微波辐射致小鼠GC-2spd细胞损伤效应研究

目的：探讨微波辐射对小鼠GC．2spd细胞的影响。方法：培养的GC-2spd细胞经平均功率密度为0、10、30mW／cm。微波辐射15min，于辐射后1-24h，应用MTF法、光镜、电镜、流式细胞术和ELISA法观测细胞增殖活力、细胞形态学和超微结构、细胞凋亡及cAMP含量的变化。结果：10、30mW／cm2微波辐射后1-24h（除30mW／cm2辐射后12h外），GC-2spd细胞增殖活力较对照组明显下降（P〈0．01或P〈0．05），光镜见部分细胞突起变短，数目减少，胞内空泡增多；辐射后6h，细胞凋亡率（％）明显增加（14．59±1．09、8．48±1．73傩4．56±2．09，P〈0．05或P〈0．01），电镜见细胞核染色质凝集边移或核膜破裂，内质网明显扩张；辐射后6h和24h，细胞内cAMP含量（nmol／g）明显降低（1．65±0．17、1．96±0．10 vs 2．77±0．24，2．13±0．33、1．69±0．27 vs 3．02±0．47，P〈0．05或P〈0．01）。结论：10和30mW／cm2微波辐射可引起GC-2spd细胞损伤，表现为细胞内cAMP含量降低，细胞增殖活力下降，细胞凋亡增加。

金丝桃苷通过激活Keap1/Nrf2/HO-1通路保护小鼠GC-2细胞的氧化损伤

目的从Keap1/Nrf2/HO-1通路角度研究金丝桃苷(Hyp)对H2O2所诱导的小鼠精母细胞(GC-2)氧化损伤的保护作用。方法将GC-2细胞随机分为正常组、模型组、氮乙酰半胱氨酸组(阳性组,NAC,2.5 mmol/L)以及金丝桃苷组(50、100、200μmol/L),各组按剂量孵育48 h后,除正常组外其余各组细胞加入H_(2)O_(2)(150μmol/L)处理2 h,正常组给予等容量培养基。采用CCK-8法检测细胞的活力,流式细胞仪检测细胞凋亡水平,酶联免疫法检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT)活力以及丙二醛(MDA)含量,Westernblot和RT-qPCR检测Nrf2、Keap1、HO-1蛋白及mRNA的相对表达水平,免疫荧光法检测Nrf2核转位水平。结果150μmol/L H_(2)O_(2)干预2 h可制备GC-2细胞氧化损伤模型。与正常组比较,模型组GC-2细胞增殖率以及SOD、GSH、CAT活力显著降低,MDA含量、细胞凋亡率,Keap1和Nrf2 mRNA表达显著升高(P<0.05)以及Keap1蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,NAC组和金丝桃苷200μmol/L组细胞增殖率和SOD、GSH-PX、CAT活力显著升高,MDA含量、细胞凋亡率显著下降(P<0.05);金丝桃苷200μmol/L组Keap1 mRNA表达显著下降,HO-1 mRNA表达显著升高(P<0.01);金丝桃苷200μmol/L组Nrf2核蛋白(NEs-Nrf2)以及HO-1的蛋白表达显著升高(P<0.05),Keap1蛋白表达显著下降(P<0.01);金丝桃苷组出现了明显的核转位现象(P<0.05)。结论金丝桃苷可能通过激活Keap1/Nrf2/HO-1信号通路,对H_(2)O_(2)诱导的GC-2细胞氧化损伤具有保护作用。

