藏鸡GEM基因克隆及其时空表达特性分析

旨在获得藏鸡GEM基因序列,阐明其组织表达和时序表达谱,同时分析基因表达与肌内脂肪(Intramuscular fat,IMF)沉积的关系,为进一步研究藏鸡肉质和脂肪沉积奠定基础。选取1,81,119,154,210日龄健康藏鸡为试验材料,屠宰后分别采集心、肝、脾、肺、肾、胸肌、腿肌和皮下脂肪组织,提取组织总RNA,利用RT-PCR技术克隆藏鸡GEM基因序列,利用实时荧光定量PCR技术检测该基因在藏鸡不同组织以及不同发育时期胸肌和腿肌的表达情况。结果表明,克隆获得藏鸡GEM基因序列940 bp(Gen Bank登录号:KY747399),其中,CDS为894 bp,5'UTR 24 bp和3'UTR22 bp,编码297个氨基酸,与原鸡、绿头鸭、人和小鼠GEM氨基酸序列相似性较高(83.50%~98.32%);组织表达结果显示,GEM在藏鸡肺组织中的表达水平最高,极显著高于其他组织(P<0.01),在脂肪组织和脾组织中也存在较高水平的表达;时序表达结果显示,GEM基因在不同发育阶段藏鸡胸肌和腿肌中的表达模式存在差异,在胸肌中的表达水平随日龄的增加呈下降趋势,而在腿肌中随日龄的增加呈先上升后下降的表达趋势,且在119日龄达到峰值;GEM基因表达水平与不同发育阶段藏鸡胸肌和腿肌中IMF含量呈不同程度的相关,存在性别差异,且在公藏鸡腿肌中达到显著水平(r=0.414,P<0.05)。结果表明,GEM基因可能在藏鸡脂质代谢中起重要调控作用。

牦牛GEM基因克隆及生物信息学分析

旨在获得美仁牦牛GEM基因CDS区序列,并通过生物信息学分析了解其生物学特征和结构。选取7日龄健康美仁牦牛公犊牛,屠宰后收集其心肌组织,并提取心肌组织总RNA,运用RT-PCR技术克隆美仁牦牛GEM基因序列。结果表明,获得美仁牦牛GEM基因序列1478 bp(登录号:XM_005895531.1),其中,CDS区长936 bp,5′UTR 67 bp和3′UTR 475 bp,共有12个开放阅读框,编码311个氨基酸;美仁牦牛GEM蛋白质理论等电点9.72,不稳定指数56.42,半衰期30 h,总平均亲水性-0.565,为不稳定碱性亲水性蛋白;美仁牦牛GEM属于非分泌蛋白且无信号肽,不具有跨膜结构域,拥有29处磷酸化修饰位点;通过亚细胞定位发现,GEM蛋白主要存在于细胞核内。

GEM基因在3T_3-L_1脂肪细胞诱导分化过程中的表达变化

目的观察3T3L1前体脂肪细胞诱导分化过程中GEM基因表达水平的变化,探讨GEM基因与肥胖发生的关系。方法体外培养3T3L1前体脂肪细胞,采用RTPCR技术检测分化不同时段的3T3L1脂肪细胞中GEM基因的mRNA表达水平。结果在3T3L1脂肪细胞的诱导分化过程中,GEM基因mRNA表达水平无显著变化(P>0.05)。结论GEM基因在脂肪细胞分化、脂质合成和积聚过程中的作用有待进一步研究。

藏山羊GEM基因克隆及组织表达分析

本研究旨在克隆获得藏山羊GEM基因序列,预测其生物学功能,并阐明其组织表达特征。利用TA法克隆获得藏山羊GEM基因序列,并利用qPCR技术检测该基因在不同组织中的表达丰度。结果显示,藏山羊GEM基因序列1 096 bp,CDS区为936 bp,共编码311个氨基酸;GEM蛋白具有磷酸化位点和糖基化位点共33个,为不稳定碱性疏水蛋白质,主要在细胞核发挥生物学作用;藏山羊GEM基因的核苷酸序列和氨基酸序列均与反刍动物的序列具有很高的同源性;GEM基因在藏山羊肺组织中高表达(p<0.01),其次高表达于脾组织(p<0.01),均极显著高于其他组织。本研究为进一步了解藏山羊GEM基因功能提供基础数据。