达水平,但对p-PERK、PERK、p-eIF2α、eIF2α、ATF4以及ATF6的表达无显著影响。结论PA诱导小鼠GC-1细胞凋亡可能与激活IRE1通路有关。

缺氧条件下GC-1细胞凋亡的作用机制研究

以小鼠精原细胞系GC-1细胞为研究对象,探讨缺氧条件下GC-1细胞凋亡潜在的分子机制。首先,采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测不同缺氧时间处理下的细胞活力,以确定细胞缺氧损伤的时间;然后,通过化学荧光法检测GC-1细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量,采用JC-1法检测线粒体的膜电位,采用比色法检测ATP的含量,采用线粒体荧光探针法检测线粒体的数量与分布,并采用透射电镜观察细胞的超微结构;最后,利用实时荧光定量PCR检测线粒体信号通路相关基因胱天蛋白酶(caspase)-3、caspase-9、细胞色素c(cytochrome c,Cyt-c)、Bax和Bcl-2的mRNA表达水平。结果显示,缺氧36 h后,细胞活力为(60.36±5.40)%,符合后续实验需求;在缺氧条件下,GC-1细胞中的ROS含量显著增加,ATP含量显著下降,线粒体膜电位下降、数量减少,同时细胞中促凋亡相关基因的表达水平上调,抗凋亡因子Bcl-2的基因表达水平下调。实验结果初步表明,缺氧可导致GC-1细胞线粒体功能障碍,ROS/线粒体信号通路是缺氧导致GC-1细胞凋亡可能的分子机制。

LncRNA H19/miR-203a/PTEN轴在小鼠GC-1细胞缺血再灌注损伤中的作用及影响机制

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)H19在小鼠体外GC-1细胞的表达,以及其通过调控微小RNA(miRNA)-203a/磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)轴对GC-1细胞凋亡和增殖的影响。方法:建立GC-1细胞体外缺氧复氧模型,qRT-PCR检测GC-1细胞不同复氧损伤时间点lncRNA H19的表达变化;MTT法、流式细胞术测定沉默lncRNA H19对GC-1细胞增殖和凋亡的影响;Western印迹检测沉默lncRNA H19对GC-1细胞凋亡相关蛋白Bax和caspase-3表达的影响;qRT-PCR和Western印迹分别测定沉默lncRNA H19后GC-1细胞miR-203a和PTEN的表达变化。结果:随着复氧损伤时间的增加,GC-1细胞lncRNA H19表达明显增加,在缺氧3 h/复氧12 h达到峰值,与此同时miR-203a表达明显降低。此外,沉默lncRNA H19增强了GC-1细胞的增殖能力并降低了其凋亡水平,增加了miR-203a表达水平并降低了PTEN表达水平,结果显著。结论:LncRNA H19在体外GC-1细胞中高表达,其可能通过调控miR-203a/PTEN信号途径改变GC-1细胞增殖及凋亡的能力。

三种GC-1细胞DNA损伤模型的建立及比较分析

目的建立3种小鼠睾丸精原细胞株GC-1细胞DNA损伤模型并分析其异同。方法分别采用UVB辐照、D-半乳糖(D-Galactose,D-Gal)、博来霉素(bleomycin,BLM)刺激GC-1细胞不同时间,Western blot和免疫荧光法检测γ-H2AX表达及定位;免疫荧光法检测8-OHdG表达及定位;Western blot法检测p-p53和p21表达水平。结果UVB辐照和D-Gal处理后,γ-H2AX蛋白表达分别在4 h和6 h达高峰BLM刺激后,γ-H2AX蛋白表达逐渐上升且BLM浓度越高,其达到高峰时间越短。UVB辐照和BLM刺激后,胞核胞质内均有8-OHdG表达,且时间越长,核内表达越多;D-Gal处理后,8-OHdG主要表达在胞质,且在6 h达高峰。UVB辐照后,p-p53和p21蛋白表达不断上升,p21表达较滞后;D-Gal处理后,p-p53和p21表达分别在6 h和12 h达高峰;BLM刺激后,p-p53和p21蛋白表达呈同步上升趋势,BLM浓度越高,其达高峰时间越短。结论成功建立3种GC-1细胞DNA损伤模型,且D-Gal处理GC-1细胞DNA损伤较轻,而UVB辐照和BLM刺激DNA损伤较重。