海藻硫酸多糖对HPM辐射致GC-2细胞损伤保护作用研究

探讨了海藻硫酸多糖(SP)对高功率微波(HPM)致小鼠精母细胞系GC-2细胞的损伤防治作用及其机制,为新型抗电磁辐射药物开发提供基础。将GC-2细胞分为药物组、药物对照组、辐射组和正常对照组,采用平均功率密度为30 mW/cm2的S波段HPM辐照15 min,药物组和药物对照组于照射前24 h加入SP(终浓度25μg/ml)。辐照后立即检测细胞的活性氧(ROS)、凋亡相关蛋白Caspase3、p53、Bax和Bcl-2及氧化应激信号通路MAPK中蛋白p-38MAPK和p-JNK1/2等指标的活化,并于1 h、3 h、6 h、12 h、24 h检测细胞活力。与正常组相比,辐照后6 h辐射组细胞活力显著降低,细胞即刻的ROS、Caspase3、p53、Bax、p-38MAPK和p-JNK1/2表达显著升高,Bcl-2显著降低;与辐射组相比,药物组和药物对照组细胞即刻的ROS、Caspase3、p53、Bax、p-38MAPK以及p-JNK1/2的表达显著降低,Bcl-2显著升高。结果表明,30 mW/cm2 S-HPM辐射可引起GC-2细胞产生氧化应激损伤,预防性给予SP可通过抗氧化机制对HPM辐射损伤起保护作用。

磷酸三苯酯和磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯对小鼠精母细胞DNA损伤和细胞周期的影响

目的 探讨不同剂量的磷酸三苯酯(TPhP)和磷酸三(1,3-二氯-2-丙基)酯(TDCPP)对小鼠精母细胞DNA损伤和细胞周期的影响。方法 选取小鼠精母细胞(GC-2)为细胞模型,经TPhP和TDCPP(0、3、10、30和50μmol/L)染毒48 h后,利用CCK-8方法检测GC-2的细胞存活率,采用高内涵分析系统检测TPhP和TDCPP对细胞核碎片化程度、磷酸化组蛋白(pH2AX)、DNA同源重组修复蛋白(Rad51)及细胞周期等参数的影响。实时荧光定量PCR法分析精母细胞生长发育关键调控基因,包括环腺苷酸应答元件结合蛋白(CREB-1)、抑制素-α (inhibin-α)、粘连蛋白2(nectin-2)和增殖标记蛋白(Ki67)mRNA的表达水平。结果 与对照组相比,30和50μmol/L TPhP和TDCPP均显著降低GC-2细胞存活率(P<0.05),并引起细胞核碎片化程度加剧(P<0.01)。DNA损伤标志物pH2AX在10、30和50μmol/L TPhP组及TDCPP组均显著升高(P<0.05),Rad51蛋白在30和50μmol/L TPhP组和10、30和50μmol/L TDCPP组均显著升高(P<0.01),表明较高浓度的TPhP和TDCPP可引起DNA损伤。细胞周期分析显示,TPhP主要将细胞阻滞在G0/G1期,而TDCPP主要将细胞阻滞在G0/G1期和G2/M期。荧光定量PCR结果可见,与对照组相比,TPhP(30和50μmol/L)和TDCPP(10、30和50μmol/L)抑制精母细胞生长发育关键基因(CREB-1、inhibin-α、nectin-2和Ki67)的表达(P<0.01)。结论 TPhP和TDCPP均可引起GC-2细胞DNA损伤和细胞周期阻滞,并最终影响精母细胞的生长发育。

IGF2信号通路在As_(2)O_(3)致GC-2细胞凋亡中的作用

砷是一种天然类金属化学元素,广泛存在于自然界中,是世界卫生组织公布的引起重大公共关注的10种危害环境与健康的化学品之一^([1])。砷也是一种雄性生殖毒物,可以下调精子质量^([2])。流行病学报告显示,饮用水中砷含量超标导致男性血液和精液中砷含量明显升高,并造成男性精子数量和精子存活率的下降[3-4]。动物实验也发现,慢性砷暴露降低小鼠精子质量[5-6]。IGF2(胰岛素样生长因子2)信号通路是与男性生殖关系密切的信号通路.

