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柠条GDP-甘露糖-3′,5′-异构酶基因的克隆、序列分析及其植物表达载体的构建 被引量:8
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作者 王美珍 王学敏 +2 位作者 王赞 高洪文 刘磊 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2009年第5期75-83,共9页
L-抗坏血酸是一种抗氧化剂,能够保护植物免受活性氧的伤害,GDP-甘露糖-3′,5′-异构酶基因(GME)是L-抗坏血酸合成途径中的关键基因。根据其他植物GME的氨基酸保守序列设计简并引物,通过RT-PCR结合RACE扩增技术,从柠条叶片中克隆了1个编... L-抗坏血酸是一种抗氧化剂,能够保护植物免受活性氧的伤害,GDP-甘露糖-3′,5′-异构酶基因(GME)是L-抗坏血酸合成途径中的关键基因。根据其他植物GME的氨基酸保守序列设计简并引物,通过RT-PCR结合RACE扩增技术,从柠条叶片中克隆了1个编码GME的基因,命名为CkGME,Genebank登录号为FJ603689。基因全长1604bp,开放阅读框1134bp,编码377个氨基酸,氨基酸同源性比对分析表明,该基因编码的氨基酸与其他植物GME基因具有较高的同源性。进化树分析表明,该基因编码的氨基酸序列与豆科植物大豆和截型苜蓿的亲缘关系最近,与十字花科植物拟南芥的亲缘关系次之,与禾本科植物水稻和玉米的亲缘关系较远。利用4℃和GA3处理不同时间的柠条植株进行半定量RT-PCR分析结果表明,该基因在4℃处理不同时间后表达量没有明显变化,在GA3处理不同时间后表达量显著下降。利用pCAMBIA-1300质粒构建含35S启动子的正义表达载体,酶切图谱和PCR检测结果证明该表达载体构建成功。 展开更多
关键词 克隆 gdp-甘露糖-3’ 5’-异构酶 柠条 序列分析
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高山被孢霉GDP-L-岩藻糖合成途径中GDP-甘露糖-4,6-脱水酶的克隆、表达和功能鉴定 被引量:4
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作者 王鸿超 张陈 +5 位作者 周昕 陈海琴 顾震南 张灏 陈卫 陈永泉 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期14-19,共6页
GDP-L-岩藻糖是糖复合物生物合成和糖类代谢的重要中间产物,作为岩藻糖转移酶的供体参与岩藻糖基化反应,具有重要的生理功能。高山被孢霉是重要的产油真菌,是唯一在分子水平上证明可合成GDP-L-岩藻糖的真菌。GDP-L-岩藻糖从头合成途径中... GDP-L-岩藻糖是糖复合物生物合成和糖类代谢的重要中间产物,作为岩藻糖转移酶的供体参与岩藻糖基化反应,具有重要的生理功能。高山被孢霉是重要的产油真菌,是唯一在分子水平上证明可合成GDP-L-岩藻糖的真菌。GDP-L-岩藻糖从头合成途径中的GDP-甘露糖-4,6-脱水酶(GMD)能催化GDP-D-甘露糖合成GDP-4-酮基-6-脱氧-D-甘露糖。对高山被孢霉中的GMD基因进行克隆、表达和功能鉴定,可进一步阐明GDP-L-岩藻糖体内代谢的分子生物机制。首先对GMD序列进行分析,并以p ET28a+质粒为骨架构建了GMD的表达载体,然后转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达。进一步利用Ni金属螯合层析纯化目的蛋白,采用液相色谱-质谱法分析酶反应产物,表明纯化蛋白具有GMD活性。最后对高山被孢霉进行发酵培养,发现GDP-L-岩藻糖产量在氮源耗尽后较高,可达0.10 mg/g。同时GMD的转录水平在氮源耗尽后发生了明显的上调,表明GMD在氮源耗尽后对高山被孢霉体内GDP-L-岩藻糖的合成具有重要作用。这为进一步利用高山被孢霉发酵生产GDP-L-岩藻糖和酶法转化生产GDP-L-岩藻糖奠定了理论基础。 展开更多
关键词 功能鉴定 从头合成途径 gdp-甘露糖-4 6-脱水酶 gdp-L-岩藻 高山被孢霉
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茶树GDP-甘露糖-3′,5′-异构酶基因cDNA全长的克隆与表达 被引量:2
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作者 李佼 余有本 +3 位作者 周天山 肖瑶 柳洁 肖斌 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2013年第12期100-106,共7页