沉默SEMG1蛋白对精原细胞GC-1细胞周期及凋亡的影响

目的:探究沉默生精蛋白Ⅰ(SEMG1)对精原细胞系GC-1细胞周期及凋亡的影响。方法:利用脂质体转染法将SEMG1小干扰RNA(siRNA)转染精原细胞株GC-1,以空白组(空白对照组)和非特异性siRNA转染组(阴性对照组)作为对照;使用Western印迹法检测各组细胞SEMG1蛋白的表达水平,流式细胞术分析各组细胞的凋亡率及细胞周期。结果:与空白对照组和非特异性siRNA转染组相比,siRNA-SEMG1(si-SEMG1)转染组细胞的SEMG1蛋白表达水平(2.51±0.13,2.50±0.12 vs 1.80±0.05)明显降低(P<0.01);空白对照组、阴性对照组和siRNA-SEMG1转染组细胞的细胞周期无明显差异(P>0.05),但siRNA-SEMG1转染组细胞凋亡率达到(6.77±0.15)%,明显高于空白对照组(0.70±0.06)%和阴性对照组(0.8±0.06)%(P<0.01)。此外,Western印迹结果显示,siRNA-SEMG1转染组细胞的caspase-3蛋白表达水平显著上升(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。结论:siRNA-SEMG1能有效沉默精原细胞GC-1中SEMG1蛋白的表达,并最终促进GC1-细胞凋亡。

WDR12对GC-1细胞增殖凋亡及核糖体蛋白基因表达的影响

目的探究敲低WD重复结构域12(WDR12)对小鼠精原细胞(GC-1)的影响。方法利用脂质体转染法将针对WDR12的shRNA编码克隆(shWDR12)及阴性对照的EGFP质粒转染细胞后,Western blot和Q-PCR检测细胞中WDR12表达量;CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况;TUNEL试剂盒染色检测细胞凋亡情况;Q-PCR检测细胞中核糖体蛋白基因的差异表达。结果与转染阴性对照质粒的细胞相比,转染shWDR12的细胞检测结果显示成功降低了GC-1细胞中WDR12的表达(P<0.01);WDR12敲低的GC-1细胞增殖被抑制;TUNEL染色结果显示WDR12敲低后凋亡细胞数量增多;转染shWDR12后细胞内核糖体相关蛋白基因[核糖体蛋白S3(RPS3)(P<0.05)、核糖体蛋白L11(RPL11)(P<0.01)、核糖体蛋白S15(RPS15)(P<0.05)以及核糖体蛋白L31(RPL31)(P>0.05)]的表达量下降。结论转染shWDR12能有效敲低GC-1细胞中WDR12的表达,WDR12表达的降低导致GC-1细胞出现增殖能力下降、凋亡数量增多及核糖体相关蛋白基因表达下调。

增塑剂DEHP通过铁死亡途径抑制小鼠GC-1 spg精原细胞生长

目的:探究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)损伤小鼠GC-1 spg精原细胞功能的可能机制。方法:采用不同浓度DEHP(0、30、60、90、120μmol/L)处理GC-1 spg细胞,通过CCK8实验、克隆形成实验和Transwell实验检测细胞增殖和迁移能力的变化;化学分光光度比色法检测细胞内铁离子(Fe 3+)和丙二醛的相对含量;蛋白质印迹实验检测细胞内铁死亡相关蛋白胱氨酸/谷氨酸逆转运蛋白(xCT)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的相对表达;细胞免疫荧光染色技术检测细胞内活性氧水平以及线粒体膜电位(JC-1)的改变。使用铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(1μmol/L)与DEHP(90μmol/L)联合培养GC-1 spg细胞24 h,CCK8实验检测细胞的增殖能力。结果:与对照组(0μmol/L)相比,30、60、90、120μmol/L DEHP组细胞的增殖能力、克隆形成能力和迁移能力明显下降;丙二醛、活性氧、Fe 3+(90、120μmol/L DEHP组)含量明显升高;线粒体膜电位(60、90、120μmol/L DEHP组)明显降低;GPX4(60、90、120μmol/L DEHP组)和xCT蛋白表达水平明显降低。DEHP与Ferrostatin-1联合培养后细胞增殖能力较DEHP单独培养明显提高。结论:DEHP能够抑制GC-1 spg细胞的增殖和迁移能力,降低GPX4和xCT蛋白的表达,可能通过铁死亡途径引起细胞死亡。