氢载气GC-NCD分析聚合级丙烯中N_(2)O

采用氢载气气相色谱-氮化学发光检测器(GC-NCD)和石英毛细管柱建立了聚合级丙烯中N_(2)O的分析方法。对方法的线性范围、准确度、检出限进行了研究。结果表明该分析方法具有简便快速,灵敏度高的优点,非常适合生产过程分析。

吹扫捕集-GC-MS/MS法测定饮用水中2-甲基异莰醇和土臭素

目的利用吹扫捕集—气相色谱串联质谱(GC-MS/MS)法测定生活饮用水中2-甲基异莰醇和土臭素的分析方法。方法取5 mL水样,以高纯氮气会载气在40 mL/min流速下吹扫11 min后,热解吸进入GC-MS/MS进行分析,以2-异丁基-3-甲氧基吡嗪为内标进行定量。结果在优化的实验条件下,2-甲基异莰醇和土臭素在5.0~100 ng/L浓度范围内线性较好,相关线性系数(R^(2))分别为0.9996和0.9998,方法检出限分别为0.13 ng/L和0.06 ng/L,水样加标回收率在92.3%~104.5%之间,相对标准偏差(RSD)为1.89%~4.07%。结论该方法简便、快速、准确、灵敏度高,可用于测定饮用水中2-甲基异莰醇和土臭素。

基于数值模拟的CO_(2)地质封存项目井筒泄漏风险定量化评价方法

为评估CO_(2)地质封存场地的CO_(2)沿井筒泄漏风险,介绍了自主研发的可对CO_(2)井筒泄漏风险进行定量化评价的数值模拟WellRisk软件,将软件应用于实际CO_(2)地质封存场地--神华鄂尔多斯CO_(2)咸水层封存示范工程,定量评估该场地CO_(2)沿注入井和监测井的泄漏量,并将软件模拟结果与美国能源部开发的NRAP–IAM–CS(The national risk assessment partnership–integrated assessment model–carbon storage)软件模拟结果进行对比,实现了CO_(2)沿井筒泄漏风险的定量化评价。定义了井筒泄漏系数,即井筒发生泄漏的有效截面积和井筒总截面积的比值,并将井筒泄漏系数作为量化表征井筒固井质量的重要参数。当泄漏系数取值为10^(–6)时,神华CO_(2)地质封存场地在1000 a内的总泄漏量为720 tCO_(2),占总注入量的0.24%,小于IPCC的风险阈值1%。因此,泄漏系数为10^(–6)或更低的井筒是低风险泄漏井,具有良好的固井质量,对应于NRAP–IAM–CS软件中井筒渗透率低于10^(–12)m^(2)的情况。泄漏系数为10–5或更高的井筒是高风险泄漏井,具有较差的固井质量。WellRisk和NRAP–IAM–CS的计算结果均表明,当注入井和监测井的固井质量良好时,神华CO_(2)地质封存场地基本不存在CO_(2)泄漏风险。

邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯对GC-2spd细胞Bcl-2,Bax mRNA表达的影响

目的探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)对GC-2spd细胞Bcl-2、Bax m RNA表达的影响。方法体外培养GC-2spd细胞,用不同浓度的DEHP(0、50、100和200μmol/L)染毒24 h。采用MTT实验检测细胞存活率,Annexin V-FITC/PI双染色法结合流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光定量PCR法检测Bcl-2和Bax的m RNA表达。结果在DEHP染毒细胞24 h后,随着DEHP浓度(0、50、100和200μmol/L)的增加,细胞存活率逐渐下降,细胞凋亡率逐渐上升,Bcl-2 m RNA表达水平下降,Bax m RNA表达水平上升。结论 DEHP可能通过线粒体通路诱导GC-2spd细胞凋亡,进而影响雄性生殖功能。

