微小RNA-148a-3p靶向核心1β13-半乳糖基转移酶1增强肺腺癌细胞的放疗敏感性的研究

目的探讨微小RNA-148a-3p(miR-148a-3p)在肺腺癌中的表达及临床意义,分析miR-148a-3p靶向蛋白核心1β13-半乳糖基转移酶1(C1GALT1)对肺腺癌细胞放疗敏感性的影响及机制。方法选取肺腺癌组织芯片中76例患者肿瘤组织及肺腺癌A549细胞株为研究对象。对组织芯片分别进行miR-148a-3p原位杂交(ISH)染色和C1GALT1免疫组织化学染色,分析76例肺腺癌患者肿瘤组织中miR-148a-3p的表达与临床病理、预后及C1GALT1表达的关系。采用细胞转染技术对A549细胞进行miR-148a-3p过表达质粒的转染;转染细胞接受2 Gy放疗后采用克隆形成实验检测细胞的放疗敏感性;采用蛋白质印迹法检测细胞C1GALT1蛋白表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-148a-3p与C1GALT1的靶向调控关系;采用共转染技术分析miR-148a-3p调控A549细胞放疗敏感性的机制。结果76例肺腺癌组织中低表达miR-148a-3p与患者淋巴结转移显著相关(P=0.012);miR-148a-3p高表达者预后显著优于miR-148a-3p低表达者(P=0.005);肺腺癌组织中miR-148a-3p与C1GALT1的表达呈显著负相关(P=0.023)。多因素分析显示,miR-148a-3p低表达、T分期及淋巴结转移是预后的独立危险因素。克隆形成实验显示,过表达miR-148a-3p组克隆形成数显著低于对照组(P<0.001);Western Blot结果显示,miR-148a-3p过表达可以显著下调细胞中C1GALT1蛋白水平(P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验显示miR-148a-3p通过结合C1GALT1的3′UTR来调控C1GALT1的表达。功能拯救试验显示C1GALT1能够部分抵消miR-148a-3p的放疗增敏效应。结论肺腺癌中miR-148a-3p低表达与淋巴结转移、C1GALT1高表达及预后不良显著相关,miR-148a-3p通过负调控C1GALT1的表达增强肺腺癌细胞的放疗敏感性。

β-1,3半乳糖基转移酶-1和β-1,3半乳糖基转移酶-2在乳腺癌中的表达及临床意义

目的检测β-1,3半乳糖基转移酶-1(β-1,3-galactosyltransferase-1,B3GALT1)和β-1,3半乳糖基转移酶-2(β-1,3-galactosyltransferase-1,B3GALT2)在乳腺癌组织及癌旁正常组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系,并分析其相关通路。方法选取乳腺癌及癌旁组织标本132例,采用Western Blot法和免疫组化方法检测B3GALT1和B3GALT2在乳腺癌及癌旁正常组织中的表达,分析其临床意义。通过基因集富集分析法探索相关通路。结果乳腺癌组织中B3GALT1和B3GALT2表达均低于癌旁正常组织(P<0.05),二者表达呈正相关(r=0.635,P<0.001),且两者表达阳性患者与阴性患者的T分期和Ki-67比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。B3GALT1和B3GALT2均富集于JAK-STAT通路和Notch通路。结论B3GALT1和B3GALT2在乳腺癌中低表达,与乳腺癌的增殖、生长密切相关。