白藜芦醇对Gc-1spg细胞氧化应激损伤的作用研究

目的观察白藜芦醇(RES)对过氧化氢H_(2)O_(2)诱导的小鼠精原细胞(Gc-1 spg)氧化应激损伤的作用。方法H_(2)O_(2)复制Gc-1 spg细胞氧化应激损伤模型,设置空白组、H_(2)O_(2)组(800µmol/L)、H_(2)O_(2)+5µmol/L RES组、H_(2)O_(2)+10µmol/L RES组和H_(2)O_(2)+15µmol/L RES组。检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,CCK-8法检测细胞活力,JC-1试剂盒检测线粒体膜电位,Mito Tracker®®Green FM试剂盒检测活细胞线粒体水平,Hoechst 33342染色检测细胞核凋亡率,Western blotting检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3表达。结果浓度为800µmol/L H_(2)O_(2)处理Gc-1 spg细胞6 h时达到实验要求(P<0.05)。与空白组比较,各H_(2)O_(2)组细胞活力降低(P<0.05),与H_(2)O_(2)组比较,H_(2)O_(2)+5µmol/L RES组、H_(2)O_(2)+10µmol/L RES组、H_(2)O_(2)+15µmol/L RES组细胞活力升高(P<0.05)。与空白组比较,各H_(2)O_(2)组的GSH-Px和SOD水平降低(P<0.05),LDH和MDA水平升高(P<0.05);与H_(2)O_(2)组比较,H_(2)O_(2)+5µmol/L RES组、H_(2)O_(2)+10µmol/L RES组、H_(2)O_(2)+15µmol/L RES组GSH-PX和SOD水平降低(P<0.05),LDH和MDA水平升高(P<0.05)。与空白组比较,H_(2)O_(2)组细胞的红/绿荧光比值降低,提示线粒体膜电位降低(P<0.05);与H_(2)O_(2)组比较,H_(2)O_(2)+5µmol/L RES组、H_(2)O_(2)+10µmol/L RES组、H_(2)O_(2)+15µmol/L RES组JC-1红/绿荧光比值升高(P<0.05)。与空白组比较,H_(2)O_(2)组细胞线粒体数明显减少(P<0.05);与H_(2)O_(2)组比较,H_(2)O_(2)+5µmol/L RES组、H_(2)O_(2)+10µmol/L RES组、H_(2)O_(2)+15µmol/L RES组细胞荧光强度升高(P<0.05)。与空白组比较,H_(2)O_(2)组大量细胞核皱缩、碎裂,染色程度明显增强,细胞凋亡严重;与H_(2)O_(2)组比较,H_(2)O_(2)+5µmol/L RES组、H_(2)O_(2)+10µmol/L RES组、H_(2)O_(2)+15µmol/L RES组细胞凋亡率降低(P<0.05)。与空白组比较,H_(2)O_(2)组凋亡蛋白Bax和Caspase-3相对表达量增加(P<0.05),Bcl-2相对表达量减少(P<0.05);与H_(2)O_(2)组比较,H_(2)O_(2)+5µmol/L RES组、H_(2)O_(2)+10µmol/L RES组、H_(2)O_(2)+15µmol/L RES组Bax和Caspase-3相对表达量降低(P<0.05),Bcl-2相对表达量增加(P<0.05)。结论RES对H_(2)O_(2)诱导的Gc-1 spg细胞氧化应激损伤具有保护作用,这种保护作用与RES浓度有关。

养精胶囊对GC-1细胞增殖、凋亡及caspase-3表达的影响

目的探讨养精胶囊改善生精功能进而治疗男性不育症可能的作用机制。方法在GC-1细胞中加入养精胶囊提取液,分为空白组和低、中、高剂量组,在作用24、48、72 h后采用MTT法检测各组的吸光值;作用48 h后,采用流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡;用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测凋亡相关基因caspase-3的表达。结果在作用24、48、72 h后,养精胶囊提取液低、中、高剂量组细胞增殖明显加快,其吸光度与同期空白组相比有统计学意义(P<0.01);养精胶囊提取液低、中、高剂量组作用GC-1细胞48 h后,S期细胞比例逐渐增加,与空白组相比有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡率明显降低,与空白组相比有统计学意义(P<0.01);caspase-3mRNA表达呈下降趋势,中、高剂量组与空白组相比有统计学意义(P<0.01);caspase-3蛋白表达呈下降趋势,高剂量组与空白组相比有统计学意义(P<0.01)。结论养精胶囊具有促进GC-1细胞增殖、抑制细胞的凋亡,降低caspase-3的表达水平的作用,且呈剂量依赖性。