基于生物信息学方法分析MFAP2基因在胃癌预后及免疫治疗中的意义

目的:筛选影响胃癌患者预后及治疗的关键基因,分析关键基因微纤维相关蛋白2(MFAP2)在提示胃癌患者预后及免疫治疗敏感性中的价值。方法:从TCGA数据库下载胃癌患者的癌和癌旁组织的表达谱数据及临床资料。综合加权基因共表达网络分析(WGCNA)和单因素Cox回归分析筛选与胃癌预后显著相关的基因。使用多个患者队列评估关键基因MFAP2的预后价值,分析其效能和临床病理指标的相关性。使用多个在线数据库数据及算法分析MFAP2与肿瘤免疫微环境的关联,免疫表型评分(IPS)联合免疫治疗患者队列分析MFAP2在预测免疫治疗响应性中的价值。采用多数据集验证MFAP2在胃癌及癌旁组织中的表达差异。结果:蓝色模块与胃癌患者的生存结局相关性最高(R=0.17,P<0.001);进一步与预后相关基因取交集,共筛选到20个关键基因。关键基因MFAP2的高表达提示胃癌的不良预后和病理进展(HR>1,P<0.05)。MFAP2与肿瘤相关成纤维细胞密切相关,高表达MFAP2的胃癌患者对免疫治疗更不敏感。多数据集验证结果显示,MFAP2 mRNA在胃癌组织中高表达(P<0.05或P<0.01)。结论:MFAP2的高表达是胃癌预后不良和免疫治疗响应不佳的提示因子,有望作为胃癌的新型治疗靶点和预后标志物。

GC-MS法测定甲醇中邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯的不确定度评定

根据对GC-MS法测定甲醇中邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯实验流程的分析,确定测定过程中的不确定来源,主要有标准曲线配置、曲线拟合、仪器测量重复性引入的不确定度分量,最后合成GC-MS法测定甲醇中邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯的标准不确定度,并计算出扩展不确定度。通过对不确定度各个分量的分析与计算,得出标准曲线配制过程中所引入的不确定度影响程度最大,在实际样品的分析测试过程中,我们应严格控制实验室温度,配置标准曲线时选择合适体积的微量注射器,注意曲线配置各个环节,并确保仪器设备性能稳定,以减少分析过程引入的误差。

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对GC-2 spd细胞半胱氨酰天冬氨酸酶蛋白及mRNA表达的影响

目的探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)染毒对GC-2 spd细胞半胱氨酰天冬氨酸酶(caspase)蛋白及m RNA表达的影响。方法将体外培养的处于对数生长期的GC-2 spd细胞暴露于含终浓度为0(溶剂对照)、50、100、200μmol/L DEHP的培养基中培养24 h。采用Real-time PCR法检测细胞caspase-3、caspase-8、caspase-9 m RNA的表达,采用Western blotting法检测细胞caspase-3蛋白酶原(procaspase-3)、procaspase-8、procaspase-9的表达。结果与溶剂对照组比较,100μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞caspase-3 m RNA的表达水平和200μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞caspase-8 m RNA的表达水平及50、200μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞caspase-9m RNA的表达水平均较高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与溶剂对照组比较,100、200μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞procaspase-3、procaspase-8、procaspase-9的表达水平均较低,差异均有统计学意义(P<0.05);且随着DEHP染毒浓度的升高,GC-2 spd细胞procaspase-3、procaspase-8、procaspase-9的表达水平均呈下降趋势。结论 DEHP体外染毒可能通过启动caspase-8和caspase-9进而激活下游caspase-3级联反应,最终诱导生精细胞凋亡。

IP_3Rs在GC-2std细胞中的表达及其增殖作用机制研究

目的:观察IP3R(s1,4,5三磷酸肌醇受体)在GC-2std(GC-2)细胞中的表达情况并探讨IP3Rs在GC-2细胞增殖中的作用。方法:用RT-PCR检测IP3Rs在GC-2细胞以及在小鼠大脑,心肌,骨骼肌及睾丸中的分布情况。免疫荧光法检测IP3Rs在细胞中的分布及表达;MTT法检测不同浓度2-APB(IP3Rs拮抗剂)的作用下,IP3Rs对细胞增殖的影响,利用流式细胞术检测2-APB对细胞周期的影响。结果:IP3Rs的三种亚型在GC-2细胞中均有表达且在小鼠大脑、心肌、骨骼肌、睾丸等多种组织中广泛分布;免疫荧光实验亦表明IP3Rs分布于胞膜、胞质及核内。相差显微镜下观察,发现2-APB处理组比对照组细胞数量少。MTT实验结果亦表明:随着2-APB浓度的增加(5、25、100、200、400uM),其吸光值呈浓度依赖性的减小,经统计学分析:25uM浓度组即具有显著性差异(p<0.05)且EC50=92.0114。流式细胞结果显示:与对照组比较,100uM2-APB处理组细胞处于S期、G2期的数目增多。结论:IP3Rs在GC-2细胞及小鼠多种组织中表达,与细胞的增殖密切相关,可能与其参与调节细胞周期有关。