枣L-半乳糖-1-磷酸磷酸酶cDNA克隆及生物信息学分析

枣果是抗坏血酸含量最高的果实之一,而L-半乳糖-1-磷酸磷酸酶(L-galactose-1-phosphate phosphatase,GPP)基因是抗坏血酸合成中的一个重要基因,至今未见该基因在枣中的相关报道。本研究根据GenBank中登录的苹果、桃和拟南芥等植物GPP保守序列设计引物,采用RT-PCR法,从‘金丝小枣’(Ziziphus jujuba‘Jinsixiaozao’)叶片中克隆出该基因并对其编码的蛋白进行了生物信息学分析。该基因包含完整的开放阅读框为813bp,编码270个氨基酸残基,预测分子量为29.083kDa,理论pI值为5.28,命名为ZjGPP(登录号KJ739593);进一步的生物信息学分析表明,该序列具有典型的肌醇单磷酸化酶结合区域,属于FIG家族蛋白;其氨基酸与其他植物GPP基因具有较高的同源性。进化树分析表明,该基因与桃、苹果和刺梨等蔷薇科植物的GPP亲缘关系较近。

苹果L-半乳糖-1-磷酸磷酸酶cDNA克隆及其表达

【目的】了解苹果果实L-半乳糖-1-磷酸磷酸酶(L-galactose-1-phosphate phosphatase,GPP)基因的特性,探索苹果GPP基因表达特性及其与抗坏血酸(ascorbic acid,AsA)水平的关系。【方法】通过RT-PCR从苹果果实中克隆GPP全长cDNA,分析其序列特征,进行原核表达,制备GPP特异抗体,分析GPP mRNA及其蛋白表达水平与苹果不同组织AsA的关系。【结果】从‘嘎啦’苹果果实中克隆的GPP cDNA(GenBank登录号为FJ752240)包含的最大开放阅读框(open reading frame,ORF)为813 bp,编码270个氨基酸残基,预测分子量为29 kD,该基因与其它植物报道的GPP基因具有较高的相似性,但与肌醇-1-磷酸磷酸酶基因差异较大。构建的pET-32a(+)-GPP载体在大肠杆菌BL21(E.coli BL21)中异源表达后,获得主要以包涵体存在约50 kD的融合蛋白GPP-His(His约21 kD)。以该蛋白制备抗体,与重组蛋白的Western杂交表明该抗体能与GPP发生特异反应。对苹果可溶性蛋白杂交显示,苹果体内GPP蛋白约33 kD。在苹果不同组织中,GPP mRNA与蛋白质的相对表达水平与AsA含量存在明显的一致性。【结论】以单体形式存在的苹果GPP蛋白具有翻译后修饰特性,且该基因的表达在苹果AsA合成调控中可能起重要作用。

血清半乳糖凝集素-1、凝集素-3水平与阿尔茨海默病临床特征相关性及其诊断价值研究

目的探讨血清半乳糖凝集素-1(Gal-1)、凝集素-3(Gal-3)水平与阿尔茨海默病(AD)患者认知功能及日常生活能力的相关性,以期为AD的临床诊疗提供循证依据。方法选择2021年1月至2023年1月该院收治入院62例AD患者列入观察组,同期选择56名健康志愿者为对照组,采用酶联免疫吸附法检测两组对象血清Gal-1、Gal-3水平。并运用简易智力状态检查量表(MMSE)、日常生活量表(ADL)评估其认知功能及日常生活能力。采用Pearson相关分析观察组血清Gal-1、Gal-3水平与MMSE、ADL评分的相关性;并绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析Gal-1、Gal-3在AD中的诊断效能。结果观察组血清Gal-1水平、MMSE、ADL评分低于对照组,Gal-3水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。Pearson相关分析显示:观察组MMSE、ADL评分与血清Gal-1水平均呈正相关(r=0.422、0.385,P<0.05),与血清Gal-3水平均呈负相关(r=-0.481、-0.356,P<0.05)。ROC曲线显示:Gal-1、Gal-3对AD的诊断效能较高,其ROC曲线下面积(AUC)分别为0.725、0.759,灵敏度分别为72.6%、75.8%,特异度分别为66.1%、62.5%,Gal-1、Gal-3两项标志物联合检测的AUC为0.826,灵敏度和特异度为82.3%、73.2%。结论AD患者血清Gal-1水平降低,Gal-3水平升高,这与其认知功能和日常生活能力密切相关。血清Gal-1、Gal-3有望成为临床辅助诊断AD的潜在生物标记物。