【目的】对茶树GDP-甘露糖-3′,5′-异构酶(GDP-Mannose-3′,5′-epimerase,GME)基因cDNA全长进行克隆分析及原核表达。【方法】以茶树品种"乌牛早"叶片的cDNA为模板,用RT-PCR和RACE技术克隆GME,并对其进行生物信息学分析。利... 【目的】对茶树GDP-甘露糖-3′,5′-异构酶(GDP-Mannose-3′,5′-epimerase,GME)基因cDNA全长进行克隆分析及原核表达。【方法】以茶树品种"乌牛早"叶片的cDNA为模板,用RT-PCR和RACE技术克隆GME,并对其进行生物信息学分析。利用pETiteTM N-His SUMO Vector构建GME原核表达载体pET-GME,在大肠杆菌HI-Control BL21(DE3)中进行原核诱导表达。采摘同一茶树嫩茎、芽、叶片以及不同品种茶树叶片样品,提取其RNA,反转录合成cDNA后,通过荧光定量PCR分析GME在不同茶树组织和品种中的表达谱。【结果】克隆获得了长度为1 427bp的GMEcDNA全长序列,其包含长度为1 131bp的开放阅读框,编码376个氨基酸。构建了GME原核表达载体pETGME,其在大肠杆菌HI-Control BL21(DE3)中能诱导表达分子质量约60ku的融合蛋白。荧光定量PCR结果显示,GME基因在芽中的表达量最高,在嫩茎中的表达量最低,在叶片中的表达量随成熟度的增加而逐渐降低;在不同茶树品种之间的表达也存在明显差异。【结论】从茶树叶片中克隆得到了GMEcDNA全长序列,并成功对其进行了原核表达。 展开更多
关键词 茶树 gdp-甘露糖-3′ 5′-异构酶 荧光定量PCR 原核表达 SUMO表达系统
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拟南芥GDP-甘露糖焦磷酸化酶基因转化生菜的研究 被引量:5
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作者 王维鹏 郭新波 唐克轩 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2011年第2期43-49,共7页
维生素C是植物体内重要的抗氧化物质,同时也是人体所必需的营养物质。为了提高生菜中维生素C的含量,根据GenBank中拟南芥GDP-甘露糖焦磷酸化酶基因(GMP)序列设计特异引物,从拟南芥cDNA中扩增出了GMP基因编码区片段,分别连上CaMV 35S启... 维生素C是植物体内重要的抗氧化物质,同时也是人体所必需的营养物质。为了提高生菜中维生素C的含量,根据GenBank中拟南芥GDP-甘露糖焦磷酸化酶基因(GMP)序列设计特异引物,从拟南芥cDNA中扩增出了GMP基因编码区片段,分别连上CaMV 35S启动子、MYC序列和NOS终止子后将含GMP基因的表达盒插入到植物表达载体pCAMBIA2301中,获得含有GMP基因的植物表达载体p2301-GMP-myc。通过农杆菌介导法转化生菜,获得了64株转基因植株,PCR检测以及荧光定量PCR分析证实外源基因已被成功导入生菜基因组中并表达。采用HPLC-ELSD测定转基因生菜中维生素C的含量。结果表明,大多数转基因生菜中维生素C的含量高于对照植株。转基因生菜中维生素C含量最高的约为对照的2.5倍。该研究证明过量表达GMP基因是提高生菜中维生素C含量的有效方法。 展开更多
关键词 维生素C 生菜 gdp-甘露糖焦磷酸化酶基因
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棉花GDP-甘露糖-3',5'-异构酶基因的克隆及其表达分析 被引量:3
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作者 王江英 张宁 +1 位作者 司怀军 吴家和 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第1期12-17,共6页
根据棉花盐胁迫相关的EST序列设计特异性引物,利用3',5'-RACE技术,从棉花叶片中克隆出GDP-甘露糖-3',5'-异构酶(GDP-mannose-3',5'-epimerase,GME)基因,命名为GhGME。基因全长1 467 bp,开放阅读框1 131 bp,编码... 根据棉花盐胁迫相关的EST序列设计特异性引物,利用3',5'-RACE技术,从棉花叶片中克隆出GDP-甘露糖-3',5'-异构酶(GDP-mannose-3',5'-epimerase,GME)基因,命名为GhGME。基因全长1 467 bp,开放阅读框1 131 bp,编码376个氨基酸,分子量为42.39 6 kDa,等电点pI=6.291。利用荧光定量Real-time RT-PCR方法对棉花根、茎、叶和3种处理下该基因的表达特性进行分析,结果表明,GhGME在根、茎中高水平表达,在叶中表达量较低。在4℃低温和200 mmol/L NaCl处理下该基因表达上调,然而用100μmol/L GA3处理则表现为下调表达。GhGME的不同表达情况暗示该基因可能在棉花抗逆反应中起着重要的作用,为该基因在棉花中抗逆功能和应用研究提供了基础。 展开更多