气相色谱—串联质谱法测定阿哌沙班中2-氯乙酰乙酸乙酯的残留量

目的:建立一种气相色谱—串联质谱(GC-MS/MS)方法,用于测定阿哌沙班中潜在基因毒性杂质2-氯乙酰乙酸乙酯的残留量。方法:用聚乙二醇[VF-WAXms(30 mm×0.25 mm×0.25μm)]为固定液的毛细管色谱柱;进样口温度为230℃;流速1.0 mL/min;载气:氦气;不分流进样。采用电子轰击离子源(EI),选择离子监测模式(SIM)。结果:2-氯乙酰乙酸乙酯在0.05~1.02μg/mL质量浓度范围内呈现良好的线性关系(r=0.9985);定量限浓度是0.02μg/mL;检出限是0.01μg/mL;三份不同浓度水平的平均回收率为97.9%(RSD=4.2%)。结论:所建立的GC-MS/MS测定方法灵敏度高、专属性强和准确度好,可用于阿哌沙班中2-氯乙酰乙酸乙酯的测定。

奇楠沉香中2-(2-苯乙基)色酮的GC-MS分析鉴定

采用乙醚浸提法提取奇楠沉香样品,并应用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术分析测定其中的化学成分及相对含量,鉴定了11个化合物。同时采用柱色谱技术对该乙醚提取物进行分离纯化得到单体化合物1～6,其结构通过核磁共振等波谱技术鉴定为2-(2-苯乙基)色酮类化合物。通过质谱比对,将GC-MS分析中未能鉴定的5个含量较高的成分分别鉴定为化合物2～6。样品中2-(2-苯乙基)色酮类化合物的相对含量达到63.62%,表明奇楠沉香富含2-(2-苯乙基)色酮类化合物。探讨了2-(2-苯乙基)色酮类化合物的质谱裂解规律,有助于采用GC-MS技术对沉香样品中2-(2-苯乙基)色酮类成分进行分析和鉴定,为合理地评价沉香的质量提供了科学依据。

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对GC-2 spd细胞FasL蛋白及mRNA表达的影响

目的研究邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)对GC-2 spd细胞FasL蛋白和mRNA表达的影响。方法将处于对数生长期的GC-2spd细胞,分别暴露于含终浓度为0(溶剂对照)、50、100、200μmol/L DEHP的培养液培养24 h。分别用q RT-PCR及Western blotting检测GC-2 spd细胞FasL mRNA和蛋白的表达。结果 100、200μmol/L DEHP染毒组GC-2 spd细胞FasL mRNA和蛋白的表达水平均高于溶剂对照组,差异有统计学意义(P<0.05);且随着DEHP染毒浓度的升高,GC-2 spd细胞FasL mRNA和蛋白的表达水平呈上升趋势。结论 DEHP可能通过增强生精细胞FasL mRNA及蛋白表达,激活Fas/FasL信号通路,最终导致生精细胞凋亡。

塑胶中邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯萃取剂及萃取时间的研究

本文通过研究甲苯、正己烷萃取在不同浓度的DEHP提取效率、回收率,针对塑胶制品确定了相对有效的萃取溶剂,同时通过改变超声温度挑选出最有效的超声温度,并用实际样品进行了相关实验验证。结果表明:甲苯萃取剂萃取效率更高(92.4%),超声萃取温度与30℃时效率最高,标液线性良好(R^(2)=0.999 8),回收率在(92.3~95.2)%。