蛋白磷酸酶1在D-半乳糖诱导老化小鼠耳蜗中的表达

目的观察D-半乳糖诱导老化小鼠耳蜗中蛋白磷酸酶1(protein phosphatase 1,PP1)的定位表达及作用。方法 40只昆明小鼠随机分为对照组和D-半乳糖组,每组20只。D-半乳糖组颈背部皮下注射D-半乳糖(800mg·kg^(-1)·d^(-1)),对照组每日皮下注射等量生理盐水,连续给药8w;停药后检测血浆总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)水平;免疫荧光法定位PP1在耳蜗的表达,real-time PCR法检测耳蜗中PP1mRNA水平,Western blot法检测小鼠蛋白磷酸酶1核目标亚基(protein phosphates 1nuclear targeting subunit,PNUTS)、PP1及caspase-3的表达。结果与对照组比较,D-半乳糖组小鼠总SOD活力降低而MDA水平升高(均为P<0.01);PP1主要定位表达于小鼠耳蜗毛细胞、螺旋神经节细胞及血管纹细胞的胞核和胞浆中,且给予D-半乳糖后,小鼠耳蜗中PP1mRNA及其蛋白表达水平显著升高,而PNUTS表达减少,caspase-3表达增加(均为P<0.05)。结论 PP1在D-半乳糖诱导老化小鼠耳蜗毛细胞、螺旋神经节及血管纹细胞中表达,且参与了其耳蜗老化过程。

半乳糖凝集素-1预处理对机械通气相关性肺损伤小鼠的影响

目的探讨半乳糖凝集素-1(Galectin-1)预处理对机械通气相关性肺损伤(VILI)小鼠的影响。方法选择清洁级健康雄性C57BL/6小鼠30只,6~8周龄,体重22~30 g。采用随机数字表法将小鼠分为三组:对照组(C组)、VILI组(V组)和Galectin-1+VILI组(G组),每组10只。C组气管插管后保持自主呼吸4 h,V组和G组气管插管后机械通气4 h。气管插管前1 h C组和V组腹腔注射生理盐水0.75 ml,G组腹腔注射Galectin-13μg。于气管插管前即刻、自主呼吸或机械通气结束时采集动脉血检测PaO_(2),后处死小鼠,收集肺泡支气管灌洗液(BALF),采用ELISA法检测BALF中IL-1β和IL-18浓度。取肺组织测定湿/干重比(W/D),采用qRT-PCR法检测肺组织GSDMD、caspase-1和caspase-11 mRNA表达量,Western blot法检测肺组织GSDMD、caspase-1和caspase-11蛋白含量,HE染色法观察病理改变并行肺损伤评分。结果与C组比较,V组和G组机械通气结束时PaO_(2)明显降低,W/D、BALF中IL-1β和IL-18浓度、肺组织GSDMD、caspase-1、caspase-11 mRNA表达量及蛋白含量、肺损伤评分明显升高(P<0.05)。与V组比较,G组机械通气结束时PaO_(2)明显升高,W/D、BALF中IL-1β和IL-18浓度、肺组织GSDMD、caspase-1、caspase-11 mRNA表达量及蛋白含量、肺损伤评分明显降低(P<0.05)。结论Galectin-1能够升高小鼠PaO_(2),降低IL-1β和IL-18浓度、经典及非经典细胞焦亡途径相关基因mRNA表达量和蛋白含量,减轻小鼠VILI。