MiR-29a靶向调控瞬时受体电位通道家族4在睾丸缺血再灌注损伤中对GC-1细胞增殖及凋亡的影响及作用机制

目的研究miR-29a通过靶向调控瞬时受体电位通道家族4(TRPV4)在睾丸缺血再灌注损伤(IRI)中对GC-1细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法建立睾丸GC-1细胞缺氧复氧模型,RT-PCR检测不同复氧损伤时间点miR-29a和TRPV4的表达水平;分别采用MTT实验、流式细胞术检测转染miR-29a对GC-1细胞增殖和凋亡能力的变化;荧光素酶实验证实miR-29a和TRPV4的靶向关系,Western blot法测定转染miR-29a后细胞中TRPV4的蛋白表达水平。结果miR-29a随着复氧损伤时间的增加,其表达显著降低,而TRPV4的表达明显增加;过表达miR-29a能显著促进GC-1细胞的增殖能力,抑制细胞凋亡水平。沉默miR-29a可使GC-1细胞的增殖能力明显减弱,凋亡水平增加;荧光素酶报告实验表明TRPV4是miR-29a的下游靶基因。过表达miR-29a能明显抑制GC-1细胞的TRPV4表达,而沉默miR-29a能显著促进TRPV4表达。结论MiR-29a可以通过靶向调控TRPV4来改变GC-1细胞的增殖和凋亡能力,从而影响睾丸IRI的发生发展。

ANKRD49通过上调Bcl-xL的表达抑制UV诱导GC-1细胞的凋亡

目的:利用稳定过表达Ankyrin repeat domain 49(ANKRD49)的GC-1(小鼠精原细胞)细胞模型,探讨ANKRD49过表达对GC-1细胞凋亡的影响。方法:40J/m^2紫外线(UV)刺激GC-1细胞2 min诱导凋亡,分别利用流式细胞术、Hoechst33258染色和免疫印迹技术检测过表达ANKRD49对GC-1细胞线粒体膜电位、核浓缩情况和凋亡相关蛋白多聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、Cleaved-Caspase-3、Bcl-xL和Bax的表达变化,以反映ANKRD49对GC-1细胞凋亡的影响。结果:流式细胞术检测结果表明稳定过表达ANKRD49的GC-1细胞线粒体膜电位下降率和细胞凋亡率均明显低于空载体组和裸细胞组(P<0.05)。Hoechst33258染色结果显示ANKRD49稳定过表达组细胞的凋亡百分比明显低于其它组(P<0.05)。Western blotting检测结果显示ANKRD49稳定过表达组Cleaved-PARP、Cleaved-Caspase-3蛋白的表达水平明显低于对照组,而Bcl-xL蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05)。结论:ANKRD49过表达可抑制UV诱导的GC-1细胞凋亡,其作用可能是直接或间接通过促进Bcl-xL的表达而实现的。

淫羊藿苷对博来霉素诱导的GC-1细胞DNA损伤的保护作用

该文旨在探究淫羊藿苷(icariin,ICA)对博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠GC-1精原细胞DNA损伤的保护作用及其分子机制。将GC-1细胞分为正常对照组、BLM处理组(10μg/mL)、BLM+不同浓度(0.5、1、2和4μmol/L)ICA组。用不同浓度ICA预保护GC-1细胞12 h后加入BLM继续处理6 h,收集细胞,Western blot法检测DNA损伤相关蛋白γ-H2AX、DNA损伤修复相关通路蛋白(pATM、p-Chk1、p-P53和P21)、碱基切除修复(base excision repair,BER)相关通路蛋白(OGG1、APE1和XRCC1)的表达水平;免疫荧光技术检测γ-H2AX、8-OHdG表达与定位。结果表明,与正常对照组相比,BLM处理组中γ-H2AX、p-ATM、p-Chk1、p-P53、P21、OGG1、APE1和XRCC1的蛋白表达水平均显著上升,而ICA可浓度依赖性地下调BLM诱导的γ-H2AX、p-ATM、p-Chk1、p-P53、P21、OGG1、APE1和XRCC1蛋白表达水平。免疫荧光结果显示,与正常对照组相比,BLM处理组中γ-H2AX阳性细胞数量和8-OHdG表达量呈上升的趋势,而不同浓度ICA均可下调上述BLM诱导的γ-H2AX和8-OHdG表达水平。综上所述,ICA能够改善BLM诱导的GC-1细胞DNA损伤,并下调ATM/Chk1通路和BER信号通路活性。