关键词 棉花 基因克隆 gdp-甘露糖-3' 5'-异构酶 表达分析
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番茄叶片GDP-甘露糖焦磷酸化酶基因表达载体的构建与转化 被引量:1
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作者 吴海琴 赵瑛 +1 位作者 符庆功 王华森 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期154-156,177,共4页
GDP-甘露糖焦磷酸化酶(GMPase,EC 2.7.7.22)是维生素C合成途径的第一步关键酶。通过RT-PCR扩增到1498 bp的GMPase全长序列,GenBank登录号为DQ449030。利用克隆到的基因分别构建得到正义及反义植物表达载体。并将其克隆至PBI121真核表达... GDP-甘露糖焦磷酸化酶(GMPase,EC 2.7.7.22)是维生素C合成途径的第一步关键酶。通过RT-PCR扩增到1498 bp的GMPase全长序列,GenBank登录号为DQ449030。利用克隆到的基因分别构建得到正义及反义植物表达载体。并将其克隆至PBI121真核表达载体,转化农杆菌LBA4404,利用农杆菌介导法转化烟草植株,经基因组PCR及琼脂糖凝胶电泳检测,结果表明GMPase真核表达载体构建成功,并成功获得转基因植株。 展开更多
关键词 番茄 gdp-甘露糖焦磷酸化酶基因(GMPase) ASA 表达载体
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发菜中GDP-甘露糖4,6-脱水酶基因的克隆及原核表达 被引量:5
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作者 蔡国强 陈雪峰 +2 位作者 范华 刘欢 赵圆圆 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期31-36,共6页
前期采用RNA-Seq技术对高盐胁迫下的发菜样品进行转录组测序,发现GDP-甘露糖4,6-脱水酶基因转录水平较正常培养条件上调2.18倍。基于转录组测序结果,通过同源相比对分析设计引物,以发菜基因组为模板克隆GDP-甘露糖4,6-脱水酶基因,获得... 前期采用RNA-Seq技术对高盐胁迫下的发菜样品进行转录组测序,发现GDP-甘露糖4,6-脱水酶基因转录水平较正常培养条件上调2.18倍。基于转录组测序结果,通过同源相比对分析设计引物,以发菜基因组为模板克隆GDP-甘露糖4,6-脱水酶基因,获得长度为1 080 bp的核酸序列。通过生物信息学分析表明,该基因具有较高保守性,蛋白质二级结构主要构成方式为随机卷曲和α螺旋,是亲水性蛋白,酪氨酸、苏氨酸、丝氨酸磷酸化位点个数分别为13、15、17,蛋白质分子质量为41.08 ku,等电点为5.73。正负电荷氨基酸残基数分别为38和46。随后,将该基因插入质粒p ET-28a中成功构建重组表达质粒,然后转化至BL21大肠杆菌感受态中进行原核表达。在OD值为0.8时,用1 mmol/L IPTG在16℃下诱导表达20 h后,获得预期大小重组蛋白(41.08 ku)。该研究首次成功克隆得到发菜GDP-甘露糖4,6-脱水酶基因,并成功构建重组表达质粒于大肠杆菌高效表达。 展开更多
关键词 发菜 盐胁迫 gdp-甘露糖 4 6-脱水酶基因 克隆 原核表达
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魔芋GDP-甘露糖焦磷酸化酶基因及其启动子的克隆与分析 被引量:4
8
作者 李鹏佳 焦茂娟 +1 位作者 王启军 苏承刚 《西南大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期14-22,共9页
以花魔芋和白魔芋为材料,通过魔芋5个转录组高通量测序数据库,与拟南芥进行tBlastn比对、拼接,得到魔芋中的GDP-甘露糖焦磷酸化酶基因GMP的推定全长,设计基因特异性引物,克隆得到魔芋GMP基因的部分cDNA序列,长度为1 233 bp,其中基因编... 以花魔芋和白魔芋为材料,通过魔芋5个转录组高通量测序数据库,与拟南芥进行tBlastn比对、拼接,得到魔芋中的GDP-甘露糖焦磷酸化酶基因GMP的推定全长,设计基因特异性引物,克隆得到魔芋GMP基因的部分cDNA序列,长度为1 233 bp,其中基因编码区长度为1 086 bp,编码的氨基酸为361个.在此基础上运用FNPI-PCR技术得到了魔芋GDP-甘露糖焦磷酸化酶基因GMP上游启动子2 116 bp,经生物信息学分析,该序列具有典型的TATA-box、 CAAT-box及与胁迫相关的元件和光应答元件. 展开更多