西伯利亚白刺L-半乳糖-1-磷酸磷酸酶基因克隆与序列分析

目的克隆西伯利亚白刺Nitraria sibirica维生素C合成过程中L-半乳糖-1-磷酸磷酸酶(L-galactose-1-phosphate phosphatase,GPP)编码基因。方法利用生物信息学方法对西伯利亚白刺三代转录组数据进行分析,共鉴定出2个GPP基因,并从西伯利亚白刺中成功克隆得到2条NsGPP基因序列,进一步利用生物信息学方法对其理化性质、蛋白结构、保守序列以及系统进化等进行分析,并结合RNA-seq数据分析其在盐胁迫下的表达模式,利用qRT-PCR实验检测其在不同组织中的表达水平。结果从西伯利亚白刺中成功鉴定克隆出2个NsGPP基因,2个NsGPP基因所编码蛋白均含有保守的FBPase/IMPase/glpX-like(FIG)结构域,且与其他植物GPP蛋白具有较高的相似性。利用多个物种的GPP蛋白序列构建系统进化树,结果显示西伯利亚白刺与灌木或半木质化草本植物亲缘关系更近。Motif分析发现NsGPP蛋白与拟南芥等GPP蛋白较为相似,但也存在差异,并且2个NsGPP蛋白之间也存在差异。此外,NsGPP1与NsGPP2的蛋白三维结构之间也存在微小差别。RNA-seq分析表明,不同浓度NaCl处理下,NsGPP1的表达逐步升高的趋势,而NsGPP2的表达量则较低,且在盐胁迫后其表达水平逐渐降低。qRT-PCR实验结果显示,白刺GPP基因的表达存在组织表达特异性,且在同一组织中NsGPP1的表达水平显著高于NsGPP2。结论从西伯利亚白刺中成功克隆到2个NsGPP基因,其编码蛋白均含有保守的FIG结构域,且与拟南芥等草本植物的GPP蛋白更为相似。NsGPP基因在不同组织中表达水平具有显著差异,其中NsGPP1可能参与西伯利亚白刺维生素C生物合成并参与白刺抵抗盐胁迫。为进一步解析白刺维生素C生物合成以及耐盐分子机制提供了理论依据。

冠心病患者血清VCAM-1、miR-145、Gal-3、SFRP5水平变化

目的探讨冠心病患者血清血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、miR-145、半乳糖凝集素-3(Gal-3)、分泌型卷曲蛋白5(SFRP5)水平变化及意义。方法选取冠心病患者80例为冠心病组,另收集健康志愿者40名为健康对照组。采集清晨空腹肘静脉血,酶联免疫吸附法测定血清VCAM-1、Gal-3、SFRP5浓度;RT-PCR检测血清miR-145表达水平。根据冠脉造影检查诊断的病变支数分为单支病变、双支病变、多支病变。收集两组受试者人口学特征及冠心病患者实验室指标;进行1 a随访,记录不良预后发生情况(病情加重再入院、死亡)。结果冠心病组患者血清VCAM-1、Gal-3水平明显高于健康对照组,miR-145、SFRP5水平明显低于健康对照组(均P<0.01)。急性心肌梗死组患者血清VCAM-1、Gal-3水平明显高于不稳定型心绞痛组、稳定型心绞痛组患者,血清miR-145、SFRP5水平明显低于不稳定型心绞痛组、稳定型心绞痛组患者(均P<0.05)。多支病变患者血清VCAM-1、Gal-3水平明显高于双支病变和单支病变患者,血清miR-145、SFRP5水平明显低于双支病变和单支病变患者(均P<0.05)。预后不良组患者血清VCAM-1、Gal-3水平明显高于预后良好组患者,miR-145、SFRP5水平明显低于预后良好组患者(均P<0.01)。VCAM-1、miR-145、Gal-3、SFRP5水平是冠心病患者预后的独立影响因素;ROC曲线分析显示,血清VCAM-1、miR-145、Gal-3、SFRP5水平联合检测对冠心病患者预后具有较高的预测价值(AUC=0.928)。结论冠心病患者血清VCAM-1、Gal-3水平高表达,miR-145、SFRP5水平低表达,且与冠心病分类、冠脉病变支数密切相关,联合检测对预后具有较高的预测价值。

