肿瘤相关抗原GCF2高水平表达的肝癌细胞株的筛选

目的筛选出肿瘤相关抗原GCF2高表达的人肝癌细胞株,为进一步探讨GCF2对肝癌发生发展的可能作用奠定基础。方法选择4种人肝癌细胞株(BEL-7404、HepG2、SMMC-7721和QGY-7703)及1种成人正常肝细胞株(HL-7702),培养后分别制作细胞爬片及提取蛋白后,采用免疫细胞染色技术和Western blot的方法筛选出GCF2表达量高的细胞株。结果免疫细胞染色显示,GCF2在5种细胞中的胞核及胞质中均有表达。GCF2蛋白在肝癌细胞BEL-7404、HepG2、SMMC-7721和QGY-7703的表达要强于正常肝细胞HL-7702,其中以BEL-7404的表达量最高。通过Western blot检测,BEL-7404的GCF2相对表达量为0.875±0.134,较其他细胞株高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BEL-7404细胞中GCF2蛋白水平的相对表达量最高,可以作为下一步探讨GCF2在肝癌发生发展的可能作用的实验材料。

GCF2选择性剪接区在肝癌组织及细胞株中的表达及意义

目的：研究肿瘤相关抗原GCF2选择性剪接区在人肝癌细胞株、肝癌组织、癌旁组织及正常成人肝细胞及组织中的表达及意义.方法：采用RT PCR检测GCF2 5个选择性剪接区（D1～D5）在人肝癌细胞株、43例肝癌组织、相对应的癌旁组织,以及正常成人肝细胞株及9例肝组织中的表达.结果：GCF2 4个选择性剪接区（D1～D4）在所检测的细胞株、肝癌组织、癌旁组织和正常成人肝组织中均未检测到表达;GCF2选择性剪接区D5仅在人肝癌细胞株检测到阳性表达;在43例肝癌组织及相应的癌旁组织中,有41例肝癌组织GCF2选择性剪接区D5呈阳性表达,阳性表达率为95.35％ （41/43）,而9例正常肝组织均未检测到GCF2选择性剪接区D5表达.结论：GCF2 D5选择性剪接区在肝癌组织中有较高阳性表达,GCF2选择性剪接区D5可能与肝癌的发生发展有关.

GCF2基因片段原核表达载体的构建与鉴定

目的构建肝癌相关抗原GCF2基因片断(323～1 234 bp)原核表达重组质粒。方法提取人肝癌组织总RNA,通过反转录酶合成cDNA;根据GenBank公布的GCF2基因cDNA序列设计引物,利用RT-PCR法扩增出人GCF2基因片断(编号2-5a),将此片段连接在克隆载体pGEM-T上进行测序,通过酶切、连接将目的片断重组到原核表达载体pET-30a上。结果酶切电泳鉴定结果显示GCF2基因同源片段克隆入载体中,测序结果证实克隆的基因序列与GenBank中GCF2基因相应序列完全相符。结论获得了含人GCF2基因同源片段重组原核表达质粒pET-30a/GCF2-5a,为进一步表达和纯化GCF2基因片段重组蛋白奠定了基础。

RNA干扰GCF2基因沉默对人肝癌BEL-7404细胞侵袭能力的影响

目的探讨沉默GCF2基因表达对人肝癌BEL-7404细胞侵袭能力的影响。方法实验分为GCF2-siRNA组、NC-siRNA组及MOCK组,GCF2-siRNA组转染靶向GCF2基因的RNA干扰序列GCF2-siRNA,阴性对照组转染阴性对照序列NC-siRNA,MOCK组不转染任何序列。将靶向GCF2基因的RNA干扰序列(GCF2-siRNA)瞬时转染BEL-7404细胞以沉默GCF2表达,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,体外侵袭实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测基质金属蛋白酶(MMP)-9及GCF2靶基因MMP-23蛋白表达。结果转染GCF2-siRNA使GCF2表达下调,后者导致BEL-7404增殖受阻;GCF2-siRNA组的穿膜细胞数较阴性对照组(NC-siRNA)及未转染组(MOCK)明显减少(穿膜细胞数分别为41.5±0.95、61.3±1.57、64.5±1.65,P<0.05);MMP-9和MMP-23蛋白表达较两个对照组明显下降(P<0.05)。结论下调GCF2表达能抑制BEL-7404侵袭能力,提示GCF2促进肝癌细胞的侵袭可能是其参与肝癌发展进程的重要途径。