关键词 魔芋 gdp-甘露糖焦磷酸化酶 启动子克隆与功能分析
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多花黄精果糖激酶和GDP-甘露糖焦磷酸化酶的基因克隆及酶结构性质 被引量:2
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作者 赵历强 赵德蕊 +3 位作者 单春苗 张声祥 施圆圆 吴家文 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期1-6,共6页
多花黄精(Polygonatum cyrtonema Hua,PC)果糖激酶(PCFRK)和GDP-甘露糖焦磷酸化酶(PCGMPP)是黄精多糖生物合成中重要的关键酶,为探究它们在黄精多糖生物合成途径中的作用,基于转录组测序数据分析,利用RT-PCR技术对这两种关键酶基因进行... 多花黄精(Polygonatum cyrtonema Hua,PC)果糖激酶(PCFRK)和GDP-甘露糖焦磷酸化酶(PCGMPP)是黄精多糖生物合成中重要的关键酶,为探究它们在黄精多糖生物合成途径中的作用,基于转录组测序数据分析,利用RT-PCR技术对这两种关键酶基因进行克隆,并分析酶蛋白的理化性质及结构特点。PCFRK开放读码框(ORF)为1725 bp,编码574个氨基酸,具有两个磷酸果糖激酶B家族的特征保守基序;PCGMPP的ORF为1086 bp,编码361个氨基酸,具有焦磷酸化酶家族的保守位点和活性位点。系统进化树分析发现在已知数据库中PC FRK与深圳拟兰FRK亲缘关系最近;而PC GMPP与芦笋GMPP亲缘关系最近。基因表达分析说明PCFRK和PCGMPP在根状茎中的基因表达总量明显高于其他组织,这与多花黄精根茎中多糖含量高于其他组织是一致的。研究为PCFRK和PCGMPP两种关键酶功能的进一步研究及黄精多糖生物合成途径的解析奠定基础。 展开更多
关键词 多花黄精 基因克隆 激酶 gdp-甘露糖焦磷酸化酶 生物信息学分析
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超表达番茄GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶基因马铃薯对温度胁迫的响应 被引量:4
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作者 李超汉 李青竹 +4 位作者 史庆华 白龙强 郭晓青 李霞 于贤昌 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第23期4952-4961,共10页
【目的】研究番茄GDP-甘露糖焦磷酸化酶基因(GMPase)在马铃薯中的超表达对其抵御温度胁迫能力的影响。【方法】利用已经获得的超表达番茄GMPase的两个转基因马铃薯株系,用野生型马铃薯作对照,比较其在常温(25/20℃)、温度胁迫(10/5℃低... 【目的】研究番茄GDP-甘露糖焦磷酸化酶基因(GMPase)在马铃薯中的超表达对其抵御温度胁迫能力的影响。【方法】利用已经获得的超表达番茄GMPase的两个转基因马铃薯株系,用野生型马铃薯作对照,比较其在常温(25/20℃)、温度胁迫(10/5℃低温处理3 d,35/30℃高温处理3 d)及25/20℃恢复3 d后GMPase的相对表达量、抗坏血酸(AsA)含量及其相关生理指标的变化。【结果】在常温、温度胁迫与恢复阶段,与野生型植株相比,转基因马铃薯植株具有较高的GMPase相对表达量、GMPase活性、AsA和脱氢抗坏血酸(DHA)含量;高温和低温胁迫后,转基因马铃薯的脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)、单脱氢抗坏血酸还原酶(MDAHR)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性均明显提高,丙二醛(MDA)和H2O2含量及细胞质膜透性均明显降低。【结论】番茄GMPase在马铃薯中的超表达可能有提高马铃薯植株抵御温度胁迫的能力。 展开更多
关键词 马铃薯 抗坏血酸 gdp-甘露糖焦磷酸化酶 转基因 温度胁迫
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白及PMM基因cDNA序列克隆及甘露糖合成相关基因的表达特性分析 被引量:4