血清IGFBP-3、Gd-IgA1在儿童紫癜性肾炎早期诊断中的应用价值

目的 探索血清胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)及半乳糖缺乏免疫球蛋白A1(Gd-IgA1)联合检测在儿童紫癜性肾炎(HSPN)早期诊断中的应用价值。方法 选取2021年6月至2023年4月在该院确诊的105例首发过敏性紫癜(HSP)患儿作为研究对象,在入院后按照HSP是否累及肾脏将患儿分为HSPN组及无肾炎组(HSP组),同期选择在该院体检的52例健康儿童作为对照组(NC组)。收集3组临床资料,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对血清及尿液中IGFBP-3、Gd-IgA1表达水平进行检测,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清IGFBP-3、Gd-IgA1对HSPN的早期诊断价值,多因素Logistic回归分析HSPN早期发生的影响因素。结果 与NC组相比,HSPN组及HSP组的IgA、IgG、补体C3、IgA/C3、白细胞计数(WBC)、红细胞计数(RBC)、血小板计数(PLT)及血清光抑素C(CysC)、血肌酐(sCr)水平显著升高(P<0.05),但HSPN组与HSP组的临床资料差异无统计学意义(P>0.05);HSPN组及HSP组血清IGFBP-3、Gd-IgA1及尿液IGFBP-3/尿肌酐(uCr)、Gd-IgA1/uCr表达水平较NC组显著升高(P<0.05),并且,与HSP组相比,HSPN组血清IGFBP-3、Gd-IgA1及尿液Gd-IgA1/uCr表达水平进一步升高(P<0.05);ROC曲线分析显示,联合IGFBP-3、Gd-IgA1诊断HSPN的曲线下面积(AUC)显著大于IGFBP-3单独诊断的AUC(Z=3.629,P<0.001)和Gd-IgA1单独诊断的AUC(Z=2.274,P=0.023);多因素Logistic回归分析显示,血清CysC、IGFBP-3、Gd-IgA1、尿液Gd-IgA1/uCr是HSPN早期发生的影响因素(P<0.05)。结论 HSPN患儿血清IGFBP-3、Gd-IgA1的表达水平均显著上升,二者是HSPN早期发生的影响因素,血清IGFBP-3、Gd-IgA1水平联合检测对HSPN的早期诊断具有较高的应用价值。

二精丸对去卵巢+D-半乳糖联合Aβ1-40致肾阴虚AD大鼠学习记忆能力的影响

目的探讨二精丸对去卵巢+D-半乳糖联合β-淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)致肾阴虚阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力的影响。方法在采用D-半乳糖+去卵巢法建立肾阴虚大鼠模型的基础上,联合海马注射Aβ1-40建立肾阴虚AD学习记忆障碍大鼠模型。雌性SD大鼠按体质量随机分为假手术组、模型组、二精丸高剂量组(9.0 g·kg^-1)、二精丸中剂量组(4.5 g·kg^-1)、二精丸低剂量组(2.25 g·kg^-1)、阳性药组(多奈哌齐,1.0 mg·kg^-1)。每日1次,连续灌胃给药30 d。通过Morris水迷宫试验、新物体识别试验检测大鼠学习记忆能力;采用HE染色、尼氏染色观察大鼠海马神经元细胞形态;免疫组化法测定大鼠海马雌激素β受体(ERβ)、Aβ及p-tau404蛋白表达水平;ELISA法测定大鼠血清的雌激素水平。结果与模型组比较,二精丸中、高剂量组从第3天开始逃避潜伏期显著缩短(P<0.05,P<0.01),高剂量组的穿越平台次数明显增加(P<0.05),新物体识别指数明显升高(P<0.05);二精丸组大鼠海马区神经元、尼氏小体数量增多,形态较完整,排列较整齐,无破损,核仁清晰;二精丸中、高剂量组大鼠海马区阳性Aβ细胞数显著减少(P<0.01),血清雌激素水平显著升高(P<0.05,P<0.01);二精丸高剂量组大鼠海马区p-tau404阳性细胞数量明显减少(P<0.01);二精丸高、中、低剂量组大鼠海马区ERβ阳性细胞数量增多(P<0.01)。结论二精丸可能通过上调大鼠脑内ERβ表达和雌激素水平,减少脑内Aβ淀粉样蛋白的沉积,抑制tau蛋白的过度磷酸化,从而改善肾阴虚AD大鼠的学习记忆能力。