草甘膦对GC-1小鼠精原细胞的毒性作用及N-乙酰半胱氨酸的干预效应

摘要：为探讨41％草甘膦水溶液（农达）对雄性生殖细胞的毒性及其作用机制以及N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine，NAC）的干预效应。以GC．1小鼠精原细胞为受试细胞，设正常对照组、草甘膦染毒组（60、90、120、150、180mg·L-1）、NAC干预组（10mmol·L NAC＋90mg·L-1农达）。MTT法检测细胞存活率，Giemsa染色法观察细胞的形态学改变，彗星试验检测细胞DNA损伤，比色法检测细胞培养液乳酸脱氢酶（LDH）以及细胞内超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）及丙二醛（MDA）水平的变化。结果显示，随着草甘膦染毒浓度增加，细胞存活率逐渐下降妒〈0．01），彗星阳性率逐渐升高（P〈0．01）；与对照组相比，草甘膦染毒组LDH活性增加（P〈0．05，60mg·L-1组除外），MDA生成量增多（P〈0．05），GSH含量降低（P〈0．05）和SOD活性降低（P〈0．05）。抗氧化剂NAC预处理具有相应的拮抗作用。研究表明，60～180mg·L。浓度草甘膦对GC-1细胞有明显的损伤作用，其机制可能是草甘膦诱导氧化应激，导致细胞通透性增加和DNA损伤。抗氧化剂NAC对草甘膦的细胞毒性具有一定保护作用。

GPR30介导双酚A促进小鼠GC-1细胞增殖

目的研究环境雌激素双酚A（bisphenol A，BPA）通过G蛋白偶联受体30（Gprotein-coupled receptor 30，GPR30）对小鼠精原细胞系GC-1细胞的影响及发生机制。方法（1）对GC-1细胞分组（分为对照组，BPA＋ICI，BPA＋ICI＋GPR30 siRNA，BPA＋ICI＋AG1478，BPA＋ICI＋PD98059，G-1六个组）进行处理，培养0h，24h，48h，72h，96h后采用MTT比色法检测细胞活力。（2）分别用Gpr30 siRNA沉默Gpr30基因，AG1478阻断EGFR（epidermal growth factor receptor），PD98059阻断ERK（extracellular signal-regulated kinases），然后BPA处理GC-1细胞，5min后Western blot检测ERK-1／-2磷酸化水平和Real-time PCR检测转录因子c-Fos变化程度，48h后检测周期蛋白基因Cyclin D1表达情况。结果与对照组相比，BPA处理组促进GC-1细胞增殖，c-Fos和Cyclin D1基因表达上升（P〈0．05）。细胞在上述三个水平阻断处理后，BPA不引起相应表达差异。结论在小鼠GC-1细胞，BPA诱导GPR30转活EGFR，通过激活MAPK／ERK—c—Fos信号调节，上调周期蛋白基因Cyclin D1表达，促进细胞增殖。

枸杞多糖对小鼠GC-1spg精原细胞氧化损伤的保护作用研究

目的研究枸杞多糖(LBP)对小鼠GC-1spg精原细胞氧化损伤的保护作用,探讨其治疗男性不育症的作用及机制。方法通过次黄嘌呤-黄嘌呤(HX-XO)氧化酶体系建立体外小鼠GC-1spg精原细胞氧化应激模型,分别以50、100、200μg·mL^(-1)的LBP为低、中、高剂量设定给药组,另设空白组和模型组,培养24 h,MTT比色法测定细胞活力,通过测定细胞内丙二醛(MDA)的生成量、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性、谷胱甘肽(GSH)水平评价LBP对小鼠GC-1spg精原细胞氧化损伤的保护作用,通过检测细胞中Caspase-3和Caspase-9的活性,评价LBP对小鼠GC-1spg精原细胞凋亡的影响。结果不同浓度的LBP可以显著改善HX-XO诱导的小鼠GC-1spg精原细胞氧化损伤,提高细胞活性,降低MDA生成量,提高SDO、CAT活性和GSH水平,降低Caspase-3和Caspase-9的活性,抑制细胞凋亡。结论LBP可通过抗氧化作用对小鼠GC-1spg精原细胞氧化损伤起保护作用,改善细胞凋亡,提高细胞活力,可作为改善男性不育症的潜力药物。