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作者 许娟 石云平 +5 位作者 苏祖祥 林茜 李小泉 韦绍龙 桂杰 胡一凤 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1913-1921,共9页
【目的】克隆白及磷酸甘露糖变位酶(PMM)基因(BsPMM)cDNA序列,并检测甘露糖合成相关基因的表达特性,为研究甘露糖合成相关基因的调控功能及白及多糖合成机制提供理论依据。【方法】采用RT-PCR克隆BsPMM基因cDNA序列,对其进行生物信息学... 【目的】克隆白及磷酸甘露糖变位酶(PMM)基因(BsPMM)cDNA序列,并检测甘露糖合成相关基因的表达特性,为研究甘露糖合成相关基因的调控功能及白及多糖合成机制提供理论依据。【方法】采用RT-PCR克隆BsPMM基因cDNA序列,对其进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测BsPMM和GDP-甘露糖焦磷酸化酶基因(BsGMP)在不同品种(桂及1号和桂及2号)、生育期(苗期、生长旺期和成熟期)和组织(叶片、茎、假鳞茎和根)中的表达特性,同时测定不同生育期假鳞茎的多糖和甘露糖含量。【结果】克隆获得的BsPMM基因cDNA全长1062bp,包含一个759bp的开放阅读框(ORF),编码252个氨基酸,该基因编码的蛋白BsPMM定位于细胞质,含一个从细胞内部到外部的跨膜螺旋区;不稳定系数为41.67,为不稳定蛋白;总平均疏水指数为-0.304,为亲水性蛋白,含植物PMM蛋白特有的4个保守结构域,属于HAD超家族成员。BsPMM蛋白与单子叶植物尤其是兰科植物铁皮石斛和蝴蝶兰PMM蛋白的亲缘关系较近,与罂粟、葡萄和芦笋等双子叶植物PMM的亲缘关系较远。BsPMM和BsGMP基因在不同品种、组织和生育期均有表达,且二者在假鳞茎中表达量显著高于其他组织(P<0.05),区别在于桂及1号在生长旺期的表达量最高,而桂及2号在苗期的表达量最高。桂及1号和桂及2号假鳞茎中甘露糖含量和多糖含量均随生育期推移呈逐渐升高的变化趋势。【结论】BsPMM和BsGMP基因表达具有时空、组织和品种特异性,可能是调控多糖合成代谢途径中的关键基因,参与白及甘露糖和多糖的合成。 展开更多
关键词 白及 甘露 磷酸甘露变位酶(PMM) gdp-甘露糖焦磷酸化酶基因(GMP) 表达特性
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过表达GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶(GMP)基因提高灵芝多糖的生产 被引量:10
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作者 赵丽娜 徐军伟 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期1099-1109,共11页
灵芝多糖是灵芝的主要生物活性成分之一,具有多种药理活性,但灵芝多糖的低产量限制了其广泛应用。相关研究表明,灵芝中过表达多糖生物合成相关基因能够提高多糖产量,但过表达GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶(GMP)基因提高灵芝多糖产量未有报道... 灵芝多糖是灵芝的主要生物活性成分之一,具有多种药理活性,但灵芝多糖的低产量限制了其广泛应用。相关研究表明,灵芝中过表达多糖生物合成相关基因能够提高多糖产量,但过表达GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶(GMP)基因提高灵芝多糖产量未有报道。本研究克隆获得了灵芝gmp基因,并成功构建出了过表达gmp基因的工程菌株(GMP菌株),同时对野生型菌株(WT)和GMP菌株的胞内多糖(IPS)、胞外多糖(EPS)产量以及GDP-甘露糖合成相关基因甘露糖磷酸变位酶1(PMM1)基因及甘露糖磷酸变位酶2(PMM2)基因的表达水平进行了检测。研究结果表明,在悬浮发酵培养条件下,灵芝中gmp基因的过表达增加了灵芝多糖的积累。与WT菌株相比,GMP菌株的EPS以及IPS的含量最高达到了0.991g/L和21.59mg/100mg干重,比WT菌株分别提高了21.1%和19.5%。gmp基因的过表达也提高了基因pmm1和pmm2的表达。与WT菌株相比,GMP菌株中pmm1以及pmm2基因的表达水平分别上调了2.87倍和2.55倍。研究结果表明,过表达gmp基因是一种提高灵芝多糖产量的有效方法,并且过表达gmp基因提高了灵芝多糖的合成及pmm1和pmm2基因的表达。 展开更多
关键词 灵芝 过表达 gdp-D-甘露焦磷酸化酶 gdp-甘露糖 gmp基因
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苹果GMP、GME和GGP基因的克隆与表达分析 被引量:1