APP17肽对D-半乳糖老化小鼠海马神经元IRS和PI3K表达的影响

目的通过对胰岛素受体底物-1（IRS-1）、胰岛素受体底物-2（IRS-2）、磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）在海马表达的观察，研究APP17肽对D-半乳糖老化小鼠海马神经元信号转导途径上游步骤的影响。方法小鼠随机分为3组，每组22只：正常对照组（C组）、D-半乳糖模型组（D组）、APP17肽治疗组（D＋P组）。D、D＋P 2组每日皮下注射半乳糖100mg·kg^-1。D＋P组每周一、二、五皮下给药APP17肽0．35μg／只。4个月后，小鼠灌注固定，行脑冰冻切片，用PI3K、IRS-1、IRS-2抗体进行免疫组化染色。Western blot应用IRS—1抗体染色。结果免疫组织化学染色方法检测海马神经元胰岛素受体底物-1、胰岛素受体底物-2、PI3K的表达，结果显示3种抗体C组深染的阳性细胞排列整齐。染色深，突起深染，可见2—3级分支，细胞计数与D组差异有显著性；D组海马阳性反应细胞着色浅，少有突起，细胞数目少，分别为正常对照的67．5％、63．68％和48．6％。APP17肽治疗组（D＋P组）染色结果与C组相似，阳性细胞数目接近C组，与半乳糖老化组比较差异均有显著性，P〈0．05，但阳性细胞突起少于C组，排列亦不如C组整齐。Western blot结果亦显示D组海马表达IRS-1减少，应用17肽后IRS-1表达上调，但不如C组数值高。结论D-半乳糖老化小鼠海马神经元IRS—1、IRS-2、PI3K的表达明显下降；APP17肽能上调D-半乳糖老化小鼠海马IRS—1、IRS-2和PI3K的表达。

支气管哮喘患儿血清及支气管肺泡灌洗液中半乳糖凝集素-3和转化生长因子-β1的变化

目的探讨半乳糖凝集素-3(Gal-3)、转化生长因子-β1(TGF-β1)在哮喘患儿血清和支气管肺泡灌洗液(BALF)中的变化及临床意义。方法采用ELISA法测定和比较45例哮喘患儿(哮喘组)及15例气管异物或气道畸形患儿(对照组)血清和BALF中Gal-3、TGF-β1水平。结果哮喘组患儿的血清和BALF中的Gal-3、TGF-β1水平均较对照组高;中重度哮喘患儿的血清和BALF中Gal-3、TGF-β1水平均高于轻度哮喘患儿,差异均有统计学意义(P均<0.05)。哮喘组患儿血清中的Gal-3、TGF-β1水平与相应的BALF中的Gal-3、TGF-β1水平呈显著正相关(r=0.910、0.914,P均<0.05);血清中Gal-3水平与TGF-β1水平呈显著正相关(r=0.932,P<0.05)。结论哮喘患儿血清和BALF中Gal-3、TGF-β1水平均明显升高,可能参与了哮喘的发生、发展。