GCF2/LRRFIP1的生物学功能及其在肿瘤中的作用

综述了GCF2的生物学功能,其通过转录抑制、信号转导及细胞骨架重塑等方式参与细胞增殖、侵袭、转移和耐药等生物学进程,与包括肿瘤在内的多种疾病密切相关;应加强GCF2作为肿瘤诊断和治疗靶点的相关研究,这对于加强人们对肿瘤发病机制的认识及提高肿瘤防治十分有益。

转录抑制因子GCF2促进肝癌细胞BEL-7404迁移相关靶基因的初步鉴定

GCF2是转录抑制因子,为了研究GCF2蛋白在肝癌细胞BEL-7404迁移中的作用,并根据芯片结果验证GCF2调控参与迁移的靶基因,我们采用siR NA沉默GCF2蛋白表达,然后通过transwell实验检测GCF2沉默前后BEL-7404细胞迁移的变化,最后荧光定量RT-PCR和Western blot验证芯片结果中与迁移相关基因的表达。研究结果显示siR NA干扰GCF2成功后进行迁移实验,si RNA-GCF2组,FAM-siR NA-NC组,脂质体组,和未处理野生型BEL-7404组24 h后细胞穿过8滋m微孔滤膜的数目(x±s)分别为41.66±1.52、41.66±1.15、41.33±1.5、18.66±0.577,差异均有统计学意义(p约0.01)。QRT-PCR验证9个候选基因中,MyD 88在si RNA-GCF2组内表达显著高于其余三组(p约0.05)。Western blot检测siR NA干扰GCF2后肝癌细胞BEL-7404的MyD 88的蛋白表达显著高于其余三组(p约0.05)。结果表明si RNA沉默转录因子GCF2蛋白表达可抑制肿瘤细胞BEL-7404迁移,推测GCF2作为转录因子可能通过抑制靶基因MyD 88的表达参与细胞的迁移。

GC结合因子2在肝细胞癌中的表达和意义

目的:探讨转录因子GC结合因子2(GC binding factor 2,GCF2)蛋白的表达与肝细胞癌的关系。方法:用免疫组化方法检测21例正常肝组织,58例肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)及其对应癌旁组织(n=58)中GCF2的表达情况。结果:GCF2在HCC组织中的阳性表达率(31.0%,18/58)显著低于癌旁(84.5%,49/58)和正常肝组织(90.5%,19/21)(P<0.05),GCF2在HCC组织中的表达量亦显著低于癌旁和正常肝组织(P<0.05);GCF2的阳性表达与HCC患者的性别、年龄、肿瘤大小、临床分期、有无肝硬化基础、AFP及HBsAg情况之间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:GCF2在HCC中的表达下降与HCC的发生可能有一定关系。

德国气候预测系统中东亚冬季风的季节预测及可预报性

东亚冬季风(EAWM)作为北半球冬季最强的中纬度环流系统之一,主导着东亚的冬季气候。因此,开展东亚冬季风季节预测和可预报性研究具有十分重要的意义。本研究使用德国气候预测系统(German Climate Forecast System,简称GCFS2)输出的回报数据(1993~2016年)对EAWM的预测性能进行全面评估。GCFS2很好地预测了EAWM气候态的主要特征,包括西伯利亚高压、阿留申低压、东亚大槽、东亚高空急流及东亚上空的地表气温和降水,并可以熟练地预测东亚大槽及东亚地表气温的年际变化。GCFS2对一个海平面气压定义的EAWM指数(EAWMI)显示出了预测技巧,同时可以很好地预测与EAWM相关的位于海洋上的大气环流、地表气温及降水异常。GCFS2中EAWM的预测技巧主要得益于对观测中的EAWM–ENSO关系及ENSO遥相关的成功再现,模式中增强的EAWM–ENSO[强于观测,观测中整个24年(1993~2016)EAWM与ENSO的相关系数为-0.46]关系,有助于提前2个月或更长时间预测EAWM。GCFS2中12月初始化的EAWMI在去除ENSO信号后仍有0.42的预测技巧,说明有另一预测源,为冬季巴伦支—喀拉海区域海冰覆盖度(BK_SIC)。观测中BK_SIC减少,增强西伯利亚高压,EAWM从而增强;模式中BK_SIC的变化可以增加西伯利亚高压东北部的可预测性,使得12月初始化的EAWM预测技巧增加。