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作者 夏惠 张敏 马锋旺 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2014年第3期191-196,共6页
【目的】克隆苹果GDP-甘露糖焦磷酸化酶(GDP-mannose pyrophosphorylase,GMP)、GDP-甘露糖-3′,5′-表异构酶(GDP-mannose-3′,5′-epimerase,GME)和GDP-1-半乳糖磷酸酶(GDP-L-galactose-1-phosphate phosphorylase,GGP)的基因序列并分... 【目的】克隆苹果GDP-甘露糖焦磷酸化酶(GDP-mannose pyrophosphorylase,GMP)、GDP-甘露糖-3′,5′-表异构酶(GDP-mannose-3′,5′-epimerase,GME)和GDP-1-半乳糖磷酸酶(GDP-L-galactose-1-phosphate phosphorylase,GGP)的基因序列并分析其表达特性,探讨GMP、GME和GGP基因在抗坏血酸(Ascorbic acid,AsA)合成过程中的作用。【方法】以‘嘎啦’苹果幼果为材料,分别运用RT-PCR和PCR法克隆GMP、GME和GGP基因的cDNA和gDNA全长序列,对其序列及编码产物进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR,分析以上基因在苹果不同组织(幼叶、成熟叶、衰老叶、花、幼果、成熟果和根)中的表达情况。【结果】RT-PCR法克隆及序列分析显示,GMP基因的cDNA全长为1 280bp,编码361个氨基酸,gDNA序列中含有3个内含子;GME基因的cDNA全长为1 323bp,编码376个氨基酸,gDNA序列中含有5个内含子;GGP基因的cDNA全长为1 677bp,编码446个氨基酸,gDNA序列中含有6个内含子。基因表达的实时荧光定量PCR分析表明,GMP、GME和GGP在苹果不同组织中均有表达,在叶片中的表达量高于其他组织,且表达量随着叶片的生长逐渐升高;在花、幼果和成熟果中,GMP、GME和GGP的表达量差异不明显。【结论】克隆获得了苹果的GMP、GME和GGP基因,其在苹果不同组织的生长过程中有不同的表达特性,但GME的表达水平远远低于GMP和GGP,这在一定程度上表明,在苹果AsA的生物合成过程中,GMP、GGP较GME有更重要的作用。 展开更多
关键词 苹果 gdp-甘露糖焦磷酸化酶 gdp-甘露糖-3′ 5′-表异构酶 gdp-1-半乳磷酸酶 抗坏血酸
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陆地棉纤维中GhGMPase2基因克隆、序列分析及原核表达
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作者 赛富涛 禄亚洲 +2 位作者 王斐 钱雯婕 李鸿彬 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期49-55,共7页
从陆地棉纤维中克隆GDP-甘露糖焦磷酸化酶(GhGMPase2)基因,并进行序列分析及原核表达。利用RT-PCR技术进行基因克隆,构建原核表达载体pET28a-GhGMPase2并转化大肠杆菌BL21(DE3)进行蛋白体外诱导表达,通过SDS-PAGE检测目的蛋白的表达。... 从陆地棉纤维中克隆GDP-甘露糖焦磷酸化酶(GhGMPase2)基因,并进行序列分析及原核表达。利用RT-PCR技术进行基因克隆,构建原核表达载体pET28a-GhGMPase2并转化大肠杆菌BL21(DE3)进行蛋白体外诱导表达,通过SDS-PAGE检测目的蛋白的表达。研究结果表明,从陆地棉花纤维中克隆得到棉GhGMPase2基因,该基因的开放读码框为1 086bp,编码包含362个氨基酸的蛋白质,分子质量约为40ku。序列分析结果表明,GhGMPase2蛋白具有较高的保守性,具有典型的糖酰基转移酶转移酶A家族(GT-A)结构域和左手平行的β-的螺旋(LbetaH或LBH)域,它们分别属于糖酰基转移酶家族2(GT-2)超家族和LBH超家族。进化树分析的结果显示,棉花GhGMPase2与烟草NtGMPase在进化上亲缘关系较近。经过原核表达载体pET28a-GhGMPase2的诱导表达和SDS-PAGE分析显示,获得分子质量约为40ku的重组GhGMPase2蛋白。GMPase2基因的克隆、序列分析及原核表达为进一步研究其参与棉花纤维发育过程中的重要功能奠定基础。 展开更多
关键词 棉花纤维 gdp-甘露糖焦磷酸化酶基因 克隆 原核表达