三七皂甙Rg1改善D-半乳糖模型鼠学习记忆能力与其作用的可能因素

目的 :探讨三七皂甙Rg1改善D 半乳糖模型鼠学习记忆能力与其作用的因素。方法 :皮下注射D 半乳糖建立衰老模型 ,并设三七皂甙Rg1给药组。采用跳台和Y 迷路法检测各实验组小鼠学习记忆能力 ,分光光度法检测脑细胞抗氧化能力 ,ELISA法检测IL 1β和IL 6含量 ,流式细胞术检测胞内钙指数及神经细胞凋亡百分数。 结果 :模型鼠脑细胞抗氧化能力降低 ,胞内钙超载且神经细胞凋亡 ,及炎症因子含量增加 ,与三七皂甙Rg1给药组比存在显著差异。结论 :三七皂甙Rg1通过抗氧化作用 ,降低氧化损伤所致脑海马区炎症因子含量增加 ,并减少神经细胞胞内钙超载和神经细胞凋亡。

半乳糖凝集素-3、白介素-6、单核细胞趋化蛋白-1与动脉粥样硬化斑块稳定性的相关性研究

目的探讨分析半乳糖凝集素-3(Gal-3)、白介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)与动脉粥样硬化斑块稳定性的相关性。方法选取2015年3月—2017年2月收治的143例经颈动脉彩超检查证实为动脉粥样硬化斑块的患者进行研究,根据颈动脉彩超检查结果分为稳定斑块组(n=74)与不稳定斑块组(n=69),另选取同期无颈动脉粥样硬化斑块的健康体检者70例作为健康对照组。分别测定各组Gal-3、IL-6及MCP-1的水平,并分析Gal-3、IL-6及MCP-1与硬化斑块指数(PI)的关系。结果不稳定斑块组血清Gal-3、IL-6和MCP-1水平以及PI显著高于稳定斑块组及健康对照组(P<0.05),且稳定斑块组高于健康对照组(P<0.05)。血清Gal-3、IL-6和MCP-1水平均与PI呈正相关(r=0.243、0.571和0.643,P均<0.05)。结论血清Gal-3、IL-6和MCP-1在动脉粥样硬化斑块的形成与发展过程中起着重要作用,同时与斑块的稳定性及局部形成有着密切相关性。

猪、牛成纤维细胞α-1，3-半乳糖基转移酶基因的敲除以及人白细胞抗原-G1基因的敲入

构建了敲除猪α-1,3-GT并敲入人白细胞抗原HLA-G1基因的打靶载体pZJ,其中以新霉素抗性基因（Neo）为正筛选基因,绿色荧光蛋白基因（GFP）为负筛选基因。采用优化的脂质体转染法将打靶载体pZJ转染于一个长势良好的胎猪成纤维细胞系中,经7天G418（600μg/ml）药物筛选,共获得30个Neo抗性细胞克隆,其中12个为非绿色荧光细胞克隆,7个扩大培养良好,提取阳性克隆细胞的基因组DNA并进行PCR检测。经PCR结果检测,打靶载体转入到胎猪成纤维细胞中,其中3个非荧光阳性单克隆细胞在细胞基因组中进行了定点整合。以同样的脂质体转染条件将pZJ转染牛胎儿成纤维细胞,经筛选并对其进行PCR检测,其中2个均为定点整合阳性。该研究为今后克隆出表达HLA-G1而不表达α-1,3-GT基因的个体猪,从而提供可以真正用于临床的异种器官打下了基础,也为猪牛之间的跨物种敲除提供了一个佐证。

乳酒隐球酵母变种CK-1产β-半乳糖苷酶发酵条件优化

β-半乳糖苷酶是一类非常重要的糖苷水解酶,已被广泛应用于食品工业降低乳制品中的乳糖含量.本文通过单因素实验和L9(34)正交实验,对乳酒隐球酵母变种CK-1产生β-半乳糖苷酶的培养基组成和发酵条件进行了优化.结果表明,在以乳糖2.0%、硫酸亚铁铵2.0%、磷酸二氢钾0.4%、起始pH6.0的培养基中,按接种量8%接种后,于30℃,120 r.min-1培养CK-1菌株2 d,β-半乳糖苷酶活力可达(17.02±0.38)U.mL-1,是优化前(基础发酵培养基酶活力(5.39±0.20)U.mL-1)的3.16倍.通过优化培养条件提高了CK-1菌株的产酶量,为商业化β-半乳糖苷酶的大量生产降低了成本.