锌指蛋白146(RNF146)对吡柔比星引起的小鼠睾丸精原细胞DNA损伤的保护作用

目的评价锌指蛋白146(RNF146)对化疗药吡柔比星引起的GC-1小鼠睾丸精原细胞DNA损伤的保护作用。方法采用1.0μg/m L吡柔比星处理的方法复制DNA损伤的小鼠GC-1精原细胞模型。构建小鼠rnf146慢病毒过表达载体p CDHrnf146并包装rnf146过表达慢病毒,感染GC-1细胞上调rnf146的表达,Western blot验证过表达效率。评价RNF146对吡柔比星引起的GC-1细胞增殖抑制、凋亡增多及DNA损伤的保护作用。结果成功构建了p CDH-rnf146重组质粒并包装具有良好感染效率的RNF146过表达慢病毒。溴脱氧尿苷(Brd U)掺入标记显示RNF146能够减轻吡柔比星引起的GC-1增殖抑制。原位末端转移酶标记技术(TUNEL)提示RNF146能够抑制吡柔比星诱导的GC-1细胞凋亡。彗星实验显示RNF146过表达能够有效保护吡柔比星作用下GC-1细胞DNA的完整性。结论 RNF146对化疗药吡柔比星引起的小鼠睾丸精原细胞损伤具有保护作用。

乙酰左旋肉碱对缺氧致小鼠精原细胞氧化损伤的保护作用

乙酰左旋肉碱(ALC)是线粒体能量代谢的有效底物,在脂肪酸代谢途径中起重要作用,已被用于预防神经退行性疾病及治疗男性不育症。本试验以体外培养的小鼠GC-1精原细胞为试验对象,将其分为对照组(CON组:21%O2、5%CO2)、缺氧组(HYP组:3%O2、5%CO2)和ALC治疗组(HYP-ALC组:3%O2、5%CO2,150μmol/L ALC)。缺氧处理24 h后,检测细胞增殖、细胞抗氧化水平、线粒体膜电位(MMP)、细胞凋亡率和细胞凋亡相关基因表达情况,旨在探讨ALC对缺氧的精原细胞的保护作用。结果显示,与CON组相比,HYP组细胞活力极显著下降(P<0.01);细胞上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量、细胞内过氧化氢酶(CAT)活力、丙二醛(MDA)含量、总抗氧化能力(T-AOC)活力和细胞内活性氧(ROS)浓度均显著上升(P<0.05),MMP极显著下降(P<0.01);细胞凋亡率和Bcl2/Bax,Caspase-3和Caspase-9 mRNA表达量显著上升(P<0.05)。与HYP组相比,ALC治疗组LDH的释放,MDA和ROS浓度,CAT和T-AOC的活力显著降低(P<0.05),MMP显著升高(P<0.01);细胞凋亡率,Caspase-3和Caspase-9 mRNA表达量均显著下降(P<0.05);Bcl2/Bax mRNA表达量上升,但差异不显著(P>0.05)。结果表明,ALC可通过维持细胞氧化抗氧化稳态及线粒体稳态来减少缺氧诱导的精原细胞凋亡。

Cu2+对小鼠精原细胞活性氧及线粒体功能的影响

通过终浓度含Cu^2+为0μmol/L(对照组)、10μmol/L(低浓度组)、50μmol/L(中浓度组)、100mol/L(高浓度组)的体外培养体系分别处理小鼠精原细胞(GC-1 spg细胞),在培养12、24、36 h时,应用流式细胞仪检测GC-1 spg细胞的活性氧(ROS)水平及线粒体膜电位(Δψm)变化,应用高分辨率呼吸仪检测基础呼吸、质子漏、呼吸控制比率(RCR)、剩余氧通量(ROX),以评价不同浓度Cu^2+对体外培养GC-1 spg细胞ROS产生及线粒体功能的影响。结果显示:与对照组相比,培养12 h三个Cu^2+处理组的ROS水平显著升高,低浓度组和中浓度组的ROX显著升高,Δψm、基础呼吸、质子漏和RCR无明显变化;培养24 h中浓度组和高浓度组的ROS和ROX显著升高,三个Cu^2+处理组Δψm、中浓度组和高浓度组的基础呼吸和高浓度组的RCR显著下降,质子漏无明显变化;培养36 h中浓度组和高浓度组ROS水平显著升高、三个Cu^2+处理组的质子漏、ROX显著升高,三个Cu^2+处理组的Δψm、中浓度组和高浓度组的RCR显著下降,基础呼吸无明显变化。结果表明:在Cu^2+处理的GC-1 spg细胞中,ROS的产生先于Cu^2+诱导的线粒体功能障碍。