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坛紫菜PhGME基因克隆及差异表达分析
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作者 魏鹏华 王文磊 +4 位作者 许凯 徐燕 纪德华 谢潮添 陈昌生 《集美大学学报(自然科学版)》 CAS 2022年第2期97-106,共10页
GDP-甘露糖-3,5-表异构酶(GME)是抗坏血酸合成过程中的关键限速酶。以坛紫菜(Pyropia haitanensis)转录组测序获得的unigene序列为基础,采用普通PCR技术克隆获得了坛紫菜编码GME的基因序列PhGME。序列分析结果表明,PhGME基因序列全长141... GDP-甘露糖-3,5-表异构酶(GME)是抗坏血酸合成过程中的关键限速酶。以坛紫菜(Pyropia haitanensis)转录组测序获得的unigene序列为基础,采用普通PCR技术克隆获得了坛紫菜编码GME的基因序列PhGME。序列分析结果表明,PhGME基因序列全长1411 bp,包含一个1260 bp的开放阅读框,所编码的多肽包含419个氨基酸,相对分子质量为46.46 ku,理论等电点为6.76,具有GME特有的底物结合位点。多序列比对和系统进化树分析结果显示,PhGME与角叉菜同源且关系较近。差异表达分析结果表明,随着高盐胁迫时间的增加,TK品系处理组坛紫菜PhGME基因的表达水平均显著高于对照组,同时TK品系的AsA含量在胁迫处理6 h后明显增加。由此推测该基因的上调表达可能有助于抗坏血酸的合成,进而调控藻体抵抗盐胁迫。以上结果说明,PhGME在坛紫菜应对盐胁迫过程中发挥着重要作用,为坛紫菜抗逆功能的研究提供了理论参考。 展开更多
关键词 坛紫菜 gdp-甘露糖-3 5-表异构酶 基因克隆 抗坏血酸 盐胁迫
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霍山石斛DhGMDS基因克隆及低温胁迫下表达 被引量:1
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作者 吴丽萍 苏兴隆 +3 位作者 王兆健 俞年军 彭代银 邢世海 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期221-228,共8页
基于霍山石斛转录组数据库,利用染色体步移技术,克隆霍山石斛GDP-甘露糖4,6-脱水酶基因(DhGMDS)及其启动子,采用实时荧光定量PCR方法检测该基因的组织表达模式及低温处理下的表达,为进一步解析霍山石斛抗寒机制和遗传改良提供理论依据... 基于霍山石斛转录组数据库,利用染色体步移技术,克隆霍山石斛GDP-甘露糖4,6-脱水酶基因(DhGMDS)及其启动子,采用实时荧光定量PCR方法检测该基因的组织表达模式及低温处理下的表达,为进一步解析霍山石斛抗寒机制和遗传改良提供理论依据。结果表明:(1)成功克隆获得DhGMDS基因(GenBank登录号MW855573),其cDNA序列为1134 bp,gDNA序列为1523 bp,无内含子。(2)序列一致性分析显示,DhGMDS蛋白与黄花石斛(Dendrobium catenatum)的GMDS蛋白序列相似性达到99.03%;系统进化树分析表明,霍山石斛DhGMDS基因与黄花石斛GMDS基因处于同一进化节点上,二者亲缘关系近。(3)启动子序列分析发现,在DhGMDS基因上游启动子区含有光、低温、干旱和ABA响应元件,且具有MYB等转录因子识别和结合位点。(4)实时荧光定量PCR分析显示,DhGMDS基因在霍山石斛的花中表达量最高,其次为茎、叶,根中表达量最低;经4℃低温处理72 h后,DhGMDS基因受低温胁迫诱导上调表达,且在低温处理24 h的相对表达量最高,表明DhGMDS基因参与了植物逆境响应过程。研究推测,低温对DhGMDS基因的诱导表达可能依赖于上游MYB转录因子的调控。 展开更多
关键词 霍山石斛 gdp-甘露糖4 6-脱水酶 启动子 低温胁迫 基因表达
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药用植物质量标志物多糖生物合成通路及关键酶研究进展 被引量:7
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作者 李晓岗 张雪 +6 位作者 俞捷 王希付 代红洋 陈嘉伟 许均博 曹冠华 贺森 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2021年第15期4752-4762,共11页