新型环保绝缘气体C_(4)F_(7)N/CO_(2)的制备及检测研究

为了进一步探究C_(4)F_(7)N/CO_(2)混合气体在高压电气设备中的应用潜能,本研究搭建C_(4)F_(7)N/CO_(2)混合气体制备系统,采用分压法制备了C_(4)F_(7)N体积分数不同的C_(4)F_(7)N/CO_(2)混合气体。建立了气相色谱-氢火焰离子化检测器(GC-FID)检测方法,针对C_(4)F_(7)N/CO_(2)混合气体制备过程中检测质量难以控制的问题,基于流体力学及有限元分析,开展不同C_(4)F_(7)N/CO_(2)混合气体的热驱动扩散模拟实验。结果表明:C_(4)F_(7)N体积分数为2%、5%、10%时C_(4)F_(7)N/CO_(2)气体浓度扩散平衡的时间分别为4775、6600、8800 s,C_(4)F_(7)N气体浓度扩散平衡的时间分别为94、122、158 min。3种C_(4)F_(7)N/CO_(2)混合气体分别在配制100、125、160 min后进行质量检测及应用,可达到良好的质量控制效果。

氯化镉引起线粒体分裂诱导小鼠精母细胞GC-2 spd凋亡

目的探讨镉诱导小鼠精母细胞(GC-2 spd)凋亡的作用机制。方法于2021年3月,分别用5和10μmol/L氯化镉(CdCl_(2))染毒GC-2 spd细胞24 h,分别为CdCl_(2)5μmol/L染毒组(CdCl_(2)低剂量组)和CdCl_(2)10μmol/L染毒组(CdCl_(2)高剂量组),以未染毒的GC-2 spd细胞作为对照组。采用Mito-Track Red CMXRos线粒体荧光探针染色细胞检测线粒体形态,流式细胞术结合JC-1荧光探针检测线粒体膜电位的变化;使用细胞线粒体分离试剂盒和RIPA裂解液分别提取GC-2 spd细胞的线粒体蛋白、细胞浆蛋白和细胞总蛋白,Western blot检测线粒体稳态调节蛋白[分裂蛋白(FIS1)和融合蛋白(OPA1)]及细胞凋亡相关蛋白(Cytochrome c和cleaved Caspase-3)的表达。结果与对照组细胞比较,CdCl_(2)低剂量组和高剂量组细胞中JC-1红色/绿色荧光信号相对比值均明显降低(0.740±0.071、0.570±0.028),差异有统计学意义(P=0.017、0.004);线粒体形态由长管状变为点状,含点状线粒体的细胞比例明显升高(45.1%±3.7%和25.7%±4.9%),差异有统计学意义(P=0.005、0.001);CdCl_(2)低、高剂量组细胞中线粒体FIS1相对表达水平均明显升高(1.271±0.120、1.693±0.155),差异有统计学意义(P=0.046、0.000);OPA1相对表达水平明显降低(0.838±0.050、0.682±0.040),差异有统计学意义(P=0.049、0.001)。与对照组细胞比较,CdCl_(2)低剂量组细胞的胞浆中Cytochrome c蛋白相对表达水平(1.249±0.151)差异无统计学意义(P=0.075),然而CdCl_(2)高剂量组细胞胞浆中其相对表达水平明显升高(2.355±0.110),差异有统计学意义(P<0.001);CdCl_(2)低、高剂量组线粒体中Cytochrome c相对表达水平均明显降低(0.681±0.043、0.619±0.114),差异有统计学意义(P=0.004、0.001);细胞中cleaved Caspase-3蛋白水平升高(5.486±0.544、11.493±1.739),差异有统计学意义(P=0.004、<0.001)。结论CdCl_(2)可促进线粒体分裂,影响Cytochrome c蛋白在GC-2 spd细胞内分布并激活Caspase-3蛋白活性,引起细胞凋亡。