利用酵母双杂交技术筛选草鱼Ⅲ型呼肠孤病毒VP6和VP38相互作用蛋白的研究

为探究草鱼Ⅲ型呼肠孤病毒VP6和VP38蛋白的生物学功能,利用酵母双杂交Gal4系统分别筛选了能与GCRV104毒株编码的VP6和VP38相互作用的宿主蛋白。利用RT-PCR从感染GCRV104的草鱼肾脏细胞中扩增GCRV104 s8和s10基因组片段的编码基因后,通过酶切与连接分别克隆至载体p GBKT7中,构建诱饵质粒p GBKT7-VP6和p GBKT7-VP38。对这些重组质粒进行细胞毒性和自激活检测后,分别以VP6和VP38为诱饵在草鱼酵母文库中筛选与其相互作用的宿主蛋白,对筛选得到的阳性酵母菌落进行序列分析。结果表明,两个诱饵质粒p GBKT7-VP6和p GBKT7-VP38均无自激活作用;诱饵质粒p GBKT7-VP6筛选到7株阳性克隆,分别编码β肌动蛋白、augmin样复合体亚基2、甘露糖苷酶α2b1亚基、程序性细胞死亡蛋白6、真核翻译延长因子1γ和一个未知功能蛋白;诱饵质粒p GBKT7-VP38筛选到4株阳性克隆,分别编码剪切与多聚腺苷酸化特异性因子5、高迁移率组蛋白核小体结合结构域2、葡萄糖转运体X和蛋白酶体亚基β7。结果为进一步探究GCRV104毒株编码的VP6、VP38与宿主蛋白及其涉及的信号通路的相互作用奠定了基础。