半乳糖凝集素-1在妇科恶性肿瘤中生物活性的研究进展

近年来的研究表明,半乳糖凝集素-1在多种恶性肿瘤中特异性表达并参与调节癌细胞的多种生物学活性。本文就半乳糖凝集素-1在宫颈癌、卵巢癌等妇科恶性肿瘤中的表达以及在肿瘤的发生、发展、侵袭和转移、化疗疗效以及预后评价中的作用进行综述。

二精丸对去卵巢+D-半乳糖联合Aβ_(1-40)致肾阴虚AD大鼠海马多巴胺神经功能的影响

目的探讨二精丸对去卵巢+D-半乳糖联合β-淀粉样蛋白_(1-40)(Aβ_(_(1-40)))致肾阴虚阿尔茨海默病(AD)大鼠海马多巴胺神经功能的影响。方法将56只雌性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、二精丸高剂量组(9.0 g·kg^(-1))、二精丸中剂量组(4.5 g·kg^(-1))、二精丸低剂量组(2.25 g·kg^(-1))。造模大鼠在卵巢摘除手术1周后,腹腔注射D-半乳糖(100 mg·kg^(-1)),每日1次,持续7周;卵巢摘除手术4周后,双侧海马注射Aβ_(1-40)建立肾阴虚AD大鼠模型。卵巢摘除手术5周后,各组按照相应剂量开始灌胃给药,模型组与假手术组灌胃等量生理盐水,给药容量为10 mL·kg^(-1),每日1次,连续30d。末次给药1h后断头取海马组织,采用ELISA法检测大鼠海马组织多巴胺(DA)水平,采用免疫组化法检测大鼠海马CA1区多巴胺D1受体、酪氨酸羟化酶(TH)的表达情况。结果与假手术组比较,模型组大鼠的海马组织DA水平显著降低(P<0.01),海马CA1区多巴胺D1受体及TH表达明显下调(P<0.01)。与模型组比较,二精丸高剂量组大鼠的海马组织DA水平明显升高(P<0.01);二精丸各剂量组大鼠海马CA1区的D1受体表达明显上调(P<0.05,P<0.01);二精丸高、中剂量组大鼠海马CA1区的TH表达明显上调(P<0.05,P<0.01)。结论二精丸能够提高海马组织的DA水平,上调海马组织的多巴胺D1受体及TH表达,促进去卵巢+D-半乳糖联合Aβ_(1-40)致肾阴虚AD大鼠的海马多巴胺神经功能。

运动训练对D-半乳糖造阿尔茨海默病模型大鼠海马β位淀粉样蛋白42和裂解酶1的影响

目的:探讨游泳+跑台的混合运动训练对D-半乳糖所致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马内β位淀粉样蛋白42和裂解酶1(Aβ42、BACE1)的影响。方法:将16只雄性SD大鼠随机分为安静注射组(C组)和运动注射组(T组),所有大鼠连续8周腹腔注射D-gal造阿尔茨海默病模型大鼠,同时,T组大鼠连续进行8周的游泳和跑台(均每周3次,交替进行)相结合的混合运动训练。运用WesternBlot法检测大鼠海马Aβ42蛋白表达量,运用RT-PCR法检测大鼠海马BACE1mRNA和IGF-1mRNA的表达量。结果:①与C组相比,T组大鼠海马内Aβ42蛋白表达量显著减少,具有极显著性差异(P<0.01);②C组比T组大鼠海马内BACE1mRNA表达量多,具有显著性差异(P<0.05);③与C组相比,T组大鼠海马内胰岛素源生长因子(IGF)-1mRNA表达增加,具有极显著性差异(P<0.01)。结论:游泳和跑步混合运动训练能延缓AD的发展进程,这可能与运动训练上调了AD大鼠海马内IGF-1mRNA表达有关。