多糖是众多药用植物中重要的质量标志物,在免疫调节、抗肿瘤等方面具有显著的药理作用。多糖是一类结构复杂、种类繁多、组合多样的生物大分子,其生物合成通路主要包括蔗糖转化、尿苷二磷酸葡萄糖(uridine diphosphate,UDP)-葡萄糖至其... 多糖是众多药用植物中重要的质量标志物,在免疫调节、抗肿瘤等方面具有显著的药理作用。多糖是一类结构复杂、种类繁多、组合多样的生物大分子,其生物合成通路主要包括蔗糖转化、尿苷二磷酸葡萄糖(uridine diphosphate,UDP)-葡萄糖至其他NDP单糖的转化、多糖聚合3个部分。在这一合成过程中涉及的关键酶主要包括蔗糖合成酶(sucrose synthase,SUS)、果糖-6磷酸酯在蔗糖磷酸合成酶(sucrose phosphate synthase,SPS)、蔗糖由转化酶(invertase,INV)、己糖激酶(hexokinase,HK)、果糖激酶(fructokinase,FRK)、UDP-葡萄糖脱氢酶(UGDH)、UDP-葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphorylase,UGPase)、UDP-鼠李糖合成酶(UDP-rhamnose synthase,RHM)、磷酸甘露糖突变酶(phosphomannose isomerase,PMM)、GDP-甘露糖焦磷酸化酶(GDP-mannose pyrophosphorylase,GMPP)、糖基转移酶(glycosyl transferases,GTs)等。选取以多糖为主要质量标志物的药用植物为探讨对象,对其多糖生物合成通路、关键酶作用机制及单糖组成进行归纳分析,并对研究中存在的问题和可能的解决思路进行了梳理和展望。对明确药用植物质量标志物多糖生物合成通路,了解关键酶作用机制具有一定的参考价值。 展开更多
关键词 药用植物 生物合成通路 合成酶 磷酸合成酶 转化酶 激酶 激酶 UDP-葡萄脱氢酶 UDP-葡萄焦磷酸化酶 UDP-葡萄-4 6-脱氢酶 磷酸甘露异构酶 gdp-甘露糖焦磷酸化酶 基转移酶
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Ammonium affects cell viability to inhibit root growth in Arabidopsis 被引量:3
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作者 Cheng QIN Ke-ke YI Ping WU 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2011年第6期477-484,共8页
Ammonium (NH4^+) is an important form of nitrogen nutrient for most plants, yet is also a stressor for many of them. However, the primary events of NH4^+ toxicity at the cellular level are still unclear. Here, we ... Ammonium (NH4^+) is an important form of nitrogen nutrient for most plants, yet is also a stressor for many of them. However, the primary events of NH4^+ toxicity at the cellular level are still unclear. Here, we showed that NH4^+ toxicity can induce the root cell death in a temporal pattern which primarily occurs in the cells of root maturation and elongation zones, and then spreads to the ceils in the meristem and root cap. The results from the NH4^+-hypersensitive mutant hsn1 further confirmed our findings. Taken together,NH4^+ toxicity inhibits primary root growth by inhibiting cell elongation and division and inducing root cell death. 展开更多
关键词 Ammonium toxicity Root Cell viability gdp-mannose pyrophosphorylase ARABIDOPSIS
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